血吸虫试剂盒主要原材料研究资料
血吸虫病诊断方法及研究进展
血吸虫病诊断方法及研究进展长期以来，血吸虫病诊断研究，一直是血吸虫病研究的重点之一，并连续被列为国家医药卫生科技七五、八五、九五、十五攻关项目，成为血吸虫病防治中的热门课题。
血吸虫病的诊断一般可以分为临床诊断和实验诊断。
前者主要依据病史和体症，虽有一定参考价值，但往往缺乏足够的依据，不易和其他疾病相区别，难以确诊病人。
因此，必须依赖实验诊断，实验诊断可分为病原学诊断、免疫学诊断及其他辅助诊断方法。
一、病原学诊断研究进展（一）病原学诊断的地位传统的病原学检查方法，有粪检和直肠镜检。
尼龙绢集卵法、水洗沉淀法及改良加藤氏法等粪检方法，依然是基层疫区常用并首选的诊断方法。
粪检或无治疗史者直检，为确诊血吸虫病人的最好依据。
只要在受检者粪便中或未经治疗的患者活体组织内发现了血吸虫卵，即可确诊为血吸虫病人，是确定感染的最直接、最可靠的指标。
自从1903年Kasai氏首次在病人粪便中找到血吸虫卵以来，粪便检查一直是确诊血吸虫病和考核疗效常用的方法。
粪便检查主要包括两大内容即检查虫卵和孵化毛蚴两种方法。
检查虫卵：尼龙筛集卵法、沉淀法、透明法、改良加藤氏法；毛蚴孵化法：三角烧瓶法、塑料杯顶管法。
由于新中国成立以来，党和政府高度重视血吸虫病的防治工作，我国血防取得举世瞩目的成绩，无论是从病人的感染率或是感染度方面都显著下降，病人粪便中虫卵数大大减少，同其他检查方法比较，粪检的阳性率较低，漏诊多，因而改进粪检方法，提高粪检质量就一直是查病工作中的一个重要课题。
事实上，粪检方法随着血防工作形势的发展，一直在不断的改进和提高，大量的现场查病工作也积累了丰富的经验。
此外，血吸虫并非肠道内寄生虫，故非所有的虫卵都能随便排出，在粪便中查到的虫卵仅占雌虫产卵数的16%。
在成虫排卵前期或者是非排卵期，就缺乏诊断价值，粪检也就失去了意义。
而在发病后期，肠壁组织纤维增生，肠壁增厚，虫卵不易穿透肠壁而造成粪便中虫卵数减少，粪检时不易获得阳性结果而导致漏检。
日本血吸虫抗体检测试剂盒(间接血凝法)简介
在2
年 举 办 的 全 国 血 吸 虫 病 血 清 学免 疫 诊 断 试 剂 荣获 同 类试 剂 第1 名
再 次 获得 第1 名
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全 国 血 吸 虫病 监 测 点 居 民 血 清学免疫诊 断试 剂测评 比 赛 中
血 吸 虫
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并被
卫
生部
病 专 家 咨 询 委 员 会 确 定 为 全 国血 吸 虫病
厶 ＼ 安 徽 安 吉 医 药科技 有 限 ／ 司
画
测评 比 赛中
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产 品 介 绍
日 本 血 吸 虫抗 体 检 测试 剂 盒
(间接血 凝法 ) 简介
经 过 安 徽 省 血 吸 虫 病 防 治 研 究 所 多年 研 制
，
由安 徽 安 吉 医 药 科 技 有 限 公 司 生 产 的
吸 虫抗 体检 测 试 剂 盒 ( 间接 血 凝 法 )
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方 法
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生 产 单位 ： 安 徽 安 吉 医 药科技 有限 公 司 监 制 单 位 ： 安 徽 省 血 吸 虫 病 lr5 治 研 究 所 地 址 ： 安 徽 省 芜 湖 市 东郊~ 2 0 7 号 邮编 ： 2 4 1 0 0 0 电话 ： 0 5 5 3 3 8 1 10 8 3
实验二十 日本血吸虫病实验室诊断技术
实验二十日本血吸虫病实验室诊断技术日本血吸虫病是一种人畜共患的寄生虫病，被世界卫生组织列为全球重点防治疾病之一。
它严重威胁着疫区人和动物的健康和生命安全，给畜牧业带来巨大的经济损失。
在我国，本病严重流行于长江流域及其以南13个省、市、自治区。
