普通高中叶绿素提取和分离实验
叶绿素的提取和分离
叶绿素的提取和分离一、实验过程1、提取绿色叶片中的色素将除去叶柄和粗叶脉的5g 左右新鲜绿色叶片（菠菜叶或白菜叶、女贞叶），剪碎，放在研钵中，加入少许二氧化硅和碳酸钙，进行充分的研磨，当研磨成糊状时，再加入5-6ml 丙酮，用杵棒迅速搅动后，静止3-5min，就可看到丙酮提取液为深绿色，再将澄清的提取液直接收集到有色的小广口瓶中（不经过滤）。
丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。
在进行实验操作时尽量少吸入丙酮，搅动后静止时，用纸或塑料薄膜盖在研钵上。
因为叶绿体中的各种色素都是脂类化合物，不溶于水，只溶于酒精、乙烷、丙酮、石油醚等有机溶剂中，且用丙酮的效果较好，加入丙酮就是为了快速提取色素。
又因丙酮的化学性质不稳定，极易挥发，所以必须在充分的研磨后加入，而不在研磨前或研磨中加入。
在实验过程中，发现在研钵中加入2ml 丙酮，数量不足，色素提取液量不多，如果再经脱脂棉过滤，滤液几乎全被吸走，提取色素困难，所以改成加入丙酮5-6ml。
将色素收集到有色的小广口瓶中，目的是避免叶绿体中的色素，在接触空气或光照下遭到破坏。
2、制备滤纸条取一张预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成8-9cm 长，1cm 宽的滤纸条，再将滤纸条的一端对折剪去两角。
3、画滤液细线用牙签（或用钢笔尖、六号注射针头等）代替毛细吸管，蘸取有色小广口瓶中滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，划的线条越细越齐（直），而且待滤液干燥后，继续重复画4～5 遍，实验效果越好。
4、叶绿体中的色素分离将4ml 层析液倒入100ml 烧杯中，再将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微倾斜靠着烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧杯，滤纸上的滤液细线要与层析液离开一定的距离，即层析液不能没及滤纸条上的滤液细线。
5、实验结果的观察层析几分钟以后（约4～5min），滤纸条上便清楚地呈现出四条色素带，从上而下依次是胡萝卜素（橙黄色），叶黄素（黄色），叶绿素a（蓝绿色），叶绿素b（黄绿色）。
植物生理学实验 叶绿体色素的提取、分离
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或者 95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶水 ＝4.5∶4.5∶1的混合液来提 取叶片中的叶绿素，用于测定 叶绿素含量。 之所以要用含 有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。 提取方法 研磨法 浸提法 研磨法提取 光合色素
制作绿色标本方法：用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶 绿素
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸 （直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
2. 叶绿体色素的分离 （1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。 （2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
0.1g叶+10ml混合液浸提
实验四、叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定
实验四、叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定一．实验目的：掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。
二．实验原理：1、溶解性。
叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取2、吸附性。
滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？)，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。
当用适当溶剂推动时，混合物中各成分在两相（固定相和流动相）间具有不同分配系数，所以移动速度不同，一定时间后可将各种色素分离三．实验材料:新鲜植物叶片器具：研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张试剂：95%乙醇，石油醚四．实验步骤:1.色素提取（乙醇粗提液）a.取新鲜叶片洗净擦干，去中脉称1g左右剪碎于研钵b.研钵中加3-5ml 95%乙醇研磨成匀浆过滤于刻度试管残渣用少许乙醇冲洗一并过滤定容至10ml注：研磨用石英砂或SiO2以利于充分研磨，加入CaCO3以保护叶绿素。
