血小板抗体检查及配血操作规程
输血管理
输血科工作直接关系到患者生命安危，如何科学合理地利用血液资源及确保临床的用血安全尤其重要。
近几年我院迅速发展，为配合临床工作，输血科同样面临更艰巨的任务和责任。
在输血科工作近一年，下面谈谈一年来工作当输血科工作直接关系到患者生命安危，如何科学合理地利用血液资源及确保临床的用血安全尤其重要。
近几年我院迅速发展，为配合临床工作，输血科同样面临更艰巨的任务和责任。
在输血科工作近一年，下面谈谈一年来工作当中心得体会！1.认真+责任：直接关系到患者的生命，一定要做到零差错率。
让自己一切行为有依据，一切行为有记录，一切行为保质量。
一次值夜班，早晨5点多起来有些迷糊，有位实习同学来取血，我随即把昨天晚上事先配好的一袋说是早上来取血的发给了她，她看了半天说："这个不是我要的血，我的申请单在这里！"原来这位同学是来申请配血的。
经历此次事件，自己总结了几个值得注意的问题：①值夜班起来时一定要让自己保持头脑的清醒，可以休息几分钟后，再选择去做工作；②要弄清楚别人的来意，避免差错；③由医院的正式医护人员来取血。
取血这个环节是保证病人输注正确的血液的关键，需是双方认真核对，同时也很感谢各位医护人员的配合；2.确保输血安全：输血科必须严格按照规定的程序进行管理和操作，确保用血安全。
在输血前对供受血者检查。
例如：①在做ABO血型鉴定时，一定要同时做反定，这样正反定型可以相互核对；②交叉配血时，改良的凝聚胺试验虽已替代了生理盐水试验，但是生理盐水法可以对血型复查一次；③在输血前对供血者血型核对。
输血工作是细活，不要怕麻烦，因为也许你节省的是一个环节，可是付出的代价也许就是生命！3．血液发放与保存管理：发血时输血科医务人员要与临床医护人员双方要进行逐项核对。
当血液从输血科取走后，必须立即输注，不允许长时间放在室温或其他冰箱内。
原则上离开血库的血液制品不能退回，但因故未使用的应在30分钟之内退回。
4．科学合理的利用血液资源：首先，要求临床医生严格掌握血液制品的使用适应证。
输血查对制度
输血查对制度一、合血查对1．医师下达合血医嘱后，由两名护士在护士站核对输血申请单、试管标签及病人电子信息。
核对内容：患者科别、床号、姓名、性别、年龄、诊断、病案号、登记号、血型、输血品种，并查看输血协议。
有两人以上抽血时，一次只能拿一个病人的试管和输血申请单，要做到准确无误。
2．合血试管为EDTAK2血型交叉试管，合血小板悬液需再做血小板抗体检测（普通干试管）。
输血患者血型鉴定和交叉配血不得使用一个血液标本。
普通合血者，血标本应在1小时之内送血库。
3．两名护士携用物到病人床旁。
查对患者及其床头牌、手腕带，再次核对输血申请单、试管标签，并询问病人既往有无输血史。
4．采集血标本应严格无菌操作，禁止直接从输液管或正在输液的一侧肢体采集，避免血液稀释、药物影响引起血型鉴定和配血错误。
5．采集结束后，双人应再次核对病人、输血申请单、试管标签信息，确认无误后，派专人将取血标本及时送血库。
二、取血查对取血者与血库人员共同查对患者的科别、床号、姓名、性别、病案号、血型（包括Rh性质）、血量、交叉配血试验结果以及血液质量。
有下列情形的，一律不得接收：1.标签破损、字迹不清2.血袋有破损、漏血3.血液中有明显凝块4.血浆呈乳糜状或暗灰色5.血浆中有明显气泡、絮状物或粗大颗粒6.未摇动时血浆从与红细胞的界面不清或交界面上出现溶血7.红细胞层紫红色8.过期或其他需查证的情况三、输血操作查对（一）操作前查对1.输血前两名护士核对医嘱无误后打印执行单并在治疗室进行两人核对，准确无误后方可执行。
2.严格检查血液质量、血液的有效期及血袋有无渗漏等情况。
3.查对患者输血申请单与供血者血袋标签上的血袋编号、血型、血量品种、供血时间、供血量是否相符，不规则抗体，交叉配血试验是否相符。
查对过程中如有疑问，应及时与血库联系，自己不得擅自涂改，必要时由血库更正后方可再用。
（二）操作中查对4.输血时由两名护士携用物在床边查对床头牌，手腕带并核对患者姓名、年龄、病案号、病室、床号、血型等，确认与输血记录单（配血报告）相符，询问病人有无输血史，询问病人血型，再次核对血液无误后方可输注，在输血记录单上双人签名。
内蒙古自治区卫生厅关于印发内蒙古自治区医疗机构输血科(血库)建设与管理规范(试行)的通知
内蒙古自治区卫生厅关于印发内蒙古自治区医疗机构输血科(血库)建设与管理规范(试行)的通知文章属性•【制定机关】内蒙古自治区卫生厅•【公布日期】2011.05.12•【字号】内卫发[2011]15号•【施行日期】2011.05.12•【效力等级】地方规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】医疗管理正文内蒙古自治区卫生厅关于印发内蒙古自治区医疗机构输血科（血库）建设与管理规范（试行）的通知（内卫发〔2011〕15号）各盟市卫生局，厅直属各医院，内蒙古医学院各附属医院：为指导和加强医疗机构输血科（血库）的规范化建设和管理，保证临床用血安全，根据《中华人民共和国献血法》、《医疗机构临床用血管理办法（（暂行）》和《临床输血技术规范》等有关法律、法规，自治区卫生厅组织制定了《医疗机构输血科（血库）建设与管理规范（试行）》（以下简称《规范》），现印发给你们。
