精浆中性α-葡萄糖苷酶定量试剂盒
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)使用说明
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)使用说明货号：G8820规格：1g/5g级别：BR其他名称：α-D-葡萄糖苷酶;α-葡糖苷酶CAS号：9001-42-7提取来源：黑曲霉产品简介：α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase，EC 3.2.1.20）又被称为α-葡萄糖苷水解酶或葡萄糖基转移酶（GTase），是一种α-D-葡萄糖苷酶。
它可以从低聚糖类底物的非还原末端切开α-1,4-糖苷键释放出葡萄糖，或将游离的葡萄糖残基转移到另一糖类底物形成α-1,6-糖苷键，从而得到非发酵性的低聚糖。
α-葡萄糖苷酶来源广泛，在人体糖原的降解和动植物、微生物的糖类代谢方面具有重要的生理功能。
α-葡萄糖苷酶广泛应用于食品和发酵工业、化学工业以及医学应用等行业。
酶活定义：每小时产生1μg葡萄糖所需的酶量定义为一个α-葡萄糖苷酶活力单位。
酶活检测方法：参见QB2525-2001。
产品特性：酶活力：300000U/g最适作用温度：50℃，合适的作用温度：50-55℃。
最适作用pH：5.0，合适的作用pH：4.8-5.4。
外观：淡白色粉末或淡黄色液体，分子量约为68.5KD，无臭无味，溶于水，不溶于乙醚和乙醇。
用途：生化研究。
能水解葡萄糖苷(Glucoside)成葡萄糖和其他组成物质，是一种具有生物催化剂功能的蛋白质。
本产品的建议添加量为800U/g干物质，根据实际情况改变添加量。
抑制剂：铜、钛、钴等金属离子对本品有一定的影响。
铅、铝、锌等金属离子对本品有较强的抑制作用。
贮存：建议密封储藏于干燥、低温的环境中（≤25℃），最好在冷藏条件下（4-8℃）储藏。
25℃以下，液体可以储存3个月，保质期内酶活不会降低于产品标示的活力；4℃以下，可较长时间储存。
葡萄糖含量测定试剂盒
葡萄糖含量测定试剂盒葡萄糖含量测定试剂盒作为分析工具，酶法已在食品、生物化学和制药工业中得到了广泛的应用。
酶法具有特异性强，可重复性好，灵敏度高，检测速度快等优点，是理想的分析方法。
本试剂盒主要用酶法定量测定食品和其他材料中葡萄糖的含量。
葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。
在过氧化物酶的存在下，过氧化氢与邻联茴香胺反应，生成有色产物。
氧化的邻联茴香胺与酸反应，形成更稳定的有色产品。
在540nm下测定其吸光度值，吸光度值的变化与原来的葡萄糖浓度成正比。
本试剂盒适用于葡萄糖含量的比色测定，可完成100次反应。
试剂准备1. 酶溶液：用98mL酶缓冲液溶解1管酶，颠倒混匀，不要涡旋。
分装后避光保存于-20°C。
2. 邻联茴香胺溶液：在邻联茴香胺试管中，加入5mL蒸馏水溶解酶，颠倒混匀，不要涡旋，分装后避光保存于-20°C。
3. 分析缓冲液：将酶溶液与邻联茴香胺溶液混合，比例为49比1，按需要的量进行混合，混合后的溶液，可在2-8°C下避光保存2周。
如果出现浑浊或有颜色形成，应丢弃。
4. 终止反应液：将市售浓硫酸与蒸馏水混合，比例为1:2。
切记，在40mL蒸馏水中，缓慢加入20mL浓硫酸。
不能将蒸馏水加入浓硫酸中。
其中，浓硫酸需用户自备。
使用说明一样本制备1. 液体样本制备：用蒸馏水将样品稀释至约20~80μg葡萄糖/mL。
如果需要，可过滤或去蛋白，使溶液澄清。
有颜色的溶液需要脱色；碳酸或发酵产品需要脱气。
2. 固体样本制备：称取样品约0.1mg。
用蒸馏水提取样品。
该溶液可加热（<75°C）以辅助提取。
用蒸馏水将样品稀释至约20~80μg葡萄糖/mL。
如果需要，可过滤或去蛋白，使溶液澄清。
二葡萄糖检测方法1：用不同浓度葡萄糖制备标准曲线2. 在第一个试管中加入2mL分析缓冲液启动反应，然后混合，记为零时；随后每间隔30或60秒，在一个试管中加入2mL分析缓冲液，以此类推。
α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法
[1]Ma C M, Hattori M, Daneshtalab M, et al. Chlorogenic acid derivatives with alkyl chains of different lengths and orientations: potent alpha-glucosidase inhibitors[J]. J Med Chem, 2008,51(19):6188-6194.
