邻二氮菲指示液
邻二氮菲的配制方法
邻二氮菲的配制方法
1、[铁溶法] 取0.695g分析纯FeSO4·7H2O溶于100mL水中，加两滴硫酸，然后加入
1.485g邻菲罗啉，搅拌溶解。
浓度：~1.5%。
2、[酸溶法] 称取邻二氮菲(A.R.)0.3750g于烧杯中，加少量蒸馏水和浓盐酸4滴溶解后，移至250mL容量瓶中，加蒸馏水定容，即得到0.15%邻二氮菲指示剂。
3、[醇溶法] 取1.5g邻二氮菲，溶于约20mL乙醇（甲醇）中，转移至1L的烧杯中，以蒸馏水定容至1L。
即得到~0.15%邻二氮菲水溶液。
4、[热溶法] 取1.5g邻二氮菲，于小烧杯中加少量水搅拌成悬浮状，将其加入到1L热水（80℃+）中，搅拌5~10 min，直至溶液澄清透明为止，冷却即得~0.15%邻二氮菲水溶液。
对于上述四种配制方法的解析
1、铁溶法：用于体系本身不含Fe，或者分析对象不为Fe的氧化还原体系。
在终点时，以指示剂形式加入的Fe发生价态变化（Fe(II)→Fe(III)或Fe(III)→Fe(II) ，以前者为佳），从而表现出颜色变化。
2、酸溶法：用于对Fe本身的定量分析中，分析方法为氧化还原法。
3、醇溶法：用于对含痕量或微量Fe试样中Fe的定量分析，分析方法为分光光度法或目视比色法。
4、热溶法：与醇溶法类似，但这种方法操作较为麻烦，而且浓度不易把握，甚至会出现溶解不完全的情况。
据Samaria亲自试验，按照上面给定的用量及温度要求，可以完全溶解，得到的邻二氮菲水溶液与醇溶法效果无异。
(完整word版)常用指示剂配制方法
55种指示剂的配制方法1 、如何配制饱和溴水在有磨口玻璃塞的瓶内，将市售溴约 50g (约16mL）在2小时内注于 1L 水中，时常剧烈振荡，每次摇动之后,微开瓶塞，使积聚的溴蒸气放出。
在贮存瓶底要有过量的溴。
将溴水倒入试剂瓶时，过量的溴应当留于贮存瓶中而不要倒出。
倾倒溴和溴水时,应在通风橱中进行。
在倾倒溴时，为了防止被溴蒸气烧伤，应以凡士林涂手或带医用橡胶手套。
2 、配制碘水试剂的方法称取分析纯碘片 6。
5g ，放于小烧杯中，另外称取固体KI 18.5g，并先把碘片溶解于少量酒精中，再加入水到100毫升,搅拌均匀即可。
3 、碘酒的配方碘I2 25 g、碘化钾KI 10 g、乙醇C2H5OH 500 mL,最后加水至1 000 mL。
配制时应先将KI溶解于10 mL水中，配成饱和溶液。
再将碘I2加入KI溶液中，然后加入C2H5OH，搅拌溶解后，添加蒸馏水至1000 mL，即成为常用的皮肤消毒剂.4 、①0。
1（1g/L）酚酞指示剂的配制方法0。
1 的酚酞指示剂是指100mL溶液使用 0。
1g 的酚酞。
配置方法：称量 0。
1g 酚酞，然后用少量95％乙醇或者无水乙醇溶解,定量转移至100mL容量瓶后再用乙醇定容稀释到100mL即可。
②0.5% （5g/L)酚酞乙醇溶液：取 0.5g 酚酞,溶于乙醇,用乙醇稀释至 100mL,无需加水.变色范围 pH8.3～10.0（无色→红）。
]《说明》 100 mL滴定液加1~2滴。
本指示液对酸敏感，例如，对碳酸变色,可用来检查是否含碳酸气。
适用于强碱滴定无机酸、有机弱酸，也适用于乙醇溶液的滴定。
强酸滴定弱碱（例如氨）不适合。
硅酸和铝存在，对本溶液变色无妨碍.与浓碱接触红色消失。
5 、如何配制石蕊指示剂配制方法:①取 1g 石蕊粉末溶于50mL水中，静置一昼夜后过滤。
在滤液中加30mL95%乙醇，再加水稀释至100mL。
变色范围 pH4.5~8。
0（红→蓝）。
硫酸亚铁铵滴定液配制和标定标准操作规程
3.配制取硫酸亚铁铵40g，溶于预先冷却的40ml硫酸和200ml水的混合液中，加水适量使成1000ml，摇匀。
4.标定精密量取本液25ml，加邻二氮菲指示液2滴，用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液由浅红色转变为淡绿色。根据硫酸铈滴定液（0.01mol/L）的消耗量，算出本液的浓度，即得。
5.结果计算。
式中：FFe(NN4)2(SO4)2表示硫酸亚铁铵滴定液的校正因子。
Fce(SO4)2表示硫酸铈滴定液的校正因子。
VFe(NN4)2(SO4)2表示硫酸亚铁铵滴定液的取样量。
V·ce(SO4)2表示消耗硫酸铈滴定液的体积。
6.注意事项
6.1本液临用前标定浓度。
6.2标定中采用邻二氮菲指示液，以硫酸铈滴定液直接标定，由于指示液中含有一定
量的硫酸亚铁，会消耗微量硫酸铈滴定液，故不宜多加。
7.技术要求
7.1贮藏：置玻璃塞的棕色玻璃瓶中，密闭，在凉处保存。
7.2复标规定：即标即用。
文件名称
硫酸亚铁铵滴定液配制和标定标准操作规程
编码
页数
1
实施日期
制订人
Hale Waihona Puke 审核人批准人制订日期
审核日期
批准日期
制订部门
质管部
分发部门
检验室
目 的：制定硫酸亚铁铵滴定液配制和标定标准操作规程。
适用范围：硫酸亚铁铵滴定液的配制和标定。
责 任：检验室人员按本规程操作，检验室主任监督本规程的实施。
程 序：