家畜如牛、羊、猪感染日本血吸虫后，不仅祸害自身，更重要的是作为人体血吸虫病的主要保虫宿主，为传播本病起了重要作用。
大量调查研究表明，家畜是血吸虫病流行最主要的传染源和污染源。
控制传染源是综合防治疫病、扑灭疫情的重要环节，而控制传染源的前提是确诊传染源。
因此，应用灵敏、快速、经济的诊断方法确诊传染源，己成为日本血吸虫病流行病学调查、疫情监测、以及控制其流行和扑灭疫情必需解决的问题，这样才能做到有的放矢，减少在人力、物力和财力等方面的浪费。
当前对于日本血吸虫病的诊断方法已有大量的报道，根据本科教学的需要，下面介绍几种本科阶段应该掌握或者需要了解的实验室常用的日本血吸虫病诊断方法。
一、实验目的及要求1.熟悉日本血吸虫卵和毛蚴的形态特征。
2.掌握血吸虫病虫卵检查方法。
3.掌握血吸虫病毛蚴孵化方法。
4.了解血吸虫病的几种常见的血清学（免疫学）诊断方法。
二、实验器材(一)病原学诊断1．直接涂片法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂：50%甘油水溶液或普通水；（3）器材：载玻片、滴管、盖玻片、显微镜。
2．沉淀法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂:普通水；（3）器材:专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛、滴管、金属环、载玻片、显微镜（普通离心机）。
3．浮集法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂:普通水、饱和食盐水、33％的硫酸锌溶液；（3）器材:专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛（60目/英寸）、滴管、金属环、载玻片、显微镜。
4.毛蚴孵化法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂：pH约6.8-7.2，温度约20-30℃的灭菌自来水(脱氯处理)；（3）器械：专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛（40目/英寸）、尼龙筛网兜（260目/英寸）、塑料袋、长颈烧瓶（或三角瓶）（500ml）、脱脂棉、天平、温箱。
血吸虫虫卵抗体检测试剂盒（胶体金法）使用说明书
血吸虫虫卵抗体检测试剂盒（胶体金法）使用说明书【产品名称】1、通用名称：血吸虫虫卵抗体检测试剂盒（胶体金法）2、商品名称：血吸虫虫卵抗体检测试剂盒（胶体金法）3、英文名称：Diagnostic Kit for Antibody to Schistosoma Egg（DIGFA）【包装规格】20人份/盒；40人份/盒；50人份/盒；100人份/盒【预期用途】本产品采用胶体金免疫渗滤斑点法原理，定性检测人血清中的血吸虫虫卵抗体，主要用于日本血吸虫感染的临床辅助诊断。
【检验原理】用纯化的日本血吸虫虫卵特异性蛋白抗原，点样于滤膜上，利用胶体金免疫渗滤斑点法（DIGFA）原理，将胶体金标记SPA；当测试样本从滤膜滤过时，固定于膜上的日本血吸虫虫卵抗原与试验样本中的特异性抗体形成抗原—抗体复合物，这种抗原—抗体复合物与标记有SPA的胶体金结合形成肉眼可见的红色斑点。
【主要组成成份】20人份/盒40人份/盒50人份/盒100人份/盒试剂板20人份40人份50人份100人份洗涤液7.0ml×1 7.0ml×2 6.0ml×3 7.0ml×5金标液 2.5ml×1 2.5ml×2 3.5ml×2 2.5ml×5终止液 2.5ml×1 5.0ml×1 5.0ml×1 5.0ml×2冻干阴性血清0.1ml×1 0.1ml×1 0.1ml×1 0.1ml×1冻干阳性血清0.1ml×1 0.1ml×1 0.1ml×1 0.1ml×1试剂板由已包被了测定点和对照点的硝酸纤维素膜、不渗水海绵、吸水垫等经渗水惰性（不与试验中任何物质发生作用）胶水粘贴而成，再分切成固定宽度的板状，外加聚苯乙烯塑料外壳制成洗涤液缓冲液中加入一定量的保护剂、洗涤剂配置而成的无色或淡黄色液体金标液由胶体金标记的SPA红色液体冻干阴性血清正常人血清冻干阳性血清血吸虫虫卵抗体阳性病人血清不同批号试剂盒中的各组分不能相互交换使用。