（6）0.2mol/L的Na2CO3：称取2.16g Na2CO3于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL，4℃下保存，备用。
2.2.1.2 PNP标准曲线的绘制
精确称取0.0278g对硝基酚（PNP），加0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，再用容量瓶定容至10mL，即得20mmol/L母液。用蒸馏水将其母液稀释成浓度分别为1、5、10、20、40、40、80和100μmol/L的标准溶液。取100μl上述标准液，各加入150μL 0.2mol/L的Na2CO3，混匀1 min，再于405 nm处测定其吸光度，得标准曲线方程：y=128.13x+0.3579 (R2 =0.9998)，其中y为浓度，x为吸光值。
2.2.1.3α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定
测定方法参照Masao Hattori等试验条件，并做调整。实验分为空白组、对照组、样品空白组和样品组，各反应物按表中剂量在96孔板中进行加样，每组3个平行。按表依次加入PBS缓冲液、抑制剂溶液和底物，混合均匀，于37℃水浴保温10min，结束后，取出，加入37℃水浴的酶溶液，充分混匀，于37℃水浴反应20min，结束后加入150μL 0.2mol/L的Na2CO3溶液中止反应。由于PNPG在α-葡萄糖苷酶的作用下能水解产生葡萄糖和PNP，PNP在405nm处有最大吸收，其测定其吸光度，根据公式便可计算出各样品α-葡萄糖苷酶的抑制率及IC50值。
葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶法)产品技术要求beiken
葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中葡萄糖(GLU)的浓度。
1.1包装规格1.2产品组成成分试剂盒为单一液体试剂，主要组成成分如下：2.1外观试剂为微红色溶液，透明、无沉淀及絮状悬浮物，外包装完整无破损。
2.2净含量用通用量具量取，体试剂的装量不少于标示量。
2.3试剂空白吸光度用蒸馏水测试试剂盒，在500nm波长、1.0cm光径下，试剂空白吸光度应不大于0.2。
2.4分析灵敏度测试0.0126mmol/L的葡萄糖引起的吸光度变化应大于0.0004。
2.5线性区间葡萄糖的测试范围[2.2，25]mmol/L，线性相关系数（r）应不小于0.990；当测试范围在[2.2，4.0）mmol/L区间内，绝对偏差不超过±0.4mmol/L；当测试范围在[4.0，25]mmol/L区间内，相对偏差不超过±10%。
2.6精密度2.6.1批内精密度分别用高、中、低三个水平的质控品测试试剂盒，所得结果的变异系数（CV）应不大于5.0%。
2.6.2批间精密度用同一质控品分别测试三个不同批号的试剂盒，其相对极差（R）应不大于10.0%。
2.7准确度测试标准物质（编号：GBW(E)090544、GBW(E)090545、GBW(E)090546、GBW09174），当浓度≤4.16mmol/L，实测值与标示值偏差应不超过±0.833mmol/L；当浓度＞4.16mmol/L时，实测值与标示值的偏差应不超过±20%。
2.8稳定性贮存在2℃～8℃条件下保存至有效期末，产品性能应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
精浆全自动生化分析仪
精浆全自动生化分析仪可实现高粘度精浆标本的准确加样，可满足部分特殊生殖检测项目的自动化检测需求。
具备生化和ELISA一体化检测功能，是生殖专科实验室的理想选择。
具有多项普通生化分析仪所不具备的特殊检测模式。
如：标本去蛋白处理、标准品与样品的非同步检测、设立与测定程序相异的每标本对照程序等。
配备有稳定的精浆复合质控物，可满足质量控制和标准化的要求。
也可用于除精浆以外的其它类型标本的检测，以及其它各种生化免疫项目的检测。
产品特点：1.能全面满足各大型生殖专科实验室日常精浆、血清标本的检测需要。
自动化检测，可减轻实验室的工作强度，提高精浆生化免疫项目检测的精确性和准确性。
2.可同时检测多个项目，特别适用于检测项目纷杂、需要在短时间内快速出报告的实验室。
3.具有质量控制功能，可自动绘制质控图。
配合BRED精浆复合质控品，可满足日常质量管理和实验室标准建设的需要。
4.中(英）文操作界面，生殖项目采用固化检测模块，方便使用。
可根据客户的需求，提供扩展项目检测的个体化技术服务。
5.操作简单，易于维护和保养。
6.具有HIS/LIS接口，可以与医院HIS系统和实验室LIS系统实现无缝衔接，实现生殖医学实验室管理的信息化。
