赭曲霉毒素免疫亲和柱操作说明书
赭曲霉毒素A标准检测规程
赭曲霉毒素A标准操作规程1、目的为了规范亲和柱净化样本中赭曲霉毒素A的操作流程，特制订本操作规程。
2、范围本标准适用于粮食、饲料、食品中赭曲霉毒素A的检测。
3、检出限和定量限项目岛津安捷伦样本检出限（µg/kg）样本定量限（µg/kg）样本检出限（µg/kg）样本定量限（µg/kg）OTA 0.28 0.84 3.6 11.9 4、职责部门名称部门职责质量管理部1、负责本制度的实施。
2、负责本制度的监督执行。
5、程序5.1 原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过赭曲霉毒素A免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用2%乙酸甲醇洗脱赭曲霉毒素A，然后注入到高效液相色谱仪中用于检测。
5.2 溶液配制5.2.1 提取液Ⅰ（用于粮食类样品及酱油、醋类样品的提取）：80%甲醇-水溶液（V甲醇: V水=80 : 20）：取800mL甲醇，加入去离子水定容至1L。
5.2.2 提取液Ⅱ（用于酒类样品的提取）：称取150g氯化钠、20g碳酸氢钠溶于约950mL水中，加水定容至1L。
5.2.3 清洗缓冲液（用于酱油、醋类样品净化步骤的洗涤）：称取12.5g 氯化钠、2.5g 碳酸氢钠溶于水中，加0.1mL吐温-20，用水定容至1L。
5.2.4 冲洗液（用于酒类样品净化步骤的洗涤）：称取25g 氯化钠、5g碳酸氢钠于约950mL水中，加水定容至1L。
5.2.5 洗脱液（甲醇: 乙酸=49 : 1）：取1ml乙酸加入到49ml甲醇中混匀即可。
5.2.6 赭曲霉毒素A标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到20 ng/ml、10ng/ml、5ng/ml、2 ng/ml、1 ng/ml。
5.3 样品前处理5.3.1 粮食类----20g±0.01g样品（固体样品需粉碎，并过2mm分样筛），5g氯化钠于三角瓶中，加入100mL的提取液Ⅰ（见5.2.1）；----高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----取10mL滤液加入40mL去离子水稀释，混匀；----用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。
赭曲霉毒素检测卡说明书(完整版)
赭曲霉毒素快速检测卡【产品简介】赭曲霉毒素A(OchratoxinA，OTA)是由曲霉属和青霉属产生的有毒代谢产物，具有强烈的肾脏毒性和肝脏毒性，并有致畸、致突变和致癌作用。
赭曲霉毒素A胶体金快速检测卡基于胶体金免疫层析技术，采用竞争反应原理检测赭曲霉毒素A，样品中的OTA毒素与固定于NC膜上的OTA毒素-BSA偶联物共同竞争抗OTA毒素单克隆抗体的胶体金探针，根据不同的竞争作用而显示的颜色判读结果。
【检测原理】测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过赭曲霉毒素A 免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱赭曲霉毒素 A，然后注入到分析仪器中用于检测。
【产品规格】规格：40 份/盒4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5．5-10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
【操作步骤】1、取出所需试纸卡，多余试纸卡放在干燥避光处保存；2、用移液器取待检样品液100UL（或用滴管取3、4滴）滴入样品孔中；3、5-10分钟开始观察结果，30分钟后结果无效。
【结果判断】1、阴性（－）：T线（检测线）与C线（对照线）都显色，检测结果为阴性，说明样品中赭曲霉毒素A的含量低于10ppb。
2、阳性（＋）：C线（对照线）出线，T线（检测线）不显色，说明样品中赭曲霉毒素A的含量高于或等于10ppb。
3、无效：未出现C线，表示操作不正确或测试板已变质失效。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的测试板重新试验。
【注意事项】1、在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。
2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面；请勿使用过期的检测卡；【特异性】本产品与粮油中玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇没有交叉反应。
【贮存条件及有效期】储存于2-30℃阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期18个月。
黄曲霉毒素净化柱使用手册最新
黄曲霉毒素B/G免疫亲和净化柱使用手册目录1、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书2、样品处理方法3、柱后衍生技术4、实验操作注意事项5、主要技术指标和参数6、黄曲霉毒素分析实验室配置7、参考文献8、欧盟相关规定中黄曲霉毒素的限量表9、附件AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书LCTech 公司的AflaCLEAN TM免疫亲和净化柱采用单克隆抗体技术，预先在净化柱壁涂布了黄曲霉毒素B和G的抗体，当提取样品液过净化柱时，黄曲霉毒素就会被吸附保留在柱子上，而其他杂质则被排除，然后再用甲醇将黄曲霉毒素从净化柱上洗脱下来进行黄曲霉毒素检测分析的前处理，适用于食品，饲料以及相关原料中黄曲霉毒素检测时，样品的净化处理，特点是适用范围广，平行性好，回收率高，重新性好，操作简单，性价比高。
