柱切换二维色谱除盐质谱联用鉴定阿莫西林中杂质

时间 / min 0 10 20 30 35 40 40 45
流速 / （ mL / min） 0． 3 0． 3 0． 3 0． 3 0． 3 0． 3 0． 3 0． 3
A/% 100 100 97 80 60 60 100 100
B/% 0 0 3 20 40 40 0 0
2． 3 溶液配制
分别对两份阿莫西林样品（ 编号分别为： 403，519） ，进行 了酸、碱破坏性试样，分别取装量差异项下的内容物，混合均 匀，精密称取适量，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1 mL 中含 阿莫西林 2 mg 的溶液，作为样品。酸破坏试验： 取样品 10 mL，加浓盐酸 1 滴，置沸水浴中加热破坏 5 min。碱破坏试 验： 取样品 10 mL，加 氢 氧 化 钠 试 液 调 节 pH 值 至 10． 0，置 80℃ 水浴中加热破坏 10 min。然后把破坏样品进行混合，过 0． 22 μm 滤膜，待测。
Jiang Zhulian1 ，Zhang Wei1 ，Liu Lyuye2
（ 1． Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co． ，Ltd． ，Lianyungang 222000，China； 2． Thermo Fisher Scientific（ China） Co． ，Ltd． ，Shanghai 200210，China）
维系统中，进行在线除盐后，进 MS 进行鉴定。本方法以阿莫西林中的有关杂质进行分析为例，采用 Ultimate DGP3600 二维色谱与
三重四极杆质谱仪 TSQ Vantage 联用，正 / 负离子同时扫描测定，同时对确定的母离子再进行子离子扫描，以推测相关的结构信息。
右泵为一维分析泵，分析柱 Acclaim C18 柱（ 150 mm × 4． 6 mm，5 μm） ，含非挥发性盐流动相，流速 1． 0mL / min； 左泵，接二维在线除
盐分析柱 Acclaim PA2 柱（ 3． 0 mm × 50mm，3 μm） ，含挥发性盐溶液流动相兼容 MS，流速 0． 3mL / min； 柱温： 30℃ ； 进样量： 20 μL ；
检测波长： 230 nm。结果表明，在不改变阿莫西林国家药典标准方法的前提下，通过柱切换在线除盐技术使得分析条件能够兼容
阿莫西林 （ Amoxicillin） ，又名安莫西林或安默西林，学 名： 羟氨苄青霉素，是一种最常用的青霉素类广谱 β － 内酰 胺类抗生素，为一种白色粉末，是目前应用较为广泛的口服 青霉素之一，其 制 剂 有 胶 囊、片 剂、颗 粒 剂、分 散 片 等 等。 该 药在发酵或合成生产过程中可能产生一些副产物和降解产 物，导致其抗菌活性降低。因此根据人用药品国际注册技术 要求（ ICH） 要求，对药物中含量大于 0． 1% 的杂质要进行定 性分析。在常规的分析思路中，通常需要把所有杂质进行制
表 1 右泵梯度洗脱程序 Table1 The gradient elute program of right pump
时间 / min 流速 / （ mL / min）
A/%
B/%
0
1． 0
ห้องสมุดไป่ตู้
97
3
15
1． 0
97
3
35
1． 0
70
30
35． 1
1． 0
97
3
45
1． 0
97
3
根据每 个 化 合 物 的 保 留 时 间 与 基 质 情 况，可 以 适 当 调 整。
FWHM 为 0． 70，CE 10V，Energy Ｒamp： 3eV。 表 2 左泵梯度洗脱程序
Table2 The gradient elute program of left pump
溶液（ 用 2mol / L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 6． 0） ，B1： A 与 乙腈 2： 8 混合，梯度洗脱。左泵： 二维分析柱 Acclaim PA2 柱 （ 3． 0 mm × 50 mm，3 μm） ，流速 0． 3 mL / min。流动相： A2： 5mmol / L 乙酸铵溶液（ pH 值用乙酸调节至 5． 0） ，B2： 乙腈； 柱温： 35℃ ； 进样量： 20 μL； 检测波长： 230nm； 梯度洗脱程序， 右泵如表 1，左泵如表 2。
质谱并鉴定出阿莫西林中 4 种杂质，因此，本研究可以指导阿莫西林化工生产过程中杂质的限量，值得推广应用。
关键词： 阿莫西林； 杂质 ； 柱切换； 在线除盐
中图分类号： O657． 7
文献标识码： A
文章编号： 1008 － 021X（ 2015） 02 － 0059 － 04
Determination of Impurities in Amoxicillin by Desalt Mobile Phase with 2D Column Switch and LC － MS
1 方法与材料
Ultimate DGP3600 液相色谱系统（ 含两个三元梯度泵、自 动进样器、柱温箱和紫外检测器，其中柱温箱上装有一个 2
位 6 通阀和 200μL 收集环） ； 三重四极杆质谱仪，型号： TSQ Vantage（ 赛默飞世尔科技公司） ，二维色谱质谱连接图见图 1。AE163 电子分析天平（ 梅特勒 － 托利多仪器（ 上海） 有限 公司） ，超纯水机等。
第2 期
江竹莲，等： 柱切换二维色谱除盐质谱联用鉴定阿莫西林中杂质
·59·
柱切换二维色谱除盐质谱联用鉴定阿莫西林中杂质
江竹莲1 ，张 伟1 ，刘绿叶2
（ 1． 正大天晴药业集团股份有限公司，江苏 连云港 222000； 2． 赛默飞世尔科技（ 中国） 有限公司，上海 200210 ）
摘要： 采用柱切换二维色谱方法的原理，在一维上对药物的有关物质进行完全基线分离后，对大于 0． 1% 的含量的杂质，切入到二
阿莫 西 林 原 料 药 （ 某 药 业 股 份 有 限 公 司，批 号： 20140501） ； 阿莫西林对照品（ 中国生物制品检定研究院） ； 乙 腈、甲酸为色谱纯； 磷酸二氢钾、氢氧化钠、乙酸铵等以及其 他未注明均为分析纯； 水为去离子水。