2.荧光观察将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光3.色素萃取（石油醚提取液）取乙醇提取液5ml与另一支试管加2ml石油醚摇荡静止片刻上层深绿色为石油醚提取液注：用丙酮提取会更好些，各色素在石油醚中溶解度不同4.色素分离a.将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平）用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端待风干后再滴加几次。
b.将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚迅速盖好培养皿。
c.推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和名称注：带宽和移动速度说明？答：带宽：色素越多，色素带越宽,所以色素共分为好几个带移动速度：溶解度高的移动速度快，就越接近滤纸上边缘。
叶绿素提取和分离试验的几种方法
我们以灯芯柱纸层析法为基础,进行该实验,取得了较好的效果,现介绍如下。
具体的方法是:¹取洗净、揩干的天竺葵叶片5g剪碎,加85%丙酮5ml研成匀浆;º取滤纸一张剪成 2.5cm×5.5cm的长方形,从一端开始卷起,卷成柱状,卷时将两边对齐,捻紧备用;»将纸芯插入滤纸中央并立放于培养皿上,培养皿内装有四氯化碳(不用汽油),纸芯下端浸入四氯化碳中;¼用尖镊夹取研好的色素匀浆均匀堆于纸芯周围,盖上皿盖,静置观察。
15min左右色素可充分扩展,分离结束。
此实验方法具有以下特点:¹克服了提取液中色素量少的缺点,层析后,4种色素在滤纸上形成清晰可见的4个同心圆。
其分布由外及里依次为胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色);º分离速度的快慢与纸芯的粗细相关。
纸芯捻得越细越实,其分离速度越慢,反之则快,由此可对分离的速度加以控制;»分离的叶绿素a的色带宽度可达0.3～0.5cm,且与叶绿素b的色带之间有约1mm的分界。
因此能够提高叶绿素a和叶绿素b提取的纯度和浓度。
提取色素为了得到墨绿色的色素滤液,于实验前2～3天,取质地柔软、深绿色的草本植物的叶片放在通风处阴干。
研磨时,所取叶片要除去粗的叶脉和叶柄。
向研钵中加入少量二氧化硅和碳酸钙,进行研磨。
待研磨充分后,再加入少量氯化钠和适量丙酮,就出现了深绿色的液体,液体经脱脂棉过滤后就得到了墨绿色的色素滤液。
2 划滤液细线用毛细吸管吸取色素滤液,采用毛笔的执笔方式握住毛细吸管,悬腕,沿滤纸条上的铅笔划线作快速的划动,重复2～3次,就可以得到细、匀、齐的滤液细线。
3 分离色素3.1 采用小试管法取长15cm、直径15mm的小试管,试管塞用橡皮塞。
在橡皮塞的中央用刀片刻一细槽,然后将划过滤液细线的滤纸条无色素的一端,插入橡皮塞的细槽中。
向小试管内加入3.5ml层析液,将滤纸条慢慢地垂直插入层析液中,橡皮塞要塞紧小试管。
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取：称取5 g的绿叶，剪碎，放入研钵中→加入少量二氧化硅、碳酸钙和10 mL无水乙醇→研磨→过滤→收集到试管内并塞严试管口。
准备过滤纸条：将过滤纸条剪成略小于试管长度和直径的过滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，在距离剪角一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
画滤细线：用毛细管吸取少量滤液，并沿铅笔线均匀划出一条细线，待滤液干后再画1~2次。
叶绿素分离：在试管中倒入适量层析液。
得到滤纸上的四种颜色、不同宽度的色素带。
叶绿素提取注意事项：
准备滤纸时，要将滤纸的一端剪去两角，这样可使色素扩散到滤纸上，以便于观察实验结果。
过滤时不用滤纸过滤而用单层尼龙布过滤是因为滤纸对色素具有吸附作用，若用其过滤，会导致收集到的滤液色素含量少，使实验效果不明显或失败。
普通高中叶绿素提取和分离实验
了解叶绿素的结构和性质 促进植物光合作用的研究 为农业生产提供指导 推动叶绿素提取和分离技术的发展
叶绿素提取和 分离实验在农 业生产中的应
用
在食品工业中 利用叶绿素作 为天然色素的
潜力
叶绿素在医药 领域的应用前
景
叶绿素提取和 分离实验在实 际应用中可能 面临的问题和
挑战
汇报人：XX
叶绿素的颜色和状 态
实验前后的颜色变 化
分离后的叶绿素纯 度
实验结果的分析与 讨论
实验步骤：将提取液在分光光 度计上测定吸光度，根据标准 曲线计算叶绿素含量
实验原理：叶绿素在有机溶剂 中溶解，通过比色法测定其含 量
结果分析：比较不同实验组之 间的叶绿素提取量，分析实验
结果
结论：根据实验结果得出叶绿 素提取量的影响因素和最佳提
实验目的：通 过实验了解叶 绿素的结构和
性质
实验原理：叶 绿素是植物光 合作用的主要 色素，具有吸 收光能的作用
实验步骤：通 过提取和分离 实验，观察叶 绿素的物理性 质和化学性质
实验结果：通 过实验结果分 析，了解叶绿 素的结构和性
质