一、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱产品组成1、AflaCLEAN TM净化柱25支/盒2、批次证书和使用说明书二、实验准备1、样品处理方法：详见：“样品处理方法”2、试剂配制（1）样品提取溶剂：甲醇/水（4/1，v/v）（2）5mmol磷酸盐缓冲溶液（PBS）（pH7.2）母液配制：1）称取50.14gNa2HPO4.12H2O溶解于700ml水中。
2）称取9.66gNaH2PO4.1H2O溶解于350ml水中。
3）将上述两种溶液进行混合并加入42.5gNaCl，配制成pH7.2 5mmol 磷酸盐缓冲溶液（3）1mmol磷酸盐缓冲溶液(PBS)（pH7.2）工作液配制：取200ml 的5mmol磷酸盐缓冲溶液（pH7.2）稀释于800ml水中。
（4）磷酸盐缓冲溶液（PBS）/吐温(Tween)配制：取8ml吐温-20稀释于92mlpH7.2磷酸盐缓冲溶液中（5）HPLC 流动相配制：水/甲醇/乙腈（60/30/15,v/v）三、实验步骤1、净化柱平衡：将净化柱于室温中放置15min以上，平衡至室温。
(整理)黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱操作手册-1
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱工作手册一、溶剂的配置和准备：1．蒸馏水/去离子水（配合液相使用）；2．色谱级甲醇、乙腈；3．磷酸盐缓冲液1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，氯化钠(NaCl)8g，氯化钾(KCl)0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。
4．黄曲霉毒素M1标准品（货号：TSL-143，浓度为0.5 μg/ml）5．氢氧化钠、浓盐酸（用于调节pH）二、其他耗材及设备的准备1.滤纸；2.免疫亲和柱架或固定支座；3.注射器（建议玻璃材质，易于清洗，10 ml）或5 ml或10 ml枪头；4.1升容积的搅拌器；5.离心机；6.量筒，漏斗，移液管，烧杯，带螺盖的瓶子等玻璃器具；三、标准曲线的配制：黄曲霉毒素M1总量液态标准品：500 ng/ml 100%乙腈溶液。
取100μl 500 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至500μl，得到100ng/ml 的溶液。
绘制一条3点的校准曲线：取50 μl 100 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2.5 ml（=2 ng / ml）。
取1 ml 2 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=1 ng / ml）。
取1 ml 1 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=0.5 ng / ml）。
每种取100 μl注射进HPLC系统。
四、样品回收率的测定--针对奶粉添加浓度为0.5 ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到10 g阴性奶粉样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于1 ng/ml）--针对奶添加浓度为0.1ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到50ml阴性奶样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于2 ng/ml）五、样品处理A）牛奶-- 加热牛奶至35 - 37 ℃，用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤或者在4000 rpm下离心15分钟。
英国药典关于赭曲霉素A的检测方法
赭曲霉素A的检测方法免疫亲和净化，液相色谱-荧光检测法（详见英国药典和欧洲药典）方法：液相色谱(2.2.29)溶液A：水：乙腈（V:V=80：20），水用无水甲酸调pH值至2.3 。
供试品溶液的制备：向2.00 g的粉状药物(250)(2.9.12)加80ml 30 g / L的碳酸氢钠溶液，超声提取30 min，(超声15 min后更换水浴锅中水)。
冷却至室温,用同样的溶剂稀释到100.0 ml(V1)，离心。
取出5.0ml(Vi)的上清液并和30 mlpH值7.4 缓冲溶液混合。
将混合溶液以3 ml/min的流速通过免疫亲和柱，流速不超过5ml/min,先用10 mL pH值7.4的缓冲溶液洗脱一次，然后以两倍体积的水洗脱，每次10 ml,流速不超过5 ml/min, 使柱子保持5-10s的真空度或者使用注射器使空气进入柱子10s，将水挤出柱子，再用0.5 ml甲醇洗脱，并靠重力流下。
收集上述甲醇洗脱液，置4ml 玻璃瓶中，30s后然后再用0.5ml体积的甲醇洗脱，靠重力通过柱子，洗脱液置同一小瓶中。
再过30s后，用0.5ml体积的甲醇洗脱。
通过使空气进入柱子或者真空度收集残留在柱子上的溶液。
在40℃用氮吹将收集液浓缩至干，用0.5ml(V2)的溶液A复溶残渣，如果溶液澄清则可以直接用于分析，否则则可以使用任意的过滤装置过滤，但是过滤装置不能吸附赭曲霉素A（比如0.45 um的聚四氟乙烯）。
赭曲霉素A一级储备液用甲醇将1ml的赭曲霉素A溶液稀释到100ml，混合均匀。
赭曲霉素A二级储备液用甲醇将10 ml的一级赭曲霉素A溶液稀释到100ml，混合均匀。
赭曲霉素A标准溶液按照表2.8.22.-1 用适量赭曲霉素一级或二级储备液配制成以下不同浓度，并用溶液A定容到50 ml。
