网织红细胞计数的参考方法
《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数实验
不允许以血红 蛋白浓度来折 算红细胞数
充池要均匀， 不能有气泡混 入、溢出或不
满
请认真书写实 验报告
谢谢 大家
数板等
试剂
红细胞稀释液
改良牛鲍氏计数板
操作步骤
01
02
03
04
取中号试管1支 ，加红细胞稀 释液20ml。用清洁干燥微量吸管 取末梢血10μl ，擦去 管外余血后加至红细 胞稀释液底部，再轻 吸上层清洗吸管2-3次
立即混匀。
混匀后，用干净 微量吸管将红细 胞悬液充人计数 池，不得有空泡 或外溢，充池后 静置2-3 min后计
参考区间
男：
（4.09～5.74）×1012/L
女：
（3.68～5.13）×1012/L
新生儿：（5.2～6.4）×1012/L
注意事项
1
2
3
4
5
采血时不能 挤压过甚， 因此针刺深 度必须适
当。。
稀释液要过滤， 试管、计数板 均须清洁，以 免杂质、微粒 等被误认为红
细胞
参考范围数 值内，两次 红细胞计数 相差不得超
临床检验基础
第九讲 网织红细胞计数
目录
CONTENTS
实验原理 实验器材 实验试剂 操作步骤
计算 参考值 注意事项 思考题
实验原理
用等渗稀释液将血液按一定倍 数稀释，充人计数池后显微镜下 计数一定体积内红细胞数，换算 求出每升血液中红细胞的数量
试验器材、试剂
试验器材
显微镜、改良 Neubauer血细胞计
数。
高倍镜下依次计 数中央大方格内 四角和正中共5 个中方格内的红 细胞。对压线细 胞按"数上不数下 、数左不数右"的
网织红细胞计数简介
「参考值」成年人0.005～0.015 绝对值（25～75）×109/L平均60×109/L 儿童0.02～0.06 「临床意义」网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，经煌焦油蓝染液进行活体染色后胞浆中可见有蓝绿色的网状结构，故名网织红细胞，Heilmyer氏根据其发育阶段把它分为五型：O型：是有核的网织红细胞，胞浆内含有网织物者此型仅见于正常骨髓中。
I型：红细胞几乎被网织物充满，此型亦仅见于正常骨髓中。
II型：位于红细胞中央线团样结构，开始松散、此型大量存在于骨髓中。
Ⅲ型：网织结构稀小，呈不规律枝点状排列，末梢血中可见少量。
IV型：胞浆中嗜碱物质很少呈单独的细颗粒粒可短丝状，正常血液中的网织细胞大多见于此型。
为了充分利用从网织红细胞发育过程中获得的有关红细胞生成活性的全部信息，除计数网织红细胞外，确定网织红细胞的成熟分型是十分必要的，从外周血中正常情况下能检测到Ⅲ型网织红细胞约0.2～0.3，IV型约0.7～0.8，但在激活的红细胞生成中还能检测到I型和II型网织红细胞并且Ⅲ型网织红细胞明显增多，这将对红细胞生成研究提供良好信息，对临床诊断提供有力帮助。
网织红细胞增多：表示骨髓红细胞生成旺盛，常见于溶血性贫血，特别是急性溶血（高达0.6～0.8）。
急性失血后5～10天网织红细胞达高峰，2周后恢复正常。
网织红细胞减少：见于再生障碍性贫血，溶血性贫血再生危象时，典型再生障碍性贫血，网织红细胞计数常低于0.005。
网织红细胞绝对值低于15×109/L为再生障碍性贫血的诊断标准之一。
红细胞比容和三种平均值、网织红细胞计数、
②MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。
③LFR：细胞内含15个以下细小颗粒
参考值
①网织红细胞百分数： 成人和儿童:0.005～0.025
新生儿:
0.02～0.06
②网织红细胞绝对数： 成人和儿童: (24～84)X109／L
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[检测原理]
1.普通光学显微镜法 活体染色（新亚甲蓝或煌焦油蓝)的碱性着色基团 网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷) RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩， 蓝色的点状、线状或网状结构 ， 显微镜下计数 1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百 分比或分数数表示。