仪器配套检测项目：1. 精浆锌定量检测（Zn）2. 精浆柠檬酸定量检测（Citric）3. 精浆果糖定量检测（Fructose）4. 精浆酸性磷酸酶定量检测（ACP）5. 精子顶体酶活性定量检测（Acrosin）6. 精浆弹性蛋白酶定量检测（Elastase）7. 精浆中性α-葡萄糖糖苷酶定量检测（NAG）8. 精浆（液）乳酸脱氢酶同工酶X定量检测（LDH-X）9. 其他生化、ELISA免疫项目检测产品参数：检测速度: 光学测试:240测试/小时，EIA：120测试/小时样品位置: 96个位置，任意放置常规/定标或质控,可随时插入急诊样本试剂位置：27个位置，可扩展至44个（EIA法）反应杯清洗：可以反应杯自动清洗，并可以自动监测清洗状态样本稀释：可以自动样本稀释，并可以选择稀释比例检测通道：4个光学通道同时检测样本测光方式：后分光，可做单/双波长光源：氙灯2000小时以上寿命，大部分可用3-5年RS232接口：标准RS232通讯接口HIS/LIS：具有HIS/LIS接口。
精液化验单解读
精液常规化验单解读三
无精子症
治疗原则 • 梗阻性 外科手术 辅助生殖技术 • 非梗阻性：辅助生殖技术
精液检验
精液常规 精子形态学分析 精液白细胞检测 精子存活试验 抗精子抗体检测 精子DNA完整性检测 精子自发顶体反应检测 精子顶体酶活性定量检测
精子形态学分析
弱精子症
分度 精子活力（a+b) 治疗
自然受孕
轻度弱精子症 ≧20%,<32% 中度弱精子症 ≧10%,<20%
重度弱精子症 ≧ 1， <10%
IUI/IVF
IVF/ICSI
极度弱精子症 <1 %
ICSI
精液常规化验单解读二
少精子症
精子浓度
轻度少精子症 ≧10,<15×106/ml
治疗
自然受孕/IUI
2010
WHO5
活动力
WHO-4 快 A级 B级 C级 D级 WHO-5
前向运动
慢
PR级
NP级 IM级
非前向运动 不动
活 动 力
参考值：
PR≥32% PR+NP≥40%
2010
WHO5
重要的参数
a+b级总数
=精液量×精子浓度 ×(a+b )%
结果的判断
a+b级总数=精液量×精子浓度 ×(a+b )%
常用变量参考值 Fra bibliotek颜色 总量
灰白色，浅黄色 ≥1.5ml (2-10)
PH
液化时间 精子浓度 活动率 活力
≥7.2
< 60 分钟 ≥15×106/ml ≥40% ≥32%
(7.2-8.0)
精浆的生化检验技术三修
0.5~20ul、50~200ul、100~500ul、 200~1000ul 石英定时钟
实验操作方法 试剂准备
糖苷酶抑制剂冻干粉以120μl蒸馏水溶解，4℃可使 用20天，分装保存-20℃可长期使用（切勿反复冻 融）
精浆柠檬酸定量测定
二、精浆中性α-葡萄糖甘酶测定（酶法）
检测目的
主要是附睾分泌功能的指标，较左旋肉毒碱 和甘油磷酸胆碱对附睾更敏感、更特异 先天性副睾发育不良明显降低、急慢性副睾 炎降低 正常见于单纯输精管阻塞无精症
原理
α-葡 糖
P-硝基酚吡喃葡糖苷 （底物） 苷酶 对硝基
加酸
酚（产物） Na2CO3 淡黄色物质，在405nm
男性生殖腺分泌功能
睾丸:精子、雄性激素、转铁蛋白、 附睾 : 中性α-葡萄糖苷酶、肉毒碱、甘油磷酸
胆碱、唾液酸等，与精子的功能性成熟有关 精囊腺: 分泌果糖、前列腺素等，呈碱性 前列腺: 分泌酸性磷酸酶、柠檬酸、谷氨酸转
肽酶、PSA、锌、镁等，其分泌物呈酸性
精液的组成和来源
OF STD1: 0 精液是由精子和精浆组成的混合物
检测前，将待检精浆标本用样本稀释液1:4稀释，充分混匀
五 、精浆酸性磷酸酶的检测
精浆果糖检测标准化和管理
精液经2 000 r/min离心在10 mi精n后，浆84. 中约30%来自前列腺，60%来自精囊
腺，5-10%来自于附睾及尿道球腺
正常精浆应具备
外观和粘稠度都正常
精浆各项生化指标正常 精液WBC＜ 1×106/ml 细菌培养阴性或细菌计数＜1000/ml
波长有最大吸收峰
加酸是抑制酸性α-葡萄糖甘酶 ，保护中性α-
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 产品说明书
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法)产品编号 产品名称包装 S0201S 葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 200次 S0201M葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法)1000次产品简介：葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) (Glucose Assay Kit with O-toluidine)是一种基于葡萄糖与邻甲苯胺的显色反应，通过比色法超高灵敏度、超宽线性范围检测血清、血浆、尿液、细胞或组织裂解液、饮料等溶液中葡萄糖含量的试剂盒。
本试剂盒灵敏度高、线性范围极宽、使用便捷。
本试剂盒对于在5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)范围的葡萄糖内有良好线性，并且具有操作便捷、显色稳定、无需煮沸、成本低、适合高通量检测等优点。