具备条件的医疗机构要按照《规范》要求，加强对输血科（血库）的建设和管理，大力推行科学合理用血，进一步提高临床输血诊疗水平。
目前条件尚不能达到《规范》要求的医疗机构，要加强对输血科（血库）的建设，增加人员、配置设备、改善条件、健全制度、严格管理，力求到2012年年底达到《规范》要求。
二〇一一年五月十二日内蒙古自治区医疗机构输血科（血库）建设与管理规范（试行）第一章总则第一条为了加强和规范医疗机构临床输血管理，促进临床科学合理用血，确保临床输血安全，根据《中华人民共和国献血法》、《医疗机构管理条例》、《医疗机构临床用血管理办法（试行）》和《临床输血技术规范》等法律法规，结合我区实际，制定本规范。
第二条输血科（血库）应参照本规范建设与管理。
第三条三级综合医院、年用血量超过3000单位的三级专科和二级综合医院应设立独立建制的输血科。
其他有临床输血治疗需求的医疗机构应设立血库，其中，二级以上（含二级）医疗机构应设立独立建制的血库，二级以下医疗机构设立挂靠检验科的血库。
输血
1.内科具有出血倾向的患者入院后常规化验血型。
重点科室：消化内科。
2.平诊需要输血的患者要等血型结果出来以后（也就是病房医生从电脑上看到血型结果后）才能申请输血。
平诊患者夜晚禁止输血。
急诊除外。
3.每位输血的患者每次输血都要进行输血前评估和输血后效果评价，填评价表。
评价表在“全院→其他记录→输血相关记录”中选取打印。
4.大量输血（24小时内或一次输血（备血）量≥1600ml）时，需要填写审批表，审批表在“全院→其他记录→输血相关记录”中选取打印。
输血相关医嘱下法：
一、血型医嘱消化内科
ABO红细胞定型、ABO血型鉴定（卡式法）、Rh血型鉴定（卡式法）
二、不规则抗体筛查
有孕产史、输血史的患者，包括入院后第二次输血的患者需进行不规则抗体筛查。
三、输血医嘱
1.输注红细胞医嘱（以2个单位为例，共三项）：
手工分红细胞悬液/洗涤红细胞/RhD阴性冰冻去甘油红细胞2个单位
白细胞除虑
全血、各种红细胞、粒细胞、手工分离浓缩血小板配血
2.输注血浆医嘱（以200毫升为例，共三项）：
手工分冰冻血浆200毫升
病毒灭活（血浆）200毫升
血浆、机采血小板、冷沉淀配血
3、输注血小板医嘱（以1个治疗量为例，共三项）：
机采血小板1个治疗量
血浆、机采血小板、冷沉淀配血
4、输注冷沉淀医嘱（以1个单位为例，共三项）：
冷沉淀1个单位
血浆、机采血小板、冷沉淀配血
四、血小板抗体测定医嘱（共二项）：
血小板抗体（HPA）检测
血小板IgG致敏红细胞试验。
血小板抗体检测和相容性血小板输注的应用
血紫癜 （Ｔ ） Ｐ Ｐ 相符合 。 对血小板输注疗效 的评价 ， 由于血小板
输 注后 患 者 出血症 状 不易 量化 ，故 以血小 板恢 复 百分 率
的 １ ３例 进 行 ２次 以 上 血 小 板 输 注 治 疗 的血 液 病 及 肿 瘤 患 １
上普遍采用机采血小板输注 ， 但有妊娠史 的女性或 多次输血
的患者 ， 易产生同种免疫 ， 导致血小板输注无效 （Ｔ 。本文 Ｐ Ｒ） 通过对 １ ３例多次输注 机采血小板 的患者进行 血小板抗体 １
展 ， 腔镜 、 腹 宫腔 镜 下 处 理 子宫 肌 瘤 已成 为手 术 发 展 的方 向 ， 具 有 创 伤 出血 少 、 复 快 的 特 点 。 恢
［ ］ 黎培毅 ， ４ 刘宏伟 ， 杨延林 ． 腹式筋膜 内子宫 切除术． 用妇产科 实
杂志，９ ８ １ （ ）３ ． １９ ，４ １ ：６ ［ ］ 唐 良萏 ， ５ 卞度宏． 妊娠合并子宫肌瘤 的处理 ． 实用妇产 科杂志 ，
被检测 。
１ 统计 学 处 理 ． ４
Ａ Ｏ血 型不合而导致血小板破坏 ｌ。若血小板输 注后 １ｈ的 Ｂ ５ ｌ Ｃ Ｉ７ ， Ｃ＜ ． 应首先考虑免疫 因素所 致 ； １ｈ的 Ｃ Ｉ 数在正 ５ 若 Ｃ指
常范 围内， ２ 而 ４ｈ的 Ｃ Ｉ４５ 则应考 虑非免疫性 因素所致 。 Ｃ ＜ ．， 本研究结果显示 ４ ． ６９ ％患者出现 Ｐ Ｒ， Ｔ 与文献 ［ ］ ６ 报道在多次 输血 和慢性血小板减少 患者 中 ，有 ３ ％一０ ０ ７ ％出现血小板输
为正常卵巢组织。我院在全子宫切除术时是否切 除卵巢 已采 取非常慎重的态度 。术中应仔细检查双侧卵巢 ， 若正常 ． 原则 上予 以保 留。
参 考 文 献