血吸虫抗体快速检测试剂盒综述资料
1、产品预期用途1.1产品预期用途：血吸虫抗体快速检测试剂盒（斑点免疫金渗滤法）简称试剂盒，是用于体外定性人血清中是否有血吸虫抗体，是用于诊断血吸虫病的依据，也是血吸虫病预防控制的基础、流行病学调查的工具、疫情监测的手段。
1.2与预期用途有关的临床适应症背景情况：血吸虫病免疫学诊断方法是十分可靠的辅助诊断依据，也是流行病学调查最常用的工具。
1.3相关的临床或实验室诊断方法及产品现状等：血吸虫病是一种严重威胁人类健康的流行性传染病，发展有效的诊断筛查方法能促进血吸虫病流行的预防控制工作。
国内外已建立用于血吸虫病诊断的病原学、免疫学及分子生物学等多种方法，病原学诊断方法（粪便查虫卵）由于敏感性较低，分子生物学方法（如PCR）需要特殊的仪器设备，均难以在流行区现场推广。
目前，常用的血吸虫病现场筛查方法仍以免疫学方法为主，如酶联免疫吸附法（ELISA）、环卵沉淀（COPT）、间接血凝（IHA）。
随着现代免疫理论和技术的进步，免疫学检测技术得到了不断发展和更新，快速简便，易于操作的免疫学诊断方法更易于被医技人员，尤其是现场防治人及患者所接受。
上海疾控生物科技有限公司生产的“血吸虫抗体快速检测试剂盒”操作简便，不需要使用仪器设备，结果易于判读，适合于各级医疗卫生机构及现场血吸虫病防治人员使用。
此方法纳入了中华人民共和国卫生行业标准—血吸虫病诊断标准（WS261-2006）目前国内外尚无类似产品。
2、产品描述2.1 产品所采用的技术原理：氯金酸(HauCI )在还原剂的作用下可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液称胶体金。
胶体金颗粒表面带有负电荷与蛋白质等生物大分子的正电荷基团因静电作用形成牢固结合，而蛋白质的生物活性无明显的改变。
当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点。
2.1.1血吸虫抗体试剂盒测定原理：斑点免疫金渗滤法（Development of dot immunogold filtration assay，DIGFA)是以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔膜的可滤过性和毛细管作用，使抗原抗体反应在一个特殊的渗滤装置上，以液体渗滤过膜的方式迅速完成。
血吸虫实验报告
一、实验目的1. 了解血吸虫的生命周期及其在人体内的发育过程。
2. 掌握血吸虫卵的形态特征。
3. 学习显微镜观察技术，提高对寄生虫学标本的识别能力。
二、实验原理血吸虫是一种严重危害人类健康的寄生虫，主要通过接触传播。
其生命周期包括成虫在人体内繁殖、虫卵随粪便排出体外、虫卵在水中孵化出毛蚴、毛蚴侵入钉螺体内发育为尾蚴、尾蚴从钉螺体内逸出侵入人体。
本实验通过观察血吸虫卵的形态特征，了解血吸虫的生命周期及其对人体的危害。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：血吸虫卵染色标本、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、生理盐水等。
2. 仪器：显微镜、恒温箱、解剖镜、解剖刀、剪刀、镊子等。
四、实验方法与步骤1. 准备血吸虫卵染色标本将血吸虫卵染色标本放置于载玻片上，滴加适量生理盐水，盖上盖玻片。
2. 显微镜观察将载玻片置于显微镜下，观察血吸虫卵的形态特征。
（1）观察卵壳：血吸虫卵呈椭圆形，卵壳较厚，表面光滑，无色透明。
（2）观察卵黄：卵黄位于卵壳中央，呈黄色，质地均匀。
（3）观察卵黄膜：卵黄膜较厚，呈淡黄色。
（4）观察卵黄粒：卵黄粒呈球形，大小不一，分布在卵黄中央。
3. 记录观察结果将观察到的血吸虫卵形态特征详细记录在实验报告中。
4. 分析讨论根据观察结果，分析血吸虫卵的形态特征及其与人体感染的关系。
