血小板抗体检查及配血操作规程

【口的】Capture-?®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。可为血小板输注无

效患者进行血小板配血。

【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血

【检测原理】

Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和

Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的

抗体接触。阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥

联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。

【主要组成成份】

Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。每个微带板可以进行8个单独的检测。这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，

铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。微带板可以单使用，也可以多个使用。未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）

Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* O

Capture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。红细胞悬浮在缓冲溶液（预先加入氯霉素（0. 25 mg/mL）,新霉素（0.1 mg/mL）和庆大霉素（0.05 mg/mL））中。如果指示红细胞出现轻微的聚集，这是正常现象。

Capture-P阳性对照血清（弱）：含有血小板抗体。加入叠氮化钠（0. 1%）作为防腐剂*o Capture-P阴性对照血清：不含有血小板抗体。加入叠氮化钠（0. 1%）作为防腐剂叫进行Capture-P 试验的组分（Capture-P指示红细胞，Capture LISS, Capture-P对照

血清，Capture-P检测微孔）在有效期内可以交替使用，而不用管它们的批号（前提是

这些组分都在有效期内）。

【储存条件】在不使用微带板时，在1-10摄氏度下保存。其它辅助试剂在1—10 摄氏

度下保存。

【样本要求】

血小板来源：源自供体血小板的样本应该采集于加有EDTA, ACD, CPD或CPDA-1的容器内。不能使用已凝固的血样。样本釆集后，富含血小板的血浆必须储存在20°C至

25°C。检测必须在48小时内进行。从血小板浓缩袋中取出的密封小辫片段必须在釆集

日期24小时内进行检测。

患者或供体血浆或血清：通过静脉穿刺来抽取血液样本。抽取的血样可以加入EDTA, ACD, CPD,或CPDA-1,或者可以不加抗凝剂。检测应当尽快进行，降低假阳性或假阴性（因为样本污染或者储存不当造成）的机率。如果不能马上对血清或血浆进行检测，推荐将保存于1-1O°C下或冷冻保存。不能使用收集于含有中性分离胶试管中的样本。这样的样本会导致假阳性结果的出现。

【提供的材料及试剂】

1.Capture-P检测微孔

2.Capture LISS

3.Capture-P指示红细胞

4.Capture-P阳性对照血清（弱）

5.Capture-P阴性对照血清

6.源于供体或患者的血小板

7.源于血小板供体和/或受血者的血浆或血清

8.塑料移液管（注：不能使用玻璃移液管）

9.10X75毫米聚丙烯或聚乙烯试管（注：不能使用玻璃试管或聚苯乙烯试管）

10.适用于96孔板、硬质微孔板或微带板微孔的离心机和转子

11.37°C加热板或干热培养箱

12.磷酸盐缓冲液,pH 6. 5-7. 5 （近似15毫米）

13.专用于微孔板的分配总管或移液管管理器

14.秒表或间隔计时器

15.照明表面

16.记号笔

17.离心机

【检测方法】

1.在检测前，把所有的检测试剂都置于18-30°C平衡。

2.血样采集：

2.1血清标本：患者自凝血1500rpm离心lOmin,获取上层血清。

2.2待测血小板样本的制备：

2.2. 1浓缩血小板（PC）:将机釆血小板袋热合取下1-1. 5cm的富含血小板的小辫，再转移至塑料试管（聚丙烯或聚乙烯）中。

2.2.2富含血小板血浆（PRP） : EDTA抗凝全血在2600rpm离心样本Smino使用塑料吸管把血小板富含血浆（PRP）部分移至塑料试管中。

3操作步骤：

3.1 除去密封袋上Capture-P检测微孔的必需编号。检查密封袋中的湿度计。如果湿度计显示有湿气存在，此密封袋中的微带板就不能使用。

3・2使用塑料移液管，在微带板微孔中分别加入1-2滴（50-100 U1）血小板样本（见图1） o本组中的第一个微孔将作为阳性对照（弱）,第二个作为阴性对照。在第一行中剩余微孔中依次作为待检测供者血小板（PC或PRP） o

3.3在45-65 xg转速下离心微孔板5分钟。使血小板

固定在微孔板的孔表面。

3.4轻轻倒出上清，然后用生理盐水洗涤微带板3- 6

次，以去除为结合的血小板。（倒上清时应一次性倒扣

微孔板并拍打）

注意：过度或剧烈洗涤技术可能会造成血小板层的

移位或在固定血小板层上出现小洞。

3.5立即向每个含有血小板的微孔中加入2滴（100

图1. Capture-P检测微孔