标准曲线用赭曲霉素A标准溶液制备标曲，标曲范围包含了赭曲霉素A在中药中的浓度0.5-250 µg/kg，检查标准曲线，如果样品中赭曲霉素A的含量超出了标曲的范围那么供试品必须要稀释，稀释到赭曲霉素A的含量适合于所建立的标曲。
黄曲霉毒素 M1M1 免疫层析亲和柱产品说明书 M1M1 免疫层析亲和柱 产品说明书
PriboFast IAC 中文说明书产品产品用途用途用途：：免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1，从而对黄曲霉毒素M1样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和层析柱与HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
产品产品概述概述概述：：黄曲霉毒素（AFT ）是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡, 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
反应反应原理原理原理：：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱黄曲霉毒素M1，然后注入到分析仪器中用于检测。
适用范围及性能 适用于定性、定量检测牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等样品中黄曲霉毒素M1的样品前处理。
柱容量柱容量≥≥200ng 200ng 回收率回收率≥≥90% 产品产品包装组成包装组成包装组成：：每一个盒中包括25支/50支黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱及1份说明书。
需要的材料但盒中不提供需要的材料但盒中不提供：： 设备 器皿耗材 试剂 HPLC 泵流操作架 空气泵 天平 匀质器 高速粉碎机 超声波发生器 100ml/10mL 量筒 50ml 漏斗 玻璃针筒 样品瓶 100ml/1L 容量瓶 移液器或移液管 50ml 离心管 定量滤纸 玻璃纤维滤纸 圆孔筛 氯化钠(分析纯) 氢氧化钠浓盐酸(分析纯)色谱甲醇色谱乙腈蒸馏水或去离子水 黄曲霉毒M1标准品 石油醚注意事项注意事项：： ----黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。
赭曲霉毒素免疫亲和柱操作说明书
百奥思科赭曲霉毒素A免疫亲和柱操作说明书【概要】赭曲霉毒素A （Ochratoxin A）是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物，属烈性的肾脏毒和肝脏毒，广泛存在于各种食物中，谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。
动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后，会发生急性或慢性中毒症。
防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链，加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。
【适用范围及性能】本公司真菌毒素免疫柱系列产品测试形式是一个高性能的免疫亲和柱，设计用于在进行HPLC（高效液相色谱法）、GC-MS（气相色谱-质谱联用仪）、ELISA（酶联免疫吸附剂测定）之前清理（净化）或浓缩样本。
用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的赭曲霉毒素A时的样品前处理。
柱容量：≥200ng回收率：≥90%【试验原理】本产品的测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素A单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的赭曲霉毒素A经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过赭曲霉毒素A 免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，赭曲霉毒素A与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。
用甲醇洗脱赭曲霉毒素A，然后注入到分析仪器中用于检测。
【包装组成】25支/盒，3mL柱管/支产品说明书1份【需要而未提供的设备及试剂】设备：┅┅高速均质器或组织匀浆机┅┅粉碎机┅┅200ml/50ml量筒┅┅天平：感量0.1g┅┅微量移液器：单道100μl～1000μl┅┅槽纹滤纸（折叠快速定性或定量滤纸）┅┅玻璃微纤维滤纸（1.5μm孔径）┅┅50ml漏斗┅┅一次性玻璃试管┅┅泵流操作架（包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等）试剂：┅┅甲醇（色谱级）┅┅蒸馏水或去离子水┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲液）：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL┅┅清洗缓冲液：25g 氯化钠+5g碳酸氢钠+0.1mL吐温-20 用纯水稀释至1000 mL【试剂配制】样品提取液：配制甲醇-水（8：2）溶液作为样品提取液【样本处理步骤】（一）花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料┅┅称取20g粉碎的样品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化钠，以甲醇-水（8：2）溶液定容；┅┅转移到均质杯中，以均质器高速搅拌，提取2分钟；┅┅4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤；┅┅取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测；┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。
