胰岛素钳夹实验技巧
高胰岛素-正常血糖钳夹试验
高胰岛素-正常血糖钳夹试验1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。
1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。
根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。
高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。
该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。
在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。
目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。
2、关注要点2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。
2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。
2.2.2 监测血糖间隔时间每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。
胰岛素钳夹实验技巧
胰岛素钳夹实验技巧胰岛素钳夹实验技巧背景介绍胰岛素是一种重要的激素，能够调节血糖水平。
胰岛素钳夹实验是用来研究胰岛素对血糖水平的影响的常用实验方法。
本文将介绍一些胰岛素钳夹实验的技巧，帮助你顺利进行此实验。
实验前准备在进行胰岛素钳夹实验之前，需要做一些准备工作：•动物模型的选择：根据实验的目的和动物种类的特点，选择合适的动物模型（如小鼠或大鼠）。
•实验仪器的准备：确保实验仪器（如钳夹仪、采血针等）处于良好工作状态。
•试剂的准备：准备好胰岛素溶液和其他相关试剂，确保其纯度和浓度符合实验要求。
实验步骤1.动物麻醉：根据实验需要，使用适量的麻醉剂使动物处于麻醉状态，确保操作过程安全无虞。
2.控制血糖水平：在实验开始前，测量动物的空腹血糖水平，并确保其在正常范围内。
如有需要，进行必要的调整（如胰岛素注射或葡萄糖注射等）。
3.建立动脉和静脉通路：使用适当的方法建立动脉和静脉通路，以便进行胰岛素钳夹实验时的血液采样和胰岛素注射。
4.基础血样采集：在实验开始前，收集一定量的基础血样，用于后续血糖测量。
5.胰岛素注射：根据实验设计，进行定量的胰岛素注射，并确保注射技术准确。
6.钳夹实验：在胰岛素注射后，使用钳夹仪逐渐提高血糖水平，监测血糖动态变化，并记录相关数据。
7.血样采集与血糖测量：根据实验设计，在不同时间点采集血样，并使用合适的方法测量血糖水平。
8.数据处理与分析：对实验得到的数据进行统计分析，并根据需要进行图表展示。
实验注意事项在进行胰岛素钳夹实验时，需要注意以下事项：•操作精确：实验过程中的所有操作都需要准确、精细。
特别是胰岛素注射和钳夹操作，都需要严格控制药物和力度的大小。
•实验时间安排：根据实验的需要和动物的特性，合理安排实验的时间和顺序，以减少动物的压力和疲劳。
•安全措施：在实验过程中，严格遵守实验室的安全规范，包括佩戴好防护手套、眼镜等，并妥善处理实验废弃物。
•数据记录：及时、准确地记录实验中得到的数据和观察结果，以备后续分析和讨论。
正葡萄糖钳夹实验
一、高胰岛素--正葡萄糖钳夹技术
（一）、历史背景 1966年Andres等根据葡萄糖一胰岛素的负反馈原理，创立了一种可定量分析胰岛
素分泌及作用的方法——葡萄糖钳夹技术。1979年De Fronzo等对该技术从理论上作了
详细的阐述，并给予技术指导，推动了世界范围的广泛应用。萄糖钳夹技术根据研究 目的的不同又划分为高糖钳、正糖钳及低糖钳等不同方法。 （二）、技术原理 1、葡萄糖一胰岛素负反馈体系 血糖升高时，胰岛素分泌增加，并通过增加摄取、储存和利用葡萄糖等方式，下调 血糖；血糖下降，胰岛素分泌降低，胰高血糖素等升糖激素增加，促进代谢分解，加 速糖原分解和葡萄糖异生作用，升高血糖。
升高，而后以较低的速度持续输注维持一定血胰岛素浓度。在静脉通道对侧前肢取血 测量血糖，每隔5min取血测量血糖一次，通过调节葡萄糖输注率以维持血糖水平恒定。 经一段时间后、血糖恒定维持于平衡状态。给胰岛素制剂后,葡萄糖输注率随着胰岛素 产生的作用变化，以此来评价胰岛素制剂的药效动力学特征。
3、正糖钳技术指标 ① 钳夹稳定状态下血糖(SSPG)：SSPG需控制在正常空腹血糖±10％范围内。 ② 钳夹稳定状态下胰岛素(SSINS)：较高的血浆外源性胰岛素水平才能抑制内源性肝 糖及胰岛素的生成，满足实验要求。 ③ 血糖变异系数(CVBG)：钳夹实验期间CVBG可反映钳夹技术的稳定性与准确性。
（三）、特点
Hale Waihona Puke 1、避免了内源性胰岛素缺乏(如糖尿病患者)及低血糖(如胰岛素耐量试验中)对胰岛素
敏感性测定的影响。 2、将内源性干扰减至最小，增加了实验的可控性与准确性，降低了结果的变异性。 （四）、缺点 1、不同受试者的应激反应和血管紧张度等诸多因素会对稳态的建立产生一定的影响。 2、该技术复杂耗时、费用昂贵，实验中需频繁取血。 （五）、实验方法 1、建立静脉输液通道及采血通道 在前臂静脉或正中静脉穿刺并留置导管建立输液通道，用于输入胰岛素和葡萄糖 溶液。葡萄糖和胰岛素输注通道经三通管与静脉通道联接。采血通道由输液器、三通
钳夹实验汇总
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优点：该方法相对可靠，在临床工作中普遍使用。 缺点：以胰岛素升高水平来评估葡萄糖耐量减低人群的胰岛 β细胞功 能可能比葡萄糖耐量正常的人群更好，因此在评估不同糖耐量水平 人群的胰岛β功能时，可能有偏差。目前胰岛素测定方法很难对高值 做出准确的测定，所以单纯以绝对值升高的倍数做判断也需要十分 仔细的考虑。
高胰岛素正糖钳夹实验原理
胰岛素敏感性
高胰岛素输注 （固定值）
外周组织葡萄糖 利用率增加
葡萄糖输注
正常血糖 （固定值）
葡萄糖输注率＝葡萄糖代谢率＝胰岛素敏感性＝1/胰岛素抵抗
胰岛素抑制试验(insulin suppression test; IST) 方法是给受试者静脉注射普蔡洛尔5mg,5min后用输液泵恒定输注由 普蔡洛尔、肾上腺素、葡萄糖和胰岛素组成的混合液，以抑制肝糖 输出和内源性胰岛素分泌。在这种稳定状态下，血浆葡萄糖浓度直 接反映组织对外源性胰岛素的敏感性。
静脉注射葡萄糖耐量实验（IVGTT）
方法：50％的葡萄糖50ml（25g），1-3min内注完。
注射完2、3、5、8、10分钟测血糖、胰岛素和/或C肽 较好的胰岛β细胞功能指数，可预测糖尿病发生风险
AIR（acute insulin response）常用于评估β细胞功能。静脉25g葡萄
糖负荷后第一时相分泌，常在1-15min左右。
