7 补体测定和补体结合实验
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补体的概念
Jules Bordet (1870-1961), discoverer of complement By National Library of Medicine
补体是血清中具有酶活性的一种不耐热球蛋白。 由三组球蛋白分子组成： 九种补体成分组成 B因子、D因子、P因子 补体活化过程中的抑制因子和灭活因子
补体激活途径
百度文库
补体激活和调节系统
经典途径补体总活性的测定
1. 血清补体总活性测定（CH50试验） 50% complement hemolysis 实验原理 补体最主要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与 红细胞结合后可激活补体经典途径，导致红细胞 表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细 胞肿胀而发生溶血。 当红细胞和溶血素含量一定时，在规定反应时间 内，溶血程度与补体活性程度呈正相关。
Control Proteins: C1-INH, C4-BP
Mannan binding C3, Factors B C5, C6, C7, protein (MBP), & D*, C8, C9 mannanProperdin asociated serine protease (MASP, Factors I* & Protein S MASP2) H, DAF, CR1, etc.
单个补体成分的测定
在30多种补体成分中，主要检测C3、C4、 C1q、B因子和C1酯酶抑制物。 测定方法可分为溶血法和免疫化学法。溶 血法用以检测单个补体成分的溶血活性， 免疫化学法则测定其含量，目前多采用免 疫比浊法。
单个补体成分的测定
免疫溶血法 溶血法主要根据抗原与其特异性抗体(IgG、IgM型) 结合后可激活补体的经典途径，导致细胞溶解。 该方法中抗原为SRBC，抗体为兔或马抗SRBC的抗 体，即溶血素。将两者组合作为指示系统参与反 应。试验中有两组补体参与，一组是作为实验反 应系统的补体， 另一组为待测血清中的补体。溶 血程度与待测补体成分活性有关，仍以50%溶血为 终点。
补体测定的应用
5. 补体参与的试验 即利用补体作为试剂而设计的 实验: HLA分型的补体依赖性细胞毒试验 脂质体免疫试验 免疫粘连血凝试验 溶血空斑技术 胶固素结合试验 C1q结合试验和补体结合试验 6. 流行病学调查
经典途径补体总活性的测定
溶 血 %
豚鼠血清1:500
补体介导的溶血反应曲线
经典途径补体总活性的测定
2. 脂质体liposome均相免疫溶破法 用脂质体做固相载体，脂质体内包有荧光 素、有色染料或酶等物质。脂质体表面偶 联抗原或抗体。 当致敏的脂质体与相应的抗体或抗原特异 性结合后，经典途径激活补体，导致脂质 体溶破。 释放出的脂质体内容物的量与补体活性呈 正相关。
补体结合试验
试验原理 反应系统: 已知抗原(或抗体)与待测抗体(或抗原) 补体系统 指示系统: SRBC与相应溶血素
补体结合试验
补体结合试验
如果反应系统于存在待测的相应抗体 (或抗原)，则反应的第一阶段抗原抗体 复合物结合补体，此时由于补体已被结 合掉，反应液中已无游离补体，故第二 阶段加人指示系统不出现溶血，补体结 合试验阳性。
单个补体成分的测定
免疫化学法 免疫化学法分为单向免疫扩散法、火箭免疫 电泳、透射比浊法和散射比浊法。 前两种方法多用手工操作，影响因素多，结 果重复性差，已逐渐被自动化检测仪器代替， 对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行测 定。 单一补体含量与补体生物学活性
补体结合试验
凡能激活补体的IgM和IgG类抗体与 相应抗原结合的反应均可应用本法检测。 目前主要用于病毒性传染病诊断和流行 病学调查，以及一些自身抗体、肿瘤相 关抗原和HLA血清学分型的检测。
Proteins of the Complement system
Table 1. Proteins of the Complement system Classical Pathway Activation Proteins: C1qrs, C2, C3, C4 Lectin Pathway Alternative Pathway Lytic Pathway
Components underlined acquire enzymatic activity when activated. Components marked with an asterisk have enzymatic activity in their native form.