本试剂盒检测下限可以达到5mg/dl (20µl 样品)，相当于50ng/ml 或278µM ；检测上限可以达到2000mg/dl (5µl 样品)或10,000mg/dl (1µl 样品)，相当于20mg/ml (约111mM)或100mg/ml (约555mM)。
本试剂盒既可以轻松检测正常血样中的葡萄糖浓度，也可以检测高血糖血样品。
市售常见血糖仪的葡萄糖浓度检测范围约为1-30mM ，相当于约20-600mg/dl ，在检测一些过高血糖或过低血糖样品时会存在困难，而本试剂盒提供了5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)极宽的葡萄糖浓度检测范围。
本试剂盒所需样品体积小。
本试剂盒推荐的样品用量为5-20µl ，也可以使用如1-2µl 或更小体积的样品。
本试剂盒特异性好。
与常用的葡萄糖氧化酶-过氧化酶偶联(GOD-POD)法相比，由于邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，且不受其它还原性物质的影响，本试剂盒非常适合血清、尿液等溶液中葡萄糖浓度的检测。
葡萄糖(glucose)，也被称为dextrose 或grape sugar ，被认为是自然界中分布最广且最为重要的一种单糖。
精浆的生化检验技术(三修)
标本1实际浓度
结果报告
标本最终检测结果以“精浆中性α- 葡糖苷酶
总活性”方式报告，即总活性=标本浓度
(U/L)×一次射精的精液体积 (ml)=mU/ 一次射 精
正常参考值
≥20 mU /一次射精（WHO）
33
试验中注意事项
• 严格控制禁欲时间和样本离心速度 • 操作时加样要准确，混匀充分
ENTER NUMBER OF STANDARD REPLICATES: 01
CONCN. OF STD1: 0
CONCN. OF STD2: 4.46
CONCN. OF STD3: 8.92 CONCN. OF STD4: 17.84
CONCN. OF STD5: 35.68
按“平滑曲线”方式拟合标准曲线
空白孔单孔，所有检测孔吸光度均为之相减。
30
各检测孔在微孔板上的位置排列方式如下：
1 A B C 2 B S1 S2 3 R1 R1B R2 R5 R5B R6 4 …… …… …… ……
D
E F G H
S3
S4 S5 Q QB
R2B
R3 R3B R4 R4B
R6B
R7 R7B R8 R8B
……
…… …… …… ……
Centrifugation at 2 000 r/min for 10 minutes Centrifugation at 3 500 r/min for 15 minutes
25
20 15
10
5 0 1 5 9 例数
39
49
13
17
21
25
29
33
37
41
45
•
男科实验室诊疗常规
前言随着男科学领域的快速发展和国际交流的广泛、深入，对男科实验室诊断的标准化的共识日益增强，从而促使《男科实验室诊断指南》的编写，目的在于进一步规范目前男科实验室检测方法，以达到更好的标准；提高精液分析及其他相关分析的质量，使不同实验室的分析结果具有可比性，从而满足研究人员和临床医生的需要，并可减少重复检查给病人带来的沉重经济负担。
男科实验室诊断的分类男科实验室诊断以精液、血液分析为主，必要时可以采集分泌物镜检或培养来诊断。
男科实验室诊断包括男性不育症、性功能障碍、前列腺疾病、性传播疾病等的实验室诊断。
男性不育症实验室诊断项目一般可分为：①精液常规分析，一般包括精液量、pH值、液化时间、精液粘稠度、精子密度、精子活动力等的分析，也可包括精子存活率和精子形态学分析，但需临床医生特别注明，因为精子存活率和精子形态学分析均需要特殊的染色方法；②精浆生化指标的检测，目前常用的指标为精浆α葡糖苷酶、酸性磷酸酶和果糖的检测，它们可分别反映附睾、前列腺和精囊腺的分泌功能，有些实验室也开展了精浆锌和肉毒碱水平的检测，认为它们可分别反映前列腺和附睾的功能；③精液白细胞和生精细胞的检测；④抗精子抗体的检测；⑤精液培养及精子功能的检测，目前男科学实验室开展较少，其检测意义尚不明确。
性功能障碍的实验室诊断主要为生殖激素的测定。
前列腺疾病的实验室诊断主要包括前列腺按摩液的检测和前列腺特异性抗原的检测。
性传播疾病的实验室诊断主要包括淋病双球菌、支原体、衣原体等的检测。
遗传性疾病的实验室诊断主要为染色体的核型分析和各种特异性基因的检测。
要保证男科实验室检测结果的准确，以及不同实验室检测结果具有可比性，质量保证亦是男科实验室诊断的重要环节。
质量保证主要包括各种样本的正确采集和处理，以及相关的质量控制措施。
第一节男性不育症的实验室诊断一精液样本的采集要使精液分析为临床提供可靠的结果，精液的采集必须按标准化程序进行。
通常，精液采集需要注意以下几点：1 受检者采集精液前，实验室工作人员需要给受检者提供清晰的书面或口头指导，需要询问禁欲时间和受检目的，同时提供留样容器，并嘱咐留样时的注意事项。
α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性检测试剂盒说明书
