M1免疫亲和柱使用说明书
免疫亲和柱应用说明
免疫亲和柱的应用说明1. 应用背景免疫亲和柱是一种用于分离和纯化特定蛋白质的生物技术工具。
它基于免疫学原理，利用抗体的高选择性与抗原结合，从复杂的混合物中富集目标蛋白质。
免疫亲和柱广泛应用于生物医学研究、临床诊断和制药工业等领域。
2. 应用过程免疫亲和柱的应用过程主要包括以下几个步骤：2.1 制备免疫亲和柱制备免疫亲和柱时，首先需要选择适当的抗体作为固定相。
常见的固定相材料包括琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
将抗体与固定相材料共价结合，形成具有高亲和性的固定相。
2.2 样品预处理在进行样品处理之前，通常需要对样品进行预处理。
这可能涉及去除细胞碎片、细胞核酸或其他非目标蛋白质的步骤。
预处理步骤的目的是减少样品中的干扰物，提高目标蛋白质的纯度。
2.3 样品加载将经过预处理的样品加载到免疫亲和柱上。
目标蛋白质会与固定相上的抗体结合，而非特异性结合的蛋白质则会通过洗涤步骤被去除。
2.4 洗涤通过洗涤步骤可以去除非特异性结合的蛋白质和其他杂质。
洗涤缓冲液通常包含一些成分，如盐类、洗涤剂等，以提高选择性和纯度。
2.5 目标蛋白质的洗脱通过改变条件，如pH值、离子强度或添加竞争性抗原等，可以使目标蛋白质与抗体解离。
这样就可以将目标蛋白质从免疫亲和柱上洗脱下来。
2.6 纯化和分析得到目标蛋白质后，可以对其进行进一步纯化和分析。
常见的方法包括SDS-PAGE凝胶电泳、Western blotting等。
3. 应用效果免疫亲和柱在生物医学研究、临床诊断和制药工业等领域有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用情况：3.1 生物医学研究免疫亲和柱可用于纯化目标蛋白质，从而方便进行其结构和功能的研究。
通过纯化获得高纯度的蛋白质样品，可以进行进一步的结晶、质谱分析、活性测定等实验。
3.2 临床诊断在临床诊断中，免疫亲和柱可用于检测特定蛋白质标志物。
例如，通过使用抗体偶联的免疫亲和柱，可以富集血液中的肿瘤标志物，并通过后续分析方法（如ELISA）进行定量检测。
黄曲霉毒素M1液相检测222
泰乐祺科技－高效液相色谱法检测黄曲霉毒素M1操作规程作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商之一，近年来泰乐祺检测应用实验室重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。
针对近期奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提出以下快速解决方案。
1. 仪器1.1 高效液相色谱仪配荧光检测器1.2 震荡器（或高速搅拌器）1.3 高速离心机2. 试剂与试液2.1 色谱甲醇2.2 蒸馏水2.3 乙腈+水（25+75）2.4 石油醚2.5 10%乙腈2.6 氢氧化钠溶液（0.5mol/L）玻璃纤维滤纸（PriboFast免疫亲和柱免费赠送）3. 测定法本法系用高效液相色谱法（GB/T 18980-2003）测定牛奶，奶粉等产品中的黄曲霉毒素M1，除另有规定外，按下列方法测定。
3.1 色谱条件色谱柱：C18柱，150×4.6mm，5um检测器：荧光检测器；激发波长365nm，发射波长435nm；流动相：乙腈-水（25：75）流速：1.0ml/min进样量：20ul柱温：室温3.2 标准品溶液的配制取黄曲霉毒素M1标准品，用乙腈稀释成0.5ug/ml的标准储备液。
根据使用需要，准确吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黄曲霉毒素标准储备液，置5ml的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配成相当于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液，即得。
3.3 样品前处理3.3.1牛奶将100mL牛奶水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.2乳粉和粉状婴幼儿配方食品称取10g奶粉样品，将100mL50℃水多次少量加入，搅拌，使奶粉充分溶解；6000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.3发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)称取60 g混匀的试样，用0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH至7.4；用高速均质器在 9500 转/分钟，高速匀浆5 min水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用3.3.4干酪称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g置于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇；用高速均质器在 9500r/分钟，高速匀浆5 min；超声提取30 min；在6000r/分钟下离心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。
多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理-黄曲霉毒素检测
