DB33T 624-2006 动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定 气相色谱-质谱法.doc
盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检验方法的简化与验证
“瘦肉精”是一种特定的可用来减少被饲养动物脂肪、增加其瘦肉比例的药物的俗称。
传统型瘦肉精一般是指β－受体激动剂，是一类人工合成的苯乙醇胺类物质，包括克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林、异丙喘宁、氯丙那林、西马特罗与非诺特罗等，其中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺最为常见。
该类药物在动物性食品中的残留会对消费者的身体造成不同程度的影响，对于易感人群危害更为严重[1-2]。
2002年，β－受体激动剂被列入《食用动物禁用兽药及其他化合物清单》[3]。
现阶段，对β－受体激动剂和喹乙醇及其代谢物的检测方法较多。
刘佳等[4]建立了一种检测猪肝中26种β2-受体激动剂药物残留的反相液相色谱-串联质谱方法；金玉娥等[5]也采用液相色谱—串联质谱测定了猪肉和猪肝中11种β2-受体激动剂，上述检测方法取得了比较理想的结果。
但上述研究的前处理过程都比较复杂，一般包括酶解、提取、固相萃取的过程，比较费时费力。
GB/T 21313-2007[6]的检验方法中用高氯酸溶液进行提取，众所周知，高氯酸为强氧化易爆品，具有较高的危险性，在实验室使用具有较大的安全隐患。
本研究对GB/T 21313-2007的检验方法进行调整，用盐酸溶液代替高氯酸溶液进行提取，简化过柱净化程序，提高实验效率，降低上机液杂峰干扰。
1 材料与方法1.1 试验原理试样中β-受体激动剂残留经酶解后，再用盐酸溶液提取，经过滤和离心后，上清液用MCX固相萃取柱净化，液相色谱/串联质谱仪测定，外标峰面积法定量。
1.2 试验仪器液相色谱Agilent1200；二级串联质谱Agilent6410；万分之一分析天平；水浴锅。
1.3 试剂甲酸（99%）；乙腈，色谱纯；甲醇，色谱纯；乙酸，分析纯，乙酸钠（NaAc·4H2O）；盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液：准确称取0.010 0 g标准品（色谱纯≥99.5%），用甲醇溶解并定容至10 mL，即可得浓度为1 000 mg/L的标准储备液，-18 ℃保存，有效期12个月。
瘦肉精相关检测标准汇总
瘦肉精相关检测标准汇总央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。
GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。
本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。
本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。
本方法检出限：第一法气相色谱—质谱法为0.5μg/kg;第二法高效液相色谱法为0.5μg/kg；第三法酶联免疫法为0.5μg/kg。
线性范围：第一法气相色谱—质谱法为0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng～4ng；第三法酶联免疫法为0．004ng～0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。
GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。
GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。
GB/T21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了β-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat-erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、马贲特罗（mapenterol）、溴代克仑特罗（brom-chlorbuterol）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。
饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的定性筛查
饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的定性筛查前言β-受体激动剂能与动物和人体内多数组织细胞膜上的β-受体结合，调节交感神经系统兴奋，又称β-兴奋剂、β2-肾上腺素受体激动剂，以克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇为代表。
在发现具有促使肉畜体内营养素重新分配、提高瘦肉率功效后，20世纪80年代初克仑特罗和沙丁胺醇被用于改善肉畜胴体品质。
西班牙1990年和1992年两次爆发食用残留克仑特罗的牛肉、牛肝中毒的严重食品安全事件，自此欧盟颁布法规，禁止此类药物用于饲养食品动物。
我国也早在1999年颁布《饲料和饲料添加剂管理条例》，禁止使用β-受体激动剂作为动物促生长调节剂。
但近几年仍时有残留克仑特罗、莱克多巴胺动物组织导致的食品安全事件发生。
可见加强β-受体激动剂残留的检测任重道远。
本研究基于PCS-MS-Mate联用质谱分析系统开发了饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的快速检测方法，无需繁琐的样品前处理，1步操作1min完成样品分析，本方法的检出限均为1μg/g。