2)静滴胰岛素,使血胰岛素水平维持在100mU/ L，保持此速 率不变，然后静滴 2% 的葡萄糖 , 每隔 5 min 监测血糖一次，并用 Harvard泵调整葡萄糖的输注速率(glucose infusion rate; GIR)，以 外源性胰岛素钳夹血糖于正常水平 (5. 2±0.1mmol/L)，持续 60min 。 3）血胰岛素浓度在50mU/L，以上能抑制90%肝脏内源性葡萄 糖生成，因此钳夹试验中当达到高胰岛素稳态时外源性葡萄糖输注 率（GIR）等于外周组织的葡萄糖利用率（M值），此时GIR可作为 评价机体胰岛素敏感性的指标，这就是胰岛素敏感性指标。 优点：外源性胰岛素敏感性的指标 缺点：操作复杂，临床难以运用
正葡萄糖钳夹技术在胰岛素研究中的运用
高
正
定量检测
胰岛素分泌
来源：外源性 和胰岛素抵抗 的方法
作用：抑制内源性
血 糖
水
抑制肝糖原分解
平
技术特点
技术原理
输注外源性葡萄糖及胰岛素 葡萄糖输注率等于
打破体内葡机萄体糖的-胰葡岛萄素糖的利负用反率馈调控 调节灌注流速控制血糖稳态降低内源性 干扰
胰岛素敏感性评价的金标准
金标准 避免低血糖
评判标准
0.0 2.0
钳夹技术在胰岛素研究中的应用
钳夹的建立 样品的采集
分三步走 指标的检测
钳夹术检测不同胰岛素制剂后平均GIR-T曲线
20
注射 胰 岛 素 口服胰岛素
10
GIR (mg/kg/min)
0 0
120
240
360
480
600
Time/min
生长抑素
生理作用：促进组织生长 对胰岛素有拮抗
作用
高分泌现象：肢端肥大症、 糖尿病
低分泌现象：侏儒症、肝硬 化 脑肿瘤
生理作用：抑制生长激素、 促甲状 腺激素、胰岛素、 胰高 血糖素的分泌
药理作用：减少胰腺的内外 分泌 降低酶活性，对 胰腺细
血糖代谢 血糖稳态
血糖稳态
机体消耗葡萄糖5 g/h，是血液中含有的全部葡 萄糖的总量
10
20
GIR
血糖
8
15
6
10
4
5
2
0
0 0
-5
20
40
60
80
100
120
t (h)
钳夹建立过程中平均胰岛素及C肽的浓度-时间曲线
胰 岛 素 浓 度 （mIU. -L1） C肽 （μg.L-1）
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术检测原发性高血压患者胰岛素敏感性的护理
关键词 ： 原发 性 高血 压 ； 糖 尿 病 ； 高胰 岛 素一 葡 萄 糖钳 夹技 术 ； 胰 岛素 抵 抗 ； 护 理 正
中 图分 类 号 ： ７ 。 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ： ０ ｌ １ ２ ２ ０ ） ７ ０ １ —０ Ｄ ： ０ ３ ７ ／ ｌｚ． ０ ９ ０ ． １ Ｒ４ ３ ５ Ｂ １ ０ 一４ ５ （ ０ ９ Ｏ — ０ ８ ２ ＯＩ １ ． ８ ０ ｈ ｘｚ ２ ０ ． ７ ０ ８
者 的心理 疏导 ， 检测 前 ， 检测 目的 、 将 意义 及 可 能产 生
２ 护 理
１ １ 一般 资料 ．
２ ４例 中男 １ ４例 、 １ 女 ０例 ， 年龄 ３ ～ ５
６ （ ０ １ － ． ５ 岁 ， 质 指数 ２ ． ５ ０ ６ ， ０ ４． ７－ ３ ） 体 ＿８ ４ １ ７ １ ． １ 空腹 血 糖 （．８ ４ ９ ±０ １ ） ． １ ｍｍｏ／ ｌＬ。２ ４例 患 者 均 确 诊 为 原 发 性 高血 压 ， 即收缩 压≥ １ ０ｍｍＨｇ和 （ ） 张 压≥ ９ ４ 或 舒 Ｏ
的量 和速度 ， 血糖 钳 夹 在 一 个 预 定 的水 平 ； 使 同时 通
检 测 相关项 目。检测 开始 １ ｉ ０ｒ ｎ内快 速 输 入 人胰 岛 ａ 素 溶 液（ 分钟 体表 面积 ８ 每 ＯｍＵ） 将 血糖钳 夹 在一个 ， 预 先设 计 的稳定 水平 ［ 血糖 值 （ ． ０ ． ８ ｍｍｏ／ 靶 ５ Ｏ ±０ ２ ） ｌ Ｌ， ］ 然后 以每 分 钟 体 表 面积 ４ ０ ｍＵ 的 速 度维 持 至检 测结 束 。所得 数 据 通 过 计 算 机 专 用 软件 计 算 ＧＤＲ，
ｔ ｉ ／ Ｐ ａ ｍ ｉ Ｌ ｉｕ ｎ． ｉ ｔ ／ ＡＮ Ｘｉｏ ｅ ， １ ｊａ ＸＵ ｎ ｅ ｖｙ Ｌ Ａ ｆｎ
关于高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术的建立
关于高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术的建立【摘要】目的：建立能精确测定胰岛素敏感性的高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术. 方法：应用高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术对10名正常体质量、正常糖耐量的健康志愿者进行方法学研究. 结果：钳夹试验开始后，血浆胰岛素浓度迅速上升并维持在100 mU/L左右，空腹血糖维持在正常水平(5.0 mmol/ L)，试验过程中内源性胰岛素和肝糖源输出得到完全抑制，血液升糖激素浓度 (包括皮质醇和生长激素) 与基础值相比无明显上升. 钳夹稳态期，葡萄糖输注率为(11.56±1.74) mg/(kg・min). 结论：高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术已成功建立. 在高胰岛素�舱�常葡萄糖稳态条件下，葡萄糖输注率等于机体的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率可以作为评价组织对外源性胰岛素敏感性的指标.【关键词】胰岛素葡萄糖钳制技术胰岛素抗药性胰岛素敏感性0引言高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术 (hyperinsulinemic��euglycemic clamp) 是目前世界上公认评价机体胰岛素敏感性的金标准，已在基础及临床医学研究领域中得到广泛应用，并且已扩展应用于许多病理状态、药物或非药物防治措施的机制研究中. 建立和开展高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术对于糖尿病基础和临床研究具有重要意义，但由于此方法操作复杂、价格昂贵且费时，国内仅有数家医院开展此技术. 我院内分泌科自2006年引进葡萄糖钳夹系统以来，根据DeFronzo等［1］所建立经典钳夹技术的原理并结合国内外近年来的研究进展，成功建立了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术.1对象和方法1.1对象10 (男5，女5)名正常健康志愿者，年龄27.0 ± 4.4 (23~37)岁，体质量指数20.3 ± 1.2 (19.2~23.2) kg/m2，无糖尿病、高血压病家族史，血脂谱正常，肝、肾功能及血尿酸浓度均在正常范围，未服用任何可能影响胰岛素敏感性的药物，口服75 g葡萄糖耐量试验均为正常糖耐量者 (按2003年ADA标准).试验前3 d受试者每日碳水化合物饮食不少于200 g，体质量保持稳定. 