[检测原理]
2．仪器法
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[检测原理] 1．手工法 同时计数红细胞，测定血红蛋白和血细胞比容，
计算出红细胞3个平均指数。 例：RBC为3.50X1012／L，Hct为0.36，Hb为120g/L
Hct 0.36 MCV＝—— （fl）＝—————— ＝103（fl） RBC 3.50X1012／L
Hb Hb MCH＝—— （pg）， MCHC＝——（ g／L ） RBC Hct
当HCT大于0.7，RBC为(7-10)X1012／L, Hb大于 180g／L，即可诊断。
临床意义
3．红细胞平均指数计算的基础数据
红细胞平均值(MCV、MCHC)可用于贫血的形态 学分类。
4．血液流变学指标
HCT增高表明红细胞数量偏高，
全血黏度增加，严重者表现为高黏滞综合征，
微循环障碍、组织缺氧。 HCT与其他血液流变学指标联合应用，可对一些 血栓前状态进行监测。
临检--网织红细胞计数(Ret)
网织红细胞计数（Ret）【定义】网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，属于尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸（RNA），经活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。
【分型】根据网织红细胞发育阶段分为4型，分别是：Ⅰ型（丝球型）：红细胞充满网状物，见于骨髓。
Ⅱ型（网型）：红细胞网状物结构松散，见于骨髓。
Ⅲ型（破网型）：红细胞网状物结构稀少，呈不规则枝点状排列，见于外周血。
Ⅳ型（点粒型）：红细胞内为分散的细颗粒、短丝状网状物，见于外周血。
【检测原理】1.普通光学显微镜法2.网织细胞计数仪法和血液分析仪法【操作方法】1.显微镜试管法操作（1）加染液：于试管中加入10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液2滴，再加新鲜血2滴，立即混匀，置37℃下15～20min。
（2）制片：取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。
（3）观察：在低倍镜下选择红细胞分布均匀的部位进行观察。
（4）计数：在油镜下计数至少1000个红细胞中网织红细胞数。
（5）计算：网织红细胞分数=（计数的网织红细胞数）/1O00，网织红细胞绝对值（×109/L）=红细胞数×1012/L×网织红细胞分数。
2.显微镜法注意事项（1）网织红细胞必须活体染色，WH0推荐使用新亚甲蓝染液，其染色力强且稳定。
煌焦油蓝染液操作简单、费用低廉，但易产生沉淀、工作效率不高、精度差。
染液与血液比例以1:1为宜，严重贫血时，可适量增加血量。
（2）为提高网织红细胞计数精度和速度，ICSH推荐使用Miller窥盘，方法是将Miller 窥盘置于目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位（3）用小方格（A）计数红细胞，大方格（B）计数网织红细胞，按下式计算：（4）注意鉴别网织红细胞与HbH包涵体。
Ret为蓝绿色网状或点粒状物质，分布不均，HbH包涵体为蓝绿色圆形小体，均匀散布于整个红细胞内。
网织红细胞计数
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3．作为病情观察的指标
溶血性贫血及失血性贫血，治疗过程中 连续观察网织红细胞计数，可作为判断 病情变化的参考指标。 如治疗后网织红细胞逐渐降低，表示溶 血或出血已得到控制。 如网织红细胞持续不减低，甚至更增高， 表示病情未得以控制，甚至加重。
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四、红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR），简称血沉率 指红细胞在一定条件下沉降的速率。 正常情况下，红细胞在血浆中具有相对 的悬浮稳定性，沉降极其缓慢。 在病理情况下，血沉率可明显增快。
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临床意义