五、实验结果与分析1. 血吸虫卵呈椭圆形，卵壳较厚，表面光滑，无色透明。
2. 卵黄位于卵壳中央，呈黄色，质地均匀。
3. 卵黄膜较厚，呈淡黄色。
4. 卵黄粒呈球形，大小不一，分布在卵黄中央。
根据观察结果，血吸虫卵的形态特征具有以下特点：1. 卵壳较厚，有助于保护卵内胚胎发育。
2. 卵黄较大，为胚胎发育提供充足的营养。
3. 卵黄粒大小不一，可能表示血吸虫卵发育阶段的差异。
4. 卵黄膜较厚，有利于卵在水中孵化。
六、实验结论1. 通过本实验，掌握了血吸虫卵的形态特征。
2. 了解血吸虫的生命周期及其对人体的危害。
3. 提高了显微镜观察技术，为寄生虫学诊断提供了基础。
血吸虫抗体快速检测试剂盒(胶体金法)
血吸虫抗体快速检测试剂盒（胶体金法）血吸虫病概述：血吸虫病是由血吸虫寄生于人体引起地方性的寄生虫病，主要有埃及、曼氏、日本这3种血吸虫，而我国只有日本血吸虫病流行。
由于血吸虫病是一种分布广泛、严重危害人畜共患的寄生虫病，自从20世纪80年代以来，血吸虫病防治策略由消灭媒介钉螺转向以治疗为主的综合性防治措施，因此，血吸虫病早期快速筛查工作具有重要的作用和意义！产品简介：血吸虫快速检测试剂盒采用了金标斑点渗滤法定性检测人血清中特异性血吸虫IgM抗体，适用于疑似血吸虫病的大量人群进行快速筛查。
检测原理：本试剂盒利用斑点免疫金渗滤技术，将血吸虫抗原预先包被在固相载体硝酸纤维素薄膜上，待检测时，将预先处理好的样本血清滴加在加样孔中，通过渗滤使抗体和抗原在膜上发生特异性免疫结合反应，形成抗原抗体复合物。
然后滴加红色胶体金标记的第二抗体（显色液），与复合物中对应的的抗体结合，则形成肉眼可读取的检测结果。
试剂盒组成：1、血吸虫快速检测板（含预先包被的血吸虫抗原）2、试剂A（洗涤液1瓶，0.02moI/L PH7.4PBS）3、试剂B（显色液1瓶，含胶体金标记物）4、原版说明书1份包装规格：24T/盒，单人份独立包装检测样本：只限血清储存条件：原试剂盒包装于2-8℃密封避光保存有效日期：18个月生产企业：广州市标健生物科技有限公司样本要示：样本只限血清，建议最好采用新鲜血清标本，若是陈旧血清或高血脂血清恐影响检测效果。
检验方法：1、将试剂盒取出，和样本一起恢复室温25℃左右。
2、拆开试剂包装，将检测板水平放于工作台。
3、在反应孔中间垂直加入2滴（试剂A），待液体完全渗透。
4、在反应孔正中央垂直加入50ul待检血清，待血清完全渗透。
5、加入4滴显色液（试剂B），待液体完全渗透。
6、加入2滴（试剂A），待液体完全渗透，观察结果。
检测结果的解释：阳性结果：检测板的C端出现红色线条，T端也出现红色线条，表明血吸虫IgM抗体阳性。
血吸虫试剂盒主要原材料研究资料
1．血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）（试剂盒检测点原料）（1）制备方法：取人工感染1500条日本血吸虫尾蚴45d的家兔肝脏，用生理盐水洗净后经高速捣碎机捣碎，分样筛分离除去肝脏组织，沉淀离心，收集分离虫卵，依次经200目和300 目尼龙绢过滤，收集滤渣，即为较纯净的血吸虫虫卵。
然后加入10倍量的生理盐水，置玻璃匀浆器内制成匀浆，用超声粉碎机超声处理（1min×10次），液氮冻融3次，最后以10 000 r/ min离心30 min ，上清液即为血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA），经0.22um超滤膜过滤除菌后分装，―20℃冻存备用。
（2）抗原性测定a．测定方法1)取抗原200 µl加入比色杯内，用分光光度计测定A280和A260OD值；2)将抗原用pH9.6碳酸盐缓冲液作1:4、1:8、1:16、1:32、1:64稀释,分别包被于酶标板内(100ul/孔),37℃3小时；然后倾去抗原液,用洗涤液洗涤3次,每次5分钟；BSA（0.5mg/ml)为对照，同法操作；3)加样：分别加已作1:100稀释的血吸虫抗体检测质控品、阳性和阴性对照血清各100µl，空白孔仅加100 µl稀释液。