吉林医疗机构输血科血库基本标准2010年版
吉林省医疗机构输血科（血库）基本标准（2010年版）一、总则第一条为加强医疗机构输血管理，促进临床科学合理用血，确保输血安全、高效，根据《中华人民共和国献血法》、《医疗机构临床用血管理办法》（试行）和《血站实验室质量管理规范》制定本标准。
第二条本标准适合于各级各类医疗机构输血科（血库）。
内容包括输血组织与管理、功能与任务、科室设置与要求、信息管理、业务与质量管理及感染管理等。
第三条本标准是输血科（血库）执业应达到的标准，是对输血科（血库）准入及检查评价的基本依据。
第四条医疗机构根据临床用血需求设立独立建制的输血科（血库）。
年用血量超过5000单位（红细胞类）的医院应设立独立建制的输血科，其他有临床输血治疗需求的医疗机构设立血库。
二、组织与管理第五条各级各类医疗机构应向卫生行政部门申请办理输血科（血库）执业许可登记，经验收合格后在医疗机构执业范围内增加输血科或血库设置，由省级卫生行政部门指定的血站负责血液供应。
否则，卫生行政部门将通知血站停止血液供应。
第六条有临床输血治疗需求的医疗机构应成立临床输血管理委员会。
（一）由主管业务院长担任主任，成员由医务科、输血科、检验科、护理部、医院感染科、麻醉科及相关临床科室主任及有关专家组成。
（二）制定临床输血管理委员会章程。
第七条输血科（血库）应建立持续改进的临床输血质量管理体系。
文件应覆盖输血科（血库）整个工作过程，包括质量手册、程序文件、SOP文件和记录。
第八条输血科主任（血库负责人）应在院长、主管院长和输血管理委员会的直接领导下开展临床输血工作。
负责对输血科（血库）的质量管理体系进行全面管理和控制，确保输血科（血库）的质量管理体系有效运行。
三、功能与任务第九条输血科（血库）在医院临床输血管理委员会的指导和监督管理下开展工作。
认真执行《中华人民共和国献血法》、《医疗机构临床用血管理办法（试行）》和《临床输血技术规范（试行）》等有关法律、法规、行政规章和卫生行业标准，负责全院临床输血管理工作。
3-血小板血型系统与检测技术
特制血小板
移除大部分血浆的PLT---儿童、ABO不相容
洗涤PLT---有IgA抗体的患者
以引起血小板的破坏，也可影响血小板的生成。
• ITP患者的治疗 基于ITP的基本发病机制，临床上对ITP患者作血 小板输注不仅没有疗效，而且有可能因血小板表面各 类血型抗原的同种免疫作用，导致输血后紫癜等输血 反应。 为此，临床上通常应用皮质激素等免疫抑制剂和 脾切除术作为 ITP 的主要治疗方法，并通过大量血浆 置换及大剂量静脉射免疫球蛋白等治疗，达到降低血 小板抗体效价、减缓血小板破坏、升高血小板计数和 纠正出血症状的目的 国内报道应用长春生物碱类药物偶联单采血小 板，给难治型ITP患者输注，获得较好的效果。
原因：胎儿和母亲间的血小板血型不合
症状：内脏和中枢神经系统出血，脑水肿，婴儿出生时
(12~24小时)有严重、广泛的瘀点和瘀斑。或出生时 正常,于二、三天后出现血小板减少症 诊断：母体血小板抗体检测，抗原检定 患儿血小板抗体(表面、游离)检测
预后：死亡率13%
• NAITP的治疗措施
主要是给患儿输入与母体血清中同种 抗体无反应性的血小板，也可以对患儿 进行换血治疗，纠正患儿的血小板减少。 对新生儿的治疗一般选用静脉内注射免 疫球蛋白。
注： 血小板计数单位为µ l,体表面积单位为m2 输前立即计数；输后1小时；输后24小时计数；输入 的血小板总量
• 诊断标准：
输注血小板后1小时CCI<7500 输注血小板后24小时CCI<4500
血小板回收率（PPR）的计算公式
（输血后血小板计数-输血前血小板计数） ×血容量
输注血小板总数（×1011） ×100%
临床检验标准化实验室完整SOP程序文件
13、三级医院必须设置清洁区，污染区，操作有气溶胶可能的标本应配置生物安全柜及其它防护设置，如紫外线灯，排气扇等。
14、非科室工作人员不准进入实验室，外来人员参观需经科主任同意方可进入
（二）质量管理制度
1、各专业实验室根据省临检中心的有关规定，开展实验室内的质量控制，并制定有关措施。对室內质控应每日有记录，对失控情况有纠正方法，有预防性措施，对于目前尚无完整的室内质控体系的实验室，应积极创造条件，建立室内质量控制体系。
D10、铁染色标准操作规程
D11、酸性磷酸酶(ACP)染色标准操作规程
D12、红细胞渗透脆性试验标准操作规程
D13、自体溶血试验标准操作规程
D14、血清酸化溶血试验(Ham试验)标准操作规程
D15、热溶血试验(定性)标准操作规程
D16、蔗糖溶血试验(糖水试验)标准操作规程
D17、变性珠蛋白小体检查(Heinz小体染色)标准操作规程
3、对工作中可能发生的触电、失火、玻璃割伤、针头刺伤、烧伤、不慎中毒、传染性标本的污染，各实验室应有应急处理的方法，有关人员均应熟悉。