沙丁胺醇结构式克伦特罗结构式莱克多巴胺结构式图1. 三种β-受体激动剂的结构式实验部分1.3实验方法 1.3.1实验样品沙丁胺醇，CAS 18559-94-9。
冷藏保存，使用时稀释至所需浓度。
克伦特罗，CAS 37148-27-9。
冷藏保存，使用时稀释至所需浓度。
莱克多巴胺，CAS 97825-25-7。
冷藏保存，使用时稀释至所需浓度。
阴性饲料样品存于密封容器中，常温保存。
1.3.2样品检测用微量固体取样器移取约一平勺饲料粉末，加载于PCS 试剂盒样品窗口的纸基上，取5滴快速检测专用溶剂-B01加载于溶剂窗口，而后将PCS 试剂盒插入MS-Mate 进样平台，供质谱测定。
实验结果与讨论2.1质谱图图2.1 加标饲料中沙丁胺醇(1μg/g)的三级子离子扫描谱图图2.2 加标饲料中克伦特罗(1μg/g)的三级子离子扫描谱图PCS luoce sample 1pm ACN-1#2-26RT:0.07-0.52AV:8NL: 1.73E1F:ITMS + p ESI Full ms3 240.00@cid25.00 222.00@cid25.00 [100.00-400.00]100120140160180200220240260280300320340360380400m/z5101520253035404550556065707580859095100R e l a t i v e A b u n d a n c e165.75147.75203.75221.67193.75129.75175.75161.92109.00204.75P CS luoce sample 1pm ACN-1#2-24RT:0.02-0.47AV:8NL: 5.50E 2F:ITMS + p E SI Full ms3 277.00@cid25.00 259.00@cid25.00 [100.00-400.00]100120140160180200220240260280300320340360380400m/z5101520253035404550556065707580859095100R e l a t i v e A b u n d a n c e202.67240.83160.83258.67130.83170.83188.83230.75104.50382.08338.58图2.3 加标饲料中莱克多巴胺(1μg/g)的三级子离子扫描谱图2.2检出限通过对阴性饲料样品加标的方式考察了本方法的检出限，以S/N=3计，本方法沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的检出限均为1μg/g 。
液相色谱串联质谱法测定饲料中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A
Ｓ ｍｐｅｐｅ ａａｉｎ ａ ｄＨＰ Ｃ－ Ｓ／Ｍ Ｓａ ａｙｉａ ｏ ｄｔ ｎ ｒ ｘ ｍｉｅ ｎ ｐｉ ｚ ｄｃ ｔ ａｌ ｙｕ ｅｏ ｅｉｓ ｆ ａ ｌ ｒｐ ｒｔ ｎ Ｌ Ｍ ｏ ｎ ｌｔ ｌ ｎ ｉｏ ｓ ｃ ｃ ｉ ｗｅｅｅ ａ ｎ ｄａ ｄｏ ｔ ｍｉｅ ｒ ｉ ｌ ｂ ｓ ｆ ｓｒｅ ｉ ｃ ｙ ｌ ｆ ｏ
Ａ。通过 一 系列实验对 样品前 处理条件 进行 了优化 ， 品经 乙腈提 取 、 样 乙酸酸化 、 净化 后 ， 采用 ＨＰ Ｃ Ｅ ＩＭＳ ＭＳ Ｌ — Ｓ－ ／
检 测 分析 ， 多反 应监 测模 式 （ Ｍ ） ， 标 法定 量 。 方 法 的检 出限 为 ０ ５ｍｇ ｋ ， 组 分 浓 度 在 ００ １ ０２ｍｇ 在 ＭＲ 下 外 ． ／ ｇ各 ０ ． ～． ０ ／
液 相 色 谱 串联 质 谱 法 测 定 饲 料 中盐酸 克 伦 特 罗 、 克 莱 多 巴 胺 、 丁 胺 醇 、 乙 醇 胺 Ａ 沙 苯
顾亮， 丁磊
（ 徽 国 家农 业 标 准 化 与 监 测 中心 ， 肥 安 合 ２０５ ） ３ ０ １
摘要
利 用液相 色谱 串联质谱 （ Ｃ— Ｓ－ ／ Ｌ Ｅ ＩＭＳ ＭＳ） 测定饲料 中盐酸克伦特 罗、 莱克多 巴胺 、 沙丁胺醇 、 乙醇胺 苯
Ｇｕ ａ Ｌｉｎｇ， ｉ ｉ Ｄ ｎｇＬｅ
瘦肉精相关检测标准汇总
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GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。
本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。
本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。
本方法检出限：第一法气相色谱—质谱法为0.5μg/kg;第二法高效液相色谱法为0.5μg/kg；第三法酶联免疫法为0.5μg/kg。
线性范围：第一法气相色谱—质谱法为0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng～4ng；第三法酶联免疫法为0．004ng～0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。
GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。
GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。
GB/T21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了β-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat-erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、马贲特罗（mapenterol）、溴代克仑特罗（brom- chlorbuterol）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。
盐酸克伦特罗,莱克多巴胺,沙丁胺醇联合检测卡.