补体经典激活途径
补体结合试验
如果反应系统中抗原(或抗体)缺乏，或 两者不对应，则反应的第一阶段补体游 离，与第二阶段加入的指示系统结合出 现溶血，补体结合试验阴性。试验中将 反应系统的待测抗原(或抗体)作系列倍 比稀释可作定量测定。试验中以50%不 溶血为判断终点。
补体测定的应用
1.诊断病原体感染 2.检测补体的功能 3.补体单个成分及其裂解产物的测定 C1q、C3、C4、C3a和补体受体的测定等。 4.相关疾病时补体的检测 免疫性疾病 与补体有关的遗传性疾病 补体含量显著降低的疾病 高补体血症
Jules Bordet (1870-1961), discoverer of complement By National Library of Medicine
补体是血清中具有酶活性的一种不耐热球蛋白。 由三组球蛋白分子组成： 九种补体成分组成 B因子、D因子、P因子 补体活化过程中的抑制因子和灭活因子
补体激活途径
百度文库
补体激活和调节系统
经典途径补体总活性的测定
1. 血清补体总活性测定（CH50试验） 50% complement hemolysis 实验原理 补体最主要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与 红细胞结合后可激活补体经典途径，导致红细胞 表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细 胞肿胀而发生溶血。 当红细胞和溶血素含量一定时，在规定反应时间 内，溶血程度与补体活性程度呈正相关。
Control Proteins: C1-INH, C4-BP
Mannan binding C3, Factors B C5, C6, C7, protein (MBP), & D*, C8, C9 mannanProperdin asociated serine protease (MASP, Factors I* & Protein S MASP2) H, DAF, CR1, etc.
单个补体成分的测定
在30多种补体成分中，主要检测C3、C4、 C1q、B因子和C1酯酶抑制物。 测定方法可分为溶血法和免疫化学法。溶 血法用以检测单个补体成分的溶血活性， 免疫化学法则测定其含量，目前多采用免 疫比浊法。
单个补体成分的测定
免疫溶血法 溶血法主要根据抗原与其特异性抗体(IgG、IgM型) 结合后可激活补体的经典途径，导致细胞溶解。 该方法中抗原为SRBC，抗体为兔或马抗SRBC的抗 体，即溶血素。将两者组合作为指示系统参与反 应。试验中有两组补体参与，一组是作为实验反 应系统的补体， 另一组为待测血清中的补体。溶 血程度与待测补体成分活性有关，仍以50%溶血为 终点。
补体测定的应用
5. 补体参与的试验 即利用补体作为试剂而设计的 实验: HLA分型的补体依赖性细胞毒试验 脂质体免疫试验 免疫粘连血凝试验 溶血空斑技术 胶固素结合试验 C1q结合试验和补体结合试验 6. 流行病学调查
经典途径补体总活性的测定
溶 血 %
豚鼠血清1:500
补体介导的溶血反应曲线
经典途径补体总活性的测定
2. 脂质体liposome均相免疫溶破法 用脂质体做固相载体，脂质体内包有荧光 素、有色染料或酶等物质。脂质体表面偶 联抗原或抗体。 当致敏的脂质体与相应的抗体或抗原特异 性结合后，经典途径激活补体，导致脂质 体溶破。 释放出的脂质体内容物的量与补体活性呈 正相关。
补体结合试验
试验原理 反应系统: 已知抗原(或抗体)与待测抗体(或抗原) 补体系统 指示系统: SRBC与相应溶血素
补体结合试验
补体结合试验
如果反应系统于存在待测的相应抗体 (或抗原)，则反应的第一阶段抗原抗体 复合物结合补体，此时由于补体已被结 合掉，反应液中已无游离补体，故第二 阶段加人指示系统不出现溶血，补体结 合试验阳性。
单个补体成分的测定
免疫化学法 免疫化学法分为单向免疫扩散法、火箭免疫 电泳、透射比浊法和散射比浊法。 前两种方法多用手工操作，影响因素多，结 果重复性差，已逐渐被自动化检测仪器代替， 对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行测 定。 单一补体含量与补体生物学活性
补体结合试验
凡能激活补体的IgM和IgG类抗体与 相应抗原结合的反应均可应用本法检测。 目前主要用于病毒性传染病诊断和流行 病学调查，以及一些自身抗体、肿瘤相 关抗原和HLA血清学分型的检测。
Proteins of the Complement system
Table 1. Proteins of the Complement system Classical Pathway Activation Proteins: C1qrs, C2, C3, C4 Lectin Pathway Alternative Pathway Lytic Pathway
Components underlined acquire enzymatic activity when activated. Components marked with an asterisk have enzymatic activity in their native form.
补体经典激活途径
补体结合试验
如果反应系统中抗原(或抗体)缺乏，或 两者不对应，则反应的第一阶段补体游 离，与第二阶段加入的指示系统结合出 现溶血，补体结合试验阴性。试验中将 反应系统的待测抗原(或抗体)作系列倍 比稀释可作定量测定。试验中以50%不 溶血为判断终点。
补体测定的应用
1.诊断病原体感染 2.检测补体的功能 3.补体单个成分及其裂解产物的测定 C1q、C3、C4、C3a和补体受体的测定等。 4.相关疾病时补体的检测 免疫性疾病 与补体有关的遗传性疾病 补体含量显著降低的疾病 高补体血症