多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理
（黄曲霉毒素检测）
PriboFast 系列多功能净化柱分为柱压型（带玻璃试管）和推杆型（针筒式）
两种，以极性、非极性及离子交换等基团组成填充剂，可选择性吸附样液中的
脂类、蛋白质类等杂质，毒素不被吸附而直接通过，其操作更为简便，不需要
进行活化、淋洗和洗脱操作，只需要直接上样，30秒钟即可完成整个净化过程，效果理想，可同时净化多种毒素，降低检测成本，有效提高检测效率，稳定性强，回收率高，适用于食品、粮食饲料、饮料、中药材等多种复杂样品。
同时
我们还提供多毒素符合免疫亲和柱。
PriboFast®免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理, 将抗体与凝胶共价结合，然后填充柱子。
将样品提取溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。
其提纯效率很高,适用于
各类复杂样品包括食品、饲料等多种基质。
整个纯化过程30分钟左右。
亲和柱层析操作(可溶性蛋白)
亲和柱层析操作规程（可溶性蛋白）1.装柱：1.1 取出层析柱，用去离子水冲洗干净，连接好管子后固定柱子；1.2用水冲洗层析柱3-5次，每次10ml去离子水；1.3取出填料，静止至室温后，根据需要用移液器取出3-5ml的填料进行装柱，1.4用去离子水冲洗填料5个柱体积；2.柱的平衡与上样：2.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)平衡Ni柱，直至流出液的pH为8.0；2.2对处理的样品进行过滤后，缓慢上样让蛋白充分结合；3洗杂蛋白：3.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)过柱，清洗没有结合到层析柱上的杂蛋白，至流出液与缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.3用含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.4用含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.5用含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.6用含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）4解离目的蛋白：4.1用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.2 用含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.3 用含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.4用含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul 做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）5.柱的清洗与保存：5.1用含500mM咪唑的缓冲液A（pH8.0）以冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.2用浓度为1.5M的NaCl溶液冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.3用过滤去离子水冲洗50ml；5.4用20%乙醇冲洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱操作手册-1
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱工作手册一、溶剂的配置和准备：1．蒸馏水/去离子水（配合液相使用）；2．色谱级甲醇、乙腈；3．磷酸盐缓冲液1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，氯化钠(NaCl)8g，氯化钾(KCl)0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。
4．黄曲霉毒素M1标准品（货号：TSL-143，浓度为0.5 μg/ml）5．氢氧化钠、浓盐酸（用于调节pH）二、其他耗材及设备的准备1.滤纸；2.免疫亲和柱架或固定支座；3.注射器（建议玻璃材质，易于清洗，10 ml）或5 ml或10 ml枪头；4.1升容积的搅拌器；5.离心机；6.量筒，漏斗，移液管，烧杯，带螺盖的瓶子等玻璃器具；三、标准曲线的配制：黄曲霉毒素M1总量液态标准品：500 ng/ml 100%乙腈溶液。
取100μl 500 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至500μl，得到100ng/ml 的溶液。
绘制一条3点的校准曲线：取50 μl 100 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2.5 ml（=2 ng / ml）。
取1 ml 2 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=1 ng / ml）。
