抗植物病原菌活性菌株的筛选

第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选43第三章　抗植物病原菌活性菌株的筛选　

对从芹菜和油菜中分离得到的215株内生菌包括34株内生放线菌进行拮

抗植物病原菌的体外活性筛选

第一节活性菌株的筛选

１．１材料　

１．１．１待测菌　

从油菜和芹菜中分离的215株内生菌纯化后使用

直喙镰孢菌Fusarium orthoceras

由中国科学院沈阳应用生态研究所惠赠

１．１．３培养基　

改良沙氏培养基

１．２方法　

１．２．１菌块活性的检测　

采用菌块对峙培养测定法

接种于改良沙氏培养基的培养皿中央下培养24 h

¶ÔÕÕ²»½Óɸѡ¾ú下培养72h

Ñ¡ÔñÞ׿¹×÷ÓÃÃ÷ÏԵľúÖê½øÐи´É¸

蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探

44

初筛有活性的菌株用改良沙氏液体培养基28·¢½ÍÒº5000rpm离心10minÖظ´3次ｍ的滤膜过滤

下保存

冷却凝固后

28ÒÔÖ±½ÓÅàÑøµÄ²¡Ô-¾ú×÷Ϊ¶ÔÕÕ

ÒÔÈçϹ«Ê½¼ÆËãÏà¶ÔÒÖÖÆÂÊÔÚʵÑéÊÒµÄÌåÍâ»îÐÔɸѡÖÐ时

初始

对照组菌块直径

对于215株内生菌包括34株放线菌进行了菌块活性的初筛其中放线菌为8株

而从放线菌中筛选到活性菌株的比例为23.5可见从放线菌中发现生物活性的概率远高于其它微生物

１

ＹＣＥＤ　３　

ＹＣＥＤ　１５Ｂ＊

ＹＣＥＤ　１６Ｂ＊

ＹＣＥＤ　２４Ｂ＊

第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选45

ＣＨＳＨ　１２Ｂ　

ＣＨＳＨ　１９Ａ＊

ＣＨＳＨ　２５Ｂ

ＣＨＳＨ　３４＊

ＣＨＳＨ　３８＊

ＹＩＭ１８　

¾úÖê±àºÅÖдøÓÐ*标志的为放线菌代表有活性代表没有活性　

１．３．２发酵液活性检测　

发酵液活性复筛的实验结果如图３当相对抑制率小于３０

图中不做表示

从图３放线菌ＣＨＳＨ１９Ａ　发酵液拮抗立枯丝核菌的活性最高

ＹＣＥＤ７ＣＨＳＨ１９ＢＣＨＳＨ３４和ＣＨＳＨ３５６

对三种病原真菌均有拮抗活性　部分菌株固体培养时有抑制活性如ＣＨＳＨ３２

对三种病原菌ＹＣＥＤ３

其原因可能有产生抗生

素的同时产生一种分解抗生素的物质抗生素的产生

与琼脂中含有的某些微量物质有关

发酵液显示出活性ＹＩＭ１６

和ＹＩＭ１８对立枯丝核菌ＣＨＳＨ１８和ＣＨＳＨ１２Ｂ对苹果黑腐皮

壳虽然比较简便

造成漏筛

也就是前面使用的菌块

活性和发酵液活性适于大量筛选

液体发酵可利用发酵液进行更多的试验

蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探

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性电泳　

固体发酵与液体发酵有时有一定的差别

而液体发酵时无抗菌活性他们从土壤分离到６５００株放线菌这些活性菌株再用液体发酵时而有２５株在液体发酵时无抗菌活性

初筛时在琼脂培养基上产生的抗生素与液体培养产生的抗生素可能不是同一抗生素

可以用这几种培养液或者某些提取物重新检测［１］

菌株编号中带*标志的为放线菌

图3

第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选47

第二节活性菌株的染色和显微观察

对显示出抑制植物病原真菌活性的菌株

２．１材料　

第一节筛选出的２０株活性菌株

干燥

２．２．２染色　

用草酸铵结晶紫染液染色1min

２．２．３媒染　

滴加革兰氏碘液冲去残水用水冲去碘液

滴加95²¢ÇáÇáÒ¡¶¯ÔØƬ

Ô¼0.5min立即用水冲净乙醇并用滤纸轻轻吸干

必须严格掌握乙醇脱色的程度脱色不够时

阴性菌被误认为阳性菌

水洗

以金黄色葡萄球菌作为阳性菌对

照细胞呈紫色的是革兰氏阳性菌

蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探

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染液配法参见附录

２．３．结果和讨论　

在２０株活性菌株中占４０细菌为１２株

放线菌是生物活性菌株的极好来源

表３活性菌株的基本特征　

菌株　来源　革兰氏染色结果　形状　大小ｍ

５　ＹＣＥＤ　３　芹菜叶　革兰氏阴性菌　杆菌　１ｘ２　

ＹＣＥＤ　７　芹菜叶　革兰氏阴性菌　球菌　０

ＣＨＳＨ３５因为菌种退化没有染色观察

第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选49

第三节　小结　

１．　筛选出２０株内生菌　２．　６株内生菌　３．　活性细菌以革兰氏阴性菌为主

参考文献　

［１］．吴剑波主编

黄仪秀主编．微生物学实验教程．北京