1.仪器用具十万分之一分析天平、容量瓶、移液管、锥形瓶、量筒、滴定管等。
2005年版《中国药典》(二部)指示剂与指示液
2005年版《中国药典》（二部）指示剂与指示液乙氧基黄叱精指示液取乙氧基黄叱精0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。
变色范围 pH3.5～5.5（红→黄）。
二甲基黄指示液取二甲基黄0.1g。
加乙醇100ml使溶解，即得。
变色范围 pH2.9～4.0（红→黄）。
二甲基黄－亚甲蓝混合指示液取二甲基黄与亚甲蓝各15mg，加氯仿100ml,振摇使溶解（必要时微温），滤过，即得。
二甲基黄－溶剂蓝19混合指示液取二甲基黄与溶剂蓝19各15mg,加氯仿100ml使溶解，即得。
二甲酚橙指示液取二甲酚橙0.2g，加水100ml使溶解，即得。
二苯偕肼指示液取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。
儿茶酚紫指示液取儿茶酚紫0.1g，加水100ml使溶解，即得。
变色范围 pH6.0～7.0～9.0（黄→紫→紫红）。
中性红指示液取中性红0.5g，加水使溶解成100ml，滤过，即得。
变色范围 pH6.8～8.0（红→黄）。
孔雀绿指示液取孔雀绿0.3g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。
变色范围 pH0.0～2.0（黄→绿）；11.0～13.5(绿→无色)石蕊指示液取石蕊粉末10g,加乙醇40ml,回流煮沸1小时，静置，倾去上层清液，再用同一方法处理2次，每次用乙醇30ml,残渣用水10ml洗涤，倾去洗液，再加水50ml煮沸，放冷，滤过，即得。
变色范围 pH4.5～8.0（红→蓝）。
甲基红指示液取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。
变色范围 pH4.2～6.3（红→黄）。
甲基红－亚甲蓝混合指示液取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％亚甲蓝溶液8ml，摇匀，即得。
甲基红－溴甲酚绿混合指示液取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得。
甲基橙指示液取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。
变色范围 pH3.2～4.4（红→黄）。
常用指示剂配制方法
55种指示剂的配制方法1、如何配制饱和溴水在有磨口玻璃塞的瓶内，将市售溴约50g （约16mL）在2小时内注于1L 水中，时常剧烈振荡，每次摇动之后，微开瓶塞，使积聚的溴蒸气放出。
在贮存瓶底要有过量的溴。
将溴水倒入试剂瓶时，过量的溴应当留于贮存瓶中而不要倒出。
倾倒溴和溴水时，应在通风橱中进行。
在倾倒溴时，为了防止被溴蒸气烧伤，应以凡士林涂手或带医用橡胶手套。
2 、配制碘水试剂的方法称取分析纯碘片6.5g ，放于小烧杯中，另外称取固体KI 18.5g，并先把碘片溶解于少量酒精中，再加入水到100毫升，搅拌均匀即可。
3 、碘酒的配方碘I2 25 g、碘化钾KI 10 g、乙醇C2H5OH 500 mL，最后加水至1 000 mL。
配制时应先将KI溶解于10 mL水中，配成饱和溶液。
再将碘I2加入KI溶液中，然后加入C2H5OH，搅拌溶解后，添加蒸馏水至1000 mL，即成为常用的皮肤消毒剂。
4 、①0.1（1g/L）酚酞指示剂的配制方法0.1 的酚酞指示剂是指100mL溶液使用0.1g 的酚酞。
配置方法：称量0.1g 酚酞，然后用少量95%乙醇或者无水乙醇溶解，定量转移至100mL容量瓶后再用乙醇定容稀释到100mL 即可。
②0.5% （5g/L）酚酞乙醇溶液：取0.5g 酚酞,溶于乙醇，用乙醇稀释至100mL,无需加水。
变色范围pH8.3～10.0（无色→红）。
]《说明》100 mL滴定液加1～2滴。
本指示液对酸敏感，例如，对碳酸变色，可用来检查是否含碳酸气。
适用于强碱滴定无机酸、有机弱酸，也适用于乙醇溶液的滴定。
强酸滴定弱碱(例如氨)不适合。
硅酸和铝存在，对本溶液变色无妨碍。
与浓碱接触红色消失。
5 、如何配制石蕊指示剂配制方法：①取1g 石蕊粉末溶于50mL水中，静置一昼夜后过滤。
在滤液中加30mL95%乙醇，再加水稀释至100mL。
变色范围pH4.5～8.0（红→蓝）。
②1 g溶于微碱性水溶液，然后加微酸性水溶液至l00 mL，呈紫色保存。
常用指示剂配制方法
55种指示剂的配制方法之巴公井开创作1、如何配制饱和溴水在有磨口玻璃塞的瓶内，将市售溴约 50g （约16mL）在2小时内注于 1L 水中，时常剧烈振荡，每次摇动之后，微开瓶塞，使积聚的溴蒸气放出。
在贮存瓶底要有过量的溴。
将溴水倒入试剂瓶时，过量的溴应当留于贮存瓶中而不要倒出。
倾倒溴和溴水时，应在通风橱中进行。
在倾倒溴时，为了防止被溴蒸气烧伤，应以凡士林涂手或带医用橡胶手套。
