08.药品微生物限度检测技术

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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
3.操作注意事项 3.操作注意事项
1.尽量使菌细胞分散开， 1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成 尽量使菌细胞分散开 一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。 一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。
2.为防止细菌增殖及产生菌苔， 2.为防止细菌增殖及产生菌苔，制 为防止细菌增殖及产生菌苔 成供试液后，应尽快稀释，注皿。 成供试液后，应尽快稀释，注皿。 一般稀释后应在1小时内操作完毕。 一般稀释后应在1小时内操作完毕。
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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
4.菌落计数及报告方法 4.菌落计数及报告方法
宜选取细菌、酵母菌平均菌落数小于300 cfu、 宜选取细菌、酵母菌平均菌落数小于300 cfu、霉菌 平均菌落数小于100 cfu的稀释级 作为菌数报告（ 的稀释级， 平均菌落数小于100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位 有效数字）的依据。 有效数字）的依据。 当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定， （1）当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的 平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数;当有2个或2个以上稀释 平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数;当有2个或2 级的菌落数符合上述规定， 级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍 数的值报告之。 数的值报告之。 如各稀释级的平板均无菌落生长， （2）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级 的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低 稀释倍数的值报告菌数。 稀释倍数的值报告菌数。
－（薄膜过滤法）
阴性对照： 取供试品微生物限度检查相应的溶 剂和稀释液同法操作，阴性对照不得长菌
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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
－薄膜过滤法
结果判断 细菌总数
符合药典该品细菌、 真菌总数检验合格
否则因从同一批次产品中重新抽样， 否则因从同一批次产品中重新抽样，独立复试 三次， 三次，以三次结果的品均值报告菌数
操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。 操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。
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二、药品微生物限度检测的基本条件
㈡ 方 法 验 证
由于某些供试品具有抗菌活性， 由于某些供试品具有抗菌活性，在建 立测定方法或原测定法的检验条件发生改 变时，可能影响检验结果的准确性，必须 变时，可能影响检验结果的准确性， 对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性 进行验证。 进行验证。
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二、药品微生物限度检测的基本条件
1.抽样方法 1.抽样方法 ㈢ 正 确 抽 样
①随机 ②优先抽有疑问样品 抽样量：检测用量的3~5 3~5倍 ③抽样量：检测用量的3~5倍
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二、药品微生物限度检测的基本条件
2.检测用量 2.检测用量 ㈢ 正 确 抽 样 3.检测量 3.检测量
①＞2个最小包装 大蜜丸≥ ②大蜜丸≥4丸 膜剂≥ ③膜剂≥4片
部分口服给药制剂:口服液、酊剂、 部分口服给药制剂:口服液、酊剂、中 药丸剂、糖浆剂、散剂、特殊部位使 药丸剂、糖浆剂、散剂、 用的片剂（口腔帖片、阴道片、 用的片剂（口腔帖片、阴道片、阴道 泡腾片、外用可溶片） 泡腾片、外用可溶片） 含中药原粉、豆豉、神曲、 含中药原粉、豆豉、神曲、动物组织 等口服制剂 鼻用制剂 洗剂 灌肠剂等
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口服给药制剂 每1g不得过1000个。每1ml 不得过1000个。 不得过100个
给药途径 细菌数 霉菌和酵母数 （每1g、1ml或10cm2） 大肠埃希菌 （每1g、1ml或10cm2） 金黄色葡萄球菌（每1g、 1ml或10cm2） 铜绿假单胞菌 （每1g、1ml或10cm2） 沙门菌 霉变、长螨
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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
3.操作注意事项 3.操作注意事项
5.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照， 5.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照， 为检查和控制灭菌效果 以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过 程是否无菌操作。 程是否无菌操作。
6.为便于区别药品中的颗粒与菌落， 6.为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在 为便于区别药品中的颗粒与菌落 营养琼脂中加入1mL0.5 1mL0.5％ 每100mL 营养琼脂中加入1mL0.5％的TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色， 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色， 而药品的颗粒颜色无变化。 而药品的颗粒颜色无变化。
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非规定 灭菌制 剂及其 原、辅 料
一、药品微生物限度检查意义
确定药物是否污染或其污染程度， 确定药物是否污染或其污染程度，控制药 品的质量； 品的质量； 保证用药的有效性和安全性； 保证用药的有效性和安全性； 可作为衡量药品生产全过程卫生水平的根 据之一。 据之一。
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二、药品微生物限度检测的内容
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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