4、用电设备、电源线路、CO2气体、给排水系统的安全性符合使用要求，不能带电检修仪器。
5、使用强酸碱腐蚀品时，应在适当的环境下正确操作，防止腐蚀、灼伤、中毒、火灾和爆炸等事件发生。
8、易燃，易爆试剂应分开存放远离火源和电源。
9、供应商所送的试剂必须先经药库清点才能接受，检验科人员清点后必须在货单上签字，有出入者必须向科主任或试剂管理员、组长报告，再将货单交给试剂管理员，以便月底结帐。
10、科室试剂管理员：钟梁。
（五）实习生管理制度
1、科室按实习大纲安排实习时间表，如遇特殊情况科室统一安排。
血小板特殊配血检测
血小板特殊配血检测针对存在HLA抗体、HPA抗体或血小板自身抗体的患者进行的血小板配血称为血小板特殊配血。
（一）SEPSA1.该技术在血小板抗体检测中首次介绍，此处介绍在血小板特殊配血检测时的检验方法。
（1）原理：同SEPSA在血小板抗体检测中的原理。
器材：平板离心机，95×16mm尖底离心管（以下称“尖底管”），96孔脱卸式U型板，滴管，加样器。
（2）试剂：生理盐水、ACD-A保养液、甲醛、阴阳对照试剂、PBS及Tween20-PBS（以下称“T-PBS”）试剂。
（3）操作：1）与患者ABO同型的献血者富含血小板血浆（PRP）中加入1/10量的ACD-A液，混合，1100g（2800r/min），离心10分钟，弃去上清液。
2）同血小板抗体检测SEPSA操作3）～8）。
3）每孔中加入25μl被检者血清，室温湿盒1小时。
4）同血小板抗体检测SEPSA操作10）。
5）同血小板抗体检测SEPSA操作12）。
6）结果判定与记录：凝集强度判读见表。
阳性表明受检者血清中存在和献血者血小板反应的抗体，为血小板特配不相合；阴性表明受检者血清中未检出和献血者血小板反应的抗体，为血小板特配相合。
2.方法学评价同血小板抗体检测中的SEPSA方法学评价。
3.质量保证（1）检测前：将被检血清4000r/min（2800g）离心10分钟，以去除沉淀。
被检标本不能使用血浆。
被检血清不需要灭活补体。
（2）检测中：为了防止静电干扰，宜在室温湿润状态下操作。
设立阴阳性对照以进行质量控制，以正常人AB血清为阴性对照，已知阳性血清为阳性对照。
4.参考范围阴性。
5.临床意义对于有指征的患者，在明确血小板抗体性质的基础上，其输注血小板时应通过血小板特殊配血获得配合性血小板输注，以避免血小板输注无效和输血后紫癜。
当患者被高度同种免疫，存在多种同种抗体时，比较难以获得相容性血小板，血小板特殊交叉试验往往难以成功。
这种情况下，可以通过选择HLA匹配的血小板来得以解决。
血小板抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
1目的为规范血小板抗体检测操作，保证检测的有效性及临床用血的安全性，依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。
2适用范围适用于医疗机构输血科（血库）进行血小板抗体检测。
3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。
4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体（针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX），血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。
加入受检血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体和反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗IgG及IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
5设备与材料5.1材料血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）。
5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。
6检测环境室温应控制在18-25℃，湿度应控制在30%-70%。
7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1检测样本准备7.1.1.1采集患者静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或枸橼酸钠抗凝，经3000rpm离心5分钟，分离出血浆进行检测。