2 、配制碘水试剂的方法称取分析纯碘片 6.5g ，放于小烧杯中，另外称取固体KI 18.5g，并先把碘片溶解于少量酒精中，再加入水到100毫升，搅拌均匀即可。
3 、碘酒的配方碘I2 25 g、碘化钾KI 10 g、乙醇C2H5OH 500 mL，最后加水至1 000 mL。
配制时应先将KI溶解于10 mL水中，配成饱和溶液。
再将碘I2加入KI溶液中，然后加入C2H5OH，搅拌溶解后，添加蒸馏水至1000 mL，即成为经常使用的皮肤消毒剂。
4 、①0.1（1g/L）酚酞指示剂的配制方法0.1 的酚酞指示剂是指100mL溶液使用 0.1g 的酚酞。
配置方法：称量 0.1g 酚酞，然后用少量95%乙醇或者无水乙醇溶解，定量转移至100mL容量瓶后再用乙醇定容稀释到100mL即可。
②0.5% （5g/L）酚酞乙醇溶液：取 0.5g 酚酞,溶于乙醇，用乙醇稀释至 100mL,无需加水。
变色范围 pH8.3～10.0（无色→红）。
]《说明》 100 mL滴定液加1～2滴。
本指示液对酸敏感，例如，对碳酸变色，可用来检查是否含碳酸气。
适用于强碱滴定无机酸、有机弱酸，也适用于乙醇溶液的滴定。
强酸滴定弱碱(例如氨)不适合。
硅酸和铝存在，对本溶液变色无妨碍。
与浓碱接触红色消失。
5 、如何配制石蕊指示剂配制方法：①取 1g 石蕊粉末溶于50mL水中，静置一昼夜后过滤。
在滤液中加30mL95%乙醇，再加水稀释至100mL。
变色范围pH4.5～8.0（红→蓝）。
65种溶液与指示剂的配制
65种溶液、指示剂配制方法1、淀粉指示液1.1称1g淀粉加入100mL H2O中煮沸完全溶解，冷却后加入几滴氯仿。
1.2称可溶性淀粉0.5g，加5mL H2O搅拌后，缓缓倾入100mL沸水中，边加边搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液。
此指示液应临用新配。
2、酚酞指示液：1g酚酞溶于80mL酒精，以酒精稀释到100mL，变色范围PH8.3-10.0，无色变红色3、靛红指示液：0.5g靛红+50%的酒精，以H2O稀释至100mL。
4、石蕊指示液：称10g石蕊粉末，加40mL乙醇，回流煮沸1小时，静置，倾去上层清液，再用同以方法处理2次，每次用乙醇30mL，残渣用水10mL洗涤，倾去洗液，再加H2O50mL 煮沸，放冷，滤过，即得。
变色范围：PH4.5-8.0，红色变蓝色。
5、间苯二酚指示液：0.2间苯二酚溶于20mL丙酮，以H2O稀释至100mL，摇匀。
6、甲基红指示液5.1称0.1g甲基红溶解于60mL酒精，以H2O稀释至100mL。
5.2称0.1g甲基红，加7.4mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液，使溶解，再加H2O稀释至200mL，变色范围：PH4.2-6.3，红色变黄色。
7、甲基橙指示液：称0.1g甲基橙溶解于100mL热H2O中，若有不溶物应过滤，变色范围：PH3.2-4.4，红色变黄色。
8、二甲酚橙指示剂：称0.2g干燥的二甲酚橙，加入100g无碘氯化钠，研匀，可长期保存。
9、二甲酚橙指示液：称0.2g二甲酚橙，以H2O稀释至100mL，摇匀，变色范围：PH3.2-4.4，红色变黄色。
10、溴酚蓝指示液：称0.1g溴酚蓝溶解于3.0mL0.05N氢氧化钠溶液中，使溶解，以H2O稀释至200mL，摇匀，变色范围：PH2.8-4.6，黄色变蓝绿色。
11、铬黑T（简称EBT）10.1 称10g干燥的分析纯氯化钠研细，加入0.1g铬黑T，再研匀，可长期保存。
10.2 称0.5g铬黑T，加入盐酸羟胺4.5g，加酒精100mL溶解。
常用指示剂配制方法
常用指示剂配制方法 Prepared on 22 November 202055种指示剂的配制方法1、如何配制饱和溴水在有磨口玻璃塞的瓶内，将市售溴约 50g （约16mL）在2小时内注于1L 水中，时常剧烈振荡，每次摇动之后，微开瓶塞，使积聚的溴蒸气放出。
在贮存瓶底要有过量的溴。
将溴水倒入试剂瓶时，过量的溴应当留于贮存瓶中而不要倒出。
倾倒溴和溴水时，应在通风橱中进行。
在倾倒溴时，为了防止被溴蒸气烧伤，应以凡士林涂手或带医用橡胶手套。
2 、配制碘水试剂的方法称取分析纯碘片，放于小烧杯中，另外称取固体KI ，并先把碘片溶解于少量酒精中，再加入水到100毫升，搅拌均匀即可。
3 、碘酒的配方碘I2 25 g、碘化钾KI 10 g、乙醇C2H5OH 500 mL，最后加水至1 000 mL。
配制时应先将KI溶解于10 mL水中，配成饱和溶液。
再将碘I2加入KI溶液中，然后加入C2H5OH，搅拌溶解后，添加蒸馏水至1000 mL，即成为常用的皮肤消毒剂。
4 、①（1g/L）酚酞指示剂的配制方法的酚酞指示剂是指100mL溶液使用的酚酞。
配置方法：称量酚酞，然后用少量95%乙醇或者无水乙醇溶解，定量转移至100mL容量瓶后再用乙醇定容稀释到100mL即可。
②% （5g/L）酚酞乙醇溶液：取酚酞,溶于乙醇，用乙醇稀释至100mL,无需加水。
变色范围～（无色→红）。
]《说明》 100 mL滴定液加1～2滴。