试验前向受试者解释试验的性质、目的及可能发生的不良反应，所有受试者均自愿参加试验并签署知情同意书.1.2方法受试者检查前空腹12 h，早8:00到达检查室，测量身高、体质量，排空小便后清醒静卧于检查床30 min后开始试验. 先分别于受试者双侧前臂行静脉穿刺，利用三通管组成2条静脉通道. 一侧用于输注胰岛素及200 mL/L葡萄糖液 (连接于Injectomat C IS和INCA��ST容积泵，德国Fresenius公司)；另一侧用于试验中采血 (将此侧前臂置于60℃恒温仪中，以保证静脉血动脉化［2］)，不采血时缓慢静滴生理盐水，采血前临时关闭输液器.钳夹开始10 min内以4 mU/（kg・min）速率输注人胰岛素溶液 (诺和灵R，40000 U/L，丹麦Novo Nordisk公司) 使血液胰岛素浓度迅速升高，随后110 min内以2 mU/（kg・min）速率持续输注. 在此期间每5 min测一次静脉血糖值(BIOSEN5030血糖分析仪，葡萄糖氧化酶电极法，德国)，根据血糖值调整200mL/L葡萄糖液输注率，使受试者血糖值维持在5.0 mmol/L左右. 每10 min采静脉血测定血清胰岛素浓度，每30 min测定血清C肽、皮质醇和生长激素浓度 (化学发光法，药盒购自天津德普诊断产品有限公司). 试验结束时收集试验期间尿标本，测定尿糖值 (测定方法同血糖测定). 所有血标本均经离心分离血清，-80℃冰箱保存至同批测定.统计学处理：试验结束后计算各受试者试验中血糖值均数(x)、标准差(s)及变异系数(CV)，计算试验中每10 min的平均葡萄糖输注率(glucose infusion rate， GIR)、机体总葡萄糖利用率 (钳夹开始 20~120 min内平均GIR) 和最大葡萄糖利用率 (钳夹稳态期最后30 min平均GIR). 全部数据均采用SPSS 13.0软件处理，计量资料以x±s表示，不同性别之间比较采用两独立样本t检验.2结果全部受试者均成功完成钳夹试验，检查结束后均未发生低血糖反应及其他异常反应，静脉穿刺部位未发生感染及静脉血栓形成. 结果显示高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术成功建立.2.1外源性胰岛素�财咸烟谴�谢稳态形成基础血浆葡萄糖浓度为(4.26±0.39) mmol/L，在高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中，血糖稳定在(4.99±0.15)mmol/L，稳态期血糖CV为(3.09±1.29)%. 基础血清胰岛素浓度为(3.81±2.20) mU/L，钳夹试验开始后血清胰岛素浓度迅速升高，于10 min时达到高峰 (133.70±21.91)mU/L，随后维持在(91.57±13.86)mU/L 至试验结束. 基础血清C肽浓度为(1.92±0.34)μg/L，整个钳夹过程中C肽浓度为(1.32±0.35)μg/L，各个时点的C肽浓度与基础状态相比呈逐渐下降趋势 (图1). 钳夹稳态期与基础状态相比较，升糖激素如血皮质醇、生长激素的浓度无明显上升，且均呈逐渐下降的趋势 (图2).2. 2高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中的血糖及葡萄糖输注率变化钳夹试验过程中受试者血糖浓度稳定在(4.99±0.15)mmol/L，试验开始40 min内GIR上升较快，达到(9.45±3.17)mg/（kg·min），此后上升趋于平缓，在90~120 min时均保持在稳态 (图3). 钳夹开始20~120 min内GIR为(10.75±2.38)mg/（kg・min），稳态期GIR为(11.56±1.74)mg/（kg・min），不同性别之间GIR ［男(10.53±1.57)mg/（kg・min），女(12.25±1.59)mg/（kg・min）］差异无统计学意义（P=0.12）.3讨论1966年Andres依据糖代谢特点设计了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术，1979年DeFronzo等［1］对该技术作了详细研究并应用于人体，从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用，成为目前公认评价机体胰岛素敏感性的“金标准”. 本研究按照DeFronzo等［1］的方法进行设计，结果显示形成稳定高胰岛素状态，达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的；血糖钳夹在正常水平，变异系数小于5%；试验中内源性胰岛素分泌被抑制，升糖激素无明显释放，符合高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术成功建立的标准［1］. 正常人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被完全抑制，故钳夹试验中当达到高胰岛素稳态时外源性葡萄糖输注率 (GIR) 等于外周组织的葡萄糖利用率 (M值)，此时GIR可作为评价机体胰岛素敏感性的指标［1］. 贾伟平等［3］建立扩展高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术时稳态期胰岛素浓度为(63.00±4.86) mU/L时肝糖产生为0，故计算M值时可忽略肝糖的产生. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，经典试验中采用的胰岛素输注率所达到的稳态期胰岛素浓度并不能完全抑制肝糖输出［4］.研究表明，无论是糖尿病患者还是其他胰岛素抵抗严重的患者，当采用较快的胰岛素输注率使稳态期胰岛素浓度达到200 mU/L以上时，肝糖输出几乎被完全抑制，可以避免肝糖输出影响试验结果［5- 6］. 本组10名受试者钳夹试验时均采用2 mU/（kg・min)的胰岛素输注率，稳态期胰岛素浓度与DeFronzo经典试验结果类似［1］. 不同实验室采用相同胰岛素输注率时稳态期胰岛素浓度相差较大，可能与试验具体操作、胰岛素测定方法及受试者空腹胰岛素浓度不同等因素有关. 钳夹稳态期胰岛素浓度不同，GIR值也不同，一般稳态期胰岛素浓度越高，GIR值越大［1， 3， 7-10］. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，稳态期胰岛素浓度较高，评价胰岛素敏感性时可采用稳态期胰岛素浓度加以较正［11］.综上所述，高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹试验中达到胰岛素�财咸烟谴�谢稳态后的外源性葡萄糖输注率等于外周组织的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率(GIR) 可作为评价机体胰岛素敏感性的指标. 近年来钳夹试验中微量精确输液泵和计算机技术的应用大大简化了试验操作难度并提高了成功率，高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术将在糖尿病的预测、糖尿病发病机制研究等方面发挥重要作用.【参考文献】［1］ DeFronzo RA， Tobin JD， Andres R. 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葡萄糖钳夹试验注意事项