瘦肉精三联检测卡(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇联合检测卡说明书【简介】瘦肉精是一类人工合成的β-受体激动剂,根据结构差异分为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。
因该类药物可以提高瘦肉率,减少脂肪沉积和促进动物生长,被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后,残留的瘦肉精可引起食物中毒,牲畜产品中瘦肉精残留已成为公众关注的社会问题。
因此,世界许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精。
瘦肉精三联快速检测卡可同时测定猪尿中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇,提供生猪饲养时是否使用瘦肉精的依据。
【检测原理】瘦肉精三联快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂,可同时检测尿液样品中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三类瘦肉精。
具有简单、快速、无需特殊的仪器设备等特点,既可以在实验室进行,也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本需要量少、简便快速、适用于大量样本的筛查。
结果准确,检测盐酸克伦特罗灵敏度为3ppb、莱克多巴胺灵敏度为5ppb、沙丁胺醇的灵敏度为10ppb,准确率大于95%。
【样品处理】尿液可直接用于检测。
若尿样呈浑浊状,需先用滤纸过滤或离心,取清亮部分用于检测。
【操作步骤】1、从检测卡袋中取出所需的检测卡,放置室温复温,在卡上做好样品编号标记。
2、用一次性取样滴头吸取样品,滴入加样孔,每孔3滴(75ul,在加液过程中勿使液体溢出加样孔。
3、5-10分钟内观察结果,15分钟后的结果无效。
【结果】对照线(C和检测线(T同时出线,表明尿液样品中【储存条件】1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存,忌冷冻。
2、在4-30℃下的环境温度操作。
3、有效期见包装盒侧面。
4、保存期间应避免光照、潮湿和过热。
检测卡保质期为12个月。
5、检测线T出现,产品失效。
【结果判断】泳道1:克伦特罗泳道2:莱克多巴胺泳道3:沙丁胺醇阴性(-:质控线出现、检测线清晰出现,表示样品中不含有瘦肉精或其浓度低于检测限。
液质联用测定饲料中的沙丁胺醇莱克多巴胺和盐酸克伦特罗
液质联用测定饲料中的沙丁胺醇莱克多巴胺和盐酸克伦特罗作者：邓艳芹吴国顺倪杨帆刘铭刘斌李红萍来源：《农业与技术》2016年第22期摘要：本试验对沙丁胺醇、盐酸克伦特罗和莱克多巴胺3种β-兴奋剂在饲料中的提取方法及其检测的色谱条件、质谱条件进行了优化。
样品经乙酸-甲醇提取，混合型阳离子交换SPE小柱净化后，采用HPLC-MS/MS检测分析。
3种目标化合物的检出限为0.005 mg/kg，定量限为0.02 mg/kg。
加标回收率为70.2%～118.1%，5次测定结果的相对标准偏差为7.6%～8.1%。
本试验所建立的前处理方法和仪器分析方法，不仅节省了检测时间，同时获得较好的回收率和精密度，可用于饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗残留的测定。
关键词：沙丁胺醇；莱克多巴胺；盐酸克伦特罗；液相色谱串联质谱；饲料中图分类号：S816.17 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20161132090盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺属于β-兴奋剂，常被非法用于肉用动物的养殖以提高瘦肉率，通过聚集在动物可食用组织中而对人的组织器官产生毒副作用。
开展饲料及饲料添加剂的检测是从食品安全源头进行控制的有效手段，对相关检测方法的研究具有重要意义。
1 实验部分1.1 仪器与试剂仪器为赛默飞TSQ quantum Access MAX液质联用；固相萃取柱（Agela公司，Cleanert PCX-SPE）。
莱克多巴胺、沙丁胺醇和盐酸克伦特罗标准品购自农业部环境保护科研监测所（100ug/ml），根据需要用2%（v/v）冰乙酸稀释至合适浓度。
HPLC级甲醇和乙腈（J.T.Baker）。
甲酸铵、氨水为分析纯，冰乙酸为优级纯，甲酸为色谱纯。
