药品微生物限度检测技术PPT课件
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药品微生物检验基础知识 ppt课件
险较小 · 保存期比较短， · 反复传代有引 · 比较容易掌握 起变异的可能；
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
ppt课件
17
2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
ppt课件 3
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
ppt课件 4
一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
ppt课件 25
二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
ppt课件 26
二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
ppt课件
45
四、微生物限度检查法
1、定义
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
ppt课件
17
2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
ppt课件 3
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
ppt课件 4
一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
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二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
ppt课件 26
二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
ppt课件
45
四、微生物限度检查法
1、定义
药品微生物限度检测技术PPT课件
检
喷雾剂供
查
试品
1.4.2供试品检查
非
无 菌
① 平皿法
平皿法包括倾注法和涂布法
产
品 微 生 物 限 度 检 查
除另有规定外， 取规定量供试 品，按方法适 用性试验确认 的方法进行供 试液制备和菌 数测定，每稀
培养和计数 ：除另有规定外， 胰酪大豆胨琼脂培养基平板 在30～35℃培养3天，沙氏葡 萄糖琼脂培养基平板在20～ 25℃培养5 天，观察菌落生 长情况，点计平板上生长的 所有菌落数，必要时可适当 延长培养时间至7 天进行菌落
微
生
1.3.3计数方法适用性试验
物
限
度
检
查
非 无
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
菌 1.3.1菌液制备及使用
产 品
菌种
微
试验用菌株的传代次数不得超过5
生
代（从菌种保藏中心获得的干燥菌
物
限
种为第0代），并采用适宜的菌种
度
保藏技术进行保存，以保证试验菌
检 查
株的生物学特性
检
查
非
② 薄膜过滤法
无
除另有规定外，按计数方法适用性试
菌
验确认的方法进行供试液制备。取相
产
当于1g、1ml 或10 cm²供试品的供试 液，若供试品所含的菌数较多时，可
品
取适宜稀释级的供试液，照方法适用
微
性试验确认的方法加至适量稀释液中， 立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜， 培养和计数：培养条件
生
菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基 和计数方法同平皿计数
值报告菌数
非
③ MPN 法
无
药品微生物限度与无菌检查ppt课件
药品微生物实验室 质量管理指导原则
环境保证
对照培养基 培养基保证
无菌性检查 灵敏度检查
SOP操作
有效的方法
方法验证
药品洁净实验室微生物 检测和控制指导原则
有效的结果
可靠的结论
药品微生物检验替代 方法验证指导原则
结果判断
微生物鉴定 指导原则
案例
阳性结果与玻璃安瓿表面采样菌高度相似
al Institutes for Food and Drug Control Nation
非无菌产品微生物检查：控制菌检查法
<1111>Microbiological Attributes of Nonsterile Pharmaceutical Product
非无菌药品微生物限度标准
<63>Mycoplasma Tests
支原体检查法
<71>Sterility Tests
无菌检查法
<1035>Biological Indicators for Sterilization
安瓿折断后，断 面应平整
Luzhou Institutes for Food and Drug Control
玻璃安瓿表面消毒方案比较
• 杀孢子剂（过氧乙酸）喷洒后立即（3min、5min、10min）用 75%乙醇钝化，再用湿棉签擦拭取样
• 酒精灯过火1秒钟（3秒钟、5秒钟、10秒钟）后直接用湿棉签 擦拭取样
药品微生物实验室质量管理指导原则 无菌检查用隔离器系统验证指导原则 灭菌法 药品微生物检验替代方法验证指导原则
/ /（日本药典收载）
L非uzh无ou 菌Ins药ti品tut微es 生for物Fo限od度an检d D测rug指Co导nt原rol则 中药饮片微生物限度检查法？来自药品微生物检验的过程控制
药品微生物限度检查法PPT教学课件
3
操作环境
