蔬菜农药残留的快速检测技术

速测卡法（纸片法） 速测卡法（纸片法）注意事项
6.如有条件，将农药速测卡放在 10℃以下保 存效果会更好，每小包产品开封后最好在 三 天内用完，如用不完，可放入将有变色硅胶吸 潮剂的瓶中密封保存，如发现农药速测卡的红 色 药片由鲜红橙色变为暗淡的褐红色，说明 纸片已吸潮失效。
PR-3 便携式农药残毒快速检测仪
速测卡法（纸片法） 速测卡法（纸片法）
3.分析步骤 分析步骤 3.1整体测定法 整体测定法 3.1.1选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成 选取有代表性的蔬菜样品， 选取有代表性的蔬菜样品 擦去表面泥土， 1cm左右见方碎片， 取 5g放入带盖瓶中， 加入 左右见方碎片， 放入带盖瓶中， 左右见方碎片 放入带盖瓶中 加入10mL 缓冲溶液，震摇50次 静置2min以上。 以上。 缓冲溶液，震摇 次，静置 以上 3.1.2取一片速测卡 ， 用白色药片沾取提取液 ， 放置 取一片速测卡， 取一片速测卡 用白色药片沾取提取液， 10min以上进行预反应，有条件时在 ℃恒温装置中 以上进行预反应， 以上进行预反应 有条件时在37℃ 放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 放置 。预反应后的药片表面必须保持湿润。
酶抑制率法（分光光度法） 酶抑制率法（分光光度法）
1.试剂 试剂 1.1 pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢 二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1000ml蒸馏水溶 解。 1.2 显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯甲 酸（DTNB）和15.6mg碳酸氢钠，用20ml缓 冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。
结果判定
白色 阳性结果 阴性结果 蓝色
结果判定
结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制 (为阳性)、未抑制（为阴性）表示。 与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅 蓝色均为阳性结果。白色药片变为天蓝色或与 空白对照卡相同，为阴性结果。 对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步 确定具体农药品种和含量。
速测卡法（纸片法） 速测卡法（纸片法）注意事项
1.有些蔬菜如生姜、葱、蒜、辣椒和番茄等的 汁液中含有破坏酶 活性或者使蓝色产物褪色 的物质， 处理这类蔬菜时，不要让其汁液太 多释放出来，不要剪得太碎，浸提时间不宜过 长，必要时可采用整枝蔬菜浸提或采用表面测 定法进行测定。对一些含叶绿素较高的蔬菜， 也可采取整株(体)蔬菜浸提的方法，减少色素 的干扰。
两种快速检测方法的技术原理
如果蔬菜中含可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性的 有机磷和氨基甲酸酯类农药，这种酶就不能被 水解，从而无显色反应。 在溶液中加入乙酰胆碱酯酶和显色剂，用此判 断有机磷和氨基甲酸酯类农药残留是否存在。
速测卡法（纸片法） 速测卡法（纸片法）
1.试剂 试剂 1.1 固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片(速测 卡)。 1.2 pH7.5缓冲溶液：分别取15.0g磷酸氢二钠 (Na2HP04·12H2O)与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2P04]， 用500mL蒸馏水溶解。 2仪器 仪器 2.1常量天平 有条件时配备37℃±2℃恒温装置
酶抑制率法（分光光度法） 酶抑制率法（分光光度法）
3.2 对照溶液测试：先于试管中加入2.5mL缓 冲溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂， 摇匀后于37℃放置15min以上(每批样品的控 制时间应一致)。加入0.1mL底物摇匀，此时检 液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中， 记录反应3min的吸光度变化值△Ao。
酶抑制率法（分光光度法） 酶抑制率法（分光光度法）
3.3 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样 品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记 录反应3min的吸光度变化值△At。
结果的表述计算
检测结果按公式计算： 抑制率(％)=[(△Ao-△At)／△Ao]×100 式中：△Ao---对照溶液反应3min吸光度的变 化值； △At---样品溶液反应3min吸光度的变化值；
速测仪法的主要优点： 速测仪法的主要优点：
1. 该方法具有快速方便、前处理简单、成本较 低等优点，适用于现场定性测定，特别适合在 蔬菜生产基地、批发市场及农产品检测部门开 展快速检测工作。 2. 该方法可对有农药残留的蔬菜进行粗筛，将 一部分农药残留含量较高的蔬菜控制在市场之 外，避免因农药残留发生中毒事件。
酶抑制率法（分光光度法） 酶抑制率法（分光光度法）
1.5 可选用由以上试剂制备的试剂盒。乙酰胆 碱酯酶的△Ao值应控制在0.3以上。 2.仪器 仪器 2.1 分光光度计或相应测定仪及常量天平。
酶抑制率法（分光光度法） 酶抑制率法（分光光度法）
3.分析步骤 分析步骤 3.1 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品， 洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样 左右见方碎片， 洗掉表面泥土，剪成 左右见方碎片 品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入 ，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲 缓冲 溶液，振荡1～ 溶液，振荡 ～2min，倒出提取液，静置 ～ ，倒出提取液，静置3～ 5min，待用。 ，待用。