AFB1免疫亲和柱使用说明书
2013版苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）。
25支/盒，1mL柱管/支；20支/盒，3mL柱管/支。
说明书1份。
【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱说明书 (四合一)
苏微黄曲霉毒素总量（B1、B2、G1、G2）免疫亲和柱说明书1、用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2, 从而对黄曲霉毒素样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
2、产品性能柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。
3、测定原理：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，免疫亲和柱中抗体与毒素结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用乙腈洗脱黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，然后注入到分析仪器中用于检测。
4、包装组成：标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；5、需要的材料但盒中不提供：5.1设备----HPLC----气控操作架----空气泵----天平----组织匀浆机（或摇床）----粉碎机----分样筛----100mL/10mL量筒----50mL漏斗----针筒----快速定性滤纸----微纤维滤纸（Whatman 934-AH）----样品瓶----转接头（配3ml免疫亲和柱使用）5.2 试剂----甲醇，氯化钠，乙腈，蒸馏或去离子水。
6、注意事项：----黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。
----使用过的容器及黄曲霉毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%,V/V）浸泡过夜。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----2~8℃储存，不得冻存。
----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）7、样品处理：方法：适用于玉米、花生或中药等样品----玉米花生或中药等样品粉碎，过2mm分样筛；----25g过筛粉碎的样品加入5g 氯化钠与125mL 60%甲醇-水溶液混匀；----高速匀浆1min（或用摇床剧烈振荡20min），用快速定性滤纸过滤；----用20mL蒸馏水稀释10mL滤液，再用微纤维滤纸过滤；----取15mL上样检测。
食品中赭曲霉毒素的检测-HPLC法
食品中赭曲霉毒素HPLC检测法1.0液相色谱条件：色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）流动相：乙腈/水/乙酸（99+99+2）流速：1mL/min检测器：荧光检测器，激发波长333nm,发射波长477nm进样体积：20-50uL2.0 样品的提取2.1 粮食及粮食制品：研磨样品，但不要研成粉末，使所称样品的95%通过20目筛，置25克研磨的样品于磨口量筒中，加入5克氯化钠和100mL提取液（甲醇：1%碳酸氢钠溶液=8:2），手动震荡3分钟，然后用定量滤纸过滤，收集滤液10ml，加40ml水稀释，混匀后，用玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液A。
2.2酒类：取脱气酒类样品(含二氧化碳的样品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min，超声脱气)或不含二氧化碳样品20g于磨口量筒中，用提取液（150g氯化钠，20g碳酸氢钠，水定容至1L）至100ml，混匀，用定量滤纸过滤，收集滤液B。
2.3酱油、醋、酱及酱制品：取25g样品，用提取液（甲醇：1%碳酸氢钠溶液=8:2）定容至50ml，混匀，用定量滤纸过滤，取10ml滤液，加40ml水稀释，混匀后，用玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液C。
3.0 亲和柱操作3.1粮食及粮食制品：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取10mL滤液A，注入玻璃注射器，调节压力，使上述滤液以1滴/秒的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入柱子。
用10ml 纯水以2滴/秒的流速冲洗柱子，直至空气进入柱子。
3.2酒类：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取20mL滤液B，注入玻璃注射器，调节压力，使上述滤液以1滴/秒的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入柱子。
用5ml 纯水以2滴/秒的流速冲洗柱子，直至空气进入柱子。
3.3酱油、醋、酱及酱制品：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取10mL滤液C，注入玻璃注射器，调节压力，使上述滤液以1滴/秒的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入柱子。