取1 ml 1 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=0.5 ng / ml）。
每种取100 μl注射进HPLC系统。
四、样品回收率的测定--针对奶粉添加浓度为0.5 ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到10 g阴性奶粉样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于1 ng/ml）--针对奶添加浓度为0.1ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到50ml阴性奶样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于2 ng/ml）五、样品处理A）牛奶-- 加热牛奶至35 - 37 ℃，用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤或者在4000 rpm下离心15分钟。
黄曲霉毒素 M1M1 免疫层析亲和柱产品说明书 M1M1 免疫层析亲和柱 产品说明书
PriboFast IAC 中文说明书产品产品用途用途用途：：免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1，从而对黄曲霉毒素M1样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和层析柱与HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
产品产品概述概述概述：：黄曲霉毒素（AFT ）是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡, 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
反应反应原理原理原理：：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱黄曲霉毒素M1，然后注入到分析仪器中用于检测。
适用范围及性能 适用于定性、定量检测牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等样品中黄曲霉毒素M1的样品前处理。
柱容量柱容量≥≥200ng 200ng 回收率回收率≥≥90% 产品产品包装组成包装组成包装组成：：每一个盒中包括25支/50支黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱及1份说明书。
需要的材料但盒中不提供需要的材料但盒中不提供：： 设备 器皿耗材 试剂 HPLC 泵流操作架 空气泵 天平 匀质器 高速粉碎机 超声波发生器 100ml/10mL 量筒 50ml 漏斗 玻璃针筒 样品瓶 100ml/1L 容量瓶 移液器或移液管 50ml 离心管 定量滤纸 玻璃纤维滤纸 圆孔筛 氯化钠(分析纯) 氢氧化钠浓盐酸(分析纯)色谱甲醇色谱乙腈蒸馏水或去离子水 黄曲霉毒M1标准品 石油醚注意事项注意事项：： ----黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。
AFB1免疫亲和柱使用说明书
2013版苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）。
25支/盒，1mL柱管/支；20支/盒，3mL柱管/支。
说明书1份。
【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱说明书 (四合一)
苏微黄曲霉毒素总量（B1、B2、G1、G2）免疫亲和柱说明书1、用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2, 从而对黄曲霉毒素样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
2、产品性能柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。
3、测定原理：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，免疫亲和柱中抗体与毒素结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用乙腈洗脱黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，然后注入到分析仪器中用于检测。
4、包装组成：标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；5、需要的材料但盒中不提供：5.1设备----HPLC----气控操作架----空气泵----天平----组织匀浆机（或摇床）----粉碎机----分样筛----100mL/10mL量筒----50mL漏斗----针筒----快速定性滤纸----微纤维滤纸（Whatman 934-AH）----样品瓶----转接头（配3ml免疫亲和柱使用）5.2 试剂----甲醇，氯化钠，乙腈，蒸馏或去离子水。
6、注意事项：----黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。