7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血，经3000rpm离心5-10分钟，取上清进行检测。
7.1.1.3如果患者血标本为血浆（血清），3000转离心5-10分钟。
7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。
若需长期保存，应离心后分离血清或血浆，－20摄氏度冻存。
7.2平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。
7.3制备血小板悬液7.3.1商品化的冻干血小板稀释后直接使用。
免疫血液学红细胞血小板配血试验
静电引力、氢键、疏水键及范德华力
影响红细胞抗原抗体反应的因素
• 离子强度： 反应液中的电解质会增加溶液的介电常
数，减弱抗原抗体间的静电作用。
降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合 速率。如:离子强度由0.17M降到0.03M时，抗 D和D阳性红细胞的开始结合速率增加1000倍 。
二、HLA与器官移植 (一)肾移植 (二)骨髓移植
三、HLA与亲子鉴定
二、血小板血型
一类是与其他细胞表面或组织共有的 抗原，称血小板相关抗原
另一类为血小板特异性抗原
血小板血型
相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及
人类白细胞抗原(HLA)有关
特异性抗原：由血小板特有的抗原决定簇组成
，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他细胞 和组织上不能发现
HLA的研究历史
最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954年 • HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。 • 它是分布广泛的组织抗原。
HLA的分型命名
血清学分型命名
• 具有临床意义的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等 位点(Loci)，每个位点又有若干等位基因，这些基 因的产物便是HLA抗原。
抗
原
抗
体
静电作用力
离子
聚凝胺技术
（1）低离子聚凝胺交叉配血技术
原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价 阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很 多正电荷，可以中和红细胞表面的负电 荷，使红细胞之间距离减少，能引起正 常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果 使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则 凝集不可逆。
具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构 中的一部分
浅谈开展血小板抗体检测项目的体会陈秉宇
2020/7/14
浙江省人民医院 输血科
15
三血小板抗体检测技术的简述
（四）操作
6 用封口胶将反应孔封好，轻摇微孔板混匀后置于湿盒中，37℃水浴孵 育30分钟。
7 按步骤5.4洗涤反应板5次。 8 立即加入1滴（50 μl）抗人IgG试剂及1滴（50 μl）指示细胞，轻轻震
荡混匀。 9 将反应板以200g（1300rpm）离心5分钟。将待检孔与对照孔的结果
浅谈开展血小板抗体 检测项目的体会
陈秉宇 浙江省人民医院 输血科
2020/7/14
浙江省人民医院 输血科
1
➢ 六大方面
一血小板抗体的简介 二开展血小板抗体检测的目的和意义 三血小板抗体检测技术的简述 四 我院开展血小板抗体检测的简况 五 如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会 六 血小板抗体检测技术的应用拓展
鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该项目得 到今年11月1日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省 兄弟医院已相继开展。
输血科 2011年11月21日
2020/7/14
浙江省人民医院 输血科
9
三血小板抗体检测技术的简述
（一）原理 （二）试剂组成 （三）实验前准备 （四）操作
2020/7/14
浙江省人民医院 输血科
相容性抗体检测；价格—90元/次。 3）现医保限定支付范围—限列入支付范围的器官移植；甲乙分类—甲。