用10mlPBS缓冲液及10ml纯水以2滴/秒的流速冲洗柱子，直至空气进入柱子。
1多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理-黄曲霉毒素检测
多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理
（黄曲霉毒素检测）
PriboFast 系列多功能净化柱分为柱压型（带玻璃试管）和推杆型（针筒式）两种，以极性、非极性及离子交换等基团组成填充剂，可选择性吸附样液中的脂类、蛋白质类等杂质，毒素不被吸附而直接通过，其操作更为简便，不需要进行活化、淋洗和洗脱操作，只需要直接上样，30秒钟即可完成整个净化过程，效果理想，可同时净化多种毒素，降低检测成本，有效提高检测效率，稳定性强，回收率高，适用于食品、粮食饲料、饮料、中药材等多种复杂样品。
同时我们还提供多毒素符合免疫亲和柱。
PriboFast?免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理, 将抗体与凝胶共价结合，然后填充柱子。
将样品提取溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。
其提纯效率很高,适用于各类复杂样品包括食品、饲料等多种基质。
整个纯化过程30分钟左右。
免疫亲和柱技术及其在黄曲霉毒素等检测中的应用
➢操作步骤——
均质样品
• 盖上搅拌杯的盖 子，高速均质12 分钟
• 也可以置于锥形 瓶中，在摇床上 振动30分钟左右
粗滤与稀释
• 将均质液通过槽 纹滤纸过滤，准 确移取15毫升滤 液并加入30毫升 水稀释
• 将免疫亲和柱 连接于玻璃注 射器下，准确 移取15毫升样 品提取液注入 玻璃注射器中
免疫亲和柱技术及其在黄曲霉毒素检测中的应用
黄曲霉毒素
免疫亲和柱技术在黄曲霉毒素中的应用
•黄曲霉毒素
黄曲霉毒素(Aflatoxin，A)是黄曲霉和寄生曲霉所产生的一组结
构类似的有毒代谢产物，其基本结掏为二呋喃环和香豆素。现已
分离出 AFB 1 ，AFB 2 ， AFG 1 ， AFG 2 ， AFB 2a ， AFG 2a ， AFM 1， AFM 2，AFP 1 等 18 种之多，其中以 AFB 1 的毒性和致 检癌测性标准最：强我。国现对已食证品实中有的A1F7B种1衍的限生量物标．准 其（G中B最276重1-要20的05）包括是：B花1、生、B1、 玉G米1、、G花2生、油M及1等其5制种品，的 被AFWBH1O≤划20为μgⅠ/kgA；类大致米及癌其物他。食用黄油曲的霉AF污B 染1 ≤1范0μ围g/k：g；玉 粮米食、、豆谷类物、、发酵花食生品、的 粮AF食B 1饲≤5料μg、/kg植；物婴儿油代、乳辣品不椒得等检作出。物我。国也规定牛乳
2.3 抗体与基体偶联
基体在与抗体偶联之前，需要进行活化。一般是在基体骨架 上引入亲电基团，然后与间隔分子或抗体上的亲核基团共价结 合，需要说明的是在小配体的亲合色谱中，常在基体和配体之 间插入一个间隔臂，以减小空间位阻的影响。
常用的活化试剂包括溴化氰、环氧氯丙烷和维生素H酰肼等 抗体与活化基体的偶联方式有随机偶联与定向偶联两种。
OA亲和柱说明书
2013版苏微赭曲霉毒素（OA）免疫亲和柱使用说明书【产品用途】赭曲霉毒素（OA）免疫亲和柱适合于和OA酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测OA。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测粮食、食品等样本中OA的样本前处理。
柱吸附能力：≥40ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：70%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素（OA）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的OA经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过OA免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，OA与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱OA，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【试剂配制】提取液1：甲醇+水（80+20）提取液2：称取150g氯化钠、20g碳酸氢钠，于约950mL水中溶解后，加水定容至1L。
冲洗液（用于酒类样品）：称取25g氯化钠、5g碳酸氢钠，于约950mL水中溶解后，加水定容至1L。
清洗缓冲液（用于粮食等样品）：称取25g氯化钠、5g碳酸氢钠，加入0.1mL吐温-20，加水定容至1L。
PBS缓冲液（pH7.0）：分别称取8g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用990mL水将上述试剂溶解，然后用浓HCl调pH至7.0，最后用水定容至1L。
免疫亲和柱-高效液相色谱法测定饼干中赭曲霉毒素A
关键词：高效液相色谱柱；免疫亲和柱；赭曲霉毒素 A
赭曲霉毒素是一组结构类似的真菌毒素，有 A、B、C、 D 4 种化合物，主要危及人和动物肾脏，其中毒性最大、与 人类健康关系最密切、产毒量最高、对农作物的污染最重及 分布最广的是赭曲霉毒素 A[1]。赭曲霉毒素 A 致癌、致畸、 破坏免疫系统，对肝、肾脏造成损害，还可以导致神经中毒 [2]。
线性方程为 y=9 915.48x+1 391.31，以信噪比为 S/N ≥ 10 时确
定定量限为 1.0 μg/kg，欧盟规定饼干中赭曲霉毒素 A 限量值
