实验九 徒手切片法制片技术

实验九徒手切片法制片技术

一、目的要求

徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。

二、材料、用品

1、用品

显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。

三、方法与步骤

1、选材

所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。

2、切片

（1）盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。

(2)右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。

(3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。

(4)切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。

(5)刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。

(6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。

3、固定

挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。固定时间为16分钟或更长时间。

4、染色、脱水、透明

（1）用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红（50%酒精溶液）约30分钟。

（2）再用吸管吸去番红，换用70%→85%→95%酒精进行冲洗、脱水，每级酒精3～5分钟。（3）复染色。吸去酒精，用0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为0.5分钟。

（4）冲洗、脱水。用95%酒精冲洗1次，时间10秒。后移入纯酒精中脱水2～3次，每次3～5分钟。

（5）透明。吸去纯酒精，放入1/2二甲苯—1/2纯酒精溶液中脱水和透明1次，时间5分钟。（6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次，时间5分钟。

5、封片、贴标签

将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。

在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作日期和制作者姓名等项，以便查考。

较好的切片，其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色，细胞质和纤维素的壁则常被染成绿色，红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。

现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下:

选材→切片→固定(70%酒精)→1%番红(50%酒精溶液)染色→70%酒精冲洗→脱水（85%酒精、95%酒精）→0.5%固绿(95%酒精溶液)复染色→冲洗(95%酒精1次)→进一步脱水(纯酒精2～3次)→透明(1/2纯酒精十1/2二甲苯及纯二甲苯各二次)→封片(中性树胶)→贴标签。附：药品的简单配方

（1）1%番红：于蒸馏水或50%酒精100毫升中溶入番红粉末l克，过滤后使用。

（2）0.5%固绿：95%酒精100毫升中加入固绿粉末0.5克。