----使用过的容器及黄曲霉毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%,V/V）浸泡过夜。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----2~8℃储存，不得冻存。
----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）7、样品处理：方法：适用于玉米、花生或中药等样品----玉米花生或中药等样品粉碎，过2mm分样筛；----25g过筛粉碎的样品加入5g 氯化钠与125mL 60%甲醇-水溶液混匀；----高速匀浆1min（或用摇床剧烈振荡20min），用快速定性滤纸过滤；----用20mL蒸馏水稀释10mL滤液，再用微纤维滤纸过滤；----取15mL上样检测。
免疫亲和柱 柱容量 afb1
免疫亲和柱柱容量 afb1免疫亲和柱（Immunaffinity Column）是一种常用的柱层析技术，用于富集和纯化特定的分子或化合物。
本文将以AFB1（黄曲霉毒素B1）为例，介绍免疫亲和柱的原理、应用和优势。
AFB1是一种由黄曲霉菌产生的黄曲霉毒素，对人和动物具有较高的毒性。
由于其对人体健康的潜在危害，监测和分析AFB1在食品和环境样品中的含量变得尤为重要。
传统的分析方法包括高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC），但这些方法需要复杂的前处理步骤和昂贵的设备，且分离效果有限。
而免疫亲和柱作为一种快速、高效的富集和纯化技术，被广泛应用于黄曲霉毒素的检测和分析。
免疫亲和柱的原理是利用特定的抗体与目标分子之间的高度选择性结合。
在免疫亲和柱中，固定化的抗体通过特异性结合与目标分子相互作用，从而将目标分子从复杂的样品基质中富集出来。
免疫亲和柱的填料通常是以高纯度的抗体固定在固定相上，形成高效的亲和层析柱。
使用免疫亲和柱进行AFB1的富集和纯化，通常包括以下步骤：首先，将样品与免疫亲和柱进行接触，使目标分子与柱上的抗体结合。
随后，通过洗脱步骤将非目标分子洗去，使得目标分子得以富集。
最后，从柱上洗脱目标分子，用于进一步的分析和检测。
免疫亲和柱在AFB1的分析中具有许多优势。
首先，免疫亲和柱具有高度的选择性和特异性，可以有效地富集和纯化目标分子，减少样品基质的干扰。
其次，免疫亲和柱具有较高的富集效率和灵敏度，可以在短时间内获得较低浓度的目标分子。
此外，免疫亲和柱操作简便，无需复杂的前处理步骤，适用于不同类型的样品。
然而，免疫亲和柱也存在一些局限性。
首先，柱容量是免疫亲和柱的重要参数之一，它决定了柱富集目标分子的能力。
较低的柱容量可能导致目标分子无法完全富集，影响后续的分析结果。
其次，免疫亲和柱的使用寿命有限，经过多次使用后，抗体的活性和选择性可能会下降，影响分析结果的准确性。
总结而言，免疫亲和柱是一种重要的分离和纯化技术，在AFB1等目标分子的富集和纯化中具有广泛的应用前景。
黄曲霉素M1全套解决方案
泰乐祺科技推出奶及奶制品中黄曲霉素M1全套解决方案-黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。
霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。
黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。
除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2)，还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4－羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，薄层层析法(TLC)等。
而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。
黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。
高效液相色谱法：根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定HPLC条件：样品取样：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。
样品前处理：分不同样品牛奶水浴加热至40 oC；离心用上清液过柱净化；乳粉和粉状婴幼儿配方食品：称取适量奶粉样品，用于蒸馏水中，混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化；发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：称取适量奶粉样品，用于蒸馏水中，调节PH值至微碱性，高速均质器匀浆，水浴加热后离心，取上清液混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化；干酪：称取适量切细或粉碎，过筛用加纯水溶解，高速均质器匀浆，超声提取后收集上清液，然后用石油醚进行两次萃取，然后用适宜的有机溶液萃取，取若干上清液过柱净化奶粉样品，用于蒸馏水溶解中，调节PH值至微碱性，水浴加热后离心，取上清液混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化；奶油：称取适量加甲醇水溶解，震荡后分页漏斗取下层溶液，蒸干后溶于水用于过柱净化。
免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱法检测乳及乳粉中的黄曲霉毒素M1