葡萄糖钳夹试验注意事项葡萄糖钳夹试验是一种用于测量血糖水平的标准化测试方法。
以下是关于葡萄糖钳夹试验的10条注意事项以及详细描述：1. 必须空腹测试：葡萄糖钳夹试验需要在空腹状态下进行，通常是早晨最早起床后至少8-10小时内没有进食或饮水。
2. 严格遵守禁食规定：在进行试验前的前夜，受试者需遵守相关限制，如停止高糖、高脂肪和高蛋白摄入的食物。
3. 停止药物干扰：某些药物（如胰岛素、口服降糖药物）会干扰葡萄糖钳夹试验的结果，因此在试验前应咨询医生并停用相关药物。
4. 试验需要临床监控：葡萄糖钳夹试验涉及血液抽取和胰岛素注射，因此通常需要在临床医生或合格的医学专业人员监护下进行。
5. 试验过程中需保持稳定：在试验过程中，受试者需要保持休息状态，避免剧烈运动或其他身体活动，以确保结果的准确性。
6. 准备好试验用具：进行葡萄糖钳夹试验需要一些专用器具，如血糖仪、针头、葡萄糖溶液和胰岛素溶液。
在进行试验前，确保所有必要的试验用具都已准备好。
7. 注意采集血液样本：葡萄糖钳夹试验需要抽取多次血液样本以测量血糖和胰岛素水平。
确保在采集血液时使用无菌器具，并妥善保存样本，以免污染或失误影响结果。
8. 严格按照试验方案进行：葡萄糖钳夹试验涉及多个步骤，包括葡萄糖注射、胰岛素注射和血液采集。
按照试验方案的指示进行，避免操作失误。
9. 注意副作用：葡萄糖钳夹试验中使用的胰岛素注射可引起低血糖反应，如头晕、恶心和出汗等。
如果出现不适症状，应立即告诉医生并接受合适的处理。
10. 结束后的观察和监测：葡萄糖钳夹试验结束后，需要进行一段时间的观察和监测。
医生会根据结果评估受试者的血糖调节功能，并根据需要提供进一步的建议和治疗方案。
胰岛素抵抗的检验方法
胰岛素抵抗的磨练办法胰岛素抵抗的检测办法很多,按设计道理大致分为三类：1.开环法：即阻断内源性葡萄糖与胰岛素反馈环法,如正常葡萄糖高胰岛素钳夹技巧.胰岛素克制实验.2.闭环法：即激发葡萄糖与胰岛素反馈环法,如最小模子技巧.口服葡萄糖耐量实验.胰岛素耐量实验.胰高血糖素实验和中断输注葡萄糖模子剖析法 3.基本状况法：用基本状况下的空肚血糖（FPG）和空肚胰岛素浓度（FBI）两个指标评估胰岛素抵抗,如FBG/FBI,1/FBG×FBI和稳态模子评价（HOMA）等.正常血糖高胰岛素钳夹技巧（EICT）被公以为评价胰岛素的金尺度;最小模子法与EICT相干性好,被以为是精确性较高的检测办法但两种办法操纵繁琐,不合适大样本身群胰岛素抵抗的普查.胰岛素迟钝指数.稳态模子法以及空肚胰岛素程度等办法轻便易行,以被广泛运用于胰岛素抵抗的普查.3.1正常血糖胰岛素钳夹技巧（EICT）EICT是今朝公认的检测胰岛素抵抗的办法,被以为是IR检测的金尺度.本办法是测定组织对外源性胰岛素迟钝性的办法,快速中断胰岛素灌注使血浆胰岛素浓度敏捷升高并保持在必定程度,改变葡萄糖灌注率使血糖稳固在基线程度.在这种程度下可经由过程克制肝糖输出和内源性胰岛素的排泄,即阻断内源性葡萄糖－胰岛素反馈,这时葡萄糖灌注率等于外源性胰岛素介导的机体葡萄糖代谢率.具体办法为：空肚12h,抽血测基本血糖.胰岛素的值,静滴胰岛素1.5mU/kg.min,使血胰岛素保持在100mU/L,保持此速度不变,然后静滴2％葡萄糖（2mg/kg.min）,每隔5min监测血糖一次,并用Harvard泵调剂葡萄糖的输注速度（GIR）,以外源性胰岛素钳制血糖于正常程度（5.2+_0.1mmol/L）中断60min.血胰岛素浓度在50mU/L以上能克制90％肝脏内源性葡萄糖生成,是以外源注入葡萄糖量减去机体所有组织摄取量,即为胰岛素介导的葡萄糖代谢率和单位胰岛素所代谢葡萄糖量,这就是胰岛素迟钝性指标,运用较广泛.GIR越小,机体胰岛素抵抗越轻微.与胰岛素耐量实验（ITT）比拟,具有不产生低血糖和陪同的庞杂神经内排泄反响等长处,因为以每5min距离盘算葡萄糖代谢率,可测组织对胰岛素迟钝的时光曲线,对解释疾病的发病机制有帮忙.该实验消除了体内很多灾以掌握的干扰身分对评价IR的影响.但该实验时葡萄糖可受胰岛素程度改变时四周血流变动的影响;并与输入胰岛素量而非胰岛素浓度相干.但是完成实验须要床边血糖主动剖析议和Harvard泵等特别装备,每5min调剂GIR,费用昂贵,限制了此技巧的推广.3.2胰岛素克制实验（IST）办法：受试者静脉打针普萘洛尔5mg,5min后用输液泵恒定输入由普萘洛尔.肾上腺素.葡萄糖和胰岛素构成的混和液,以克制肝糖输出和内源性胰岛素排泄.在这种稳固状况下,血浆葡萄糖浓度直接反应组织对外源性胰岛素的迟钝性.改进办法：用发展抑素代替普萘洛尔和肾上腺素,来由是普萘洛尔和肾上腺素可以引起受试者心率减慢.血压升高.和血液从新散布等副感化,且肾上腺素可使脂肪分化,对胰高血糖素和发展激素的排泄的克制其实不充分;而发展抑素可以充分克制糖原分化,克制胰岛素.胰高血糖素和发展激素的排泄,对脂肪代谢没有直接的影响,不引起血汗管反响.故发展抑素更安然.IST是一种简略易行的办法,但成果不如钳夹法精确.3.3渺小模子法（MMT）MMT是运用盘算机模仿机体血糖与胰岛素动力代谢的关系,而同步盘算出标书胰岛素抵抗程度的胰岛素迟钝性指数（ISI）和不依附胰岛素感化的葡萄糖自身代谢效能（SG）,也被称为频仍采血的静脉葡萄糖耐量实验（FSIVGTT）.根据葡萄糖和胰岛素的动力学关系求得ISI.假如受试者β细胞功效过低,则需在打针葡萄糖前打针一次D860或胰岛素,不然胰岛素曲线太低,盘算将消失误差.具体办法：凌晨空肚（禁食10h后）,平卧歇息30min,阁下肘腕部各保存一个静脉通道,一侧用于葡萄糖,另一侧用于采血.打针葡萄糖按0.3g/kg盘算,β细胞功效反应较差者在给葡萄糖20min后打针0.3克甲苯磺丁脲钠,对完整没有β细胞功效者打针外源性胰岛素75mU/kg.采血时光最初为3h采30个血样,后来改为12或14个,经对比剖析,削减样本不影响测定成果.SG是指机体不依附胰岛素自身对葡萄糖的代谢才能,当SG降低时葡萄糖的代谢才能明显降低就会引起临床意义上的糖耐量平常,甚至2型糖尿病的产生.正常人胰岛素迟钝指数与胰岛素对葡萄糖急性应答之间消失双曲线的相干关系,即当胰岛素迟钝性降低时,为了保持血糖浓度的正常,胰岛素排泄必须有较大幅度的增长.但是当β细胞不再能中断高程度排泄胰岛素时,陪同着有代偿性高胰岛素血症的胰岛素抵抗将改变成葡萄糖耐量减低.是以,在最小模子技巧中,第一时像胰岛素排泄不但时全部多样本静脉葡萄糖耐量联合实验中胰岛素排泄的一个重要构成部分,并且还可能是一个早期解释胰岛β细胞功效障碍的一个指标.盘算公式：dG（t）/dt=[p1+X(t)]G(t)+P1GBdX(t)/dt=p3[I(t)-Ib]-P2X(t)G（t）.I（t）分离代表各个t时相葡萄糖.