了解叶绿素的结构和性质 探究叶绿素在光合作用中的作用机制 掌握叶绿素的提取和分离技术 了解叶绿素在植物生长和发育中的重要地位
叶绿素是一种脂溶 性色素，可溶于有 机溶剂如乙醇、丙 酮等。
实验中常采用研磨 法将叶绿素从植物 组织中提取出来。
提取时需加入适量 的有机溶剂，如乙 醇或丙酮，并不断 搅拌。
提取过程中需注 意温度和时间， 避免叶绿素分解。
叶绿素组成：由 叶绿素a、叶绿 素b、叶绿素c等 多种成分组成
分离原理：利用 不同叶绿素在溶 剂中的溶解度不 同，采用萃取法、 沉淀法等方法进 行分离
叶绿素分离,提取与含量测定
叶绿素提取、分离与测定曹志凡141140003一．实验目的1、了解叶绿体色素的构成；2、了解叶绿素的某些物理及化学性质，掌握提取叶绿素及分离叶绿素的原理；3、了解纸层析法分离色素的实验原理4、学会用纸层析的方法分离叶绿体色素；5、初步学习用分光光度计测定叶绿素ab含量。
二．实验原理1.植物叶绿体色素是吸收太阳光能,进行光合作用的重要物质.它一般由叶绿素a,叶绿素b,胡萝卜素和叶黄素组成，它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体。
2.绿色素（包括叶绿素a蓝绿色和叶绿素b黄绿色）和黄色素（包括胡萝卜素黄色和叶黄素橙黄色）这两类色素都很难溶于水，而易溶于有机溶剂,故可用乙醇,丙酮等有机溶剂提取。
3.由于光合色素位于叶绿体中的类囊体上，要把它提取出来必须破坏叶表皮、细胞壁和细胞膜、叶绿体的双层膜，所以要剪碎后加二氧化硅研磨，以便充分提取色素。
4.叶绿素是一种含镁的化合物，其中的镁易被H+、Cu2+、Zn2+等取代。
当被H+取代后，就形成去镁叶绿素，呈黄褐色。
虽然研磨过程中不发生产生大量H+的化学反应，但液泡中常含有多种有机酸。
一般认为，碳酸钙的作用在于中和研磨过程中产生的H+，以防止叶绿素被破坏。
5.纸层析法又称纸色谱法。
以纸为载体的色谱法，固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。
根据不同色素在层析液中的溶解度不同造成随层析液扩散速度不同这一原理进行分离。
6.当层析溶剂不断从纸上流过时,由于混合物(叶绿素提取液)中各种成分在固定相和流动相间溶解度和吸附能力不同而具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后,可将各种色素分开，其中胡萝卜素在层析液中的溶解度最高，扩散速度最快，其次是叶黄素、叶绿素a，叶绿素b溶解度最低，扩散得最慢。
7.分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器，分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度，样品的吸光值与样品的浓度成正比。
叶绿素的提取和分离
实验名称：绿叶中色素的提取和分离
1、实验原理：提取：用无水乙醇（色素溶解在无水乙醇中）
分离：层析液（色素在层析液中的溶解度不同）
2、选材：叶片要新鲜，颜色要深绿
3、方法步骤：
①提取：剪碎＋ SiO2 ＋ CaCO3 ＋无水乙醇→过滤
的目的：使研磨充分
加SiO
2
加CaCO
的目的：防止色素被破坏
3
研磨要迅速、充分：迅速是为了防止无水乙醇挥发
充分是使叶绿体充分被破坏，是叶绿体中的色素完全释放出来。
过滤时要用单层尼龙布而不用滤纸的原因：
a、色素分子较大，不容易透过滤纸。
b、滤纸有较强的吸附能力而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度影响实验效果
②制备滤纸条：
在滤纸条的一端剪去两角的目的：防止色素带分离不整齐。
距剪角的一端1cm处用铅笔画一细横线的目的：起标记作用（以便使每次重复画的滤液细线在同一位置）
③画滤液细线：
滤液细线要细而直
为使滤液细线上积累较多的色素应该怎么办？重复二、三次
画的时候注意待滤液干后再画下一次，原因：防止色素扩散，使画出的滤液细线较粗（即滤液未干透，重合不
好导致色素不集中，分离效果差）
④分离绿叶中的色素：
a、将滤纸条有滤液细线的一端朝下
b、不能让滤液细线触及层析液，原因：防止色素溶解在层析液中，影响实验效果。
c、层析液不能过多：为了保证有充足的空间让色素分开。
⑤观察与记录
掌握几个问题：
1、四种色素的颜色
2、含量最多的色素、含量最少的色素、扩散最快的色素、扩散最慢的色素、相邻两条色素带间距离最大的、最小的
3、色素主要吸收的光谱。
高中生物叶绿素提取
高中生物叶绿素的提取
高中生物叶绿素的提取主要涉及到以下几个步骤：
1. 将新鲜菠菜叶片洗净擦干，去掉叶柄及中间脉络，称取10克去掉中间脉络的叶片，剪碎置于研钵内，加入少许固体碳酸钠或碳酸钙和10毫升丙酮，迅速研磨成匀浆，再加15毫升丙酮充分研磨提取叶绿素。
2. 在玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉，将匀浆通过脱脂棉过滤到已装有15毫升石油醚的分液漏斗中，再用少量丙酮冲洗叶片残渣和研钵，合并滤液。
3. 沿分液漏斗的壁小心加入30毫升蒸馏水，轻轻转动加入4 -8毫升饱和氯化钠水溶液，静止几分钟待分层清楚后，弃去下面的丙酮一水层。