置于湿盒内，37 ℃培育30 分钟；4)洗板：取出酶标板，甩去孔内液体，每孔注满洗涤液洗涤5 次，每次均需停留30秒后再甩净拍干；5)加酶标结合物：除空白对照孔外，每孔加入酶标结合物2 滴，37℃培育30分钟；6)洗板：同3；7)显色：每孔加底物和显色剂各1滴，混匀，37℃避光反应10分钟，加终止液1 滴，混匀，判断结果。
b．判断依据：1)根据公式计算：样品浓度（mg/ml）=（1.45×A280-0.74×A260 ）×稀释倍数；2)肉眼观察：不加终止液观察，基本无色或微蓝色为阴性，呈明显蓝色为阳性；3)仪器判断：酶标仪上450nm读取OD值，待检样本孔的OD值大于阴性对照2.1倍者为阳性。
血吸虫抗体快速检测试剂盒综述资料
血吸虫抗体快速检测试剂盒综述资料血吸虫抗体快速检测试剂盒的综述资料1、产品预期用途1.1产品预期用途:血吸虫抗体快速检测试剂盒(斑点免疫金渗滤法)简称试剂盒，是用于体外定性人血清中是否有血吸虫抗体，是用于诊断血吸虫病的依据，也是血吸虫病预防控制的基础、流行病学调查的工具、疫情监测的手段。
1.2与预期用途有关的临床适应症背景情况:血吸虫病免疫学诊断方法是十分可靠的辅助诊断依据，也是流行病学调查最常用的工具。
1.3相关的临床或实验室诊断方法及产品现状等:血吸虫病是一种严重威胁人类健康的流行性传染病，发展有效的诊断筛查方法能促进血吸虫病流行的预防控制工作。
国内外已建立用于血吸虫病诊断的病原学、免疫学及分子生物学等多种方法，病原学诊断方法(粪便查虫卵)由于敏感性较低，分子生物学方法(如PCR)需要特殊的仪器设备，均难以在流行区现场推广。
目前，常用的血吸虫病现场筛查方法仍以免疫学方法为主，如酶联免疫吸附法(ELISA)、环卵沉淀(COPT)、间接血凝(IHA)。
随着现代免疫理论和技术的进步，免疫学检测技术得到了不断发展和更新，快速简便，易于操作的免疫学诊断方法更易于被医技人员，尤其是现场防治人及患者所接受。
上海疾控生物科技有限公司生产的“血吸虫抗体快速检测试剂盒”操作简便，不需要使用仪器设备，结果易于判读，适合于各级医疗卫生机构及现场血吸虫病防治人员使用。
此方法纳入了中华人民共和国卫生行业标准—血吸虫病诊断标准(WS261-2006)目前国内外尚无类似产品。
2、产品描述2.1 产品所采用的技术原理:氯金酸(HauCI )在还原剂的作用下可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液称胶体金。
胶体金颗粒表面带有负电荷与蛋白质等生物大分子的正电荷基团因静电作用形成牢固结合，而蛋白质的生物活性无明显的改变。
当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点。
2.1.1血吸虫抗体试剂盒测定原理:斑点免疫金渗滤法(Development of dot immunogold filtration assay，DIGFA)是以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔膜的可滤过性和毛细管作用，使抗原抗体反应在一个特殊的渗滤装置上，以液体渗滤过膜的方式迅速完成。
吸血虫实验报告
1. 了解吸血虫的基本生物学特性。
2. 掌握吸血虫的实验室培养方法。
3. 学习吸血虫对宿主的感染过程及病理变化。
4. 探讨吸血虫病的防治措施。
二、实验材料1. 吸血虫卵（阳性）2. 实验室培养皿、培养箱、显微镜、解剖镜、解剖针、剪刀、镊子、吸管、生理盐水、75%酒精、碘酒、棉签等。
三、实验方法1. 吸血虫卵培养（1）将吸血虫卵置于培养皿中，加入适量生理盐水，轻轻搅拌使卵均匀分布。
（2）将培养皿放入培养箱中，温度控制在25-28℃，湿度保持在70-80%，培养时间约为2周。
（3）定期观察吸血虫卵孵化情况，记录孵化率。
2. 吸血虫幼虫培养（1）将孵化出的吸血虫幼虫置于培养皿中，加入适量生理盐水。
（2）将培养皿放入培养箱中，温度控制在25-28℃，湿度保持在70-80%，培养时间约为1周。
（3）定期观察吸血虫幼虫生长情况，记录幼虫长度。
3. 吸血虫感染实验（1）将吸血虫幼虫接种于实验动物（如小鼠）体内。