第 1 页，共 2 页α-半乳糖苷酶（α-GAL ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：AC10467规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系本公司工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体50 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二液体15 mL×1瓶4℃保存试剂三液体80 mL×1瓶4℃保存标准品液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前每瓶加入5 mL 双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；2、标准品：5 μmol /mL 的对硝基苯酚溶液。
产品说明：α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能专一地催化α-半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。
α-GAL 对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供最初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。
α-GAL 分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL 活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s ，间隔10s ，重复30次），15000g ，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。
精浆中性α-葡萄糖苷酶活力水平与男性不育的关系探讨
140 CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.8 No.5 March20182018年3月第8卷第5期·检验医学·精浆中性α-葡萄糖苷酶活力水平与男性不育的关系探讨何韶坚1 梁爱芬2 徐艳霞1 郑练俊1 卢耀明1 翁光明1 罗 嘉1▲1.广东省东莞康华医院生殖医学中心，广东东莞 523000；2.广东省东莞康华医院检验医学中心，广东东莞 523000[摘要] 目的 探讨中性α-葡萄糖苷酶在精浆中的活力水平与男性不育的关系。
方法 回顾性分析2017年1～6月于我院生殖医学中心就诊的176例不育男性患者，其中梗阻性无精子症组60例，少精子症组116例；另选取同期于我院检查精子质量结果正常的124例作为正常精子组，检测并比较各组精液参数及精浆中性α-葡萄糖苷酶含量。
结果 各组精液量与液化时间比较差异无统计学意义（P ＞0.05）；各组精浆中性α-葡萄糖苷酶检测异常发生率比较：少精子症组（36/116，30.76%），梗阻性无精子症组（42/60，70.00%），正常精子组（21/124，16.93%），梗阻性无精子症组、少精子症组、正常精子组的精浆中性α-葡萄糖苷酶异常发生率不相同，比较差异有统计学意义（χ2=51.827，P ＜0.001），其中少精子症组异常发生率高于正常精子组（χ2=6.579，P ＜0.05），梗阻性无精子症组异常发生率高于少精子症组（χ2=24.331，P ＜0.001）。
结论 梗阻性无精子症与少精子症中精浆中性α-葡萄糖苷酶异常发生率显著高于正常精子人群，精浆中性α-葡萄糖苷酶检测在附性腺病变引起的男性不育诊断方面具有一定的临床应用价值。
[关键词] 精浆中性α-葡萄糖苷酶；男性不育症；梗阻性无精子症；少精子症[中图分类号] R277.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2018）05-140-03Relationship between the activity level of neutral alpha glucosidase in seminal plasma and male infertilityHE Shaojian 1 LIANG Aifen 2 XU Yanxia 1 ZHENG Lianjun 1 LU Yaoming 1WENG Guangming 1 LUO Jia11.Dongguan Kanghua Hospital Reproductive Medicine Center,Dongguan 523000,China;2.Dongguan Kanghua Hospital Laboratory Medicine Center,Dongguan 523000,China[Abstract] Objective To investigate the relationship between the activity level of neutral alpha glucosidase in seminal