再加入30毫升蒸馏水，轻轻晃动分液漏斗，以洗去石油醚中残留的丙酮，弃去水层。
共洗两次。
将含色素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中，置暗处或用黑纸包好备用。
请注意，叶绿素的提取与分离需要一定的技巧和耐心，同时要注意实验安全。
建议在专业人员的指导下进行。
实验六 叶绿素的提取分离
实验六叶绿素的提取分离实验六叶绿素的提取、分离叶绿素的提取与分离一、实验目的1.掌握从植物叶片中提取叶绿素的方法。
2.了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。
二、实验原理1.叶绿素提取原理：叶绿素等脂溶性有机分子。
根据相似溶解度原理，叶绿体含有色素分子，如叶绿体色素（叶绿素a和B、胡萝卜素和叶黄素），它们可溶于有机溶剂，但不溶于极性水。
因此，在研磨和收集叶绿色素时，应使用丙酮或无水乙醇等有机溶剂提取。
2.色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。
滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。
把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。
结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。
剪纸形状毛细管点样三、仪器和药物薄层色谱展开砂浆、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、皮氏培养皿等。
95%乙醇、丙酮、石油醚、碳酸钙、石英砂四。
实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。
（2）在砂浆中加入少量碳酸钙和石英砂，加入4-5ml无水乙醇，研磨成糊状，加入10ml无水乙醇，充分混合，从叶匀浆中提取色素。
15-20分钟后，将其过滤到一个50毫升的锥形瓶中，并塞住使用。
分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。
高中生物实验叶绿体色素的提取和分离
实验叶绿体色素的提取和分离
1、原理：( 1 )叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇(或丙酮)中，所以用无水乙醇可提取叶绿体中的色素。
( 2 )不同的色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得慢，因而可用层析液将不同色素分离。
3、结果分析：①从色素带的宽度可知色素含量的多少依次为：叶绿素a >叶绿素b >叶黄素>胡萝卜素; ②从色素带的位置可知色素在层析夜中溶解度大小依次是：胡萝卜素>叶黄素>叶绿素 a >叶绿素 b ; ③在滤纸上距离最近的两条色素带是叶绿素a 与叶绿素
b ，距离最远的两条色素带是胡萝卜素与叶黄素。
4、注意事项：(1)裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。
(2)根据烧杯的高度制备滤纸条，让滤纸条长度高出烧杯1cm ，高出的部分做直角弯折。
(3)画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中。
(4)研磨要迅速、充分。
a.因为丙酮容易挥发; b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;
c.叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。
(5)制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。
5、实验创新：在本实验中在圆形滤纸中央点上叶绿体色素的提取液进行层析，会得到近似同心的四个色素环，由内到外依次是黄绿色、蓝绿色、黄色、橙黄色。
叶绿素的提取和分离
实验名称：叶绿素的提取和分离一、实验目的（1）掌握叶绿素提取的方法。
（2）了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作方法。
（3）了解叶绿体中所含色素种类及其在滤纸层析上的分布情况。
二、实验器材95％乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油，量筒，滤纸，大培养皿，小培养皿，长滴管，剪刀。
三、实验过程（1）提取色素将深绿色的植物叶剪碎放入研钵中。
放入少量的SiO2 和CaCO3再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。
将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。
（2）制备滤纸条将干燥的定性滤纸剪成稍小于试管长与直径的滤纸条，将一端减去两角，并在距这一端1厘米处用铅笔画一条细线。
（3）画滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀划出一条细线。