本指示液对酸敏感，例如，对碳酸变色，可用来检查是否含碳酸气。
适用于强碱滴定无机酸、有机弱酸，也适用于乙醇溶液的滴定。
强酸滴定弱碱(例如氨)不适合。
硅酸和铝存在，对本溶液变色无妨碍。
与浓碱接触红色消失。
5 、如何配制石蕊指示剂配制方法：①取 1g 石蕊粉末溶于50mL水中，静置一昼夜后过滤。
在滤液中加30mL95%乙醇，再加水稀释至100mL。
变色范围～（红→蓝）。
② 1 g溶于微碱性水溶液，然后加微酸性水溶液至l00 mL，呈紫色保存。
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件、实验目的1、掌握分光光度计的原理、构造和使用方法。
2、学习分光光度计分析中如何确定最佳实验条件。
、实验原理在可见光区分光光度法测量中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
显色反应的程度受显色剂用量、显色时间，显色液酸度等条件的影响，通过实验，确定合适的显色条件。
三、仪器及试剂分光光度计；1cm 吸收池；10mL移液管；25mL 容量瓶,100ml 容量瓶1．铁标准溶液100μg·mL -1（即0.01 mg·mL-1）铁标准溶液：准确称取0.3511g（NH 4）2 Fe（SO4）2·6H 2O 于烧杯中，用2 mol ·L-l盐酸15 mL 溶解，移入500 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
用前，准确稀释10 倍成为含铁10 ug·mL -1标准溶液。
2. 1g.L -1邻二氮菲：1.0 g 邻二氮菲于小烧杯中，加入5-10ml 95%乙醇溶液溶解，再用水稀释到1000 mL 。
3. 10％盐酸羟胺水溶液：10％水溶液（现用现配，避光保存）4. 醋酸钠溶液1mol/L5. 0.8 mol/L 氢氧化钠溶液四、实验步骤1、吸收曲线的制作和测量波长的选择用移液管吸取0.0ml、2.0mL 10 ug ·mL -1标准溶液，分别注入二个25 mL 容量瓶中，加入1.0mL10% 的盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min ；再加2 mL 邻二氮菲溶液，2.5mL 醋酸钠溶液溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
放置5min 后，用1cm 比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm 之间，每隔10nm 测一次吸光度，其中在500-520 nm 之间，每隔5nm 测一次吸光度。
然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
2、显色剂用量影响在7 只25mL容量瓶中，各加2.0 mL 10 ug·mL -1铁标准溶液和1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min。
实验一--邻二氮菲分光光度法测定铁
实验一邻二氮菲分光光度法测定铁[实验目的]1、了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方法。
2、掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法。
3、了解721型（或722型）分光光度计的构造和使用方法。
[实验原理]Fe2+与邻二氮菲反应生成红色配合物，在波长510nm（最大吸收波长）处，其吸光度的高低与浓度的关系符合朗伯—比尔定律。
Fe2+与邻二氮菲在PH为2—9范围都能形成稳定的红色配合物，但在5—6时最佳。
铁必须是以Fe2+形式反应，因此显色前要加入还原剂，通常用盐酸羟胺作为还原剂，反应式如下：4Fe3+＋2NH2OH = 4Fe2+＋N2O↑＋4H+＋H2OFe2+与邻二氮菲的反应式如下：[试剂和仪器]1、试剂：0.1mg/mL标准铁溶液：准确称取0.8634g分析纯铁铵矾［NH4Fe（SO4）2·12H2O］置于烧杯中加入20mL6mol·L-1的HCl溶液，溶解后转入1000mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
(或0.702 0 g NH4Fe(S04)2·6H20)1.5 g·L-1邻二氮菲水溶液避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。
100 g·L-1盐酸羟胺水溶液用时现配。
1mol·L-1NaAc溶液0.1mol·L-1NaOH溶液2、仪器 721（或722）型分光光度计一台（包括比色皿一套）、50mL容量瓶10只、5mL吸量管2支其它辅助器皿[实验步骤]（一）、工作条件试验1、吸收曲线的绘制用吸量管吸取1mL标准铁溶液，注入50mL容量瓶中，依次加入1mL盐酸羟铵溶液（摇匀）、2mL邻二氮菲溶液、5mL1mol/LNaAc溶液，定容至刻度，摇匀。