胰岛素的浓度;X（t）为组织间液胰岛素对四周靶细胞的调节感化;Gb.Ib分离为打针葡萄糖前,即基本状况下葡萄糖.胰岛素浓度.;P1为SG;p3为胰岛素对肝脏和四周靶细胞对葡萄糖代谢调节参数;P3/P2为ISI.MMT法有了最小模子软件就可进行,大大降低了费用,操纵简略;在心理的葡萄糖－胰岛素反馈调节状况下评估IR;不依附血糖浓度,不须要设定基本正常的血糖值.此类办法的配合长处是与阻断葡萄糖－胰岛素反馈法比,没有干扰葡萄糖－胰岛素反馈的心理机制;与激发葡萄糖－胰岛素反馈法中OGTT比较,更相符心理性的实验.一般的心理情形下葡萄糖是在胃肠道间接和血液轮回中直接感化于胰腺,引起胰岛素排泄,而静脉葡萄糖耐量实验就没有了葡萄糖在胃肠道间接引起胰岛素排泄的感化.国表里均有效葡萄糖曲线下面积（AUCG）和胰岛素曲线下面积（AUC1）的比值作为胰岛素迟钝指数的报导.无论是OGTT或IVGGT所得血葡萄糖和胰岛素的曲线都是葡萄糖和胰岛素互相感化的产品.,称为闭环模子.此模子所得的成果手IS及β细胞功效两种身分的影响有时难以差别.如血胰岛素升高而血糖未见明显降低,提醒有IR.G－INS的量效关系其实不是简略的直线关系,而是函数关系,二参数刻互相反馈而不恒定：葡萄糖↑－→刺激β细胞释放－→G摄取增长,血糖降低.但是有时不成靠.具体办法为：凌晨空肚作通例四点OGTT.血样均测葡萄糖及胰岛素,葡萄糖和胰岛素曲线下面积的盘算办法雷同.ISI＝MCR/logMI=M/MG/logMIM=75000/120+(G0-G120)××180××体重/120××体重为血糖池的总容积.这是一种较精确.简略易行的IR检测办法,合适大样本临床和风行病研讨.3.5胰岛素糖耐量实验（ITT）办法：将导管拔出一手臂静脉,使血动脉化,t为0min时,按0.1U/kg 快速注入短效胰岛素,t为0.3.6.9.12.15.20.30min共9个时光点取血样测葡萄糖浓度,ISI＝0.693/T(T为3－30min时血糖曲线的斜率).研讨中人们发明胰岛素引诱血糖降低导致胰高血糖素和儿茶酚胺等排泄反抗调节反响.这种感化重要产生在静注胰岛素15－20min,低血糖症也产生在20min后.改进后：胰岛素量由0.1减为0.05,时光由30min缩短为15min.ITT时一种简略,可粗略估量IR的办法.3.6胰高血糖素实验胰高血糖素实验（Gt）是传统评估胰岛素β细胞功效的办法.办法：按1mg/m2快速静注胰高血糖素,让血糖自由升高20min,20min时用一个相似胰岛素泵的装配（biostator）中断检测血糖,并按负反馈道理调节输注短效胰岛素30min,使血糖掌握在根本程度,经由过程比较血糖降低和进入轮回血中ins的量得出ISI.较为精确,但费用较高.办法：葡萄糖按每分钟5mg/kg的量中断固定输注60min,分离在50.55.60min共3次取血测葡萄糖和胰岛素浓度,平均浓度作为获得的血浆葡萄糖和胰岛素浓度.再根据浓度从CIGMA盘算机模子图中查出IR值.此法简略,但只能粗略的估量IR.3.8基本状况法：因为血糖和胰岛素是互相感化的,故有人假想以空肚血糖（FPG）与空肚胰岛素之间的冠县作为诊断IR的量化参数.稳态模子评价（HOMA）：本法只需测空肚胰岛素和血糖浓度,其数学模子的理论根据是肝脏和胰岛β细胞在调节血糖和胰岛素浓度时消失一个负反馈环路.此法只需做一次简化的75gOGTT及胰岛素释放实验,采血样2次(空肚及服糖2h后),分离测定2次的血糖和胰岛素程度,用下述公式盘算IR及细胞功效. IR＝FI×G/22.5, β细胞功效＝20×FI/(G-3.5).FI 为空肚血浆胰岛素浓度,G为空肚血糖.HOMA办法简略靠得住,临床和风行病学研讨均可运用.但是在糖耐量平常人中,HOMA和钳夹法的相干性不佳.HOMA是根据空肚血糖和胰岛素浓度来断定IR,而这两个数值均反响的是基本状况下胰岛素的迟钝性,不克不及很好的断定餐后阶段的胰岛素迟钝性,也不克不及精确的反应肝脏和外周组织的胰岛素感化.消失胰岛素排泄平常的情形时,如IGT,HOMA不克不及精确的反响IR.空肚胰岛素是反应胰岛素抵抗的一个较好的指标.在血糖程度允常或升高的人群中,空肚胰岛素程度增高标明胰岛素抵抗的消失.但在糖尿病患者中空肚胰岛素和钳夹技巧的相干性比正常人低.这是因为作为今朝公认“金尺度”的钳夹技巧所测到的全身葡萄糖摄取仅反应了胰岛素在外周组织的感化,而胰岛素程度则受胰岛素抵抗和胰岛素排泄的配合决议.β细胞对别传组织胰岛素抵抗的反应是排泄大量的胰岛素来保持血糖在正常规模内.当胰腺过度排泄胰岛素才能降低时便产生了糖耐量平常,是以,2型糖尿病患者胰岛素排泄缺点和胰岛素感化缺点共存.即使这些患者呈明显的胰岛素抵抗状况,因为胰岛素排泄的功效障碍而使胰岛素程度不高.尽管如斯,研讨标明,2型糖尿病患者的空肚胰岛素程度与钳夹技巧有相当好的相干性经典的胰岛素RIA法测定的是胰岛素.胰岛素原及个中央代谢产品的总程度,而不是胰岛素的真实程度,所以得出的成果不免有误差.总之,检测IR的办法浩瀚,被广泛接收精确检测IR的办法是钳夹法和MMT,但技巧庞杂,费用高.OGTT法是检测IR的一种较精确.简略.更相符心理性的办法,较实用于临床通例检测.基本状况法和HOMA法,二者简略.粗略评估IR.。
胰岛素抵抗程度的评估
胰岛素抵抗程度的评估胰岛素抵抗是一种广泛存在的现象，但不同个体胰岛素抵抗的程度，即对胰岛素的敏感性可有很大的差异，即存在明显的异质性。
在临床和科研工作中，常需要评价机体的胰岛素敏感性，即评价胰岛素抵抗的程度。
目前开展的评估方法主要分为两大类：精确检测机体胰岛素敏感性的方法和简易评价机体胰岛素敏感性的方法。
（一）精确检测机体胰岛素敏感性的方法1.正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术葡萄糖钳夹技术（简称钳夹技术）是目前评价机体胰岛素敏感性的黄金标准。
该技术于1979年由Defronzo等首创。
钳夹技术包括两种类型：高血糖-正常血浆胰岛素钳夹技术（高糖钳夹技术）和正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术（正糖钳夹技术）。
高糖钳夹技术主要用于定量评价胰岛B细胞对葡萄糖的敏感性，即B细胞功能。
而正糖钳夹技术则用于评价胰岛素外周靶组织对胰岛素的敏感性。
正糖钳夹技术是目前直接测定机体胰岛素敏感性的最精确的方法。
其原理是在实验中通过输注外源性胰岛素人为造成外源性高胰岛素血症状态（100 μU/ml），同时输注葡萄糖溶液，通过不断测定血糖（每5 min 1次）并调节葡萄糖输注的速度，使血糖始终保持在正常血糖水平。
当血糖保持在正常水平并保持稳定时（即稳定状态），葡萄糖输入的速度即等于机体周围组织对葡萄糖的摄取或廓清率（M值），输入的葡萄糖愈多，表明组织对胰岛素愈敏感，反之表明胰岛素抵抗愈严重。
正糖钳夹技术包括常规和扩展两种亚型，扩展型需采用同位素示踪技术和骨骼肌活检技术以精确评价外周靶组织的胰岛素刺激的葡萄糖摄取和利用。