2．血细胞比容减低 见于各种贫血。 不同类型的贫血，红细胞体积大小不同， 故血细胞比容的减少与红细胞数量减少 并不—定成正比。 因此必须将红细胞数、血红蛋白量和血 细胞比容三者结合起来，计算红细胞各 项平均值才有参考意义。
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(二)红细胞平均值的计算
1．平均红细胞容积(MCV) 指每个红细胞的平均体积，以飞升（ fl ）为单 位。
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参考值
魏氏(Westergoen)法： 成年男性0~15mm/1小时末
成年女性0~20mm/1小时末
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临床意义
(一)生理性变化 12岁以下的儿童血沉略快。 妇女月经期血沉略增快，可能与子宫内膜破损 及出血有关。 妊娠3个月以后至分娩后3周血沉快，与生理性 贫血及纤维蛋白原含量增加等有关。 老年人血浆纤维蛋白原含量增加血沉加快。 高原地区居民红细胞增多，血沉低于平原地区。
网织红细胞的检测及临床应用
经验交流201网织红细胞的检测及临床应用牛 君四川省南充市南部县人民医院 四川南充 637300网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，是晚幼红细胞在脱核后到完全成熟之间产生的过渡性细胞。
基于其胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后，可见蓝或蓝绿色枝点状甚至网织状结构，所以我们通常称其为网织红细胞。
网织红细胞可以直接对骨髓红系造血功能进行反映，主要是应用于评价骨髓增生能力、判断贫血类型，评价贫血疗效，骨髓移植前后监测，放疗和化疗的监测等方面。
随着高端检测仪器的普遍使用，网织红细胞相关参数的检测为疾病提供了大量的信息，临床应用价值越来越高。
1网织红细胞的检测网织红细胞的检测方法有活体染色手工镜检法、血细胞分析仪法、流式细胞仪法和专用网织红细胞分析仪法。
活体染色手工镜检法分为玻片法和试管法。
由于玻片法在实际应用中很可能造成混合血液中水分的蒸发，染色时间不足，所以检测的结果可能会出现偏低的情况。
而试管法则更容易掌握，具备较为显著的重复性优势，在必要的情况下还可以进行复查，最大程度上降低了被检查者的痛苦，是手工法网织红细胞计数的参考方法。
由于传统的显微镜计数方法操作比较繁琐，影响因素比较多，近年来，我国主要采用米勒窥盘的方式进行计数统计，不仅有效规范了计算区域，同时还明显降低了实验中出现的误差，对于结果的准确性提升有着重要帮助和影响。
目前血细胞分析仪的应用，给网织红细胞的计数提供了更为有效的帮助。
此种仪器不仅能更为精准的计数网织红细胞，同时还能检测出网织红细胞的绝对值、网织红细胞的平均体积、网织红细胞的成熟指数等许多参数，这些参数为疾病的诊断、鉴别诊断及治疗等提供更为显著的帮助作用。
流式细胞仪法是一种多用途的精密分析仪器，应用特殊的荧光染料对网织红细胞染色后进行技术分析，从而得出网织红细胞的百分比和绝对值等参数，它还可对网织红细胞的成熟程度进行分群，将其划分为低荧光强度网织红细胞、中荧光强度网织红细胞、高荧光强度网织红细胞、。
(三)网织红细胞计数
（2）评价疗效
网织红细胞反应： 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B 或叶酸治疗2~3d后，网织 给予铁剂、维生素 12或叶酸治疗 后 红细胞计数值开始上升， 达到最高(10% 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高 达到最高 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 左右 ；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。 血红蛋白开始升高。 骨髓移植、 治疗后： 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 治疗后 血功能， 升高， 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。 升高 网织红细胞计数值上升。