plasma and male infertility. Methods A retrospective analysis of 176 infertile men who were treated in our reproductive medicine center from January to June 2017,including 60 cases of obstructive azoospermia group and 116 cases of oligozoospermia group.In addition,124 cases of normal sperm were selected as normal sperm group in our hospital during the same period.The semen parameters and neutral α-glucosidase content in seminal plasma of each group were detected and compared. Results There was no significant difference between the quantity of semen and the time of liquefaction (P ＞0.05).The incidence of abnormal detection of neutral alpha glucosidase in seminal plasma of each group was compared:oligozoospermia group (36/116,30.76%),obstructive azoospermia group (42/60,70%),normal sperm group (21/124,16.93%),the incidence of abnormal neutral alpha glucosidase in seminal plasma of obstructive azoospermia group,oligozoospermia group and normal sperm group was different,the difference was statistically significant (χ2=51.827,P ＜0.001).The incidence of abnormal sperm in oligozoospermia group was higher than that in normal sperm group (χ2=6.579,P ＜0.05),and the incidence of abnormal in obstructive azoospermia group was higher than that in oligozoospermia group (χ2=24.331,P ＜0.001). Conclusion The incidence of abnormal neutral alpha glucosidase in the seminal plasma of obstructive azoospermia and oligozoospermia is significantly higher than that of normal sperm.The detection of neutral alpha glucosidase in seminal plasma has a certain clinical value in the diagnosis of male infertility caused by gonadal lesions.[Key words] Seminal plasma neutral alpha glucosidase;Male infertility;Obstructive azoospermia;Oligospermia▲通讯作者目前临床评估男性生育功能主要通过精液常规分析法，重视精浆生化指标的检查，了解精子质量，有利于全面评估男性生殖能力[1]。
α-葡萄糖苷酶测定法
α-葡萄糖苷酶測定法α-葡萄糖苷酶测定法：原理、应用与意义α-葡萄糖苷酶是一种重要的生物酶，广泛存在于生物体内，并在碳水化合物代谢中起着关键的作用。
为了更好地研究和理解α-葡萄糖苷酶的活性、功能以及与疾病的关系，开发出准确、可靠的α-葡萄糖苷酶测定法显得尤为重要。
本文将详细介绍α-葡萄糖苷酶的测定法，包括其原理、应用和意义。
一、测定法原理α-葡萄糖苷酶测定法基于酶与底物反应的原理。
在存在α-葡萄糖苷酶的情况下，特定底物（如p-硝基苯酚-α-D-吡喃葡萄糖苷，简称pNPG）会被酶水解，生成p-硝基苯酚（pNP）和葡萄糖。
其中，pNP具有明显的黄色，并且在405nm处有最大吸收峰，因此可以通过测量405nm处的吸光度变化，来推算α-葡萄糖苷酶的活性。
二、测定法应用1.生物医学研究：α-葡萄糖苷酶与多种疾病有关，如糖尿病、肥胖症等。