用水符合GB/T6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》的规定。
1.2 样品前处理按GB/T14699.1规定方法采样约1.5kg，以四分法缩减至200g。
用橡皮锤对样品进行粉碎，过40目筛后充分混匀，装入磨口瓶中备用。
瘦肉精相关检测标准汇总
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GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。
本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。
本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。
本方法检出限：第一法气相色谱—质谱法为0.5μg/kg;第二法高效液相色谱法为0.5μg/kg；第三法酶联免疫法为0.5μg/kg。
线性范围：第一法气相色谱—质谱法为0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng～4ng；第三法酶联免疫法为0．004ng～0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。
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GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。
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本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat-erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、马贲特罗（mapenterol）、溴代克仑特罗（brom-chlorbuterol）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。
建立克伦特罗、沙丁胺醇残留分析方法评价体系的研究的开题报告
建立克伦特罗、沙丁胺醇残留分析方法评价体系的研究的开题报告一、选题背景与意义克伦特罗和沙丁胺醇是常见的禽畜药品，广泛应用于动物饲料中以加速生长和预防疾病。
然而，因为这两种药物的残留量极高且不易被分解，所以它们的滥用不仅会直接危害动物健康，而且可能对人类体健康产生潜在的风险。
鉴于此，为了保护消费者安全和动物健康，世界各国纷纷对这两种药物的使用和残留量进行了限制和监管，建立了相应的检测标准和方法。
目前，在我国，针对克伦特罗和沙丁胺醇的检测方法主要是基于高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）技术，以及酶联免疫吸附法（ELISA）等技术。
然而，这些方法存在着样品前处理繁琐、操作复杂、分析时间长、灵敏度差等不足之处，因此亟需建立新的评价体系，优化检测方法的性能指标，提高检测效率和精度。
二、研究目标本研究旨在建立克伦特罗和沙丁胺醇残留分析方法的评价体系，通过系统评估和比较不同方法的性能指标，以提高检测准确性和可靠性，为食品安全保障和动物养殖提供技术支撑。
三、研究内容1. 收集相关文献资料，了解克伦特罗和沙丁胺醇的物理化学性质、毒理学特性、残留行为和检测要求等方面的信息。
2. 建立克伦特罗和沙丁胺醇的标准品库，并确定合适的检测方法、仪器设备和操作流程。
3. 评价不同检测方法的性能指标，如检出限、准确度、特异性、重复性、稳定性等，分析其优缺点和适用范围，建立相应的评价体系。
4. 比较和验证不同方法的检测结果，评估其可靠性和准确性，并探讨其在实际应用中的可行性和局限性。
四、研究方法与技术路线1. 实验室前处理：样品制备、提取、净化等2. 检测方法建立：选取合适的HPLC-MS、ELISA等技术，优化分离条件和检测参数，建立分析方法。
3. 方法评价：评估不同方法的性能指标，如灵敏度、特异性、准确度、重复性、稳定性等，建立评价体系。
4. 结果分析：比较分析不同检测方法的结果，评估检测方法的可靠性和准确性，探讨其在实际应用中的优劣和适用范围。
高效液相色谱-质谱法分析( 沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、西马特罗,特步他林)原始记录
质谱条件
离子化模式：ESI +
质谱扫描模式：MRM
母离子
沙丁胺醇：
莱克多巴胺：
克伦特罗：
西马特罗
特步他林
子离子