六、参考值
成人： 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） （ ） 新生儿： 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） （ ） 儿童： 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） （ ） 成人绝对值（ 成人绝对值（24-84） ×109/L ）
七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 ）评价骨髓增生能力， 再障时 明显降低。绝对值低于 × 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 可 做为急性再障的辅助诊断指标。 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 溶血性贫血 显高于正常。 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。 正常、轻度升高或降低。
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 降低， 早期 和 降低 红细胞的降低。而停止放、化疗， 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案， 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。 严重的骨髓抑制。
网织红细胞报告单模板
网织红细胞报告单模板
简介
网织红细胞指的是骨髓中分化程度较低、直径略大于红细胞的细胞，其作用在
于产生红细胞。
网织红细胞计数是评价骨髓造血功能和红细胞更新速度的指标之一。
本文将提供一个针对网织红细胞报告单的模板。
项目信息
•报告单编号： RBC-20210901
•报告时间： 2021年9月1日
•检测机构： XXX化验室
检测结果
指标结果参考范围
网织红细胞计数 1.2% 0.2%~2.0%
网织红细胞平均含量36.2 pg 27.0~34.0 pg
网织红细胞平均体积108.6 fl 80~100 fl
网织红细胞分布宽度20.5% 11%~14%
注意：参考范围可能因报告单不同而有所变化，以实际报告单为准。
结论
1.网织红细胞计数偏高，说明骨髓造血功能略有亢进，需要关注。
2.网织红细胞平均含量、网织红细胞平均体积偏高，可能与缺铁性贫血
和巨幼红细胞性贫血有关。
建议查找病因并及时治疗。
3.网织红细胞分布宽度正常。
注意事项
1.本次检测结果只是针对特定个体的，不能代表所有人群。
2.检测报告单应由专业机构完成，不要购买低质量的自助检测产品。
3.网织红细胞检测结果并不能作为疾病诊断的唯一指标，必须结合临床
表现和其他检查指标进行综合分析。
总结
网织红细胞检测是评价骨髓造血功能和红细胞更新速度的一种方法，对预防和
治疗血液疾病具有重要意义。
该报告单模板可以作为参考，但具体报告单应根据实际情况进行设计，以确保检测结果准确可靠。
网织红细胞计数
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手工法
魏氏法、温氏法、ζ血沉率及潘氏法, 检测原理相似。 差别在于抗凝剂、用血量、血沉管规 格、观察时间的不同，故各种方法的参 考值不同。 ICSH推荐魏氏法为血沉测定参考方法
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魏氏法
将枸橼酸钠抗凝血吸入
10mm
特制血沉管内，垂直立 ESR：10mm/h 于室温中，1h末读取红
细胞层下沉的距离，用
Ⅳ点粒型
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对网织红细胞的描述
是晚幼红细胞脱核后的未完全成熟的红细胞 体积比成熟红细胞体积稍大 胞浆内残存有正常核糖核酸(RNA) 具有合成血红蛋白的能力 核糖核酸越多，网织红细胞越幼稚 外周血中主要是Ⅳ型网织红细胞 网织红细胞经瑞氏染色为嗜多色性红细胞 存在于骨髓与外周血中
5
网织红细胞计数（Ret）