图 1 二维色谱质谱连接示意图
Fig． 1 The flow sketch of 2D LCMSMS
收稿日期： 2014 － 12 － 15 作者简介： 江竹莲（ 1974—） ，女，现任正大天晴药业集团股份有限公司研究院分析部部长兼分析 1 室主任，长期从事药物 分析工作的研究。
·60·
山东化工 SHANDONG CHEMICAL INDUSTＲY
2015 年第 44 卷
液相色谱紫外检测器分析完后，收集到定量环（ Loop） 中，转 入二维色谱柱，先进行在线脱盐，然后用对质谱兼容的流动 相，进行定性分 析，找 到 有 关 物 质 的 结 构 信 息。通 过 该 方 法 进行质量标准研究工作，以期对相关杂质分析提供一个新的 思路，为药物使用的安全性和有效性提供参考。
2 方法与结果
到） ： 正负离子同时 扫 描，m / z = 100 ～ 400，扫 描 时 间 0． 2s，
2． 1 色谱条件
右泵： 一维分析柱 Acclaim C18 柱（ 150 mm × 4． 6 mm，5 μm） ，流速 1． 0 mL / min。流动相： A1： 0． 01 mol / L 磷酸二氢钾
2． 2 质谱条件
扫描模式： （ 1） 电喷雾正负离子 ESI（ + / － ） 模式； 喷雾 电压： 3． 5kV； 毛 细 管 温 度： 300℃ ； 鞘 气： 40arb； 辅 助 气 体： 5arb； 碰撞气： 氩气（ 0． 1995Pa） ； 质谱扫描范围： 正离子模式， m / z： 200 ～ 1200； 负 离 子 模 式： 80 ～ 500； 扫 描 时 间： 0． 4s， FWHM 为 0． 70。（ 2） 子离子扫描 （ 母离子根据 （ 1 ） 扫描得
Abstract： Based on the principle of two － dimensional chromatograph，related impurities more than 0． 1% of drug were desalted and then switched to the second dimension for identification using MS after complete baseline separation in the first dimension． Taking amoxicillin as an example，we used Ultimate DGP3600 two － dimensional chromatography coupled with three － triple quadrupole mass spectrometer （ TSQ Vantage） ，while the positive / negative ions were being scanned at the same time． Furthermore，the parent ions were scanned followed by determination of the daughter ions so as to speculate the related structure information． The right pump was one － dimensional analysis of pump and the analytical column was Acclaim C18 column （ 150 mm × 4． 6 mm，5 μm） ，containing non － volatile salt mobile phase，with flow rate of 1． 0 mL / min； the left pump was connected to D － dimensional online desalting analytical column Acclaim PA2 column （ 3 mm × 50mm，3 μm） ，the mobile phase containing volatile salt solution being compatible with MS，flow rate was 0． 3 mL / min； column temperature was 30 ℃ ； sample was injected 20 μL； the detected wavelength was 230 nm． It was shown that， abiding by national pharmacopoeia standard method，four kinds of impurities in amoxicillin were identified by column － switching online desalting method combined with mass spectrometry． Therefore，our study would be benefit for limited control of amoxicillin during the process of chemical production，being worthy of popularization． Key words： amoxicillin； impurity； column － switching； online desalting
备、然后纯化，来鉴定其结构与分子量信息，本方法参照相关 文献的报道，采用了柱切换二维色谱质谱联用的方法对阿莫 西林可能产生的杂质进行了分析。首先参照中 国《药 典》 2010 版，先对阿莫西林进行破坏性试验，以期得到更多的杂 质信息。然后采用液相色谱紫外检测器法分析有关物质，流 动相为 0． 05mol / L 磷酸二氢钾溶液（ 用 2mol / L 氢氧化钾溶 液调节 pH 值至 5． 0） 和乙腈，梯度分析。由于，该流动相不 能直接进行质谱分析，因此，本方法采用了二维色谱配置，在