在721（或722）型分光光度计上，用1cm比色皿，一试剂空白为参比溶液在波长为440～560nm间，间隔10nm测定一次吸光度（在最大吸收波长附近，每隔2nm测定一次）。
以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择吸收峰最高点所对应的波长为工作波长。
指示剂、指示液液配制操作规程
目的：建立指示剂、指示液的配制操作规程,使配制操作规范化。
范围：指示剂、指示液的配制操作。
责任人：QC员、QC主管。
内容：1甲基红指示液：取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。
变色范围：PH4.2-6.3(红→黄)2甲基红——亚甲蓝混合指示液：取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%亚甲蓝溶液8ml，摇匀，即得。
3甲基红——溴甲酚绿混合指示液：取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得。
4甲基橙指示液：取甲基橙0.1g，加水100ml，使溶解，即得。
变色范围PH3.2——4.4（红→黄）。
5锌碘化钾淀粉指示液：取水100ml，加碘化钾溶液（3→20）5ml与氯化锌（1→5）10ml，煮沸，加淀粉混悬液（取可溶性淀粉5g，加水30ml搅匀制成），随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，即得。
（本液应在凉处密闭保存）。
6邻二氮菲指示液：取硫酸亚铁0.5g,加水100ml使溶解，加硫酸2滴与邻二氮菲0.5g，摇匀，即得。
（本液应临用新制）。
7茜素磺酸钠指示液取茜素磺酸钠0.1g,加水100ml使溶解，即得。
（变色范围pH3.7-5.2）（黄→紫）8荧光黄指示液：取荧光黄0.1g,加乙醇100ml使溶解，即得。
9钙黄绿素指示剂：取钙黄绿素0.1g，加氯化钾10g，研磨均匀，即得。
10结晶紫指示液：取结晶紫0.5g,加冰醋酸100ml使溶解，即得。
11萘酚苯甲醇指示液：取α-萘酚苯甲醇0.5g,加冰醋酸100m使溶解，即得。
（变色范围pH8.5-9.8）（黄→绿）。
12酚酞指示液：取酚酞1g,加乙醇100ml溶解，即得（必要时滤过）。
变色范围PH6.8-8.4(黄→红)。
指示剂、指示液配制操作规程编号ZL-C-704版次：01第 2 页共 2 页13钙紫红素指示剂：取钙紫红素0.1g,加无水硫酸钠10g，研磨均匀，即得。
PH指示剂配制方法
P H指示剂常用指示剂1乙氧基黄叱精指示液取乙氧基黄叱精0.1g，加乙醇100m l使溶解，即得。
变色范围p H3.5～5.5(红→黄)。
二甲基黄指示液取二甲基黄0.1g。
加乙醇100m l使溶解，即得。
变色范围p H2.9～4.0(红→黄)。
2二甲基黄-亚甲蓝混合指示液取二甲基黄与亚甲蓝各15m g，加氯仿100m l,振摇使溶解(必要时微温)，滤过，即得。
3二甲基黄-溶剂蓝19混合指示液取二甲基黄与溶剂蓝19各15m g,加氯仿100m l使溶解，即得。
4二甲酚橙指示液取二甲酚橙0.2g，加水100m l使溶解，即得。
5二苯偕肼指示液取二苯偕肼1g，加乙醇100m l使溶解，即得。
6儿茶酚紫指示液取儿茶酚紫0.1g，加水100m l使溶解，即得。
变色范围p H6.0～7.0～9.0(黄→紫→紫红)。
7中性红指示液取中性红0.5g，加水使溶解成100m l，滤过，即得。
变色范围p H6.8～8.0(红→黄)。
8孔雀绿指示液取孔雀绿0.3g，加冰醋酸100m l使溶解，即得。
变色范围p H0.0～2.0(黄→绿);11.0～13.5(绿→无色)9石蕊指示液取石蕊粉末10g,加乙醇40m l,回流煮沸1小时，静置，倾去上层清液，再用同一方法处理2次，每次用乙醇30m l,残渣用水10m l 洗涤，倾去洗液，再加水50m l煮沸，放冷，滤过，即得。
变色范围p H4.5～8.0(红→蓝)。
10甲基红指示液取甲基红0.1g，加0.05m o l/L氢氧化钠溶液7.4m l使溶解，再加水稀释至200m l，即得。
变色范围p H4.2～6.3(红→黄)。
11甲基红-亚甲蓝混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20m l，加0.2%亚甲蓝溶液8m l，摇匀，即得。
12甲基红-溴甲酚绿混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20m l，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30m l，摇匀，即得。
13甲基橙指示液取甲基橙0.1g，加水100m l使溶解，即得。
OH.的清除能力(邻二氮菲一Fe2+比色法)
OH的清除能力（邻二氮菲一Fe2+比色法）一、测定原理邻二氮菲—Fe2+是常用的氧化-还原指示剂，其颜色变化可敏锐地反映溶液氧化还原状态改变。