沙丁胺醇：
莱克多巴胺
克伦特罗：
西马特罗
特步他林
定量
离子
沙丁胺醇：
莱克多巴胺：
克伦特罗：
西马特罗
特步他林
定量方法标准曲线
序号
1
2
3
4
5
6
混标浓度（ng/mL）
特步他林
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
仪器编号
××/××-070-2
电子天平FA2004
××/××-074-2
样品处理情况
按照GB/T22286-2008对样品进行处理。
标准溶液名称/浓度
沙丁胺醇，莱克多巴胺，克仑特罗，西马特罗，特步他林均为100μg/ml
色谱条件
色谱柱：UPLC-C18
柱温：40℃
流速：0.4mL/min
进样量：10μL
高效液相色谱-质谱法分析（沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、西马特罗，特步他林）原始记录
第1页，共页
检测项目
沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、西马特罗，特步他林
检测开始时间
年月日
检测依据
GB/T 22286-2008
检测结束时间
年月日
检测方法
高效液相色谱质谱联用法
温度/相对湿度
℃％
仪器名称/型号
PE Qsight220/A30
沙丁胺醇峰面积（A）
莱克多巴胺峰面积（A）
动物源性食品中克伦特罗 莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法
附件6动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201706）1范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2氢氧化钠。
3.1.3磷酸二氢钾。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5盐酸。
3.1.6氯化钠。
3.1.7氯化钾。
3.1.8三氮化钠。
3.1.9乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.11乙酸乙酯。
3.1.12磷酸二氢钠。
3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。
3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。
3.1.16Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取Tris（3.1.10）121.14g，溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0后用水定容至1000mL。
利用液相色谱一质谱联用法同时测定饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗
42 食品安全导刊 2011年5月刊ANAlySIS & TEST 分析与检测□ 珀金埃尔默仪器（上海）有限公司 供稿沙丁胺醇，莱克多巴胺和盐酸克伦特罗是饲料中主要检测的三种“瘦肉精”类添加物。
根据相关国家标准GB/T22147-2008的要求，这三种化合物应该采用液相色谱－质谱联法来进行检测。
本文中所介绍的方法主要根据GB/T 22147-2008的要求进行样品处理，并采用Perkinelmer Flexar SQ 300 MS液质联用仪进行分析检测，实现对三种化合物5分钟内的快速分离，其最低检出限可到0.5ppb，结果具有良好的重现性（RSD=2.6%）和较宽的线性范利用液相色谱－质谱联用法同时测定饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克伦特罗围（0.5～100ppb）。
实验与方法实验材料仪器：Pe r ki n el m e r Flexa r 10 UHPLC SQ 300 MS；试剂：沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸克伦特罗标准品、纯度>98%，超纯水、甲醇、乙腈（色谱纯），甲酸氨（>99.995%），甲酸（>98%），浓磷酸、冰乙酸、硫化钠（分析纯）；样品处理和标样配制：参照国标GB/T 22147-2008。
液相条件：流动相：A：0.1mol/L甲酸氨水溶液（甲酸调pH3.8），B: 乙腈。
流动相梯度：见表1。
色谱柱：Perkinelmer Brownlee A n a l y t i c a l D B C 18 1.9µm50×2.1mm；进样量：4µL；紫外波长：244nm。