酶抑制率法（分光光度法） 酶抑制率法（分光光度法）
1.3 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0ml 蒸馏水溶解，摇匀后置4 ℃冰箱中保存备用。 保存期不超过两周。 1.4 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓 冲溶液溶解，3min的吸光度变化△Ao值应控 制在0.3以上。摇匀后置4℃冰箱中保存备用， 保存期不超过四天。
速测卡法（纸片法） 速测卡法（纸片法）
3.2.3放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃ 恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面 必须保持湿润。 3.2.4将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒 温3min，使红色药片与白色药片叠合反应。 3.2.5每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。
操作步骤 1.接通电源，右侧开关拨至“开”，打开上盖 按“START”键预热； 2.当预热达到设置反应温度TEMP时，听到 “哗”一声，屏幕显示“TEMP1”，预热结束， 等待倒计时； 3.去试纸外膜，插入试纸（白片在下端），在 白片上分别加1-2滴提取液；
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4.再次按“START”键，单片电脑开始“TEMP1”倒计 时； 5.当听到连续“哗、哗、哗”声，屏幕显示“CLOS”， 提示合上前盖，进入“TEMP2”倒计时； 6.当听到六声“哗、哗、哗”音，本次操作结束，打 开上盖观察试纸颜色变化； 7.试纸显示蓝色为阴性，浅蓝色为弱阳性，白色为阳 性； 8.测试完毕，向上取下试纸进行下一次的检测。
结果判定
结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。当蔬菜 样品提取液对酶的抑制率≥50％时，表示蔬菜 中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在， 样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检 验2次以上。对阳性结果的样品，可用其它方 法进一步确定具体农药品种和含量。
酶抑制率法注意事项
1. 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、 蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次 生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时， 可采取整株(体)蔬菜浸提。对一些含叶绿素较 高的蔬菜，也可采取整株(体)蔬菜浸提的方法， 减少色素的干扰。
酶抑制率法注意事项
3.当吸光度大到无法读取时，说明测定液浑浊 有干扰。 4.待测样品放入分光光度计速度的Байду номын сангаас响。待测 样品加入底物后，应马上摇匀，放入测定仪， 否则影响数据准确性。
酶抑制率法注意事项
5.比色杯的透光度影响。保持比色杯的清洁， 使比色杯有好的透光度是减少检测误差的必要 条件。比色杯可定期用乙醇进行清洗。 6.微量移液器的影响。微量移液器要专用，贴 上标签，避免交叉使用造成试剂污染；试剂从 试剂瓶吸出后，不能再放回瓶中，坚持只吸不 进的原则，防止试剂污染。
酶抑制率法注意事项
2.当温度条件低于37℃，酶反应的速度随之放 慢，加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相 对延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶空白 对照测试3min的吸光度变化△Ao值在0.3以上， 即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对 照溶液放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空 白对照溶液3min的吸光度变化△Ao值<0.3的 原因：一是酶的活性不够，二是温度太低。
速测卡法（纸片法） 速测卡法（纸片法）注意事项
2.试纸上的提取液不可太多而溢出试纸，亦不 可太少而使反应不完全。 3.最好将每一批样品处理好后一起加样，以免 时间过长蒸干。
速测卡法（纸片法） 速测卡法（纸片法）注意事项
4.当温度条件低于37℃，酶反应的速度随之放 慢，药片加液后放置反应的时间应相对延长， 延长时间的确定，应以空白对照卡用（体温） 手指捏3分钟时可以变蓝，即可往下操作。注 意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间 一致才有可比性。 5.空白对照卡不变色的原因：一是药片表面缓 冲溶液加的少，预反应后的药片表面不够湿润， 二是温度太低。
有机氯类； 有机磷类； 氨基甲酸酯类； 拟除虫菊酯类等。
根据以上情况，制定出有机磷和氨基甲酸酯类 农药的快速检测方法，加强对农药残留的快速 检测已成为十分必要的监管措施。
农药残留主要的检测方法有两种： 农药残留主要的检测方法有两种：
⒈色谱检测法 色谱检测法用作农残定量分析，可为农药残留执法提 供依据。 ⒉速测仪法 速测仪法只能作农残定性分析，对于检测人员技术水 平要求低，易于在基层推广等特点，是目前我国控制 高毒农药残留的一种有效方法，也是目前国内和我省 应用最为广泛的农药残留快速检测方法。
速测仪的检测方法有两种: 速测仪的检测方法有两种 (GB/T5009.199-2003)
⒈速测卡法（纸片法） ⒉酶抑制率法（分光光度法）
两种快速检测方法的技术原理
根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中 枢和周围神经系统中的乙酰胆碱酯酶的活性造 成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传 导，导致昆虫中毒致死的原理而设计。 如果蔬菜中不含有机磷和氨基甲酸酯类农药， 乙酰胆碱酯酶水解后，水解产物可与显色剂反 应产生颜色。