干燥后，重复一两次。
（4）色素分离取适量层析液倒入烧杯中，将滤纸条轻插入层析液中（滤液细线不能触及层析液，以防止色素溶解于层析液中而无法分离）,用培养皿盖住（防止层析液挥发）。
（5）观察与记录四、实验现象五、实验结论绿叶中有一种细胞器叫叶绿体，植物通过叶绿体进行光合作用，把光能、二氧化碳、水转化成化学能。
叶绿素分布在叶绿体的类囊体薄膜上。
叶绿素 a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取经过色素分离后，叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶绿素占总量3/4。
叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。
类胡萝卜素占总量1/4。
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素是位于植物叶绿体中的一类有机化合物，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
提取和分离叶绿体色素的方法如下：
1. 手工研磨法：将植物叶片取出后，加入适量的减水醇（如乙醇或甲醇），用研钵或机械研磨器搅拌研磨，使细胞破碎释放叶绿体色素。
然后通过离心将悬液离心分离出叶绿体色素。
2. 酒精沉淀法：将植物叶片切碎后加入适量的酒精溶液，用撇去悬浮物，然后再用滤纸滤除酒精中的杂质。
过滤后的溶液可以进行酒精沉淀，即加入适量的酒精悬浮叶绿体色素，并通过离心分离出沉淀。
3. 层析法：将植物叶片经过研磨和过滤后得到的色素溶液，可以通过色谱柱层析进行分离。
常用的色谱柱包括硅胶柱、纸层析柱和高效液相色谱柱等。
通过向色谱柱中加入适当的溶剂系统，可以将叶绿体色素按照其亲水性和亲油性进行分离。
4. 液-液萃取法：将植物叶片研磨并与适量的有机溶剂（如二氯甲烷、苯或正己烷）混合，通过摇晃、振荡或搅拌等方法，使叶绿体色素在有机相和水相之间分配。
随后，分离有机相并蒸干，即可得到叶绿体色素。
这些方法可以根据实验需求和设备条件选择使用，提取和分离叶绿体色素可以用于进一步的分析和研究。
叶绿素的提取、分离和测定
1.什么是传统机械按键设计？
传统的机械按键设计是需要手动按压按键触动PCBA上的 开关按键来实现功能的一种设计方式。
传统机械按键结构层图：
按
PCBA
键
开关 键
传统机械按键设计要点： 1.合理的选择按键的类型， 尽量选择平头类的按键，以 防按键下陷。 2.开关按键和塑胶按键设计 间隙建议留0.05~0.1mm，以 防按键死键。 3.要考虑成型工艺，合理计 算累积公差，以防按键手感 不良。
二、叶绿素a和b含量的测定
（一）原理 叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰分别 为为663nm和645nm。 同时在该波长时叶绿素a 、b比吸收系数k 为已知，根据Lambert—Beer定律列出浓 度C与光密度OD之间的关系式：
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OD663=82.04Ca+9.27Cb OD645=16.75Ca+45.6Cb Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度，单位mg/L 解方程式得 Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等 95%酒精、石油醚 碳酸钙
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（三）步骤
1、用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵 中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精510mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充 分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10 分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
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2、取一张色层分析纸或定性滤纸代用， 剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径； 将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸 取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置， 稍干后，再重复操作几次；然后取另一 滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提 取液，不久即可看到分离的各种色素的 同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为 蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈 鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