H2O2/Fe2+体系通过Fenton反应产生·OH（H2O2 + Fe2 + =·OH+OH- + Fe3 +），邻二氮菲-Fe2+水溶液可被经自由基氧化为邻二氮菲-Fe3+，从而使邻二氮菲-Fe2+在510nrn处的最大吸收峰消失（或降低）。
二、测定方法1.试剂配制（1）7.5mM邻二氮菲溶液：取邻二氮菲（orthophenanthroline，1,10-phenanthroline monohydrate，C12H8N2·H2O，FW198.22）1.487g，溶于10.00mL 无水乙醇中，使用时用重蒸馏水稀释100至100mL。
（2）0.05M pH7.4 PBS。
（3）7.5mM硫酸亚铁溶液。
（4）0.1% H2O2。
取3支10mL比色管, 分别依次加入1mL 7.5mM邻二氮菲溶液、2mL pH = 7.4 PBS 缓冲溶液、1mL7.5mM硫酸亚铁溶液，在2、3号比色管中各加入1mL 0.1% H2O2 , 然后在3号比色管中加入1mL提取液，用重蒸馏化水定容至刻度，在37 ℃的水浴中反应1h ，在510 nm波长测吸光度值，计算羟自由基的清除率。
重复三次。
·OH清除率( %) =（A样品—A损）/（A未损—A损）×100式中：A样品—缓冲液+ FeSO4+邻二氮菲+样品+ H2O2A未损—缓冲液+ FeSO4+邻二氮菲A损—缓冲液+ FeSO4+邻二氮菲+ H2O2Hydroxyl free radical scavenging activities：The scavenging activities of hydroxyl free radical were assayed by a modified Fenton reaction protocol (Caillet et al., 2007). The assay system consisted of 1.4 mL of 0.02 mM crystal purple solution, 1.0 mL of 5 mM Fe2+ solution, 1.0 mL of tris–HCl (pH 5.5), 1 mL of 2.5 mM H2O2 and distilled water. The final volume was 10 mL. The different concentrations of the test compounds were incubated at 37 _C for 1 h. The scavenging activities of hydroxyl free radical of positive including the samples and the control were evaluated by the following formula:AA (%) =[(A2- A1)/(A0 - A1)]*100%where AA is the scavenging activities of hydroxyl free radical, A2 is the absorbance of sample with fenton reagents at 580 nm, A0 is the absorbance of sample without fenton reagents at 580 nm, and A1 is the absorbance of sample with fenton reagents and 0.5 mL of 0.2 M KF.Caillet, S., Yu, H., Lessard, S., Lamoureux, G., Ajdukovic, D., & Lacroix, M. (2007). Fenton reaction applied for screening natural antioxidants. Food Chemistry, 100, 542–552.。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的：1、学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
2、掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理：1、邻二氮菲：，即“1,10-邻二氮杂菲”，也称邻菲罗啉、邻菲咯啉，是一种常用的氧化还原指示剂。
在pH=2～9的溶液中，Fe 2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+：2+NN3Fe 2++N NNNNNFe此配合物的lgK 稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L ·mol -1·cm -1，而Fe 3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK 稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH 2OH ·HCl)将Fe 3+还原为Fe 2+，其反应式如下：2Fe 3++2NH 2OH ·HCl →2Fe 2++N 2+H 2O+4H ++2Cl -因此，分光光度法测定试样中的微量铁实验时常用盐酸羟胺(NH 2OH ·HCl)将Fe 3+还原为Fe 2+，用邻二氮菲测定试样中铁的总量（控制溶液的酸度为pH ≈5较为适宜）。