为 3.0 μg/kg，方法定量限满足检测的需求。
为了保障人民的身体健康，《食品安全国家标准 食品中真
菌毒素限量》（GB 2761—2017）规定了谷物及其制品（不包 括焙烤食品）中赭曲霉毒素 A 的限量为 5.0 μg/kg[3]。
2021 年 4 月，瑞典通过欧盟食品和饲料快速预警系统 通报出口至我国的薄脆饼干中赭曲霉毒素 A 含量不合格， 目前文献报道的赭曲霉毒素 A 的方法主要涉及粮食及其制 品、咖啡、酒 [4-6]，针对饼干中赭曲霉毒素 A 测定技术的研 究较少。因此有必要建立饼干中赭曲霉毒素 A 的检测方法， 为开展饼干中赭曲霉毒素 A 的风险监测提供技术支撑。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂
赭曲霉毒素A单克隆抗体免疫亲和柱的制备_游淑珠
赭曲霉毒素Ａ单克隆抗体免疫亲和柱的制备游淑珠１， ２， ３，许 杨１，２，＊，邓舜洲１，２，黄志兵１，２（１．南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室，江西 南昌 ３３００４７；２． 南昌大学中德联合研究院，江西 南昌 ３３００４７；３． 珠海出入境检验检疫局技术中心，广东 珠海 ５１９０１５）摘 要：制备了赭曲霉毒素Ａ（ＯＴＡ）单克隆抗体免疫亲和柱，并用间接竞争ＥＬＩＳＡ和ＨＰＬＣ法评价了免疫亲和柱的性能，其柱容量（结合ＯＴＡ的能力）约为２００ｎｇ，加标回收率为９０．３８％～１００．１％，可反复使用３次。
建立了免疫亲和柱－ＨＰＬＣ联用分析谷物中ＯＴＡ的方法，最低检出限为０．２μｇ／ｋｇ，线性范围为０．６～４００μｇ／ｋｇ，ＯＴＡ加标量为１～１０μｇ／ｋｇ时谷物样品中的回收率为７８．７％～８７．１％，变异系数小于６．５％。
用此法检测了大米、小麦、玉米和玉米饲料等１５份市售样品，检出率为４６．７％，其中ＯＴＡ的最高含量为０．７８５μｇ／ｋｇ。
关键词：赭曲霉毒素Ａ；单克隆抗体；免疫亲和柱Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｏｌｕｍｎ ｏｆ Ａｎｔｉ－ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＡｎｔｉｂｏｄｙＹＯＵ Ｓｈｕ－ｚｈｕ１， ２， ３，ＸＵ Ｙａｎｇ１，２，＊，ＤＥＮＧ Ｓｈｕｎ－ｚｈｏｕ１，２，ＨＵＡＮＧ Ｚｈｉ－ｂｉｎｇ１，２（１．Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４７， Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｉｎｏ－Ｇｅｒｍａｎｙ Ｊｏｉｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４７， Ｃｈｉｎａ；３．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｚｈｕｈａｉ Ｅｎｔｒｙ－Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ， Ｚｈｕｈａｉ ５１９０１５， Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ａｎ ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｏｌｕｍｎ （ＩＡＣ） ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｉ－ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ Ａ （ＯＴＡ） ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ＩＡＣ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｂｅｎｔ ａｓｓａｙ （ＩＣ－ＥＬＩＳＡ） ａｎｄ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ）． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ＩＡＣ ｈａｄ ａ ｈｉｇｈ ｃｏｌｕｍｎ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｂｉｎｄｉｎｇ ＯＴＡ （２００ ｎｇ） ａｎｄ ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｎｇｉｎｇ ｆｒｏｍ ９０．３８ ％ ｔｏ １００．１ ％， ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｒｅｐｅａｔｅｄｌｙ ３ ｔｉｍｅｓ． ＩＡＣ ｌｉｎｋｅｄ ｗｉｔｈ ＨＰＬＣ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＯＴＡｃｏｎｔｅｎｔｓ ｉｎ １５ ｃｅｒｅａｌ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ （ＬＯＤ） ｏｆ ＯＴＡ ｂｙ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ０．２ μｇ／ｋｇ． Ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ＯＴＡ ｌｅｖｅｌｓｆｒｏｍ ０．６ ｔｏ ４００ μｇ／ｋｇ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｑｕａｎｔｉｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｓｐｉｋｅｄ ＯＴＡ ａｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ １ ｔｏ １０ μｇ／ｋｇ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ７８．