（2）观察实验动物感染过程中的病理变化，包括体重、行为、外观等。
（3）定期进行解剖，观察吸血虫在动物体内的分布情况。
1. 吸血虫卵培养：孵化率为90%。
2. 吸血虫幼虫培养：幼虫长度为2-3毫米。
3. 吸血虫感染实验：实验动物感染后，体重明显下降，行为异常，皮肤出现出血点，内脏器官出现病变。
五、实验讨论1. 吸血虫是一种重要的寄生虫，感染人类后可引起严重的疾病，如疟疾、黑热病等。
2. 实验结果表明，吸血虫卵在适宜的条件下可以孵化出幼虫，幼虫在适宜的温度和湿度下生长良好。
3. 吸血虫感染实验动物后，动物出现明显的病理变化，说明吸血虫对宿主具有明显的致病作用。
4. 针对吸血虫病的防治，应采取以下措施：（1）加强吸血虫病防治宣传教育，提高公众对吸血虫病的认识。
（2）开展吸血虫病普查，及时发现和治疗感染者。
（3）加强吸血虫病流行病学调查，掌握吸血虫病的流行规律。
（4）加强吸血虫病防治技术的研究，提高防治效果。
六、实验总结本次实验成功培养了吸血虫卵和幼虫，并观察了吸血虫感染实验动物后的病理变化。
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1．血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）（试剂盒检测点原料）（1）制备方法：取人工感染1500条日本血吸虫尾蚴45d的家兔肝脏，用生理盐水洗净后经高速捣碎机捣碎，分样筛分离除去肝脏组织，沉淀离心，收集分离虫卵，依次经200目和300 目尼龙绢过滤，收集滤渣，即为较纯净的血吸虫虫卵。
然后加入10倍量的生理盐水，置玻璃匀浆器内制成匀浆，用超声粉碎机超声处理（1min×10次），液氮冻融3次，最后以10 000 r/ min离心30 min ，上清液即为血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA），经0.22um超滤膜过滤除菌后分装，―20℃冻存备用。
（2）抗原性测定a．测定方法1)取抗原200 µl加入比色杯内，用分光光度计测定A280和A260OD值；2)将抗原用pH9.6碳酸盐缓冲液作1:4、1:8、1:16、1:32、1:64稀释,分别包被于酶标板内(100ul/孔),37℃3小时；然后倾去抗原液,用洗涤液洗涤3次,每次5分钟；BSA（0.5mg/ml)为对照，同法操作；3)加样：分别加已作1:100稀释的血吸虫抗体检测质控品、阳性和阴性对照血清各100µl，空白孔仅加100 µl稀释液。
置于湿盒内，37 ℃培育30 分钟；4)洗板：取出酶标板，甩去孔内液体，每孔注满洗涤液洗涤5 次，每次均需停留30秒后再甩净拍干；5)加酶标结合物：除空白对照孔外，每孔加入酶标结合物2 滴，37℃培育30分钟；6)洗板：同3；7)显色：每孔加底物和显色剂各1滴，混匀，37℃避光反应10分钟，加终止液1 滴，混匀，判断结果。
b．判断依据：1)根据公式计算：样品浓度（mg/ml）=（1.45×A280-0.74×A260 ）×稀释倍数；2)肉眼观察：不加终止液观察，基本无色或微蓝色为阴性，呈明显蓝色为阳性；3)仪器判断：酶标仪上450nm读取OD值，待检样本孔的OD值大于阴性对照2.1倍者为阳性。
c．结果抗原OD值A280nm 2.1510抗原OD值A260nm 2.5121计算公式抗原浓度（mg/ml）=（1.45×A280-0.74×A260 ）×稀释倍数；抗原浓度 1.26mg/ml比值SEA 阴参阳参血吸虫抗体检测质控品阳参血吸虫抗体检测质控品1:4 0.05 0.45 0.15 9.03 3.081:8 0.04 0.51 0.17 10.26 3.481:16 0.05 0.52 0.19 10.31 3.781:32 0.05 0.49 0.18 9.41 3.521:64 0.06 0.61 0.24 10.92 4.35BSA 0.01 0.04 0.01 0.82 0.11结论：浓度为1.26mg/ml，经倍比稀释，用于ELISA检测血吸虫抗体阳性临界血清，1:64(0.02mg/ml)仍呈阳性结果，具有高度的免疫原性,可用于血吸虫抗体检测（3）工作浓度：SEA 的作用是作为检测点，包被于硝酸纤维素膜上，用于检测人血清中特异性抗血吸虫抗体。