该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
2、根据朗伯－比耳定律：A=εbc ，当入射光波长λ及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A 与该物质的浓度c 成正比。
只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c 为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
3、确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
几种常用指示剂配置方法
⼏种常⽤指⽰剂配置⽅法常⽤指⽰剂配置⽅法1. 1% 酚酞配制⽅法：称取1g酚酞，⽤100mL⽆⽔⼄醇溶，变⾊范围?（⽆⾊T红）。
2. 甲基红指⽰剂⽤途：配制甲基红-溴甲酚绿混合指⽰剂配制⽅法：称取1g甲基红，⽤1000mL⽆⽔⼄醇溶解3. %溴甲酚绿⽤途：配制甲基红-溴甲酚绿混合指⽰剂配制⽅法：称取1g溴甲酚绿，⽤1000mL⽆⽔⼄醇溶解，变⾊范围?（黄T蓝）。
4. 甲基红-溴甲酚绿混合指⽰剂⽤途：测蛋⽩质⽤指⽰剂配制⽅法：临⽤时按%甲基红：%溴甲酚绿=1：5 体积⽐混合⽽成5. 淀粉指⽰液配制⽅法：取可溶性淀粉0.5g ，加⽔5ml 搅匀后，缓缓倾⼊100ml 沸⽔中，随加随搅拌，继续煮沸2 分钟，放冷，倾取上层清液，即得。
本液应临⽤新制。
6. 溴百⾥⾹酚蓝（溴麝⾹草酚蓝）配制⽅法：0.10g 溶于L 氢氧化钠溶液中，稀释⾄250ml。
黄蓝7. 甲基红－溴甲酚绿混合指⽰液取％甲基红的⼄醇溶液20ml ，加％溴甲酚绿的⼄醇溶液30ml ，摇匀，即得。
8. 甲基橙指⽰液配制⽅法：取甲基橙0.1g，加⽔100ml使溶解，即得。
变⾊范围?（红T黄）。
9. 铬⿊T 指⽰剂配制⽅法：取铬⿊T 0.1g ，加氯化钠10g ，研磨均匀，即得。
10. 碘化钾淀粉指⽰液配制⽅法：取碘化钾0.2g ，加新制的淀粉指⽰液100ml 使溶解11. 1 ，10- 菲罗啉- 硫酸亚铁铵混合指⽰液配制⽅法：称取1.6g1 ，1 0-菲罗啉及1g 硫酸亚铁铵（或0.7g 硫酸亚铁），溶于100mL ⽔中，贮存于棕⾊瓶中。
50种化学指⽰剂与指⽰液的配置⽅法和显⾊范围1⼄氧基黄叱精指⽰液取⼄氧基黄叱精 0.1g ,加⼄醇100ml 使溶解，即得。
变⾊范围- （红T 黄）。
⼆甲基黄指⽰液取⼆甲基黄0.1g 。
加⼄醇100ml 使溶解，即得。
变⾊范围- （红T 黄）。
2⼆甲基黄—亚甲蓝混合指⽰液取⼆甲基黄与亚甲蓝各 15mg ，加氯仿100ml,振摇使溶解（必要时微温），滤过，即得。
65种溶液与指示剂的配制.
65种溶液、指示剂配制方法1、淀粉指示液1.1称1g淀粉加入100mL H2O中煮沸完全溶解,冷却后加入几滴氯仿。
1.2称可溶性淀粉0.5g,加5mL H2O搅拌后,缓缓倾入100mL沸水中,边加边搅拌,继续煮沸2分钟,放冷,倾取上层清液。
此指示液应临用新配。
2、酚酞指示液:1g酚酞溶于80mL酒精,以酒精稀释到100mL,变色范围PH8.3-10.0,无色变红色3、靛红指示液:0.5g靛红+50%的酒精,以H2O稀释至100mL。
4、石蕊指示液:称10g石蕊粉末,加40mL乙醇,回流煮沸1小时,静置,倾去上层清液,再用同以方法处理2次,每次用乙醇30mL,残渣用水10mL洗涤,倾去洗液,再加H2O50mL 煮沸,放冷,滤过,即得。
变色范围:PH4.5-8.0,红色变蓝色。
5、间苯二酚指示液:0.2间苯二酚溶于20mL丙酮,以H2O稀释至100mL,摇匀。
6、甲基红指示液5.1称0.1g甲基红溶解于60mL酒精,以H2O稀释至100mL。
5.2称0.1g甲基红,加7.4mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液,使溶解,再加H2O稀释至200mL,变色范围:PH4.2-6.3,红色变黄色。
7、甲基橙指示液:称0.1g甲基橙溶解于100mL热H2O中,若有不溶物应过滤,变色范围: PH3.2-4.4,红色变黄色。
8、二甲酚橙指示剂:称0.2g干燥的二甲酚橙,加入100g无碘氯化钠,研匀,可长期保存。
9、二甲酚橙指示液:称0.2g二甲酚橙,以H2O稀释至100mL,摇匀,变色范围:PH3.2-4.4,红色变黄色。
10、溴酚蓝指示液:称0.1g溴酚蓝溶解于3.0mL0.05N氢氧化钠溶液中,使溶解,以H2O稀释至200mL,摇匀,变色范围:PH2.8-4.6,黄色变蓝绿色。