• 检验全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁 净度10000级和局部洁净度100级单向流空气 区域内进行，以防止再污染。单向流空气区 域、工作台面及环境应定期按中华人民共和 国国家标准GB/T 16292～16294-1996 《医药 工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降 菌的测试方法》进行洁净度验证。
• 取供试品5g(5ml)，加入司盘80 5g、单硬脂 酸甘油酯3g、聚山梨酯80 10g的无菌溶化 混合物（温度低于45℃）的烧杯中，用无 菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃左右的 稀释剂至100ml，边加边搅拌，使供试品充 分乳化，作为1:20供试液。
2020/12/10
9
特殊供试液制备方法
• 取供试品10g，加至含玻璃珠和20ml的 无菌十四烷酸异丙酯的容器中，充分振 摇，使供试品溶解，再加入约45℃的稀 释剂，振摇5-10分钟，萃取，待油水明 显分层，取其水层作为1:10供试液。
• 一个细菌、霉菌或酵母菌的菌落均可由一 个或多个菌细胞生长繁殖而成，因此供试 品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单 位数（colony forming unity, cfu）
• ·供试品检验的全过程必须符合无菌技术 要求。
• 培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌，按 灭菌法（见附录）的要求采用验证合格的 灭菌程序灭菌。
2020/12/10
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操作要点
• 作供试品稀释时，每一稀释级都要更换吸管。 • ·细菌培养48h，真菌培养72h，计数。如菌落极小，不
易辨认可适当延长培养时间。再点计菌落数。 • 含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定
• 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或 cm2）
• 一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小 包装单位）的3倍量供试品。
药物制剂的微生物学检查ppt课件
特殊注射剂的无菌检查
❖ １、油剂性药物的检测 ❖ 油剂性药物因难于和培养基充分混合，往往影
响检出结果。如果加入吐温－80，与油剂性药物混 合乳化，再用培养基稀释，可以使药品均匀分布在 培养基中。 ❖ 对照：吐温－80 。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 检测时先把一定量药均经增菌后转种到选 择鉴别培养基——麦康凯平板或伊红美兰平 板（EMB平板）。
❖ 培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。 生化反应包括 IMViC试验和乳糖发酵试验。 大肠杆菌IMViC试验结果为+、+、—、—
一般注射剂的无菌检查
❖ 直接接种法
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 需氧菌和厌氧菌的培养已全部采用硫乙醇酸 钠培养基检查。在同一培养基中，需氧菌在 培养基表面生长，而厌氧菌在培养基内生长。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 如检测结果为革兰阴性杆菌，乳糖发酵 阳性及IMViC试验符合，则可判断每克 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 一般选取菌落数在30-300之间的平板计数。
❖ １、油剂性药物的检测 ❖ 油剂性药物因难于和培养基充分混合，往往影
响检出结果。如果加入吐温－80，与油剂性药物混 合乳化，再用培养基稀释，可以使药品均匀分布在 培养基中。 ❖ 对照：吐温－80 。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 检测时先把一定量药均经增菌后转种到选 择鉴别培养基——麦康凯平板或伊红美兰平 板（EMB平板）。
❖ 培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。 生化反应包括 IMViC试验和乳糖发酵试验。 大肠杆菌IMViC试验结果为+、+、—、—
一般注射剂的无菌检查
❖ 直接接种法
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 需氧菌和厌氧菌的培养已全部采用硫乙醇酸 钠培养基检查。在同一培养基中，需氧菌在 培养基表面生长，而厌氧菌在培养基内生长。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 如检测结果为革兰阴性杆菌，乳糖发酵 阳性及IMViC试验符合，则可判断每克 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 一般选取菌落数在30-300之间的平板计数。
药品的微生物学检查宣讲PPT培训课件
2.细菌培养
外用药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中
37℃,24小时
Байду номын сангаас
口服药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 37℃,24小时
3.细菌总数测定