由于钳夹技术费时较多，一般需要6～8 h，并需要采用20次以上，同时需要精确输注泵、快速血糖检测仪（不使用而是直接采血）等特殊设备，费用昂贵，因此不能大规模地用于临床和流行病调查，一般在科研中使用。
目前国内在上海、北京和重庆等地已有开展。
2．微小模型法微小模型法（minimal model）又称Bergman 微小模型法，由Bergman等提出，其方法为改良的静脉葡萄糖耐量试验。
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术失败原因分析及改进措施
高胰岛素 -正葡萄糖钳夹技术失败原因分析及改进措施摘要:目的对高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术出现失败原因进行分析，以保证试验顺利完成。
方法对2017年12月至2019年10月本科共126例糖尿病及肥胖患者在进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹中所出现的失败例数进行分析总结，找出失败的原因，拟定对策。
结果 126例患者中出现钳夹试验失败的有23例，失败原因包括试验前未停用睡前长效胰岛素；空腹血糖过高；试验中仪器操作失误；结论试验前医护患三方要良好沟通，试验者对仪器的熟练掌握程度、对患者血糖波动的准确评估、输液通畅情况的严密观察以及试验者正确的采血技术，是保证试验成功的关键。
关键词高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术；胰岛素抵抗；糖尿病；高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术是目前国际上公认的最精确的测定胰岛β细胞功能的方法[1]，该技术主要针对存在胰岛素抵抗的人群[2-4]。
我科在2017年12月至2019年10月利用高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术对97例2型糖尿病患者及29例肥胖患者是否存在胰岛素抵抗的情况进行了检测。
其中有23例患者试验失败。
失败原因包括试验前未停用睡前长效胰岛素；空腹血糖过高；试验中仪器操作失误等。
针对失败原因进行分析，提出改进措施，现报道如下。
1临床资料1.1一般资料 97例2型糖尿病患者中男41例，女56例，年龄21-60岁，FBG：14.91-17.68mmol/L，均符合ADA糖尿病诊断标准。
29例肥胖患者中男11例，女18例，年龄15-47岁，BMI：29.86-35.12kg/m2，均符合WHO肥胖诊断标准。
1.2方法首先向患者介绍试验的目的和方法。
嘱患者试验前1天晚餐前停用各类胰岛素，8pm开始禁食8-12h。
试验当日分别于患者两侧前臂留置20 G和22 G静脉留置针。
试验开始10min后，每 5 min 测定患者血糖数值，每 30 min留取C 肽标本。
试验第120-150min患者血糖波动稳定在 5.0±10% mmol/L 左右，此时葡萄糖输注率处于稳定状态，以此评定机体对胰岛素的抵抗程度[2]。
高胰岛素正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立董立厚样本
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立及应用董立厚, 宋海峰( 军事医学科学院放射与辐射医学研究所, 北京 100851)【摘要】目的: 在比格犬中建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术。
方法: 以5只健康比格犬为实验对象进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验, 考察血糖、胰岛素、 C 肽及胰高血糖素等指标。
结果: 成功将血糖控制在目标水平, 变异系数小于5%; 实验过程中血清胰岛素最后稳定在40.0 ± 3.8 mI U·L-1, 显著高于基础胰岛素水平; 血清C肽浓度显示内源性胰岛素受到了明显的抑制, 胰高血糖素没有显著升高。
结论: 在比格犬体内建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术, 并将其成功用于胰岛素制剂药效动力学的评价。
【关键词】: 高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术; 药效动力学; 比格犬The euglycemic clamp technique was established in beagle dogs [Abstract] Objective:To establish euglycemic clamp technique in beagle dogs. METHODS: The euglycemic clamp technique was applied in healthy beagle dogs and the blood glucose, insulin, C-peptide, insulin and glucagon were monitored during the clamp period. RESULTS: The blood glucose level was controlled within the basal level, coefficient of variation being less than 5% during the clamp period. The serum insulin concentration finally reached to the level of 40.0 ±3.8 mI U·L-1stably and a significant inhibition was showed in endogenous insulin by the determination of C-peptide. But there was not significant increase of serum glucagon compared with basal values. CONCLUSIONS:Methodology confirmed that the euglycemic clamp technique is successful in beagle dogs【作者简介】董立厚( 1979 —) , 男, 河北清河县, 博士研究生, 研究方向: 生物技术药物药代动力学通讯联系人, 宋海峰, , Tel: (010)66930259and can be applied in study of pharmacodynamics of insulin preparations. KEY WORDS: euglycemic clamp technique; pharmacodynamics; beagle dogs 高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术[1]由于定量准确、可重复性好、避免低血糖等优点, 已成为胰岛素敏感性评价的金标准[2]。