因此，其工作浓度的选择对于检测效果的评价是试剂盒研制的关键技术。
如果浓度过高，阳性反应色度过强，易产生假阳性结果；反之，浓度过低，则不易辨别，影响检测的灵敏度。
所以，研究目的是选择能较清晰产生反应色度的最低抗原浓度。
方法：a. SEA抗原原液浓度测定：以紫外分光光度法测定SEA抗原原液A280和A260OD值，根据公式计算浓度（mg/ml）=1.45×A280-0.74×A260 ；b. SEA稀释：以0.02 mol/L pH8.0 PBS将SEA从1:2至1:10 稀释成9个稀释度，与原液一起分成10个浓度组。
c. 包被：将上述10个浓度的SEA分别点膜，在每块空白反应板中的硝酸纤维素膜（德国Schleicher & Schuell Bioscience，孔径0.45um）上点滴1ul，每个浓度组包被3块，室温干燥2小时后加入2滴封闭液（主要成分为牛血清白蛋白），待干。
d. 效果测试：分别在上述10个浓度组的金标反应板中央小孔内滴加2滴洗涤液，渗入后于反应板中央加25 µl 血吸虫抗体检测质控品（参照血吸虫病抗体诊断试剂国家参考品低感染度血清(P13)制备，方法见附页），待液体充分吸入，加2滴洗涤液，渗入后分别加3种浓度的显色液（即金标二抗，浓度依据A520OD值确定，制备方法见后），每块反应板加1种浓度的显色液，每种显色液均加4滴，最后加2滴洗涤液，渗入后根据检测点颜色深浅判断效果。
结果：a. SEA抗原原液OD值：A280为2.1510，A260为2.5121 ，根据公式（mg/ml）=1.45×A280-0.74×A260计算，浓度为1.26 mg/ml。
注：色度判断：++深，+易见，±浅，-无c. 最适工作浓度选择：金标二抗浓度在1.2 （A520值）时所有金标反应板的背景较深，且制备成本高；0.8时，检测效果较差；1.0时的检测效果最好，在抗原稀释度1:8（0.157mg/ml）仍可清晰显示检测点。
因此，抗原最适工作浓度为1:5~1:8范围内（约0.2±0.05mg/ml），而金标二抗的最适工作浓度为1.0（A520值）。
进一步验证试验：以0.2mg/ml工作浓度的SEA抗原为检测点，1.0（A520值）金标二抗为显色液研制的血吸虫抗体快速检测试剂盒（斑点免疫金渗滤法），采用中国药品生物制品检定所提供的“血吸虫病抗体诊断试剂国家参考品”（批号：20041108）作为测定血清。
其中阴性参考品由15份正常人血清组成，血吸虫病抗体均为阴性，用于测定试剂盒的特异性。
阳性参考品由15份强、中、弱阳性血清组成，用于测定试剂盒对血吸虫病抗体阳性血清的检出能力。
最低阳性检出参考品为1份血吸虫病抗体阳性样品，从1:2~1:16作倍比稀释，用于测定试剂盒的最低检出量（灵敏度）。
诊断试剂的精密性测定由1份中等阳性血清组成，重复检测10次，用于测定试剂盒的精密性（操作方法同1 (3) d ）。
血清份数阴性(数) 阳性(数) 符合率（%）阴性参考品15 15 0 100阳性参考品15 0 15 100精密度参考品10 0 10 100灵敏度参考品1:2++(1份) 1:4+(1份) 1:8±(1份) 1:16-(1份)2．金标二抗（试剂盒显色液原料）（1）制备方法：a. 胶体金制备采用鞣酸-柠檬酸钠还原法，胶体金颗粒直径为20 nm。
具体方法为：取1%氯金酸5ml 溶于395 ml dH2O，加热至60 ℃，快速加入鞣酸-柠檬酸钠溶液100 ml（1%柠檬酸三钠20 ml，1%鞣酸0.05 ml，dH2O 80 ml），加热煮沸15 min，溶液颜色由黑逐渐变为亮红色。
冷却后用0.1 mol/L碳酸钾调溶液pH至8.0。
b．金标二抗制备二抗为亲和层析法纯化的羊抗人IgG(上海神航生物科技有限公司，蛋白浓度为3.34mg/ml，批号：IP2030)。
最适蛋白稳定量选择：将待标记的二抗分别加到1ml胶体金溶液中，另设一管不加蛋白质的对照管，５分钟后加入0.1ml 10％NaCl溶液，混匀后静置２小时观察结果，红色不变者为能使胶体金稳定的蛋白量，再加20％即为最适标记蛋白量。