将剩余口服药以10-1 10-2 10-3 10-4 进行稀释 (以生理盐水稀释)
取四个中试管 各加9ml生理盐水
2.外用药 1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培
养物有无细菌生长： 增菌液变混浊―――有 2)细菌鉴定： （1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在16烷三甲 基溴化胺琼脂斜面培养基上面。 方法：斜面化线接种； （2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高 盐琼脂平板培养基上面。 方法：分区划线接种。 37℃恒温孵育箱24小时培养后，观察结果。
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)
液体培养基 平板培养基 斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基 5.显微镜下观察 细菌的基本形态: 球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。
分区划线法
菌落
斜面移种技术
菌苔
液体移种技术
穿刺技术
药物的微生物限度检查方法（二）
取出前次实验培养物观察： 1.口服药物 1)细菌鉴定：
在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有 -----接种在伊红美兰琼脂平板培养基
上面。 方法：分区划线接种。 2)细菌总数测定：
选择30-300个菌落平板， 细菌总数＝菌落数×稀释倍数
培养基分类
微生物限度检查法ppt课件
恒温培养箱
30～35℃ 36±1℃
霉菌培养箱
25～28℃
恒温水浴箱
45±1℃
净化工作台
生物显微镜 1500X
体视显微镜或放大镜
电冰箱
电热干燥箱 250～300℃
高压蒸汽消毒器
电子天平或药物天平 感量0.1g
匀浆仪或研钵
锥形瓶
100ml，250m. l，500ml，1000ml
直形吸管
1ml，10ml
凡能从药品、瓶（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、生虫以及 变质的药品不必再继续检验，应直接判为不合格。不能以有时外观 有上述情况而检验内容为合格，来判定该药品合格，因为瓶口染菌， 对服用者是不安全的，如自瓶口直接服药时，所染菌随之进入人体， 同时发现瓶口一旦染菌，瓶内药液最终要受到污染。
检验量与抽样量是两种不同范畴的量，后者指从全批产品 .
1．1972年开展此项工作 2．1978年颁布我国第一个“药品卫生标准” 3．1986年颁布修改后的“药品卫生标准”，1987年12月1日起供 内部执行 4．1989年下达“药品卫生标准补充规定和说明” 5．1990年版药典第二增补本收载了20个化学药品种的微生物限 度标准规定，与国际惯例一致 6．1995年版药典少数几个剂型（滴眼剂等）收载了微生物限度。 规定按微生物限度检查法检查不得有菌生长 7．2000年版药典按剂型、中西药分类规定微生物限度，还对几 个生化药品在各论中项下作了具. 体规定
活体特征：药典中以活的微生物作为检验对象也是独特特性。
由于以上特殊性，抽样对微生物限度检测值将产生很大的影响。当 药品无污染时，抽样将不影响检验，当批产品存在污染品时，抽样 的样本是随机变量，抽样的影响如下：
抽样方法：不同的抽样方法对批产品总体的代表性是不同的，测定 值也是有差异的。如抽取可疑样品与随机抽样，其检出率与数字显 然前者大于后者。
微生物限度检验PPT课件
- 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及 对微生物的生长和存活无影响。
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
13
稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
- 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小 时。
- 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。
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稀释剂（ 中国药典2005版）
（1） 氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） 无菌磷酸盐缓冲液 （3） 无菌磷酸盐缓冲液
中国药典2005版
菌株名称
CMCC编号
大肠埃希氏菌(E. coli)
CMCC(B)44102
金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis）
CMCC(B)63501
白色念珠菌(Can. albicans) 黑曲霉菌(Asp. niger)
CMCC(F)98001 CMCC(F)98003
一次检出为准
第一次结果超过规定标准，复 试两次，三次结果平均报告
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
不符合标准规定，取大于25g的 样品复试
一次检出为准
测定结果在规定的限度标准5 倍以内均为合格
6
验证目的
- 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样 品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采 用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检 出。