１ ． ３ ． ６ 质谱 条 件 表 ２ 离子 选 择 参 数 表
１ ． ２ ． ４乙酸 铵
１ ． ２． ５ Ｋ２ ＨＰ Ｏ４
１ ． ２． ６ ＫＨ２ Ｐ Ｏ４
１ ． ２ ． ７磷酸缓冲 溶液 ： 称取 ５ ２ ． ７ ｇ Ｋ ２ Ｈ Ｐ Ｏ ４ ， 备注：ａ 代表定量离子 ３ ０ ． ２ ｇＫ Ｈ２ Ｐ Ｏ４ ， 溶于 ５ ０ ０ｍＬ中，用 ｌ Ｍ 氢氧 １ ． ４ 检 测 方 法 化钠或盐酸溶液调节 Ｐ Ｈ＝ ７ ，水定 容至 １ Ｌ。 称取 ２ Ｏ ｇ（ 精确至 Ｏ ． ０ ｌ ｇ ）试 样 （ 或 ｌ ０ ｇ １ ． ２ ． ８黄 曲霉毒素 Ｍ－ 标准品：纯度＞ ９ ８ ％。 固体试样 ，加 １ ０ ｍＬ水 溶解 ）于 ５ ０ ｍＬ离心 图 １黄曲霉毒素 Ｍ ， 色谱峰 （ Ｍ Ｒ Ｍ模式 ） １ ． ２ ． ９免疫 亲 和 柱 ： Ｎｅ ｏ Ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ 黄 曲霉 毒 管 中 ，加 入 ５ ｇ Ｎａ Ｃ １ ，２ ０ ｍＬ 乙腈 超 声 提 取 我 们 选 择 了 来 自不 同地 区 和 不 同批 号 的 素 （ ０ １ ／ ０ ８ ） 。 １ ０ ｍｉ ｎ ，４ ０ ０ ０ ｒ ｐ ｍ离心 ５ ｍｉ ｎ ，取 上 清 溶 液 ， １ ． ２ ． １ ０ １ Ｏ ％乙腈水溶液：在 ４ ５ ０ ｍＬ水 中 几 种 常 见 乳 制 品 的 阴性 样 品 进 行 添 加 测 定 。 称质量五等分 ，取一份加入 ４ ０ ｍＬ磷酸缓冲 加入 ５ ０ｍＬ乙腈 ，混匀 。 结果 如 表 ３所 示 。 溶液 ，混 匀 。４ ０ ０ ０ ｒ ｐ ｍ 离 心 ５ｍｉ ｎ ，取 上 清 待 １ ． ２ ． １ １ ５ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ乙酸铵 水溶液 （ 含０ ． １ ％ 净化 。 甲酸 ） ：称 取 Ｏ ． ３ ８ ５ ｇ乙 酸铵 ，溶 于 １ ０ ０ ０ ｍＬ 黄 曲霉毒素 免疫亲和柱 ，去掉柱子的顶 水中，加入 ｌ ｍＬ甲酸 ，混匀 ，超声 ３ ０ｍｉ ｎ 。 表 ｌ几种乳制 品黄 曲霉毒素 Ｍ 。 残留量测定结果 （ ｎ ＝ ３ ）
免疫亲和柱技术及其在黄曲霉毒素等检测中的应用
部分黄曲霉毒素的检测方法
AFB1检测常采用酶联免疫法（ELISA），HPLC法和荧光光
度法等。ELISA方法检测成本较低，但存在较大的假阳性率,一
般作为准确定量检测前的预筛选方法。
AFM1的测定方法有薄层色谱法和高效液相色谱法，免疫亲
和柱—荧光法等。样品前处理过程繁琐、净化效果差、所需时
2.2 制备基体
理想基体应具有下列条件：
(1)不溶于水，但高度亲水； (2)惰性物质，非特异性吸附少； (3)具有相当量化学基团可供活化； (4)理化性质稳定； (5)机械性能好，具有一定颗粒形式以保持一定流速； (6)通透性好，最好为多孔网状结构，使大分子能自由通过； (7)能抵抗微生物和醇的作用。
2.3 抗体与基体偶联
基体在与抗体偶联之前，需要进行活化。一般是在基体骨架 上引入亲电基团，然后与间隔分子或抗体上的亲核基团共价结 合，需要说明的是在小配体的亲合色谱中，常在基体和配体之 间插入一个间隔臂，以减小空间位阻的影响。
常用的活化试剂包括溴化氰、环氧氯丙烷和维生素H酰肼等 抗体与活化基体的偶联方式有随机偶联与定向偶联两种。
间长等。免疫亲和柱—HPLC，选择性高、净化效果好、检测限
AFM1的检测国家新标准GB5413.37—2010中对乳和乳制品中AFM1的检测方法有
“低免疫、亲操和作层析简净单化、液相快色速谱等—串特联点质．谱法可”用、于“免牛疫乳亲中和层AF析M净1的化测高效定液。相谱”、
“免疫亲和层析净化荧光分光法”、“双流向酶联免疫法”等4种。
进样分析
• 黄曲霉毒素的测定： 将显色液加入到上步 的淋洗液中，混匀； 将测试管放入荧光计 中，一分钟后读数
免疫亲和柱使用中的注意事项
免疫亲和柱-高效液相荧光检测牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素M1
该法快速 、 简便 、 准确 、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ可靠 ， 简 化 了现 有 国标 法 中 的 操 作 步 骤 ， 适 合 于 牛 奶 和 奶 粉 中 ＡＦ Ｍ１的定 量 分 析 。
关键词 ： 免疫亲 和柱 ； 高效液相 ； 黄 曲霉 毒 素 Ｍ１ （ ＡＦ Ｍ１ ） ； 牛奶 ； 奶 粉
中图分类号 ： Ｒ１ ５ ５ ． ５ ７ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ： １ ０ ０ ６ —９ ０ ７ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ —０ ０ ６ １ —０ ２
１ ． ３ ． ３ 提取 与 纯化 ： 将 一 次性 ５ Ｏ ｍＬ注 射 器 与 亲 和 柱顶部连接， 再 与 固相 萃 取 真 空仪 连接 起 来 ， 用 移 液
管 移取 按 １ ． ３ ． １处理 的样 品 ５ ０ ｍＬ或 按 １ ． ３ ． ２处 理 的样品 ４ ０ ｍＩ 至注射器 中， 调节真空系统， 控 制 试 样 以２ ～３ ｍＬ ／ ｒ ｎ ｉ ｎ的稳定 流速 过柱 ， 待过 完后加 ２ ０ ｍＬ 水， 以稳定 流速洗 柱 ， 最 后 抽 干亲 和 柱 。取 下 亲 和 柱 ，