通过测量生物样本（如血液、组织匀浆）中的α-葡萄糖苷酶活性，可以更深入地理解这些疾病的发病机理，并为新药物的开发提供思路。
2.食品工业：在食品加工中，α-葡萄糖苷酶的应用也越来越广泛，如面包发酵、啤酒酿造等。
通过测定法，可以准确地控制酶的使用量，确保产品的质量。
3.环境保护：某些环境污染物也会影响α-葡萄糖苷酶的活性。
因此，该测定法可被用于评估环境污染的程度。
三、测定法的意义1.提供疾病诊断依据：通过比较健康人与患者体内α-葡萄糖苷酶的活性差异，可以为疾病的早期诊断提供依据。
2.指导临床治疗：对于已经确诊的患者，通过监测α-葡萄糖苷酶活性的变化，可以评估治疗效果，指导临床用药。
3.推动相关产业发展：在食品、制药、环保等相关产业中，准确、可靠的α-葡萄糖苷酶测定法是产品开发和质量控制的关键。
随着测定法的不断完善和创新，这些产业也将获得更大的发展空间。
总结α-葡萄糖苷酶测定法作为一种重要的生物酶活性检测方法，不仅为生物医学研究提供了有力的工具，也为食品、环保等相关产业的发展提供了支持。
1、检验试剂目录
序 号 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 抗原修复液
试剂名称 兔抗 CK5（SP27)抗体 兔抗 DOG1（SP31)抗体 兔抗 Myoglobin 抗体 兔抗 C-erbB-2 抗体 突触素抗体试剂 苏木素体细胞染色液 (CD3+CD20)(B/T 双染 DAB 染色液（放大聚合物法） DAB 染色液（放大聚合物法） DAB 染色液（聚合物法） DAB 染色液（聚合物法） DAB 染色液（链霉菌-生物素法） DAB 染色液（链霉菌-生物素法） DAB 染色液（增强聚合物法） DAB 染色液（增强聚合物法） DouMaxVision TM DouSP TM 免疫组化双染 HPV16 人乳头状瘤病毒 16 SuperKin TM 肾病免 T/B 细胞淋巴瘤免疫组化双染诊断 T/B 细胞淋巴瘤免疫组化双染诊断 肺癌组织学分型免疫组化双染检测 肺癌组织学分型免疫组化双染检测 即用型快捷免疫组化 MaxVisi 即用型快捷免疫组化 MaxVisi 即用型快捷免疫组化 MaxVisi 即用型免疫组化 EliVision 即用型免疫组化 EliVision 即用型免疫组化 EliVision 即用型免疫组化 UltraSens 即用型免疫组化 UltraSens 即用型免疫组化 UltraSens 即用型组合一抗免疫组化单克隆抗体 即用型组合一抗免疫组化单克隆抗体 鼠抗 EB 病毒(EBV)免疫组化单 鼠抗 EB 病毒(EBV)免疫组化单 鼠抗 EB 病毒(EBV)免疫组化单 鼠抗人 Bax 免疫组化单克隆抗体 鼠抗人 Bax 免疫组化单克隆抗体 鼠抗人 Bax 免疫组化单克隆抗体
α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法
溶液配制底物(pNPG)溶液：pH 值6.8 的0.1 mol/L 磷酸缓冲液配制成浓度为5 mmol/L (1.505mg/ml)反应终止液：0.2 mol/L Na2CO3称取2.16g Na2CO3于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL，4℃下保存，备用。
阳性对照药品阿卡波糖溶液:精密称取阿波卡糖样品，以磷酸缓冲液为溶剂溶解，配成10 mg/ml的浓度。
配制DNJ标准溶液（抑制剂）：精确称取0.0010g DNJ 标准品，用容量瓶准确定容到10mL，配制成1000μg/mL DNJ标准母液。
将母液分别稀释成、1、5、10、20、40、60μg/mL六个不同梯度的标准品溶液，备用。
α-葡萄糖苷酶的酶溶液：用磷酸缓冲液配制成0.26 U/ml α-葡萄糖苷酶的酶溶液。
OR 0.2 U/ml?配制α-葡萄糖苷酶的酶溶液：将冻干酶粉（酶活力为14u/mg）用0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，配制成2u/mL的母液。
再将酶液分别稀释，配制成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0u/mL的酶溶液，备用。
样品组（药物种类*浓度组数*3）样品空白组（药物种类*浓度组数）对照组空白组50 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG阳性对照组 60 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG50 μl 磷酸缓冲液 +20 μl 药液 +20 μl PNPG 70 μl 磷酸缓冲液 +20 μl PNPG80 μl 磷酸缓冲液 +20 μl PNPG振荡使充分混匀 37 ℃水浴10 min+100 μl 酶溶液 振荡使充分混匀 37 ℃水浴20 min+ 150 μl 0.2 mol/L Na 2CO 3在酶标仪405nm 处 测定吸光度+100 μl 酶溶液 +100 μl 酶溶液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
