网织红细胞计数的参考方法
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3 总则
为 了保 证参 考 方法 检 测 结 果 的 准 确 性 ,建 立 参 考 方 法 的实 验 室 必 须 与 其 他 参 考 实 验 室 进 行 结 果 比对 。
4 原理
网织 红 细胞 是未 完 全 成 熟 的红 细 胞 ,其 胞 质 中含 有 嗜碱 性 的 RNA物 质 ,经 碱 性 染 料 活 体 染 色 后 ,
5 血液标本 的要求
5.1 血液标 本 的采 集 应 使 用 真 空 采 血 管 或 注 射 器 采 血 后 注 人 含 抗 凝 剂 的 洁 净 试 管 中 ,要 注 意 防 止
溶血 。
5.2 使用 EDTA· K2抗 凝 剂 ,加 人 血 液后抗 凝 剂 的终浓度为 3.7umol/mL~5.4umol/mL(1.5mg/ mL~2.2mg/mL)。 5.3 标 本 采 集后要 求 在 4h内 进 行 染 色 。 5.4 检测 前 应 先 轻柔 地 颠 倒试 管 以混 匀 标 本 ,颠 倒 次 数 至少 为 8次 (试 管 的最 佳 颠 倒 次 数取 决 于试 管
数 乘 以网织 红细 胞 比值 。
7 g。 网织 红 细胞绝 对 数 检 测结 果 变 异 系数 的计 算 方 法 见公 式 (2): √CI斌2+CV巾 2
Ws/T 346-ˉ 2011
网织红细胞计数 的参考方法
1 范围
本标 准规定 了网织 红 细 胞 计 数 参 考 方 法 的技术 要 求 。 本标 准适用 于建立并 运行 网织红 细胞计 数参考方法 的实验室 。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本 文件 。 2.1
参考 方 法 refereⅡ ce method 一种 可清楚 和准确 描述 的用 于特 定 检 测 的技 术 ,该 技术 要 有 依 据 ,可 提供 是 够 准 确 和精 密 的实 验数 据 以评 价 其他 实 验方 法 检测 结 果 的有 效 性 。若 有 决 定 性 方 法 ,参 考 方 法 的准 确 性 必 须 与 决 定 性 方 法 进 行 比较 ,并 且 须标 示 不 准 确 度 和不 精 密 度 。
的种 类 和容 积 大小 )。 血液 加人 抗 凝 管 后 ,管 内剩余 空 间应 至少 占试 管体 积 的 ⒛ %。
5.5 不 能使 用 旋 涡混 匀 器 和滚 轴 混 匀 器 。
Ws/T346-2011
6 染料和染液配制
6.1 推荐 使 用 的染 料 为新 亚 甲蓝 。 6.2 染 液 的配制 方 法 :将 1。 Og新 亚 甲蓝 (染 料应 干 燥 )溶 解 于 100mL pH为 7。 4的 等 渗 磷 酸 盐 缓 冲
液 (150mmol/L的 NaH2P0418mL,15o mmol/L的 N饧 HP0482mL)中 。 6.3 待染 料 溶解 后 ,必 须 充 分 混 匀并 过滤 ,然 后 将 其装 人 干净 的棕 色瓶 中 ,避 光保存 于 2℃ ~8℃ 条 件
下 ,染 液 可稳 定 1个 月 。
6.4 使 用 前 取适 量 的染 液 用 过滤 器 或 滤 纸 (要 求孔 径 为 11um)再 次进 行 过 滤 ,以 去 除沉 淀 的染 料 和 其
由两位经验丰富 的检验技 术人员通 过视频监测器或者两 人 共用一 台双 头双筒 的显微镜 同时计 数 。
9.2 每份 检测 标 本 都 应 选 用 3张 血涂 片进行计 数 。 9.3 计 数 过程 中视 野 的移 动顺 序 如 图 1所 示 。
Ws/T346-2011
பைடு நூலகம்
计效区域
囡 1 网织红细胞计数视野移动倾序示意 图
θ。4 计数 红 细胞 的数 量 应 以能够获 得 满 意 的精 密 度 为标 准 (见 表 D。