11、铬黑T(简称EBT10.1 称10g干燥的分析纯氯化钠研细,加入0.1g铬黑T,再研匀,可长期保存。
10.2 称0.5g铬黑T,加入盐酸羟胺4.5g,加酒精100mL溶解。
52种指示剂的配制方法
52种指示剂的配制方法1 、配制饱和溴水在有磨口玻璃塞的瓶内，将市售溴约50g（约16mL）在2小时内注于1L水中，时常剧烈振荡，每次摇动之后，微开瓶塞，使积聚的溴蒸气放出。
在贮存瓶底要有过量的溴。
将溴水倒入试剂瓶时，过量的溴应当留于贮存瓶中而不要倒出。
倾倒溴和溴水时，应在通风橱中进行。
在倾倒溴时，为了防止被溴蒸气烧伤，应以凡士林涂手或带医用橡胶手套。
2 、配制碘水试剂的方法？称取分析纯碘片6.5g，放于小烧杯中，另外称取固体KI 18.5g，并先把碘片溶解于少量酒精中，再加入水到100毫升，搅拌均匀即可。
3 、碘酒的配方？碘I225 g、碘化钾KI 10 g、乙醇C2H5OH 500 mL，最后加水至1 000 mL。
配制时应先将KI溶解于10mL水中，配成饱和溶液。
再将碘I2加入KI溶液中，然后加入C2H5OH，搅拌溶解后，添加蒸馏水至1000mL，即成为常用的皮肤消毒剂。
4 、0.1酚酞指示剂的配制方法是什么？0.1的酚酞指示剂是指100mL溶液使用0.1g的酚酞。
配置方法：称量0.1g酚酞，然后用少量95%乙醇或者无水乙醇溶解，定量转移至100mL容量瓶后再用乙醇定容稀释到100mL即可。
★0.5%酚酞乙醇溶液：取0.5g酚酞,用乙醇溶解,并稀释至100mL,无需加水。
变色范围pH8.3～10.0（无色→红）。
5 、如何配制石蕊指示剂？配制方法：取1g石蕊粉末溶于50mL水中，静置一昼夜后过滤。
在滤液中加30mL95%乙醇，再加水稀释至100mL。
变色范围pH4.5～8.0（红→蓝）。
6 、0.1%甲基橙的配制：称取0.1克甲基橙加蒸馏水100毫升，热溶解，冷却后过滤备用。
变色范围pH3.2～4.4（红→黄）。
7 、0.5g/L淀粉指示剂如何配制？称取0.5g可溶性淀粉放入50mL烧杯，量取100mL蒸馏水，先用数滴把淀粉调至成糊状，再取约90mL水在电炉上加热至微沸时，倒入糊状淀粉，再用剩余蒸馏水冲洗50mL烧杯3次，洗液倒入烧杯，然后再加入1滴10%盐酸，微沸3分钟，加热过程中要搅拌。
常用指示剂的配制
乙氧基黄叱精指示液：取乙氧基黄叱精0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。
变色范围 pH3.5～5.5（红→黄）。
二甲基黄指示液：取二甲基黄0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。
变色范围 pH2.9～4.0（红→黄）。
二甲基黄－亚甲蓝混合指示液：取二甲基黄与亚甲蓝各15mg，加氯仿100ml,振摇使溶解（必要时微温），滤过，即得。
二甲基黄－溶剂蓝19混合指示液：取二甲基黄与溶剂蓝19各15mg,加氯仿100ml使溶解，即得。
二甲酚橙指示液：取二甲酚橙0.2g，加水100ml使溶解，即得。
二苯偕肼指示液：取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。
儿茶酚紫指示液：取儿茶酚紫0.1g，加水100ml使溶解，即得。
变色范围 pH6.0～7.0～9.0（黄→紫→紫红）。
中性红指示液：取中性红0.5g，加水使溶解成100ml，滤过，即得。
变色范围pH6.8～8.0（红→黄）。
孔雀绿指示液：取孔雀绿0.3g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。
变色范围pH0.0～2.0（黄→绿）；11.0～13.5(绿→无色)石蕊指示液：取石蕊粉末10g,加乙醇40ml,回流煮沸1小时，静置，倾去上层清液，再用同一方法处理2次，每次用乙醇30ml,残渣用水10ml洗涤，倾去洗液，再加水50ml煮沸，放冷，滤过，即得。
变色范围pH4.5～8.0（红→蓝）。
甲基红指示液：取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。
变色范围pH4.2～6.3（红→黄）。
甲基红－亚甲蓝混合指示液：取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％亚甲蓝溶液8ml，摇匀，即得。
甲基红－溴甲酚绿混合指示液：取0.1％甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2％溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得。
甲基橙指示液：取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。
变色范围 pH3.2～4.4（红→黄）。
甲基橙－二甲苯蓝FF混合指示液：取甲基橙与二甲苯蓝FF各0.1g,加乙醇100ml使溶解，即得。