【人教版】高三上册生物基础实验：实验7 叶绿体色素的提取和分离(含解析)
——叶绿体色素的提取和分离原理、色素的种类和吸收光谱、试剂的作用和实验成败关键前情提要：关键词：色素提取和分离的原理、色素的种类、试剂的作用难度系数：★★★重要程度：★★★★基础回顾：考点一、实验的原理（1）实验：绿叶中色素的提取和分离（纸层析法）①可以利用无水乙醇提取绿叶中的色素，在研磨时还应加入少许二氧化硅和碳酸钙，其中前者有助于研磨充分，后者可防止在研磨中色素被破坏。
②分离的原理是利用色素在层析液中的溶解度不同，溶解度越大的在滤纸上扩散的快，反之则慢。
考点二、色素的种类和吸收光谱1．提取绿叶中色素的关键（1）叶绿素不稳定，易被破坏，因此研磨要迅速、充分以保证提取较多的色素。
（2）滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以防止滤液挥发。
（3）称取绿叶的质量和加入无水乙醇的体积要适当，以保证提取液的浓度。
2．分离绿叶中色素的关键（1）滤液细线不仅要细、直，而且要含有较多的色素，因此要在滤液干后，重复画1～2次。
（2）滤纸上的滤液细线不能触及（或没入）层析液，否则会使滤液中的色素溶解于层析液中，滤纸条上得不到色素带，使实验失败。
3． 实验流程提取色素⎩⎪⎪⎨⎪⎪⎧取材：称取5 g 绿色叶片↓研磨：加少许SiO 2、CaCO 3和10 mL 无水乙醇↓过滤：漏斗基部放一块单层尼龙布 ↓收集：收集滤液，试管口用棉塞塞严制备滤纸条⎩⎪⎪⎨⎪⎪⎧干燥滤纸↓剪滤纸条：将滤纸剪成长与宽略小于试管长和宽的滤纸条，并在一端剪去两角↓铅笔画线：在距剪去两个角一端1 cm 处用 铅笔画一条细的横线画滤液细线⎩⎪⎨⎪⎧用毛细吸管吸取少量滤液↓画线：沿铅笔线画出一条细线↓待滤液干后，重复画一两次分离绿叶中的色素⎩⎪⎨⎪⎧将3 mL 层析液倒入试管中，装置如图所示插入滤纸条有滤液细线的一端朝下，随后用软木塞塞紧试管口。
注意：不能让滤纸条上的滤液细线触到层析液4、由操作要求探究操作目的5（1）收集到的滤液绿色过浅的原因分析 ①未加石英砂（二氧化硅），研磨不充分。
普通高中叶绿素提取和分离实验
植物叶绿体中色素的提取与分离实验报告用具：剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml 量筒一只，天平一只，试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片试剂：丙酮、无水乙醇、层吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、白沙（二氧化硅）、碳酸钙、碳酸钠材料：新鲜的紫茎泽兰叶、其他野生植物叶片背景资料：1、叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿素等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。
故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂而不用水。
2、叶绿素分布于基粒的片层薄膜上，加入少许二氧化硅是为了磨碎细胞壁、质膜、叶绿体被膜和光合片成，使色素溶解于丙酮中。
3、破碎的细胞中含有草酸等有机酸，叶绿素分子中含有的Mg元素处于不稳定化合太，镁离子与有机酸结合将导致色素分子破坏。
加入少许碳酸钙使得钙离子与有机酸结合，减少镁离子的转移，防止研磨时叶绿体色素的破坏。
所以在研磨时加入适量的碳酸钙，同时加入碳酸钠的道理亦如此。
4、在过滤时选用脱脂棉或纱布，而不用滤纸。
原因主要有下：（1）色素分子比较大，不容易透过滤纸；（2）滤纸有较强的吸附性而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度，影响实验效果；（3）叶绿素是脂溶性，根据相似相容的原理，脱脂棉可以减少实验过程中色素的流失，增强实验效果。
5、根据物理学中的毛细现象，画滤纸细线前滤纸必须经过干燥处理，是为了阻止水分子堵塞滤纸中的毛细管而影响层析液的扩散。
但如果用火烤的话，会使滤纸纤维变形同时破坏啦毛细管，而影响层析液的扩散。
6、由于液面的不同位置表面张力不同，纸条接近液面时，其边缘的表面的张力较大，层析液沿滤纸边缘扩散过快，而导致色素带分离不整齐的现象。
故而，在插入层析液的滤纸条一端剪去两个角。
7、为了防止滤纸条倒入层析液中而使层析实验失败。
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植物叶绿体中色素的提取与分离实验报告
用具：剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml 量筒一只，天平一只，试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片