参考文件： 《浙江省基本医疗保险医疗服务项目名称》，浙江省劳动和社会保障厅，2005
年版，第65页。 《浙江省医疗服务价格手册》（修订版），浙江省物价局、浙江省卫生厅，
2010年12月版，第44页。
2020/7/14
5）交叉配血直接采用供者血小板 6）血小板悬液应贮存于塑料容器中，室温可保存24小时，但不可 4℃保存 6 待检样本：血清或血浆样本应新鲜，3000rpm离心5min以去除析出的 纤维蛋白及其它有形成份，取上清进行检测。 7 打开水浴箱，将湿盒平衡至37℃。
医疗机构输血科基本标准
浙江省医疗机构输血科（血库）建设规范（试行）（征求意见稿）一、总贝y第一条为加强和规范医疗机构临床用血管理，推动输血医学学科建设，促进临床科学合理用血，保障临床用血安全，根据《中华人民共和国献血法》《医疗机构管理条例》《医疗机构临床用血管理办法》和《临床输血技术规范》等法律法规，结合我省实际，浙江省卫生与计划生育委员会牵头制定《浙江省医疗机构输血科（血库）建设规范（试行）》。
第二条本规范包括输血科（血库）组织与管理、基本配置、业务管理、质量管理及附则五方面。
第三条本规范是输血科（血库）建设管理的基本标准，是对医院输血科（血库）检查评价的基本依据。
二、组织与管理第四条医疗机构设置输血科（血库）应向负责核发《医疗机构执业许可证》的卫生计生行政部门提出申请，经卫生计生行政部门核准并定期接受用血资质审核后，与采供血机构签订供血协议，医疗机构方具有用血资格。
第五条医院法定代表人为临床用血质量管理第一责任人，输血科（血库）负责人为本科室质量管理的第一责任人，输血科所有员工对其职责范围内的质量负责。
第六条有临床输血治疗需求的医疗机构应成立由院领导、业务主管部门、相关科室负责人及专家组成的临床用血管理委员会，贯彻落实临床用血相关法律法规，规范、指导和监督临床用血工作。
第七条输血科（血库）在医院临床用血管理委员会的指导、管理和监督下，协助医务部门管理医院日常临床用血工作，配合临床开展输血及输血治疗工作。
三、基本配置第八条三级综合医院或年红细胞用量大于5000单位的医院应设置独立建制的输血科；其他有临床用血需要的医院应设立血库。
承担辖区内临床用血储存任务的医疗机构应设立输血科或独立血库，履行储血点和输血科（血库）功能。
第九条人力资源配置要求（一）输血科主任应具有丰富的输血相关专业知识及管理能力，应具有大学本科及以上学历、高级卫生技术职称，从事输血专业工作五年以上；血库负责人应具有大学本科及以上学历、中级及以上卫生技术职称，从事输血专业工作五年以上。
输血科开展血小板抗体检测的适应症
➢ 标本要求：红帽管2ml，无空腹要求 ➢ 如需血小板交叉配型，请同时在输血申请单上注明申
请“配型单采血小板” ➢ 医生工作站可查询检测结果、打印化验单。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
血小板抗体筛查与配型适应证
➢ 怀疑有血小板自身抗体 ➢ 新生儿免疫性血小板减少 ➢ 自身免疫性疾病如：红斑狼疮，ＩＴＰ等 ➢ 外科脾功能亢进 ➢ 初次血小板筛查阴性，输注红细胞或血小板一周
后，需再次进行抗体筛查，方可输注血小板 ➢ 其他不明原因血小板减少
血小板抗体筛查与配型送检注意事项
➢ 条码名称：血小板抗体筛查与配型（PASM），160 元/例
河南省医疗机构输血科标准化建设指南(2018版)
河南省医疗机构输血科标准化建设指南（2018版）
医院名称：级别：
单位地址：邮政编码：
输血科主任：技术职称：
单位电话：传真：
电子信箱：
说明：
1、“河南省医疗机构输血科标准化建设指南”共分基本信息（50分）、人力资源（100）、房屋设施（200分）、设备设施（200分）、开展项目（100分）、输血信息化管理（40分）、制度管理（160分）、质量体系建设（60分）、输血实验室质量控制（40分）、质量考核（50分）等十个部分，考核总分数为1000分。
2、否决项不设分值，为必须达标项目。
3、总成绩达900分以上为优秀，800-900分为良好，700-800分为合格，低于700分为不合格。
4、带有★的项目为重点项目，不通过率超过10%即视为不合格。
一、基本信息：（50分）
二、人力资源（100分）
三、房屋设施（200分）
四、设备设施（200分）
五、开展项目（100分）
六、输血信息化管理（40分）
七、制度管理（160分）
八、质量体系建设（60分）
九、输血实验室质量控制（40分）
十、质量考核（50分）。
血小板抗体检查及配血操作规程
【口的】Capture-?®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。
进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用，也可以多个使用。