本图为Perkinelmer Flexar SQ 300MS表1 流动相梯度Copyright©博看网 . All Rights Reserved.May 2011 CHINA FOOD SAFETY 43分析与检测 ANAlySIS & TEST质谱条件：毛细管出口电压：100V ；脱溶剂温度：300℃；氮气流速：10L/min；扫描: 100～500m/z；选择离子：沙丁胺醇：240m/z；莱克多巴胺：302m/z；盐酸克伦特罗：277m/z。
莱克多巴胺、沙丁胺醇与克伦特罗三合一免疫亲和柱的制备及应用
莱克多巴胺、沙丁胺醇与克伦特罗三合一免疫亲和柱的制备及应用余乐;霍光华;符金华【摘要】将莱克多巴胺抗体和克伦特罗抗体偶联到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上,制成免疫亲和柱,对其柱性能进行测试,并优化了使用条件,结合高效液相色谱-串联质谱对实际饲料样品进行检测.结果表明:该免疫亲和柱对莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗的柱容量依次为49,27,24 ng/mL胶,保质期为5个月,最佳洗脱液为甲醇,对3种物质的回收率为78.9％～ 96.5％,RSD均小于1.5％,检出限为0.1～1 ng/g.该法可同时检测饲料中3种瘦肉精的含量.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2014(033)006【总页数】5页(P693-697)【关键词】莱克多巴胺;沙丁胺醇;克伦特罗;免疫亲和柱;高效液相色谱-串联质谱【作者】余乐;霍光华;符金华【作者单位】江西农业大学生物科学与工程学院,生物资源保护和利用研究所,江西南昌330045;江西农业大学生物科学与工程学院,生物资源保护和利用研究所,江西南昌330045;江西省饲料监督监察所,江西南昌330045【正文语种】中文【中图分类】O657.1;TQ613莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗即瘦肉精均为β-肾上腺素能激动剂。
人若长期摄入或者一次性摄入大量含瘦肉精的食品，可能会出现头晕、心慌、恶心、四肢无力、手颤等症状。
心脏病、高血压等心血管疾病患者尤其要注意。
瘦肉精还可能诱发恶性肿瘤。
因此，我国明确规定禁止将瘦肉精用于动物饲料。
多种瘦肉精的同时检测已有报道，曾红惠等［1］研究了同时检测肉制品中沙丁胺醇、莱克多巴胺和克伦特罗的高效液相色谱法，此法操作简便，结果基本满足检测要求;臧李娜等［2］用二极管阵列检测器串联荧光检测器，检测肉中的沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗;李拥军等［3］采用高效液相色谱－串联质谱的方法测定了饲料中的沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺;蒋万枫等［4］采用超高效液相色谱－四极杆－飞行时间质谱法快速筛查动物组织中7种β受体激动剂残留。
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ICS 67.120C 53 动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定气相色谱-质谱法Determination of the residues of terbutaline, clenbuterol, salbutamoland ractopamine in animal tissues —Gas chromatography-mass spectrometry method浙江省质量技术监督局 发布DB33DB33/T 624—2006前言本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，建立了气相色谱-质谱法测定动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留的方法。
本标准附录A、附录B为资料性附录。
本标准由浙江省农业厅提出并归口。
本标准起草单位：浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心。
本标准主要起草人：陈慧华、应永飞、吴平谷、任玉琴、陆春波、陈勇、周文海、林仙军、赵永信。
