普鲁卡因半数致死量_LD50的测定

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实验小鼠选择
• 1.体重相近（20±2g）。 • 2.健康，雌雄各半。 • 3.怀孕雌鼠剔除不用。
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随机原则
• 随机原则：是指在抽样时排除主观上有意识地 抽取调查单位，每个受试单位以概率均等的原 则，随机地分配到实验组与对照组。
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【随机】
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小鼠随机分组处理
• 1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入 一笼。（18.19.20.21.22） • 2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。 • 3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性 别体重小鼠均匀分配于各组。
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分组方式：
组号
1* 2* 3* 4* 5*
鼠号
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345
51
23 4
45
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抓好后将小鼠保持头低位
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计算LD50及其95%可信限
• 改良寇试法 • Bliss法
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改良寇试法
• 基本要求 • 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。 • 3.各组动物数相等或相近。 • 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最 好再80%~120%范围内。
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改良寇试法
• 3.标准物 • SlgLD50=i√[(Σp-Σp2)/(n-1)]
• 4.LD50的95%可信区间 • Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50)
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Bliss法
传统计算方法
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Bliss法
采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤：
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【参考文献】
1.徐叔云，卞如濂，陈修：药理实验方法学 2.蔡七雄等；半数致死量（LD50）Bliss法的评 价及计算；数理药学杂志，1995，8（4） 3.黄 卓, 唐黎明, 王依婷：采用SAS软件包进行 半数致死量(LD50)的计算：药学服务与研究， 2002 Sep; 2(3) 4.钱之玉：药理学试验方法与指导
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改良寇试法
• 计算LD50 • 1. 最小剂量组死亡率0%，最大剂量组死亡率 100%： • LD50=lg-1（Xm-i（Σp-0.5）） • p ——各组动物死亡率 • Xm——最大剂量的对数 • i ------相邻两组对数剂量差值
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改良寇试法
• 2. 0%<最小剂量组死亡率<30%，或70%< 最大剂量组死亡率<100%时： • LD50=lg-1[Xm-i(Σp-(3-Pm-Pn)/4)] • Pm------剂量最大组死亡率 • Pn-------剂量最小组死亡率
• 改良寇试法简便而计算较为精确。
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实验部分
【实验目的】
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程 度。
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【实验材料】
• 实验动物：小白鼠50只，体重18～２２g，♀♂ 各半。 • 实验器材：计算机、电子秤、注射器、小鼠笼。 • 实验药品：1%普鲁卡因，苦味酸溶液（标记）
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普鲁卡因产生毒性作用的原理: • 普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生
全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制， 初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经 错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。
• 患者可因呼吸衰竭而死亡。
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LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、 加权机率单位法(Bliss法)、寇氏法、序贯法等。 • Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无 严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是 目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐， 故现多采用计算机程序计算。
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……
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【实验步骤】
• 1. 按剂间比1：0.85，腹腔注射1%普鲁卡因，5 组剂量分别为 130mg/kg,153mg/kg,180mg/kg,212mg/kg和 249mg/kg。
• 2.观察30min统计小鼠死亡数。
• 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50 和95%可信限。
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谢谢大家！
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普鲁卡因(LD50)的测定
小组成员：周瑞琪、宋文欣、吴迪、车远、王楠
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特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 毒性试验 长期（慢性）毒性试验
急性毒性试验：1～7d
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• 半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够引起
试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数 值表示。
• 启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再
进入半数有效量选项。
• 一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数 据。
• 单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
• 相关软件spass，sas，还有专门LD50数据处理程序。
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【注意事项】
✓给药从中剂量组开始。 ✓动物的饥饱，实验室温度、实验时间应尽量保持 一致。 ✓精密测量LD50应先摸索出合适剂量范围。
• 测定LD50意义
(1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数 (2)评价药物安全性---治疗指数 TI=LD50/ED50 (3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
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根据物质的半致死剂量LD50值，美国科学院把毒性物 质危险划分为五个等级
①“0”：无毒性，LD50>15 g/kg； ②“1”：实际无毒性，5 g/kg<LD50<15 g/kg； ③“2”：轻度毒性，0.5 g/kg<LD50<5 g/kg； ④“3”：中度毒性，50 mg/kg<LD50<500 mg/kg； ⑤“4”：高度毒性，LD50<50 mg/kg