试剂：丙酮、无水乙醇、层吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、白沙（二氧化硅）、碳酸钙、碳酸钠
材料：新鲜的紫茎泽兰叶、其他野生植物叶片
背景资料：
1、叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿素等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。
故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂而不用水。
2、叶绿素分布于基粒的片层薄膜上，加入少许二氧化硅是为了磨碎细胞壁、质膜、叶绿体被膜和光合片成，使色素溶解于丙酮中。
3、破碎的细胞中含有草酸等有机酸，叶绿素分子中含有的Mg元素处于不稳定化合太，镁离子与有机酸结合将导致色素分子破坏。
加入少许碳酸钙使得钙离子与有机酸结合，减少镁离子的转移，防止研磨时叶绿体色素的破坏。
所以在研磨时加入适量的碳酸钙，同时加入碳酸钠的道理亦如此。
4、在过滤时选用脱脂棉或纱布，而不用滤纸。
原因主要有下：（1）色素分子比较大，不容易透过滤纸；（2）滤纸有较强的吸附性而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度，影响实验效果；（3）叶绿素是脂溶性，根据相似相容的原理，脱脂棉可以减少实验过程中色素的流失，增强实验效果。
5、根据物理学中的毛细现象，画滤纸细线前滤纸必须经过干燥处理，是为了阻止水分子堵塞滤纸中的毛细管而影响层析液的扩散。
但如果用火烤的话，会使滤纸纤维变形同时破坏啦毛细管，而影响层析液的扩散。
6、由于液面的不同位置表面张力不同，纸条接近液面时，其边缘的表面的张力较大，层析液沿滤纸边缘扩散过快，而导致色素带分离不整齐的现象。
故而，在插入层析液的滤纸条一端剪去两个角。
7、为了防止滤纸条倒入层析液中而使层析实验失败。
同时，防止因液体表面张力引起层析液沿滤纸条向上的“壁流”而导致色素溶解。
8、色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。
滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。
把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。
结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。
符合我国的资源友好型社会。
操作步骤
1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏）和石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆，再加丙酮5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。
2．取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm 的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。
3．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。
4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠（即层析液）。
然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。
经过0.5—1小时后，观察分离后色素带的分布。
最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。
注意事项
纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析，避免吸入过多有害挥发物。
纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。
由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。
纸层析法又称纸色谱法。
以纸为载体的色谱法。
固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。
将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。
当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。
将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。
纸层析法
纸层析法是以纸上所吸附的水作固定相，用与水不相溶的溶剂作展开剂。
将欲分离的样品液体点在纸条上晾干。
当流动相沿纸条移动时，带动组分中的各组分以不同的速率向前移动，在移动时间内，不同的组分被带到纸上的不同部位，出现层析现象，以达到分离的目的。