７ ％ ｔｏ ８７．１ ％ ｗｉｔｈ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ （ＣＶｓ） ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ６．５ ％． Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ １５ ｓａｌｅｄ ｃｅｒｅａｌ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ４６．７ ％， ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ＯＴＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗａｓ ０．７８５ μｇ／ｋｇ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ Ａ；ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｏｌｕｍｎ中图分类号：Ｏ６５７．７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００９）０９－０１７２－０４收稿日期：２００８－０８－０９基金项目：教育部“长江学者和创新团队发展计划”项目（ＩＲＴ０５４０）作者简介：游淑珠（１９７７－），女，硕士，研究方向为食品安全检测。
如何做免疫亲和柱的条件优化
小编最近了解到，客户在使用CNW免疫亲和柱做赭曲霉毒素A时回收率较差，于是小编进行了一系列实验寻找原因。
这里我们先再回归下常规SPE操作的一些步骤及其主要作用。
SPE实验中分步收集是一个非常实用的实验技巧，可以很好的检验实验问题发生在SPE过程中的哪一步。
基于分步收集的方法，针对CNW免疫亲和柱做赭曲霉毒素A时回收率较差的问题，小编采用客户的方法做了实验，并进行了分布收集和二次洗脱。
实验方法和结果如下1、待上样液：2mL 5ppb/80%甲醇水的标准溶液与8mL水混合均匀。
2、使用前，将免疫亲和层析柱回至室温（22-25℃），放空里面的溶液。
3、上样：将处理好的样品液，以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，收集上机。
4、淋洗：加20mL水淋洗柱子，弃掉流出的液体，收集上机。
5、洗脱：加入2mL甲醇缓慢洗脱，流速约为2-3秒每滴，真空抽干，收集全部洗脱液45℃以下氮吹干，加1mL流动相复溶，上机检测。
6、二次洗脱：加入2mL甲醇缓慢洗脱，流速约为2-3秒每滴，真空抽干，收集全部洗脱液45℃以下氮吹干，加1mL流动相复溶，上机检测。
我们可以看到洗脱溶液中回收率只有20.31%，上样、淋洗以及二次洗脱中都没有检测到目标物，而目标物不会凭空消失，因此目标物可能由于和免疫亲和柱的抗原结合太过紧密而导致没有洗脱下来，产生这种情况的原因淋洗和上样液采用的水过多，没有达到免疫亲和最适的反应条件，而PBS缓冲溶液具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，能够保证完整的、具有活性的物质在最适条件下参与生物反应。
在我们的免疫亲和柱的产品说明书中也有提到做杂质较大的样品提取液时可用PBS溶液进行稀释，PBS的配置方法如下：在国标“GB 5009.96-2016食品安全国家标准食品中赭曲霉毒素A的测定”中根据不同的基质样品也使用了不同的提取液和淋洗液，如下图所示。
小编在接下来的实验中按照产品COA中PBS溶液的配置方法，采用了不同的上样和淋洗方法进行实验。
MS-Clean黄曲霉毒素B1免疫亲和柱
MS-Clean黄曲霉毒素B1免疫亲和柱
概要：
黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的真菌毒素，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物，对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力最强，还能引起突变和导致畸形。
世界各国对食品及饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
测定原理：
此免疫亲和柱以抗体-抗原特异性反应为基础，含有和黄曲霉毒素B1抗体结合在一起的凝胶。
上样时，经提取、过滤、稀释后的样品缓慢地通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱，在柱内黄曲霉毒素B1与抗体结合，其他物质不会结合而直接流出。
此后洗涤免疫亲和柱，完全除去未结合的其他物质。
最后加入甲醇，将黄曲霉毒素B1释放并洗脱，再注入到分析仪器中进行检测。
适用范围及用途：
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1检测的净化。
可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA等定量分析，适合谷物、食品和饲料等样品。
液相色谱测定条件：
检测器：荧光检测器
激发/发射波长：360 nm/440 nm 流动相：甲醇:水 = 45:55
流速：0.8 mL/min
进样量：20 uL
柱温：30 ℃
反应时间：10 min
用进样器吸取20 uL黄曲霉毒素标准工作溶液注入高效液相色谱
仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素标准溶液的高效液相色谱图。
产品参数及规格：。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