IDB33/T 624—2006动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定气相色谱-质谱法1 范围本标准规定了气相色谱－质谱（GC－MS）法测定动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留量的方法。
本标准适用于畜禽肌肉、肝脏、肺、肾等组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留量的测定。
本方法检测限为：特布他林1.0μg/kg、克伦特罗2.0μg/kg、沙丁胺醇1.0μg/kg、莱克多巴胺2.0μg/kg。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 方法原理试样加入内标物后，用甲醇提取和离子交换固相萃取柱净化，氮气吹干，与N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）进行衍生化反应，于气相色谱－质谱仪上进行测定。
内标法定量。
4 试剂和溶液所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验室用水为去离子水，应符合GB/T 6682二级水的规定。
4.1 甲醇4.2 乙酸乙酯：色谱纯4.3 氨水4.4 盐酸4.5 0.2mol/L盐酸溶液：取盐酸（4.4）9mL，加水至500mL，摇匀，即得。
4.6 30mmol/L盐酸溶液：取0.2mol/L盐酸溶液（4.5）15mL，加水至100mL，摇匀，即得。
4.7 无水硫酸钠：450℃干燥12h，备用。
4.8 正己烷4.9 甲苯：色谱纯4.10 衍生剂：N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）4.11 4％氨水/乙酸乙酯溶液：取氨水（4.3）4mL加乙酸乙酯（4.2）至100mL，超声15min，充分混匀，即配即用。
4.12 SLS阳离子交换固相萃取柱1)：每根柱填料量为400mg，柱体积5mL。
4.13 标准品：特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺，纯度≥98%。
4.14 同位素内标物：D9-克伦特罗100μg/mL，D3-沙丁胺醇100μg/mL。
4.15 β2-兴奋剂标准储备液：取特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺标准品（4.13）10mg，1)SLS阳离子交换固相萃取柱是由杭州富裕科技服务有限公司提供的产品的商品名称，给出这一信息是为了给本标准的使用者提供方便，而不是主管部门对这一产品的认可。
1DB33/T 624—2006精密称定，分别置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，其浓度均为0.1mg/mL，置-20℃以下冰箱中保存，有效期为6个月。
4.16 β2-兴奋剂混合标准工作液：分别准确吸取适量的β2-兴奋剂标准储备液（4.15）于同一容量瓶中，用甲醇稀释成含特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺均为1.0μg/mL的混合标准工作液，置4℃～8℃冰箱中保存，有效期为1个月。
4.17 β2-兴奋剂内标工作液：分别准确吸取适量的β2-兴奋剂同位素内标物（4.14）于同一容量瓶中，用甲醇稀释成含D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇均为1.0μg/mL混合内标工作液，置4℃～8℃冰箱中保存，有效期为1个月。
5 仪器设备5.1 气相色谱-质谱仪：配有电子轰击（EI）源。
5.2 离心机：最大转速9000r/min或以上。
5.3 组织绞碎机。
5.4 组织匀浆机：最大转速10000r/min或以上。
5.5 分液漏斗：125 mL。
5.6 具塞玻璃试管：5mL，10mL。
5.7 涡旋混合器。
5.8 分析天平：感量0.00001g，0.01g。
5.9 超声波清洗器。
5.10 离心管：50mL，10mL。
5.11 氮吹仪。
5.12 移液器：量程20μL～200μL，100μL～1000μL。
6 分析步骤6.1 试样制备取有代表性的样品，经绞碎后，保存于-20℃冰箱中，备用。
6.2 试样提取称取试样5g（精确到0.01g），置于50mL离心管中，加β2-兴奋剂内标工作液（4.17）50μL；加甲醇20mL，10000r/min以上均质60s，加盖，于60℃超声波清洗器中超声20min；取出离心管，冷却后8000r/min 离心10min，倾出上清液至分液漏斗中，另取甲醇10mL重复提取一次，合并上清液；加正己烷20mL脱脂一次，分离甲醇相，在60℃下氮气吹至2mL以下；加0.2mol/L盐酸（4.5）3mL，充分混匀后，在9000r/min 离心10min，分出上清液，备用。