过滤
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
菌种组：
5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml
过滤
空白样品组：
过滤
计数A 计数B （阴性对照） 计数C （阳性对照） 计数D
- 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。
7
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件
6.4药品的微生物限度检查教学课件
大肠埃希菌 耐胆盐革兰阴性菌 铜绿假单胞菌 沙门菌 金黄色葡萄球菌 梭菌 白色念珠菌
非全检，检查 种类与剂型、 给药途径、原 料来源等有关
一、药品微生物限度检查总则
（一）检查标准
《中国药典》（2015年版）四部 微生物总数检查参照通则1105；控制菌检查法 参照通则1106。
（二）检查环境
洁净度不低于D级背景下的局部B级环境
100ml 供试液
厌氧,48h
适宜体积的 梭菌增菌培 养液
报
G+杆菌 革兰染色、镜检
告 有/无芽孢
检
出 无气泡, 过氧化氢酶试验
阴性
哥伦比亚 琼脂平板 厌氧,48～72h
有菌落 无菌落
报告 未检出
（七）白色念珠菌检查
又称白色假丝酵母，卵圆形真菌，革兰染色 阳性，有芽生孢子，能形成厚膜孢子和假菌丝。 感染后可引起呼吸系统、消化系统和泌尿生殖 系统的疾病。
（一）耐胆盐革兰阴性菌检查
耐胆盐革兰阴性菌指在胆汁酸中可以存活并 繁殖的革兰阴性菌。
2015年版《中国药典》规定呼吸道吸入给药制 剂、含药材原粉的口服中药制剂、中药提取物、 中药饮片等需检查耐胆盐革兰阴性菌，其数量不 得超过限度标准。
1.耐胆盐革兰阴性菌检查程序
配培养基 和稀释液
供试液 的制备
肠道增 菌肉汤
RV 肉 汤 增菌培 养
无菌落或无特征菌落
最终结 果判断
确证 试验
木糖赖氨酸 脱氧胆酸盐 琼脂划线分 离
有特征 菌落
三糖铁琼 脂培养基 穿刺接种
2.供试品沙门菌检查操作示意图
10g/10ml
供试品
0.1ml
18～24h
18～24h
适宜体积 TSB预培养
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单向流空 气区域、 工作台面 及环境应
限 度 检
域内进行)【10版： 在环境洁净度10000 级下的局部洁净度 100级的单向流空气
得影响供试品 中微生物的检 出
定期进行 监测
查
区域内】
9
非 1.1 总则：
无
菌
产
品
微
如供试品有抗菌活
生
性，应尽可能去除
物
或中和；供试品检
限查时, 若使用了中度和剂或灭活剂，应
编辑版ppt
产
1.2 计数方法：平皿法、薄膜过滤法、最可能数
品
法（MPN法）
微 生 物 限 度
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适 用性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性 检查、计数方法适用性试验
1.4 供试品检查：检验量、供试品检查
检
1.5 结果判断
查
1.6 稀释液、冲洗液及培养基
7
非 1.1 总则：
生
MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微 生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方
物
法
限
供试品检查时, 应根据供试品理化特性和微生物限度标
度 检
准等因素选择计数方法，所选的方法必须具备检测充足 样品量的能力，以保证所获得的试验结果能够判断供试 品是否符合规定；所选方法的适用性须经确认
编辑版ppt
无
菌
当本法用于检查 本检查法可
产 品 微
微生物计数 法系用于能
非无菌制剂及其 原、辅料等是否 符合规定的微生 物限度标准时，
采用替代的 微生物检查 法，包括自
生
在有氧条件 应按规定进行检 动检测方法，
物
下生长的嗜 验，包括样品的 但必须证明
限
温细菌和真
取样量和结果的 判断等；除另有
替代方法等
胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基
30～35 ℃ 不超过5天
20～25 ℃ 不超过5天
物
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量不大于100cfu ；
检
用性检查 该产品的微生 行适用性试
查
物计数
验
12
非 无
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
菌 产
1.3.1菌液制备及使用
编辑版ppt
品 1.3.2计数培养基适用性检查
微 生 1.3.3计数方法适用性试验
物
限
度
检
查
13
非 无
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
8℃，可在24小时内使用；稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～
8℃，在验证过的贮存期内使用
非 1.3.2计数培养基适用性检查【15版】
无 菌
需氧菌总 金黄色葡萄球菌 胰酪大豆胨琼脂培养基
数计数
铜绿假单胞菌
或 胰酪大豆胨液体培养基
30～35 ℃ 不超过3天
产 品 微 生
霉菌和酵母 菌总数计数
枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 白色念珠菌 黑曲霉
查
11
非 无