（ ｗ ＨＯ ／ Ｉ ＡＲ Ｃ ） 将 ＡＦ Ｍ１列 为 Ｉ 类致 癌化合物 ， 许 多
国家也 确定 了乳 和 乳 制 品 中 的 ＡＦ Ｍ１的 法 定 限 量 标 准 。 目前 ＡＦ Ｍ１的测定 方法 有 薄层 层 析法 、 液相 色谱
一
串联 质谱 法 、 高效 液 相 法 、 荧光分光度法、 双 流 向酶
１ ． １ 仪 器与试 剂 高效液相色谱仪 ： ＨＰ １ １ ０ ０型 ， 荧
光检 测 器 （ 美 国安 捷伦 公 司 ） ； ＡＦ Ｍ１免 疫 亲 和 柱 ： Ｌ ｏ ｔ Ｆ １ ２ ０ ６ Ｍ１ ， 北京 华 安麦 科 生 物 技 术 有 限 公 司 ； 固相
黄曲霉毒素M1如何检测
乙腈(色谱纯)
正己烷(分析纯)
样品前处理
牛奶样品
1. 称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化;
2. 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)
3. 称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化。
免疫亲和柱净化
1.将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液，活化液不收集;
2.将待净化液加入免疫亲和柱，流速不超过5 mL/min，不收集流出液;
3.用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5 mL/min，抽真空1分钟，不收5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下匀浆5 min，超声提取30 min，6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中，同时加入30 mL正己烷，振摇2 min，分层后，弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL，转移浓缩液至离心管，烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中，加PBS溶液稀释至50 mL，6000r/min下离心5 min，上清液待净化。
4. 乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品
5. 称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。
中检食安：黄曲霉毒素B1B2G1G2M1M2免疫亲和柱
黄曲霉毒素B1/B2/G1/G2/M1/M2免疫亲和柱【用途】免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素，从而对样品起到非常针对性的净化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC 分析。
亲和柱与HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
本亲和柱可用于样品中黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1、M2)的样品提取、净化。
【原理】测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱黄曲霉毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
【柱容量及规格】柱容量：AFB1------300ngAFB2------300ngAFG1------300ngAFG2------300ngAFM1------100ngAFM2------100ng规格：1ml------25/50支装3ml------25/50支装【包装组成】每一个盒中包括各种规格黄曲霉毒素免疫亲和柱及1 份说明书。
【设备及耗材】（需要的材料但包装中不提供）----HPLC----衍生装置：如光化学衍生器、电化学衍生器、碘衍生装置----气控操作架----空气泵----天平----高速均质器（最高转速≥10,000r/min）或摇床----粉碎机----高速冷冻离心机（乳品检测用，可设置10℃，7,500r/min）----恒温培养箱或水浴锅（乳品检测用，可设置35℃～37℃）----分样筛：1mm 孔径----量筒：100mL/10mL----漏斗：50mL----注射器：10 mL/20mL----移液器或移液管：1mL----均质杯（或250mL 具塞锥型瓶）----样品瓶----快速定性滤纸----离心管：50ml（乳品检测用）----微纤维滤纸（Whatman 934-AH【贮藏条件及有效期】贮藏条件：2～8℃。
免疫亲和柱使用方法
免疫亲和柱使用方法
免疫亲和柱是一种常用的分离纯化蛋白质的工具，其原理是利用抗体与目标蛋白质的特异性结合，将目标蛋白质从混合物中分离出来。
下面将介绍免疫亲和柱的使用方法。
一、实验前准备
1. 准备所需的免疫亲和柱、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、目标蛋白质混合物和其他必要的实验用品。
2. 检查免疫亲和柱是否完整，无损坏或泄漏。
3. 在使用前，将免疫亲和柱放置在4℃下保存，以保持其稳定性。
二、样品处理
1. 样品处理前，应将目标蛋白质从细胞或组织中提取出来，并进行初步的纯化。
2. 样品中应去除杂质，如细胞碎片、核酸、脂质等。