9.5 成 熟 红 细胞 和 网织 红 细胞要 分 别 记 录 ,网 织 红 细胞 的 比值 ('p)可 用公 式 (1)计 算 :
矽=
… … … … … (O
9.6 网织 红 细胞 绝对 数 为 每 升全 血 中所 含 的 网织 红 细 胞 数 。该 值 等 于用 参 考 方 法 计 数 出 的红 细 胞 总
形 成 蓝 色 点粒状 或 丝 网状 结 构 。参 考 方 法 中 ,采 用显 微 镜 (明 场 或 相 差 )对 新 亚 甲蓝 活 体 染 色后 制 备 的 血涂 片进 行 网织 红细胞 计 数 ,确 定 网织 红 细胞 与 红 细胞 的 比值 后 ,使 用参 考 方 法 (ICSH,1994)计 数 红 细 胞 ,网 织 红 细胞 比值乘 以红 细胞计 数 结 果 ,即 为 网织 红 细胞 的绝 对 数 。网织 红 细胞 绝 对 数 的表达方 式 为 每 升 全 血 中含有 网织 红 细胞 的数量 。
他颗粒物质 。
7 实验器具
7.1 巴斯 德 移 液 管 。
7.2 75mm× 1omm的 玻璃试 管 。
7.3 载玻 片 (经 酸处 理 )。
8 操作过程
8.1 将 100uL过 滤后 的染液加 至 75mm× 10mm的 试 管 中 ,再 将 约 100uL的 全 血加至该试 管 中 ,加
盖并 充 分 混 匀后 ,在 室 温条 件 下染 色 3min~5min。 8.2 将 细胞 悬 液 重 新 混 匀 ,在 载玻 片上 推成 薄血膜 。血 膜 长 度 至少 有 2.5cm,血 膜 末 端 离 玻 片 的末 端
至 少 有 1cm的 距 离 ,且 整 个 血膜 周 边 应 留有 光 滑 连 续 的 空 白 区 。可 用 热 吹 风 等 方 式 使 血 膜 快 速 干 燥
(避 免 温度 过 高或 时 间过 长 )。
8.3 在低倍 镜下 (总 的放 大倍 数 为 100倍 )先 浏 览 血 膜 的细胞 分 布 情 况 ,以 确认 细胞 均 匀地 分 布 于 适 当
的计 数 区域 内 ,然 后 在 油 镜 下 计数 血 膜 上 的红 细胞 ,如 出现 任 何 干 扰 因素 (女口疟 原 虫 、H⒍ nz小 体 ),则 不
适 用 于参 考方法 。
9 计数
9.1 要 获得 准确 的计 数 结 果 ,就 必须 把 每个 视野 中 的成 熟 红 细胞 和 网织 红 细胞 准确地 区分 开来 。要 求
为 了保 证参 考 方法 检 测 结 果 的 准 确 性 ,建 立 参 考 方 法 的实 验 室 必 须 与 其 他 参 考 实 验 室 进 行 结 果 比对 。
4 原理
网织 红 细胞 是未 完 全 成 熟 的红 细 胞 ,其 胞 质 中含 有 嗜碱 性 的 RNA物 质 ,经 碱 性 染 料 活 体 染 色 后 ,
5 血液标本 的要求
5.1 血液标 本 的采 集 应 使 用 真 空 采 血 管 或 注 射 器 采 血 后 注 人 含 抗 凝 剂 的 洁 净 试 管 中 ,要 注 意 防 止
溶血 。
5.2 使用 EDTA· K2抗 凝 剂 ,加 人 血 液后抗 凝 剂 的终浓度为 3.7umol/mL~5.4umol/mL(1.5mg/ mL~2.2mg/mL)。 5.3 标 本 采 集后要 求 在 4h内 进 行 染 色 。 5.4 检测 前 应 先 轻柔 地 颠 倒试 管 以混 匀 标 本 ,颠 倒 次 数 至少 为 8次 (试 管 的最 佳 颠 倒 次 数取 决 于试 管
数 乘 以网织 红细 胞 比值 。
7 g。 网织 红 细胞绝 对 数 检 测结 果 变 异 系数 的计 算 方 法 见公 式 (2): √CI斌2+CV巾 2
Ws/T 346-ˉ 2011
网织红细胞计数 的参考方法
1 范围