未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* OCapture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。
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【口的】Capture-?®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。
进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用，也可以多个使用。
未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* OCapture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。
红细胞悬浮在缓冲溶液（预先加入氯霉素（0. 25 mg/mL）,新霉素（0.1 mg/mL）和庆大霉素（0.05 mg/mL））中。
如果指示红细胞出现轻微的聚集，这是正常现象。
Capture-P阳性对照血清（弱）：含有血小板抗体。
加入叠氮化钠（0. 1%）作为防腐剂*o Capture-P阴性对照血清：不含有血小板抗体。
加入叠氮化钠（0. 1%）作为防腐剂叫进行Capture-P 试验的组分（Capture-P指示红细胞，Capture LISS, Capture-P对照血清，Capture-P检测微孔）在有效期内可以交替使用，而不用管它们的批号（前提是这些组分都在有效期内）。
【储存条件】在不使用微带板时，在1-10摄氏度下保存。
其它辅助试剂在1—10 摄氏度下保存。
【样本要求】血小板来源：源自供体血小板的样本应该采集于加有EDTA, ACD, CPD或CPDA-1的容器内。
不能使用已凝固的血样。
样本釆集后，富含血小板的血浆必须储存在20°C至25°C。
检测必须在48小时内进行。
从血小板浓缩袋中取出的密封小辫片段必须在釆集日期24小时内进行检测。
患者或供体血浆或血清：通过静脉穿刺来抽取血液样本。
抽取的血样可以加入EDTA, ACD, CPD,或CPDA-1,或者可以不加抗凝剂。
检测应当尽快进行，降低假阳性或假阴性（因为样本污染或者储存不当造成）的机率。
如果不能马上对血清或血浆进行检测，推荐将保存于1-1O°C下或冷冻保存。
不能使用收集于含有中性分离胶试管中的样本。
这样的样本会导致假阳性结果的出现。
【提供的材料及试剂】1.Capture-P检测微孔2.Capture LISS3.Capture-P指示红细胞4.Capture-P阳性对照血清（弱）5.Capture-P阴性对照血清6.源于供体或患者的血小板7.源于血小板供体和/或受血者的血浆或血清8.塑料移液管（注：不能使用玻璃移液管）9.10X75毫米聚丙烯或聚乙烯试管（注：不能使用玻璃试管或聚苯乙烯试管）10.适用于96孔板、硬质微孔板或微带板微孔的离心机和转子11.37°C加热板或干热培养箱12.磷酸盐缓冲液,pH 6. 5-7. 5 （近似15毫米）13.专用于微孔板的分配总管或移液管管理器14.秒表或间隔计时器15.照明表面16.记号笔17.离心机【检测方法】1.在检测前，把所有的检测试剂都置于18-30°C平衡。
2.血样采集：2.1血清标本：患者自凝血1500rpm离心lOmin,获取上层血清。
2.2待测血小板样本的制备：2.2. 1浓缩血小板（PC）:将机釆血小板袋热合取下1-1. 5cm的富含血小板的小辫，再转移至塑料试管（聚丙烯或聚乙烯）中。
2.2.2富含血小板血浆（PRP） : EDTA抗凝全血在2600rpm离心样本Smino使用塑料吸管把血小板富含血浆（PRP）部分移至塑料试管中。
3操作步骤：3.1 除去密封袋上Capture-P检测微孔的必需编号。
检查密封袋中的湿度计。
如果湿度计显示有湿气存在，此密封袋中的微带板就不能使用。
3・2使用塑料移液管，在微带板微孔中分别加入1-2滴（50-100 U1）血小板样本（见图1） o本组中的第一个微孔将作为阳性对照（弱）,第二个作为阴性对照。
在第一行中剩余微孔中依次作为待检测供者血小板（PC或PRP） o3.3在45-65 xg转速下离心微孔板5分钟。
使血小板固定在微孔板的孔表面。
3.4轻轻倒出上清，然后用生理盐水洗涤微带板3- 6次，以去除为结合的血小板。
（倒上清时应一次性倒扣微孔板并拍打）注意：过度或剧烈洗涤技术可能会造成血小板层的移位或在固定血小板层上出现小洞。
3.5立即向每个含有血小板的微孔中加入2滴（100图1. Capture-P检测微孔+10 U 1) Capture LISS。