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
菌
产
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品
供试品微 供试品的微生 若检验程序
微 生 物 限 度
生物计数 中所使用 的培养基 应进行适
物计数方法应 或产品发生
进行方法适用 性试验【10版： 方法验证】，
变化可能影 响检验结果
以确认所采用 时，计数方
的方法适合于 法应重新进
编辑版ppt
课前复习
1
编辑版ppt
问题导入：药品中微生物限度检测现状
受污染的药品中，最 为普遍的是中成药
一些中小型企业 在检验过程中对 药品质量﹑溶出 度等把关严，但 对微生物限度的 控制和检验大都 没有严格的要求
药品质量的好坏直接关系到病人的安危，药品微生物限度检
测是全面控制药品质量的一个重要环节
养基，20～25℃，2～3 天
物
【10版：改良马丁（琼脂）培养基，23~28 ℃ ，24~48h】
限
黑曲霉
沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂
度
〔CMCC(F) 98 003〕
培养基 ，20～25℃，5～7天 ，或直接获得 丰富孢子
检
【10版：改良马丁琼脂斜面培养基，23~28
查
℃ ，5~7天】
菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在125～
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药品微生物限度检测技术
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掌握
药品细菌﹑酵母菌及霉 菌的检测方法
理解
药品大肠菌群﹑沙门菌 ﹑金黄色葡萄球菌﹑铜 绿假单胞菌的检测方法
了解
药品微生物限度检测检 验记录的书写方法
教学目的 及要求
重点
药品细菌﹑酵母菌 及霉菌的检测方法
难点
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药品微生物检查
无菌检查法 非无菌产品微生物限度检查 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 非无菌药品的微生物限度
菌 1.3.1菌液制备及使用
产
品
菌种
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微 生
试验用菌株的传代次数不得超过5
物
代（从菌种保藏中心获得的干燥菌
限
种为第0代），并采用适宜的菌种保
度 检
藏技术进行保存，以保证试验菌株
查
的生物学特性
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1.3.1菌液制备及使用
非
试验菌株
试验菌液的制备
无 菌 产
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
度
菌的计数
规定外，本法不 效于药典规
检
适用于活菌制剂 定的检查方
查
的检查
法
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非 1.1 总则：
无
环境：
菌
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产
微生物计数试验环
品 微 生 物
境应符合微生物限 度检查的要求 (在不 低于GMP现行版要 求的D级洁净环境、 局部洁净度不低于B 级的单向流空气区
检验全过程必 须严格遵守无 菌操作，防止 再污染，防止 污染的措施不
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨 液体培养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基 】
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品 微
枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕
白色念珠菌
30～35℃，18～24小时
沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培
生
〔CMCC(F) 98 001〕
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非 无
微生物限度检查法
菌 《中国药典》2015年版修订后将分为三个
产 品
附录：
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微
1、非无菌产品微生物限度检查：微生
生
物计数法
物 限
2、非无菌产品微生物限度检查：控制
度
菌检查法
检
3、非无菌药品微生物限度标准
查
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非 无
1.非无菌产品微生物限度检查： ----微生物计数法
菌
1.1 总则：环境、要求
检 查
确认其有效性及对 微生物无毒性
供试液制备时如 果使用了表面活 性剂，应确认其 对微生物无毒性 以及与所使用中 和剂或灭活剂的 相容性
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非 1.2计数方法：
无
菌
平皿法
产
薄膜过滤法
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品
最可能数法（Most-Probable-NumberMethod，
微
简称MPN 法）