基因工程(第二章答案)

第二章基因工程工具酶

一、解释下列名词

1.Restriction and modification（限制与修饰）宿主特异性地降解外源遗传物质（DNA）的现象称为限制。外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。

2. Matched ends(or cohesive end)（匹配末端或粘性末端）识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端

3. Blunt ends平末端。在回文对称轴上同时切割DNA 的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。

4. Star activity星星活性。在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。

5. Klenow fragment Klenow 片段。Klenow DNA 聚合酶是E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3'--5' 外切活性不受影响。

6.Reverse transcriptase反转录酶。即依赖于RNA 的DNA 聚合酶，它有5'--3' 合

成DNA 活性，但是无3'--5' 外切活性。

7.Terminal transferase（末端转移酶）

8.Ligase连接酶。催化DNA 5' 磷酸基与3' 羟基之间形成磷酸二酯键，将两段核酸连接起来的酶。

9.T4 polynucleotide kinase（T4多聚核苷酸激酶）催化ATP 的γ-磷酸基转移至DNA 或RNA 的5' 末端。

10.Alkaline phosphatase（碱性磷酸酶）催化除去DNA 或RNA 5' 磷酸

11.S1 nuclease Sl 核酸酶。可降解单链DNA 或RNA ，产生带5' 磷酸的单核苷酸或寡核苷酸双链；对dsDNA ，dsRNA ，DNA:RNA 杂交体不敏感。

二、填空题

1.限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的命名是按属名和种名相结合的原则的，通常第一个大写字母取自（属名的第一个字母），第二、三个字母取自（种名的前两个字母），第四个字母则用（菌株名）表示。

2.Ⅱ型限制酶识别回文对称序列，在回文序列（内部）或（附近）切割DNA，产生带3'－OH和5'－P基团的DNA的产物，需（Mg2＋）的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需SAM。

3. 识别相同序列的限制酶称（同裂酶）

4.DNA载体经HindⅢ切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外源DNA的连接效率，常用的防止载体自连的方法有（去磷酸化）、（部分补平）。

5.完全的回文序列应具备两个特点即（能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互

补配对）和（两条互补链的5'--3' 的序列组成相同，即将一条链旋转180°，则两条链重叠）。

6.限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）通常保存在（50%）浓度的甘油溶液中。

7.载体和外源DNA经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的影响。常用的方法有（EDTA 法）、（加热法）、（苯酚抽提法）、（试剂盒除酶法）。

8.对DNA进行双酶切时，酶切缓冲液的选择原则有(1)（）、(2)（）、(3)（）

9. Klenow DNA聚合酶是E.coli DNA polymerase经蛋白酶裂解而从全酶中除去( ) 活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。

10. E.coli DNA连接酶与T4 DNA连接酶相似，但需（）的参与。

11. T4多核苷酸激酶在高浓度的ATP时发挥最佳活性，（）是其强烈抑制剂。

三、选择题：从备选答案中选出正确的结果，正确答案是唯一的。

1.限制性内切酶一般保存在（C）浓度的甘油溶液中。

A 10%

B 20%

C 50%

D 60%

2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶（C）

A. 既可以作用于双链DNA，又可以作用于单链DNA

B. 只能作用于单链DNA

C. 只能作用于双链DNA

D. 只能作用于RNA

3.已知某一内切酶在一个环状DNA上有4个切点，当用此酶切割该环状DNA，可以得到（B）个片段

A. 3

B.4

C.5

D. 6

4.甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶星星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在（A）以下

A. 5%

B. 10%

C. 20%

D. 30%

5.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制哪一项最好（D）

A. 反应体积错误！未找到引用源。

B. 酶反应温度

C. 反应时间

D.酶量

6.下列试剂中，哪一种可以螯合Ca2＋离子（）

A. EDTA

B. 柠檬酸钠

C. SDS

D. EGTA

7.DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能（C）

A. 蛋白质（如BSA）同DNA结合

B. 有外切核酸酶污染

C. 酶失活

D. 酶切条件不适合

8. nick与gap的区别在于（A）

A. 前者是断开了一个磷酸二酯键，后者是指DNA的单链中有较小的缺失

B. 前者是是指DNA的单链中有较小的缺失，后者是指断开了一个磷酸二酯键

C. 二者无本质区别

D. 前者无法回复，后者可