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毫米（mm）数值报告。
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魏氏血沉测定
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自动血沉仪法
抗凝血液静置后，红细胞下降，红细胞 与血浆分离，其界面随时间而下移。血 沉仪用光电比浊法、红外线扫描法或摄 影法定时扫描红细胞与血浆界面位置， 得到血沉值并显示红细胞沉降高度H与 对应时间t相关的H-t曲线。
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方法学评价
方法 优点
缺点
魏氏法 国内规范方法， 测定血沉某时刻最
贫血→RBC总面积减少，ESR↑ RBC增多，ESR ↓ RBC直径愈大，ESR ↑ 球形RBC增多，ESR↓
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其他因素
血沉管位置 血沉管倾斜，血沉增快
温度 温度＞25℃，血沉增快，结 果应校正
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质量保证（魏氏法）
抗凝剂用量准确：枸橼酸钠（109mmol/L） 与血液之比（1：4）。
网织红细胞数 100%
1000
健康成人网织红细胞计数与分类参考范围调查
网织 红 细 胞 是有 核红 细胞 脱 核 后 ， 质 内仍 残 留有 细 胞 器 胞 （ 核糖体、 粒体） 如 线 的早 期 红 细 胞 ， 骨 髓 释 放 到 外 周 血 的 成 是 熟 红细 胞 的 前 体 。这 些 细 胞 器 富 含 有 核 酸 物 质 Ｒ Ａ。Ｒ Ｎ ＮＡ
表 １ 网织 红 细 胞 六 项参 数 参 考 值 （ ｓ／ｊ±１ ９ ｓ ± ） （ ．６）
注 ：＞ｏ０ 。 Ｐ ． ５
讨
论
含 量 与成 熟 程 度 成 正 比 。根 据 成 熟 程 度 将 网织 红 细 胞 分 为 高
荧 光 网织 红 细 胞 （ Ｒ） 中荧 光 网织 红 细 胞 （ Ｒ） 低 荧 光 网 ＨＦ 、 ＭＦ 、 织红 细胞 （ Ｆ ） 未成 熟 网织 红 细 胞 指 数 （Ｒ ） 表 示 幼 稚 网 ＬＲ， ＩＦ 是 织红 细胞 的 比例 ， ＭＦ 是 ＲＯ和 ＨＦ ＲＯ 之 和 。检 测 这 些 参 数 对 于评 价骨 髓 造 血 功 能 ， 断 各 种 贫 血 ， 察 贫 血 、 髓 移 植 、 诊 观 骨 肾 病 等 的治 疗 效 果 ， 导 肿 瘤 的 化 疗 、 疗 都 具 有 重 要 的 临 床 指 放
算 出 ｊ １９ ｓ９ 可 倍 区 间 ） 为 参 考 范 围 。ＲＥ ± ． ６（５ 作 Ｔ＃男 、 女
比较 差 异 有 统 计 学 意 义 （ Ｐ＜ ０ ０ ） Ｅ 、Ｒ Ｏ 、 Ｆ 、 ． ５ 。Ｒ Ｔ ＩＦ Ｌ Ｒ ＭＦ 、 ＲＯ 比较 差 异 无 统 计学 意义 （ ＞ Ｏ ０ ） 见 表 １ Ｒ ＨＦ Ｐ ．５ ， 。
・ ４Ｏ ・ １
国际检验医学杂志 ２ ９ ４ ０ 年 月第３ 卷第 ４ Ｉｔ ＬｂＭ ｄ ｎ ｎ ２０， １ ， ｏ ０ ｏ 期 ｎ Ｊ ａ ｅ， ｐｌ ｏ９ ． — — ０ Ｎ ． ４
一、网织红细胞(Ret)计数
优点：操作简单、快速，同时可获得多项血细胞参数。 缺点： ①不同的仪器使用的溶血素不同，形成不同的Hb 衍生物，某些溶血剂形成的衍生物稳定性差，故应严 格控制溶血剂的加入量及溶血时间。 ②有些溶血剂虽加入KCN,但衍生物并不是HiCN,而 是氰化血红蛋白仪器需经过校正后才能进行Hb测定。 ③ 低色素性贫血、某些肝病等，由于RBC具有抵 抗溶血剂的作用，导致RBC溶血不完全而影响Hb测定。
本试剂中含有少量KCN，废液必须无害化处理。
废液处理：用水按1:1稀释,再按每升液体加35ml次氯 酸钠，充分混匀，敞开容器口，过夜，使CN-氧化成N2 和CO2 ↑，或水解成CO32-和NH4+，然后倒入下水道。
【方法学评价】
1.氰化高铁血红蛋白（ HiCN ）法：
特点： ①WHO和ICSH推荐的标准方法，
5.Hb功能 运输O2和CO2,结合可逆。1分子Hb结合1分子O2 ，在标准 状况下，每克Hb能结合1.39 ml O2 。
。
血红蛋白测定