高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的护理体会
Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ，Ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ， ２ １ ０ ０ ２ ９ ）
秦 月华 ， 袁翠 萍 ， 周 红文 ， 付 真真
（ 南京 医科大学第一 附属 医院 内分泌科 ， 江苏 南京 ， ２ １ ０ ０ ２ ９ ）
摘 要 ：目的 探讨高胰岛素 一正葡萄糖钳夹技术 的护 理配合要点。方法 对２ ０例 ２型糖尿病患者进行高胰岛素 一正 ２ ０例 受试者均顺利 完成 高胰 岛素 一正葡 萄
ｗｅ ｒ ｅ ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ．Ｃｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ａｄ ｅ ｑ ｕ ａ ｔ ｅ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅ ｃ ｌ ａ ｍｐ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ，ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ — ｔ ｉ ｖ ｅ ｖ ｅ ｎ ｏ ｕ ｓ ｃ ｈ ａ ｎ ｎ ｅ ｌ ，ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｃ ｔ ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｂ ｌ ｏｄ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎ ｓ ａ ｎ ｄ ｃ ｌ ｏ ｓ ｅ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｃ ｌ ａ ｍｐ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ —
ｐ ｅ ｒ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｉ ｎ ｅ ｍｉ ｃ ｅ ｕ ｇ ｌ ｙ ｃ ｅ ｍｉ ｃ ｃ ｌ ａ ｍｐ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ２ ０ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｙ ｐ ｅ ２ ｄ ｉ ａ ｂ ｅ ｔ ｅ ｓ ｍ ｄｌ ｉ ｔ ｕ ｓ
高胰岛素-正常血糖钳夹技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价
高胰岛素-正常血糖钳夹技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价曾敏莉;周远大;何海霞;杨辉【期刊名称】《四川生理科学杂志》【年(卷),期】2004(026)004【摘要】目的：建立狗高胰岛素-正常血糖钳央技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价，对重组甘。
精胰岛素注射液治疗糖尿病的药效学进行了评价。
方法：高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立，将健康合格一级Beagle犬麻醉后，进行股动脉和股静脉插管。
然后同时向静脉输注胰岛素和葡萄糖。
首先从动脉抽取血液，用血糖仪测定基础血糖(BBG)。
然后以恒定的速度输注胰岛素，【总页数】2页(P186-187)【作者】曾敏莉;周远大;何海霞;杨辉【作者单位】重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.应用高葡萄糖钳夹技术评价女性非酒精性脂肪性肝病胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗 [J], 查英;刘军;盛励;陈灶萍;杨玲娣;陈钦达;廖晓寰;孟令平2.高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进分析 [J], 郑晓岩3.高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究 [J], 张锦娟;孙飞;吴彩斌;戚瑞;任丽丽4.Wistar大鼠的正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术 [J], 李晨钟;张素华;舒昌达;任伟5.清醒状态大鼠高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立及其意义 [J], 罗四川;李启富;刘红梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高胰岛素_正葡萄糖钳夹技术的建立
文章编号:0253-3626(2004)05-0615-03高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立汪志红1,李启富1,张素华1,刘秀容1,刘智萍1,罗四川2,黄健康1,何 军1(1.重庆医科大学临床学院内分泌科,重庆 400016;2.重庆市急救中心内科,重庆 400012)【摘 要】目的:建立高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术。
方法:应用高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术对8例正常体重、正常糖耐量者进行了方法学的研究。
结果:在优势胰岛素浓度、血浆葡萄糖浓度稳定在正常空腹水平状态下,内源性胰岛素释放和肝糖产生被抑制,升糖激素(皮质醇、生长激素、胰高糖素)无明显增高。
(2)在高胰岛素-正常葡萄糖钳夹稳态期,葡萄糖利用率为9.25±0.25mg/(kg.min)。
结论:高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术已成功建立。
在外源性胰岛素-葡萄糖代谢的稳定状态下,机体葡萄糖利用率显著增加。