3. 样品应在适当的缓冲液中进行处理，以保持其稳定性和活性。
三、免疫亲和柱的使用
1. 将免疫亲和柱放置在离心管中，并加入足够的洗涤缓冲液，使其完全润湿。
2. 将样品加入免疫亲和柱中，并让其在室温下静置一段时间，以便抗体与目标蛋白质结合。
3. 将未结合的蛋白质和其他杂质用洗涤缓冲液洗掉，以保持免疫亲和柱的纯度。
4. 用洗脱缓冲液洗脱目标蛋白质，以得到高纯度的目标蛋白质。
四、注意事项
1. 在使用免疫亲和柱前，应先进行实验室安全培训，并遵守实验室安全规定。
2. 在使用免疫亲和柱时，应注意避免柱子干燥，以免影响其性能。
3. 在使用免疫亲和柱时，应注意洗涤缓冲液和洗脱缓冲液的浓度和pH
值，以保证其最佳效果。
4. 在使用免疫亲和柱时，应注意避免样品中的高浓度盐类和其他杂质，以免影响柱子的性能。
总之，免疫亲和柱是一种非常有用的分离纯化蛋白质的工具，其使用
方法简单易行，但需要注意一些细节问题，以保证其最佳效果。
免疫亲和柱安全操作及保养规程
免疫亲和柱安全操作及保养规程免疫亲和柱是生物化学实验中广泛使用的一种基础性工具，其主要作用是通过单克隆抗体或多克隆抗体与靶分子特异性结合来实现其分离、纯化和检测。
然而，在使用免疫亲和柱的过程中，安全操作和日常保养是至关重要的。
下面将详细介绍免疫亲和柱的安全操作及保养规程。
免疫亲和柱的安全操作在使用免疫亲和柱的过程中，要重视安全问题。
以下是免疫亲和柱安全操作的相关规定：1. 实验前准备在进行免疫亲和柱的实验前，需要检查免疫亲和柱的外观是否完好无损，并检查各种试剂和仪器是否符合使用要求。
进行实验时，应按照实验指导书的要求准备好试剂，避免自行调配和调整。
2. 操作前的准备在进行免疫亲和柱的操作前，应做好个人防护措施。
工作场所和仪器应保持干净整洁，并保持室内良好的通风和空气流通。
同时，工作中需要佩戴手套、口罩、防护眼镜等必要的防护措施。
3. 操作过程中的注意事项在进行免疫亲和柱的操作过程中，需要注意以下几点：•操作过程中应避免直接接触免疫亲和柱的管柱，以免对其造成破损和污染；•操作过程需要使用高纯水、冰浴、40%甲醇等试剂，所以使用过程中需要注意防止出现错误使用和误操作；•操作过程需要进行菌落计数、过滤、同步凝集等步骤，需要注意操作顺序的合理性和正确性；•操作结束后需及时将废液和废料清理干净，将免疫亲和柱存放在相应的位置上，并进行记录和标记。
免疫亲和柱的保养在使用免疫亲和柱的过程中，保养免疫亲和柱也是很重要的。
以下是免疫亲和柱的保养规程和注意事项：1. 免疫亲和柱的保存免疫亲和柱保存有一定的要求，在不使用时需要注意以下几点：•闲置时应贮存在低温干燥处，避免光照、摩擦和震动等不良因素的影响；•贮藏期不宜过长，并且需要定期检查是否有渗漏和破损的情况，及时进行更换或修理；•长期闲置的免疫亲和柱需要反复冲洗，保证其工作性能和稳定性。
2. 免疫亲和柱的清洗和再生对于已经使用过一段时间的免疫亲和柱，需要进行清洗和再生。
亲和层析柱使用说明
亲和层析柱使用说明货号名称规格说明DS0101亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）DS0103亲和层析柱3ml DS0106亲和层析柱6ml DS0110亲和层析柱10ml DS0130亲和层析柱30ml DS0150亲和层析柱50ml 一、产品说明亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
它是利用生物分子间存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。
提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。
亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE（超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。
筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。
同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。
另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用1，抗体纯化纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。
2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。
immunoaffinity column方法
Immunoaffinity Column 方法简介免疫亲和柱（immunoaffinity column）是一种用于富集和纯化特定分子或细胞的技术。
该方法利用抗体与目标分子或细胞的特异性结合，将其从复杂的样品中选择性地富集出来。
免疫亲和柱广泛应用于生物医学研究、临床诊断、环境监测等领域。
本文将详细介绍免疫亲和柱方法的原理、操作步骤以及应用领域，并探讨其优缺点以及未来发展方向。
原理免疫亲和柱方法基于抗体与抗原之间的高度特异性结合。
抗体是由机体产生的一类蛋白质，可以识别并结合到特定的抗原分子上。
在免疫亲和柱中，将具有高亲和力的抗体固定在固相支持材料上，形成免疫亲和柱。
当样品溶液通过免疫亲和柱时，目标分子或细胞会与固相上的抗体发生特异性结合。
非特异性成分则通过柱床被洗脱，从而实现了目标分子或细胞的富集和纯化。
操作步骤免疫亲和柱方法的操作步骤通常包括样品处理、免疫亲和柱制备、样品处理、洗脱和收集等。