精浆中性α-葡萄糖苷酶定量检测试剂盒
简介：
精浆中含有源于附睾的中性α-葡萄糖苷酶同工酶和前列腺分泌的酸性同工酶，后者能够被选择性抑制，因此测定中性α-葡萄糖苷酶可反映附睾的功能。
Leagene 精浆柠檬酸定量检测试剂盒测定原理是硝基苯酚吡喃葡萄糖苷(PNPG)在α-葡萄糖苷酶的作用下分解成p-硝基苯酚(PNP)，p-硝基苯酚通过96孔板测定仪或分光光度计测定吸光值，同时做PNP 标准曲线，通过标准曲线来计算精液中PNP 的具体含量，经过换算获得中性α-葡萄糖苷酶的活性。
Leagene 精浆柠檬酸定量检测试剂盒是根据Cooper 法改良而来，在合适浓度范围内有较好的线性关系。
用分光光度计测定吸光值，若采用比色杯时，应按照比例调节精液和试剂的量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 1.5ml 离心管
2、 正向置换型加样器
3、 水浴锅或恒温箱
4、 96孔板
5、 酶标仪或分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、 制备标准曲线：用PNP Developer 稀释PNP 标准(5mM)。
取离心管加入PNP 标准
(5mM)和PNP Developer 混合，即获得浓度为200μM 的PNP 标准；取离心管，分
编号 名称
TC0104 50T Storage
试剂(A): PNP Developer 100ml 4℃ 试剂(B): α-Gul Inhibitor 1ml -20℃ 试剂(C): PNPG powder 5支 4℃ 避光 试剂(D): PNPG buffer
50ml RT 试剂(E): PNPG Stopping buffer 50ml RT 试剂(F): PNP 标准(5mM) 2×1ml
-20℃ 避光
使用说明书
1份
别加入480μl、360μl、240μl 、120μl 的PNP标准(200μM)并依次加入120μl、240μl、360μl 、480μlPNP Developer并混匀，即获得浓度为160μM、120μM、80μM、40μM的PNP标准。
2、制备样本：离心精液样本，取上层精浆置于新的离心管，储存于待检。
3、样本预处理：解冻去除精子的精浆，在混旋器上充分混匀。
取若干新的离心管，用正向
置换型加样器加入混匀好的精浆，每个精浆样本应加入作为复测。
同时取离心管，加入作为空白对照。
可选步骤：取离心管加入含有中和低活性葡萄糖苷酶的内质量控制的混合和4份含有高活性葡萄糖苷酶的内质量控制的混合精液。
4、样本检测：
①精液空白：向含高活性质控的混合精液中加入α-Gul Inhibitor，产生精液空白值。
②配制PNPG孵育液：取PNPG powder加入PNPG buffer，恒温振荡器上50℃振
荡10min，使其完全溶解。
③PNPG孵育：向每个离心管中加入PNPG孵育液，孵育，在孵育过程中要准确控制
温度和时间。
④终止反应：向每管样本中加入PNPG Stopping buffer，混匀，终止孵育。
⑤测OD值：将标本、标准品、空白对照、精液空白、ddH20小心移入96孔板中，
以ddH20作为空白管调节零点，用酶标仪或96孔读数板读下的结果。
计算结果：
①做PNP标准曲线，从标准曲线上读取产生的PNP浓度(μM)。
②乘以校正系数(0.6194)得到未稀释精浆中的α-葡萄糖苷酶的活性(U/L)。
注：1单位
(U)葡萄糖苷酶活性=37℃条件下每分钟产生1μmolPNP。
由于检测分析的结果是
在1.115ml总体积中含有15μl精液，孵育120min条件下获得的，因此，校正系数=1115/15/120=0.6194。
③从每个样本中减去加入α-Gul Inhibitor的精液空白值，得到校正的葡萄糖苷酶的活
性。
④乘以1次射精的精液体积，得到每次射出的精液中葡萄糖苷酶活性(mU)。
⑤参考值：一次射精柠檬酸浓度≥20mU。
注意事项：
1、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
2、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检
测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样本后重新测定。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关:
编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DF0111 中性福尔马林固定液(10%)
IH0305 柠檬酸钠抗原修复液(50×)
NR0002 Trizol(总RNA提取试剂)
PE0103 Acr-Bis(30%,29:1)
PW0082 丽春红S染色液(1×Ponceau S)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。