• 测定血液中各种血红蛋白的总浓度。 • 方法有多种
血红蛋白计法 氰化高铁血红蛋白法（HiCN） 十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法（SLS-Hb） 其他方法
血红蛋白计法
【正常参考值】
成人男： 120～160 g/L 成人女: 110～150 g/L 新生儿: 170～200 g/L
【临床意义】
贫血诊断优于RBC. Hb<120 g/L, （女，110 ）轻度， Hb<90 g/L, 中度 Hb<60 g/L, 重度 Hb<30 g/L, 极重度
【质量控制】
1.技术误差：稀释倍数尽量准确，分光光度计波、比色杯 光径要经常校正，以减少技术误差。 2.HiCN转化液：应置棕色瓶中，不得使用塑料容器，以防 CN-丢失。 3. HiCN参考液：是制备标准曲线、计算K值、校正仪器及 其他测定方法的关键物质，ICSH公布严格的 规格和制备方法。国产标准品已有供应
实验二 网织红细胞计数
三、方法
㈠ 玻片法 ⒈ 在洁净的玻片一端滴加１％的煌焦 油蓝溶液一小滴，待干。 ⒉ 取血液一大滴于煌焦蓝染料，迅速 以推片一角将其混合，然后将两玻片部 分粘合，待2~5分钟后推成血片。 ⒊ 用油镜计数1000个红细胞中的网织 红细胞数，求其百分数。 ⒋ 参考值：成人0.008~0.020，初生儿 0.020~0.060。
实验二
网织红细胞计数
一、目的
掌握网织红细胞活体染色原理、形 态学特点、计数方法。 熟悉正常参考值及临床意义。
二、原理
网织红细胞是未完全成熟的红细胞， 由于其胞浆中尚残有核糖体等嗜碱性 物质，经煌焦油蓝染液活体染色后， 可见有蓝绿色的点状，线状或网状结 构，网织红细胞点状结构越多，表示 细胞越年轻，反之则更近于成熟。
㈡ 试管法 ⒈ 小试管中放入１％的煌焦油蓝生理 盐水溶液２滴，加入血液２滴后混匀， 紧塞管口，待15分钟后混匀，倾出１滴 后推片。 ⒉ 待干后，低倍镜下选细胞分布均匀 ，着色清晰处，用目镜中加入网格计数 器或用纸圈缩小视野，计数1000个红细 胞中的网织红细胞数，除以1000，即得 网织红细胞数。
四、临床意义 ⒈ 通过网织红细胞计数，可判断骨髓 红细胞系统造血情况。溶血性贫血时， 网织红细胞高达0.20或更高。急性失血 后5~10天，网织红细胞达高峰，２周后 恢复正常。再生障碍胞可作为疗效观察的指标.
思考题 网织红细胞计数时为何强调活体染色？ 在辨别时应注意哪些事项？
2013血液检验复习指导：网织红细胞计数的检测方法
网织红细胞计数的检测方法：
（1）普通光学显微镜法：用煌焦油蓝等活体染色方法显示红细胞内网状结构，并在显微镜下计数1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百分比或分数数表示。
可分为试管法和玻片法，试管法操作简便，容易掌握，重复性较好，被列为手工网织红细胞计数的参考方法；玻片法取血量少，但染色时混合血液中的水分容易蒸发，造成染色时间偏短，结果偏低，因其携带方便，适宜于床边采血操作。
显微镜法受主观因素影响较多，且耗时费力。
（2）网织细胞计数仪法：用荧光染料使含RNA的网织红细胞着色，用流式细胞仪（FCM）计数并计算出网织红细胞的百分比，并客观地将网织红细胞分成高荧光强度网织红细胞（HFR）、中荧光强度网织红细胞（MFR）、低荧光强度网织红细胞（LFR），荧光强度越高，网织红细胞越幼稚。
这种分型对于化疗、放疗及移植患者治疗过程的监测、骨髓造血功能的分型有临床价值。
（3）血液分析仪法：最新型的血液分析仪，采用流式细胞法也可对Ret作分类计数，并提供与网织红细胞相关的多个参数，包括红细胞绝对值（Rct）、网织红细胞百分比（Rct%）、网织红细胞平均体积（MCVr）、网织红细胞血红蛋白分布宽度（HDWr）、网织红细胞血红蛋白浓度（HCR）、网织红细胞平均血红蛋白浓度（MCHCr）；低荧光强度Ret（LFR）、中荧光强度Ret （MFR）、高荧光强度Ret（HFR）、Ret成熟指数RMI 【RMI=（MFR+HFR）/LFR×100】。
网织红细胞计数流程
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在进行网织红细胞计数之前，需要进行一系列准备工作。
网织红细胞
Miller窥盘结构 示意图
ü计算
2．玻片法
ü 加染液：于载玻片的一端滴加10g/L煌焦油蓝乙醇溶液1 滴，自然干燥后备用。