LISS呈紫色。
社：倒出血小板超过1分钟，如果不加入如LISS或生理盐水之类的液体，微孔就会变干。
干燥就会导致血小板单分子层的破裂。
3.6向第一列中的第1个微孔中加入1滴(50+5 U 1) Capture-P阳性对照血清(弱)。
向第2个微孔中加入1滴(50+ 5» 1)Capture-P阴性对照血清。
3.7向第一列中微孔C和D与其他含有固定血小板测定微孔中，分别加入1滴(50+5 P 1) 患者血清。
3.8摇动微孔板以混合血浆和增效剂(通过重复轻叩微孔板的边缘来完成) 注：当血清存在时，Capture LISS会由紫色变成天蓝色或土耳其玉色。
如果Capture LISS还是保持紫色，就说明试验中血清被不小心漏加了。
3.9在37°C下孵育微孔板30分钟。
孵育时间不要超过60分钟。
3. 10用生理盐水冲洗每个微孔并倾倒，重复6-8次，每次冲洗后要倾倒彻底。
操作同3. 4o3. 11立即向每个含有血小板的微孔中加入1滴(50^5 P 1) Capture-P指示红细胞。
3. 12在700-900 x g转速下离心微带板1分钟。
3. 13将微带板置于照明表面上，来检测指示红细胞是否黏附。
邙日性反应的特征是指示红细胞黏附于微孔底部表面。
阴性反应的特征是在微孔底部形成一个紧密的细胞扣)。
记录结果。
3. 14每一个检测结果都要跟阳性对照和阴性对照血清相比较，并与供体血小板对照进行比较。
如果出现可疑反应(无规则的，非同心消失)或阳性对照和/或阴性对照血清不正确，必须进行重复检测。
如果检测微孔和供体血小板对照微孔都是阴性反应，那么抗体检测试验就是阴性的。
如果检测微孔呈现阳性反应而供体对照微孔不呈阳性，我们就认为检测呈现阳性。
如果血小板样本抗体检测试验呈现出不同的结果，要重复进行检测。
供体血小板对照呈现阳性会使相同血小板抗体检测阳性结果失效，因为供体血小板在检测前就可能结合有抗体。
给出的g力是产生所需黏附程度的速度。
对于每一个离心机都应当单独设定其适当的每分钟转速和时间。
反应稳定性：在最后离心分离后，检测结果就可以马上进行读取。
因为阳性结果是持久的，微孔板通过离心后，可以被覆盖以避免蒸发，保存于l-10°C,可以立即读取检测结果或者可以在检测后2天内进行重新读取。
质量控制：在每次使用时，利用阳性对照和阴性对照检测对Capture-P检测体系的反应性进行评价。
如果，在任何一轮检测中，阳性对照血清不能产生阳性结果和/或阴性对照血清不能产生一个阴性结果，此轮中所有检测都必须重复进行检测。
对照血浆出现连续失败可能说明一种或儿种检测试剂已经变质，或者检测操作不正确。
【检验结果的解释】1•阳性试验：包被有抗人球蛋口的指示细胞被结合到有抗体包被的微孔上，在微孔表面形成完整的细胞层，反应表面部分或全部黏附着指示红细胞。
部分或全部凝集二阳性底部有纽扣状指示红细胞聚集，并且没有容易检测到的黏附区不凝集=阴性【检验方法的局限性】检测材料的细菌或化学污染、不恰当的孵育时间，不正确的离心、检测微孔冲洗不当或遗漏检测试剂或步骤都会导致错误结果的产生。
在抗体检测过程中，必须保证有足够量的血小板覆盖于微孔上，因为不足量的血小板单分子层会导致检测结果假阳性。
在单分子层制备过程中，不适当的离心时间或者转速会导致血小板覆盖度较差。
此外，过度或剧烈洗涤微孔会导致固定于微孔底部的血小板数量的减少。
在检测最后阶段加入指示红细胞就，如果使用了酸性、无缓冲盐水冲洗膜覆盖的检测微孔，很可能会削弱抗原与抗体之间的反应。
使用PH6. 5-7. 5：的生理盐水进行冲洗会得到最好的结果。
含有较高数量血小板聚合体的样本会产生无规则黏附血小板片层（因为血小板聚合体也能像非聚合体血小板一样跟微孔表面结合）。
在离心过程中，聚合体会抑制指示红细胞的正确沉降。
如果使用的血小板在体内已经结合有IgG分子（也就是直接抗球蛋口试验阳性）,就会产生假阳性检测结果。
在血小板供体对照试验中，这种血小板会产生阳性反应。
如果使用的血小板与检测血清的ABO血型不一致，就会产生假阳性结果。
加入指示红细胞后，如果过度离心，会导致假阴性或可疑阳性结果（因为黏附指示剂层的破裂）。
如果不能获得阳性对照（弱）反应，就说明检测微孔板过度离心。
加入的指示红细胞数量超过指定数LI可能会导致假阴性或可疑检测反应。
离心机的减速因子可能会影响试验最终获得的反应类型结果。
错误使用离心机的制动装置使减速时间延长，这样会导致假阴性反应的产生。
相反地，减速时间过短会导致错误检测结果的产生。
没有完全凝结的血清样本会导致检测结果错误。
这种样本在加入到Capture-P检测微孔中后，还会继续凝结。
这种凝结的结果是在血小板单分子层上面产主了一层较薄的凝胶样物质。
加入微孔中的指示红细胞会被这种物质覆盖，而在离心过程中无法进行正确确定阳性或阴性反应。