从反应结果观察，5号管（2.5ul）颜色未变，2.5ul×120%=3 ul，再乘以二抗的蛋白浓度3.34mg/ml，则最适蛋白稳定量为0.01mg/ml胶体金。
在500 ml胶体金溶液内加入5mg 二抗，磁力搅拌30 min，依次加入1% PEG20000 20ml和5% BSA 80 ml，继续搅拌10 min，20 000 r/min 离心20 min，沉淀物用PB缓冲液（0.02 mol/L，pH8.0）洗涤，再以20 000 r/min 离心20 min，沉淀物用金标稀释液（0.02 mol/L，pH8.0 TBS）稀释至A520nm为0.8、1.0、1.2等3种浓度，过滤除菌。
（2）最适工作浓度选择：分别用以上3种浓度的金标二抗检测已包被不同浓度抗原的检测点，根据检测点颜色深浅和背景清晰度判断效果，操作方法同1 (2) d。
（3）结果：同1 (3) b, c，金标二抗浓度在1.0时的检测效果最好，在抗原稀释度1:8（0.157mg/ml）仍可清晰显示检测点。
继对“血吸虫病抗体诊断试剂国家参考品”进行测定，进一步验证了这一工作浓度的显色效果（见1（4））。
3. 人IgG（试剂盒质控点原料）（1）制备方法：采用辛酸提取法，从健康献血者5ml血清中提取人IgG。
经0.22um超滤膜过滤除菌后分装，2ul/支，置冻干机抽成干粉，-20℃保存。
临用时每支加工作浓度的0.02 mol/L pH8.0 PBS 缓冲液复溶即可。
（2）活性测定a.测定方法1)取人IgG 10 µl加190µl生理盐水作1:20稀释后加入比色杯内，用分光光度计测定A280和A260OD值；2)将样品用pH9.6碳酸盐缓冲液从1:6400起倍比稀释14个滴度,分别包被于酶标板内(100ul/孔),37℃3小时；然后倾去液体,用洗涤液洗涤3次,每次5 分钟；BSA（0.5mg/ml)为阴性对照，同法操作；3)加酶标结合物：除空白对照孔外，每孔加入酶标结合物2 滴，37 ℃培育30 分钟；4)洗板：取出酶标板，甩去孔内液体，每孔注满洗涤液洗涤5 次，每次均需停留30秒后再甩净拍干；；5)显色：每孔加底物和显色剂各1滴，混匀，37 ℃避光反应10 分钟，加终止液1 滴，混匀，判断结果。
b．判断依据：1)根据公式计算：人IgG浓度（mg/ml）=（1.45×A280-0.74×A260 ）×稀释倍数；2)肉眼观察：不加终止液观察，基本无色或微蓝色为阴性，呈明显蓝色为阳性；3)仪器判断：酶标仪上450nm读取OD值，待检样本孔的OD值大于阴性对照2.1倍者为阳性。
c．结果：人IgG OD值A280nm 2.8619人IgG OD值260nm 1.7831计算公式人IgG浓度（mg/ml）=（1.45×A280-0.74×A260 ）×稀释倍数；人IgG浓度56mg/ml人IgG OD值比值人IgG OD值比值1:6400 2.568675 51.3735 1:1638400 0.0199 0.3979961:12800 2.501804 50.03607 1:3276800 0.01358 0.2715961:25600 2.115497 42.30994 1:6553600 0.00366 0.0731981:51200 1.29285 25.85699 1:13107200 0.00918 0.1835981:102400 0.618129 12.36258 1:26214400 0.00611 0.1221981:20480 0.310279 6.205582 1:52428800 0.00552 0.1103991:409600 0.09732 1.946396 BSA 0.01354 0.27081:819200 0.0591 1.181997 空白-0.00069 -0.0138d．结论：原液浓度为56mg/ml，从1:6400起作倍比稀释，经ELISA方法检测，最低检测浓度为1:204800(0.3μg / ml),与抗人IgG的结合力强,可用作斑点免疫金渗滤法质控点。