ü 加血液：取血l滴在干燥的染料上，用推片角将血滴与 染料混匀，用另一载玻片盖在此载玻片上，使两玻片粘 合。
ü 制备涂片：5～10min后，移开上层玻片，取l小滴推制 成血涂片。
成人、儿童：0. 5℅～1.5℅。 新生儿：2.0℅～6.0℅。 成人绝对值：（24～84）×109/L。
（六）临床意义
网织红细胞计数是反映骨髓造血功能的重要 指标。 1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型 2．评价疗效 3．放疗和化疗的监测
常见网织红细胞参数及评价
小
网织红细胞活体染料的评价
2. 正确辨认网织红细胞 外周血液网织红细胞 主要为Ⅳ型，凡含有2个或2个以上颗粒、且颗粒必须 远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。
红细胞各种颗粒或包涵体的鉴别
3．网织红细胞计数方法
（1）Miller窥盘法：ICSH及我国卫生部临床检
验中心推荐使用Miller窥盘法（见下图）进行网
五、网织红细胞计数
网织红细胞（Ret，RET）是 介于晚幼红细胞和成熟红细胞之 间的过渡细胞，略大于成熟红细 胞，其胞质中残存的嗜碱性物质 RNA经碱性染料活体染色后，形 成蓝色或紫色的点粒状或丝网状 沉淀物。
ICSH将网织红细胞分为4型。
网织红细胞
网织红细胞分形及特征
（一）检测原理
1．普通显微镜法 活体染料的碱性着色基团可与 网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的 负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或 网状结构。
2．血液分析仪法 特殊染料与网织红细胞中RNA 结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占 成熟红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含 量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。
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为 了保 证参 考 方法 检 测 结 果 的 准 确 性 ,建 立 参 考 方 法 的实 验 室 必 须 与 其 他 参 考 实 验 室 进 行 结 果 比对 。
4 原理
网织 红 细胞 是未 完 全 成 熟 的红 细 胞 ,其 胞 质 中含 有 嗜碱 性 的 RNA物 质 ,经 碱 性 染 料 活 体 染 色 后 ,
他颗粒物质 。
7 实验器具
7.1 巴斯 德 移 液 管 。
7.2 75mm× 1omm的 玻璃试 管 。
7.3 载玻 片 (经 酸处 理 )。
8 操作过程
8.1 将 100uL过 滤后 的染液加 至 75mm× 10mmБайду номын сангаас 试 管 中 ,再 将 约 100uL的 全 血加至该试 管 中 ,加
盖并 充 分 混 匀后 ,在 室 温条 件 下染 色 3min~5min。 8.2 将 细胞 悬 液 重 新 混 匀 ,在 载玻 片上 推成 薄血膜 。血 膜 长 度 至少 有 2.5cm,血 膜 末 端 离 玻 片 的末 端
形 成 蓝 色 点粒状 或 丝 网状 结 构 。参 考 方 法 中 ,采 用显 微 镜 (明 场 或 相 差 )对 新 亚 甲蓝 活 体 染 色后 制 备 的 血涂 片进 行 网织 红细胞 计 数 ,确 定 网织 红 细胞 与 红 细胞 的 比值 后 ,使 用参 考 方 法 (ICSH,1994)计 数 红 细 胞 ,网 织 红 细胞 比值乘 以红 细胞计 数 结 果 ,即 为 网织 红 细胞 的绝 对 数 。网织 红 细胞 绝 对 数 的表达方 式 为 每 升 全 血 中含有 网织 红 细胞 的数量 。
数 乘 以网织 红细 胞 比值 。
7 g。 网织 红 细胞绝 对 数 检 测结 果 变 异 系数 的计 算 方 法 见公 式 (2): √CI斌2+CV巾 2
θ。4 计数 红 细胞 的数 量 应 以能够获 得 满 意 的精 密 度 为标 准 (见 表 D。