4.菌落计数及报告方法 4.菌落计数及报告方法
例次各稀释级（供试液1ml/皿 平均菌落数（cfu） 例次各稀释级（供试液1ml/皿）平均菌落数（cfu） 各稀释级 1ml/ 原液 － － － － － － 0 10-1 64 420 不可计 0 － 0 0 10-2 8 64 420 0.5 0 0 0 10-3 2 8 64 0 0 0 － 报告方式 (CFU/g,ml， (CFU/g,ml，10cm2） 640 6400 64000 ＜ 100 ＜ 100 ＜ 10 ＜ 1
1 2 3 4 5 6 7
细菌总数＝平均菌落数× 细菌总数＝平均菌落数×稀释倍数
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2012-3-2
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二、控制菌检查－检查项目
（1）阴性对照试验：取稀释液10ml按相应 阴性对照试验：取稀释液10ml按相应 试验 10ml 供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。 供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。 阳性对照试验 供试品+10~100CFU 试验： （2）阳性对照试验：供试品+10~100CFU 阳 性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。 性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。 供试品控制菌检查 控制菌检查： （3）供试品控制菌检查：依相应的检查方 法进行。 法进行。
①半/固体制剂：10g 固体制剂： 液体制剂： ②液体制剂：10ml 膜剂： ③膜剂：100cm
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二、药品微生物限度检测的基本条件
检查菌 培养基 培养温度 培养时间
㈣ 培 养 条 件
细菌数
营养琼脂
30℃～35℃ 30℃～
3 days
真菌数
玫瑰红钠琼脂
23℃～ 23℃～28℃
5 days
酵母浸出粉胨葡 酵母菌数 萄糖琼脂 控制菌
10
10
法
稀
1.0ml
10
释 液
9.0ml
10
ml
1
10
9.0ml 9.0ml
0
1.0ml
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Viable cell count
1 ml
1.dilute sample 10 9 ml 100 1000 104 2. plate out 0.1 ml 105 106 107
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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
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第三节 药品微生物限度检测方法
中药和生物系
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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
1.平皿法 1.平皿法
供试液 的制备 混合平板 的制备 细菌、真 菌的培养
书写检验 记录单
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数据 处理
检 查结 果 、 观察与计数
一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
1.平皿法 1.平皿法
1.0ml
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眼部给药制剂 每1g或1ml不得过10个 不得检出 不得检出 不得检出 不得检出 － 不合格
给药途径 细菌数
直肠给药制剂 每1g不得过1000个，每1ml不 1g不得过1000个 不得过1000 1ml不 得过100 100个 得过100个。 不得过100个 不得过100个 100
霉菌和酵母数（ 1g、1ml或 霉菌和酵母数（每1g、1ml或 10cm2） 大肠埃希菌 1g、1ml或 （每1g、1ml或10cm2） 金黄色葡萄球菌（ 1g、1ml或 金黄色葡萄球菌（每1g、1ml或 10cm2） 铜绿假单胞菌 1g、1ml或 （每1g、1ml或10cm2） 沙门菌 霉变、 霉变、长螨
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一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查 细菌数、
3.操作注意事项 3.操作注意事项
3.使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不 3.使用吸量管时，应小心沿管壁加入， 使用吸量管时 用触及管内溶液， 用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附 的溶液混入其中。 的溶液混入其中。 4.注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和， 4.注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往 注意抑菌现象 往使平板计数结果受影响， 往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落 而高释释度时菌落数反而增大。 少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情 况应重复检验， 况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操 作技术误差。 作技术误差。
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23℃～ 23℃～28℃ 细菌：30℃ 细菌：30℃～35℃ 真菌：23℃～ 真菌：23℃～28℃
5 days
二、药品微生物限度检测的基本条件
供试品检出控制菌或其它致病菌时， 供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检 出结果为准，不再复试。 出结果为准，不再复试。
㈤ 结 果 判 断
供试品的细菌数、 供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一 项不符合该品种项下的规定， 项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品 中随机抽样，独立复试两次， 中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均 值报告菌数。 值报告菌数。 供试品的细菌数、 供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项 检验结果均符合该品种项下的规定， 检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品 符合规定； 符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下 的规定，判供试品不符合规定。 的规定，判供试品不符合规定。