6.3 试样净化依次用甲醇5mL、水5mL、30mmoL/L盐酸溶液（4.6）5mL润洗阳离子交换固相萃取柱（4.12），取6.2上清液过柱，弃去流出液，并依次用水5mL和甲醇5mL淋洗柱子，抽干；用4％氨水/乙酸乙酯溶液（4.11）10mL洗脱，收集洗脱液，经无水硫酸钠（4.7）脱水，50℃氮气吹干；残余物中加乙酸乙酯5mL，置于超声波清洗器中超声5min，5000r/min离心5min，分出上清液至5mL具塞玻璃试管中，50℃氮吹至干，吹干物备用。
6.4 衍生化吹干物加入甲苯（4.9）100μL和衍生剂（4.10）100μL，加塞后于涡旋混合器充分混匀，在80℃±5℃的烘箱中恒温衍生60min，氮气吹干，加甲苯0.5mL溶解供GC-MS分析。
另取β2-兴奋剂混合标准工作液（4.16）适量，加β2-兴奋剂内标工作液（4.17）50μL，加乙酸乙酯5mL 后，氮气吹干，与样品同步进行衍生化。
6.5 仪器测定2DB33/T 624—2006 6.5.1色谱条件色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，或具同等性能的色谱柱；进样口温度：280℃；柱温程序：初温120℃，保持3 min，然后以10℃／min升至230℃，保持5min，再以10℃／min升至280℃保持3min；载气：高纯氦气（99.999%）；流速：1.0mL/min，不分流进样；进样量：2.0μL。
6.5.2质谱条件EI源：源温230℃；电子能量：70eV；接口温度：280℃；电子倍增器电压：高于调谐电压200V；质量扫描范围：30～550U；溶剂延迟：10min ；选择离子监测方式（SIM）。
监测离子（m/z）：特布他林86、356*、426；克伦特罗86*、262、243；沙丁胺醇369*、440、207；莱克多巴胺179、250*、502；D9-克伦特罗95*、262；D3-沙丁胺醇372*、443；其中带*离子为定量离子，分三段进行采集，特布他林、克伦特罗、D9-克伦特罗为第Ⅰ阶段，沙丁胺醇、D3-沙丁胺醇为第Ⅱ阶段莱克多巴胺第Ⅲ阶段，详见表1。
在上述色谱条件下，标准物质总离子流图参见附录A；标准物质质谱图参见附录B。
表1 4种β2-兴奋剂和2种内标物的保留时间和质谱条件6.5.3气相色谱-质谱测定6.5.3.1定性方法在相同试验条件下，样品中待测物与同时检测的标准物质的保留时间之差在±2s之内，并且所选择的离子相对丰度比符合表2要求，可判定为样品中存在该药物残留。
表2 试样离子丰度比与标准物质离子丰度比的允许偏差范围6.5.3.2定量方法3DB33/T 624—20064 以峰面积按内标法进行单点或多点校准定量，标准工作液和样品液中药物响应值均应在仪器检测线性范围内。
以D9-克伦特罗（m/z 95）作为计算克伦特罗（m/z 86）和莱克多巴胺（m/z 250）浓度的内标物，以D3-沙丁胺醇（m/z 372）作为计算特布他林（m/z 356）和沙丁胺醇（m/z 369）浓度的内标物。
7 结果计算按内标法单点或多点校准计算试样中4种β2-兴奋剂的含量。
试样中4种β2-兴奋剂的含量按下式计算：AX＝×DM式中：X——试样中β2-兴奋剂各组分的含量，μg/kg；A——试样色谱峰对应的β2-兴奋剂各组分的质量，ng；M——试样质量，g；D——稀释倍数；计算结果保留3位有效数字。
8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值之比应不大于20％。
9 回收率本方法回收率在60％～130％之间。
DB33/T 624—2006附录A(资料性附录)标准物质总离子流图A b u n d a n ceTim e-->图A.1 β2-兴奋剂和内标物衍生物的总离子流（TIC）图1. 特布他林（13.09min）,2. D9-克伦特罗（13.41min）, 3. 克伦特罗（13.47min），4.沙丁胺醇（13.83min）,5.D3-沙丁胺醇（13.82min）,6.莱克多巴胺（24.15min）5DB33/T 624—20066附录B(资料性附录)标准物质质谱图图B.1 β2-兴奋剂和内标物衍生物的质谱图（EI 源）A. D 9-克伦特罗，B. D 3-沙丁胺醇，C.沙丁胺醇，D.克伦特罗，E.莱克多巴胺，F.特布他林————————————Abundance AbundanceAbundanceAbundanceAbundance A b u n d a n ce。