1.样品处理：根据需要选择合适的样品处理方法，例如离心、过滤等，将样品制备成适合免疫亲和柱操作的形式。
2.免疫亲和柱制备：将具有高亲和力的抗体固定在固相支持材料上。
常用的固相支持材料包括琼脂糖、磁珠等。
将固相材料装填到柱中，并进行必要的条件优化。
3.样品加载：将经过预处理的样品溶液加入免疫亲和柱中，使目标分子或细胞与固定在柱上的抗体发生特异性结合。
4.洗脱：通过洗涤缓冲溶液冲洗免疫亲和柱，去除非特异性成分。
洗涤条件需要根据具体实验要求进行优化，以保证特异性结合物质的富集和纯化。
5.收集：将洗脱后的溶液收集下来，即得到富集和纯化后的目标分子或细胞。
收集后的样品可以进一步用于下游实验或分析。
应用领域免疫亲和柱方法在生物医学研究、临床诊断、环境监测等领域具有广泛应用。
生物医学研究免疫亲和柱方法可用于富集和纯化特定蛋白质、细胞表面受体等生物分子，从而帮助研究者深入了解其结构、功能以及相互作用关系。
该方法在蛋白质组学、代谢组学等领域发挥着重要作用。
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2013版
苏微黄曲霉毒素M1免疫亲和柱
使用说明书
【产品用途】
免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒
素M1, 从而对黄曲霉毒素M1样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
【产品性能】
柱吸附能力：≥100ng/支；
回收率：75%~90%。
【测定原理】
本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素M1（AFM1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFM1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFM1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFM1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用乙腈洗脱AFM1，然后进行相关分析。
【产品组成】
标准品（选配）；
20支/盒，3mL柱管/支
说明书1份；
【所需材料】（不提供）
（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL 玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（whatman934-AH，直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：乙腈（色谱级）、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】
----乳：将试样在水浴中加热至35℃~37℃。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
至少收集20mL试样。
----乳粉：称取10g样品（精确至0.01g）,置于250mL 的烧杯中。
将50mL已预热到50℃的水加入乳粉中，搅拌溶解。
若乳粉不能完全溶解，将烧杯在50℃的水浴中放置至少30min，仔细混匀。
将溶解的乳粉冷却至20℃，移入100ml容量瓶中，用少量的水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶中，再用水定容至刻度。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
至少收集20mL试样。
----取20mL上样检测。
* 根据需要可以增加样品量，但水溶液的量也应相应增加。
【亲和柱净化】
注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！
----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；
(3ml的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与针筒固定后使用)
----将柱子与气控操作架上的针筒连接固定，20mL 处理后的溶液上样；
----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以
1d/2~3s的速度流出；
----待液体排干后，用蒸馏水或去离子水洗涤2次，每次10mL，流速1d/s；
----待液体排干后，上样3mL乙腈，用玻璃样品瓶接洗脱液，流速1d/2~3s；
----洗脱后洗脱液用氮气吹至仅含少量液体，并用流动相稀释，再用于HPLC。
* 使用前，免疫亲和柱恢复至室温（22~25℃）。
* 每次上样前都要将上次液体完全排干。
* 洗脱液要用玻璃样品瓶装，且避光保存于-20℃，
2013版检测时再避光复温、检测。
【注意事项】
（1）AFM1对人体有害，应戴手套操作。
凡接触到
标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。
（2）不要使用过有效期的免疫亲和柱。
（3）免疫亲和柱应在2~8℃保存。
不要冷冻。
（5）AFM1对光线敏感，因此样品及其提取液应当
低温（2~8℃）、避光保存。
【保存期】
有效期为12个月。
生产日期见包装盒。