Masson三色法

Masson三色法（根据Masson,1929）

一、试剂配制

（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）

甲液：

苏木素1g

无水酒精（或95％酒精）100ml

乙液：

29％三氯化铁水溶液4ml

蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）

盐酸1ml

临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退

色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液

丽春红（Ponceau 2R）0.7g

酸性品红（acid fuchsin）0.3g

蒸馏水99ml

冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml

（三）1%磷钼酸水溶液

磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g

蒸馏水加至100ml

（四）2%苯胺蓝液

苯胺蓝（aniline blue）2g

冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml

蒸馏水加至100ml

（五）亮绿液

亮绿（light green）1g

蒸馏水99ml

冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml

（六）Bouin氏液

苦味酸饱和液（1.22％）75ml

福尔马林25ml

冰醋酸5ml

此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法

1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：

（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；

（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；

（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；

（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；

3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

4．流水稍洗。

5．1%盐酸酒精分化。1min

6．流水冲洗数分钟。25min

7．丽春红酸性品红液染5-10分钟。7min

8．蒸馏水稍冲洗。

9．1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。

10．不用水洗，直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。

11．1%冰醋酸处理1分钟。上下提动

12．95%乙醇脱水3分钟，两次；

13．95%乙醇脱水5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；

14．100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；

15．二甲苯中透明5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；

结果：胶原纤维呈蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐色。

注意事项:

1、组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37℃温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

2、铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)。

3、如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。

4、用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。