百奥思科赭曲霉毒素A免疫亲和柱操作说明书
【概要】
赭曲霉毒素A （Ochratoxin A）是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物，属烈性的肾脏毒和肝脏毒，广泛存在于各种食物中，谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。
动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后，会发生急性或慢性中毒症。
防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链，加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。
【适用范围及性能】
本公司真菌毒素免疫柱系列产品测试形式是一个高性能的免疫亲和柱，设计用于在进行HPLC（高效液相色谱法）、GC-MS（气相色谱-质谱联用仪）、ELISA（酶联免疫吸附剂测定）之前清理（净化）或浓缩样本。
用于定性、定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的赭曲霉毒素A时的样品前处理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【试验原理】
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素A单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的赭曲霉毒素A经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过赭曲霉毒素A 免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，赭曲霉毒素A与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。
用甲醇洗脱赭曲霉毒素A，然后注入到分析仪器中用于检测。
【包装组成】
25支/盒，3mL柱管/支
产品说明书1份
【需要而未提供的设备及试剂】
设备：
┅┅高速均质器或组织匀浆机
┅┅粉碎机
┅┅200ml/50ml量筒┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：单道100μl～1000μl
┅┅槽纹滤纸（折叠快速定性或定量滤纸）
┅┅玻璃微纤维滤纸（1.5μm孔径）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃试管
┅┅泵流操作架（包括空气泵，不同容积的玻璃注射器等）试剂：
┅┅甲醇（色谱级）
┅┅蒸馏水或去离子水
┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲液）：称取8.0g氯化钠，
1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用
990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL
┅┅清洗缓冲液：25g 氯化钠+5g碳酸氢钠+0.1mL吐温-20 用纯水稀释至1000 mL
【试剂配制】
样品提取液：配制甲醇-水（8：2）溶液作为样品提取液
【样本处理步骤】
（一）花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料
┅┅称取20g粉碎的样品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯化钠，以甲醇-水（8：2）溶液定容；
┅┅转移到均质杯中，以均质器高速搅拌，提取2分钟；
┅┅4000r/min离心5min或用定量滤纸过滤；
┅┅取10mL滤液并加入40mLPBS缓冲液稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测；
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。
准确移取
10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，
┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
（二）啤酒，黄酒等酒类
┅┅取10mL试样脱气后与90mLPBS缓冲液混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待测；
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。
准确移取
10.0mL样品提取液注入玻璃注射器；
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；
┅┅以10.0mL清洗缓冲液淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，
┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速为1滴-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体；
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。
收集到的1ml洗脱液中的赭曲霉毒素A含量相当于1g样品中赭曲霉毒素A含量。
【注意事项】
┅┅赭曲霉毒素危害极大，应戴手套操作。
┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：亲和柱2-8℃保存，不可冻存
保存期：该产品有效期为12个月。