9.5 成 熟 红 细胞 和 网织 红 细胞要 分 别 记 录 ,网 织 红 细胞 的 比值 ('p)可 用公 式 (1)计 算 :
矽=
… … … … … (O
9.6 网织 红 细胞 绝对 数 为 每 升全 血 中所 含 的 网织 红 细 胞 数 。该 值 等 于用 参 考 方 法 计 数 出 的红 细 胞 总
5 血液标本 的要求
5.1 血液标 本 的采 集 应 使 用 真 空 采 血 管 或 注 射 器 采 血 后 注 人 含 抗 凝 剂 的 洁 净 试 管 中 ,要 注 意 防 止
溶血 。
5.2 使用 EDTA· K2抗 凝 剂 ,加 人 血 液后抗 凝 剂 的终浓度为 3.7umol/mL~5.4umol/mL(1.5mg/ mL~2.2mg/mL)。 5.3 标 本 采 集后要 求 在 4h内 进 行 染 色 。 5.4 检测 前 应 先 轻柔 地 颠 倒试 管 以混 匀 标 本 ,颠 倒 次 数 至少 为 8次 (试 管 的最 佳 颠 倒 次 数取 决 于试 管
液 (150mmol/L的 NaH2P0418mL,15o mmol/L的 N饧 HP0482mL)中 。 6.3 待染 料 溶解 后 ,必 须 充 分 混 匀并 过滤 ,然 后 将 其装 人 干净 的棕 色瓶 中 ,避 光保存 于 2℃ ~8℃ 条 件
下 ,染 液 可稳 定 1个 月 。
6.4 使 用 前 取适 量 的染 液 用 过滤 器 或 滤 纸 (要 求孔 径 为 11um)再 次进 行 过 滤 ,以 去 除沉 淀 的染 料 和 其
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网织红细胞计数 的参考方法
1 范围
本标 准规定 了网织 红 细 胞 计 数 参 考 方 法 的技术 要 求 。 本标 准适用 于建立并 运行 网织红 细胞计 数参考方法 的实验室 。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本 文件 。 2.1
参考 方 法 refereⅡ ce method 一种 可清楚 和准确 描述 的用 于特 定 检 测 的技 术 ,该 技术 要 有 依 据 ,可 提供 是 够 准 确 和精 密 的实 验数 据 以评 价 其他 实 验方 法 检测 结 果 的有 效 性 。若 有 决 定 性 方 法 ,参 考 方 法 的准 确 性 必 须 与 决 定 性 方 法 进 行 比较 ,并 且 须标 示 不 准 确 度 和不 精 密 度 。
的计 数 区域 内 ,然 后 在 油 镜 下 计数 血 膜 上 的红 细胞 ,如 出现 任 何 干 扰 因素 (女口疟 原 虫 、H⒍ nz小 体 ),则 不
适 用 于参 考方法 。
9 计数
9.1 要 获得 准确 的计 数 结 果 ,就 必须 把 每个 视野 中 的成 熟 红 细胞 和 网织 红 细胞 准确地 区分 开来 。要 求
至 少 有 1cm的 距 离 ,且 整 个 血膜 周 边 应 留有 光 滑 连 续 的 空 白 区 。可 用 热 吹 风 等 方 式 使 血 膜 快 速 干 燥
(避 免 温度 过 高或 时 间过 长 )。
8.3 在低倍 镜下 (总 的放 大倍 数 为 100倍 )先 浏 览 血 膜 的细胞 分 布 情 况 ,以 确认 细胞 均 匀地 分 布 于 适 当
的种 类 和容 积 大小 )。 血液 加人 抗 凝 管 后 ,管 内剩余 空 间应 至少 占试 管体 积 的 ⒛ %。
5.5 不 能使 用 旋 涡混 匀 器 和滚 轴 混 匀 器 。
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6 染料和染液配制
6.1 推荐 使 用 的染 料 为新 亚 甲蓝 。 6.2 染 液 的配制 方 法 :将 1。 Og新 亚 甲蓝 (染 料应 干 燥 )溶 解 于 100mL pH为 7。 4的 等 渗 磷 酸 盐 缓 冲
由两位经验丰富 的检验技 术人员通 过视频监测器或者两 人 共用一 台双 头双筒 的显微镜 同时计 数 。
9.2 每份 检测 标 本 都 应 选 用 3张 血涂 片进行计 数 。 9.3 计 数 过程 中视 野 的移 动顺 序 如 图 1所 示 。
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计效区域
囡 1 网织红细胞计数视野移动倾序示意 图