【关键词】高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术;胰岛素抵抗;胰岛素敏感性【中国图书分类法分类号】R587.1 【文献标识码】A 【收稿日期】2003-10-24Establishment of hyp erinsulinemic euglycemic clamp techniqueW A N G Zhihong,et al(Depart ment of Endocri nology,College of Cli nical Medici ne,Chongqi ng Medical U niversity)【Abstract】Objective:To establish a hyperinsulinemic euglycemic clamp technique for the study of insulin sensitivity in Chinese. Methods:A hyperinsulinemic euglycemic clamp technique was used to the study of methodology in8normal weight subjects with nor2 mal glucose tolerance.Results:(1)When a higher level of insulin was created during maintaining fasting euglycemia,the secretion of endogenous insulin and hepatic glucose production were completely inhibited.The secretion of counter-regulatory hormones(cortisol, growth hormone and glucagon)was not significantly stimulated..(2)During the steady-state of hyperinsulinemic euglycemic clamp, the glucose disposal rate was9.25±0.25mg/(kg.min)Conclusion:The hyperinsulinemic euglycemic clamp technique was established successfully in Chinese.During the steady-state of exogenous insulin and glucose metabolism,glucose utilization increased.【K ey words】Hyperinsulinemic euglycemic clamp technique;Insulin resistance;Insulin sensitivity 众多研究表明,胰岛素抵抗(IR)和胰岛B细胞功能缺陷是2型糖尿病发病和病程中的两个重要环节。
正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较
上海第二医科大学硕士学位论文正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较姓名：***申请学位级别：硕士专业：内分泌与代谢病指导教师：***2002.4.1高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的建立及与简易指数的比较中文摘要目的：高胰岛素正葡萄糖钳夹技术是国际上公认的评价胰岛素敏感性的“金标准”。
微小模型技术是又～个国际公认的判断胰岛素敏感性的指标。
建立此两种表示胰岛素敏感性的方法并用他们评价许多简易指标有重要的临床价值。
因此本研究的目的旨在建立高胰岛素正葡萄糖钳夹试验及微小模型技术，并用以评价简易相关指数。
／对象：本研究共入选正常志愿者２。
人，单纯性肥胖者８人，Ｔ２一。
Ｍ患者１。
人。
其中男性２４人，女性１４人。
正常志愿者及单纯性非肥胖者均经ＯＧＴＴ及体检，排除其他疾病。
Ｔ２－ＤＭ为血糖控制良好，ＦＢＧ＜８ｍｍｏｌ／Ｌ，ＨｂＡｌＣ＜８％，单纯口服磺脲类降糖药，并排除服用其他影响胰岛素敏感性的药物。
所有受试者分成４组。
分别为：组１，正常ＢＭＩ，年龄２６．７±２．１６；组２，正常ＢＭＩ，年龄５２３０±５７９组３，单纯性肥胖，年龄５３．２５±５．０３；组４，Ｔ２．ＤＭ，年龄６１１１±８．０７。
组２、３、４中的女性受试者均为绝经后妇女。
方法：每个受试者均测定ＯＧＴＴ、微小模型和正葡萄糖钳夹。
每次测试间隔一周，组１的女性受试者在月经第６或第７天测试。
测试前３天Ｔ２一ＤＭ患者停药。
测试前三天保持每天２００克以上的碳水化合物饮食，晚８时后禁食。
第二天早上８时开始试验。
ＯＧＴＩ＂为口服７５克葡萄糖粉，在０’、３０’、６０’、１２０’、１８０’抽血测血糖和胰岛素。
微小模型试验为在０时推注２５％葡萄糖０．３９／ｋｇ，在２０’时推注人胰岛素（优泌灵Ｒ）０．０３ＩＵ／ｋｇ，分别在０’、２’、４’、８’、１９’、２２’、３０’、４０’、５０’、７０’、９０’、１８０’抽血测定血糖和胰岛素。
将测定值输入计算机，应用Ｂｅｒｇｍａｎ减少样本数的微小模型统计软件包得到胰岛素敏感指数ＳＩ。
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胰岛素钳夹实验技巧
实验步骤：
1.试样准备：首先准备标准品的稀释溶液和样品的提取液。
将标准品
按照一定的比例稀释至所需浓度。
对于样品，首先将胰腺组织等样品切成
小块，并添加适量的提取缓冲液，然后使用超声波浸提或者机械粉碎等方
法提取样品中的胰岛素。
2. 硝酸银试剂的制备：胰岛素钳夹实验主要是通过硝酸银试剂与胰
岛素反应生成沉淀来间接测定胰岛素的含量。
制备硝酸银试剂的方法为：
将1mol/L的硝酸银溶液缓慢滴加到相对浓度为0.1mol/L的硝酸铜溶液中，同时不断搅拌，直到沉淀停止产生。
然后将沉淀过滤并用水洗涤。
3. 血浆样品的处理：将标准品溶液和样品溶液分别加入不锈钢板槽内，然后加入硝酸钙溶液，使溶液的钙离子浓度为0.1mol/L。
接着，在
实验前通过分光光度计测定样品和标准品的吸光度值。
4.实验操作：将溶液中的胰岛素与硝酸银试剂反应，生成测定物质，
沉淀后使用胶体银试剂与捕获剂作用形成测定物，最后使用硫代硫酸钠溶
液将测定物还原，产生测定物的比色反应。
根据标准曲线和样品的吸光度值，可以计算出样品中胰岛素的含量。
实验技巧：
1.胰岛素钳夹实验需要使用无菌技术，以避免外源性胰岛素的干扰。
在实验操作前，必须充分清洁实验室器材和工作台面，并穿戴好实验手套
和口罩等防护措施。
2.样品提取过程要小心轻柔，避免过度振荡或机械破碎。
这样可以避免样品中的酶释放，导致实验结果的偏差。
3.在实验过程中，注意各个试剂的储存和保护，要避免与空气长时间接触，以防止试剂变质。
4.实验操作时要严格按照实验步骤进行，在加入试剂时注意滴加的速度和剂量。
尤其是硝酸银试剂的滴加要缓慢并加入到硝酸铜溶液中，以避免出现不必要的反应。
5.在读取吸光度值时，应在相同的光路和条件下进行测量，并使用去离子水或提取液进行基线校准。
6.在计算胰岛素含量时，需要根据实验所用的标准曲线进行插值，以减少误差。
同时，注意将标准曲线的线性范围内的吸光度值与样品的吸光度值进行比较。