本标 准规定 了网织 红 细 胞 计 数 参 考 方 法 的技术 要 求 。 本标 准适用 于建立并 运行 网织红 细胞计 数参考方法 的实验室 。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本 文件 。 2.1
参考 方 法 refereⅡ ce method 一种 可清楚 和准确 描述 的用 于特 定 检 测 的技 术 ,该 技术 要 有 依 据 ,可 提供 是 够 准 确 和精 密 的实 验数 据 以评 价 其他 实 验方 法 检测 结 果 的有 效 性 。若 有 决 定 性 方 法 ,参 考 方 法 的准 确 性 必 须 与 决 定 性 方 法 进 行 比较 ,并 且 须标 示 不 准 确 度 和不 精 密 度 。
的种 类 和容 积 大小 )。 血液 加人 抗 凝 管 后 ,管 内剩余 空 间应 至少 占试 管体 积 的 ⒛ %。
5.5 不 能使 用 旋 涡混 匀 器 和滚 轴 混 匀 器 。
Ws/T346-2011
6 染料和染液配制
6.1 推荐 使 用 的染 料 为新 亚 甲蓝 。 6.2 染 液 的配制 方 法 :将 1。 Og新 亚 甲蓝 (染 料应 干 燥 )溶 解 于 100mL pH为 7。 4的 等 渗 磷 酸 盐 缓 冲
液 (150mmol/L的 NaH2P0418mL,15o mmol/L的 N饧 HP0482mL)中 。 6.3 待染 料 溶解 后 ,必 须 充 分 混 匀并 过滤 ,然 后 将 其装 人 干净 的棕 色瓶 中 ,避 光保存 于 2℃ ~8℃ 条 件
下 ,染 液 可稳 定 1个 月 。
6.4 使 用 前 取适 量 的染 液 用 过滤 器 或 滤 纸 (要 求孔 径 为 11um)再 次进 行 过 滤 ,以 去 除沉 淀 的染 料 和 其
由两位经验丰富 的检验技 术人员通 过视频监测器或者两 人 共用一 台双 头双筒 的显微镜 同时计 数 。
9.2 每份 检测 标 本 都 应 选 用 3张 血涂 片进行计 数 。 9.3 计 数 过程 中视 野 的移 动顺 序 如 图 1所 示 。
Ws/T346-2011
பைடு நூலகம்
计效区域
囡 1 网织红细胞计数视野移动倾序示意 图
θ。4 计数 红 细胞 的数 量 应 以能够获 得 满 意 的精 密 度 为标 准 (见 表 D。
9.5 成 熟 红 细胞 和 网织 红 细胞要 分 别 记 录 ,网 织 红 细胞 的 比值 ('p)可 用公 式 (1)计 算 :
矽=
… … … … … (O
9.6 网织 红 细胞 绝对 数 为 每 升全 血 中所 含 的 网织 红 细 胞 数 。该 值 等 于用 参 考 方 法 计 数 出 的红 细 胞 总
形 成 蓝 色 点粒状 或 丝 网状 结 构 。参 考 方 法 中 ,采 用显 微 镜 (明 场 或 相 差 )对 新 亚 甲蓝 活 体 染 色后 制 备 的 血涂 片进 行 网织 红细胞 计 数 ,确 定 网织 红 细胞 与 红 细胞 的 比值 后 ,使 用参 考 方 法 (ICSH,1994)计 数 红 细 胞 ,网 织 红 细胞 比值乘 以红 细胞计 数 结 果 ,即 为 网织 红 细胞 的绝 对 数 。网织 红 细胞 绝 对 数 的表达方 式 为 每 升 全 血 中含有 网织 红 细胞 的数量 。
他颗粒物质 。
7 实验器具
7.1 巴斯 德 移 液 管 。
7.2 75mm× 1omm的 玻璃试 管 。
7.3 载玻 片 (经 酸处 理 )。
8 操作过程
8.1 将 100uL过 滤后 的染液加 至 75mm× 10mm的 试 管 中 ,再 将 约 100uL的 全 血加至该试 管 中 ,加
盖并 充 分 混 匀后 ,在 室 温条 件 下染 色 3min~5min。 8.2 将 细胞 悬 液 重 新 混 匀 ,在 载玻 片上 推成 薄血膜 。血 膜 长 度 至少 有 2.5cm,血 膜 末 端 离 玻 片 的末 端
至 少 有 1cm的 距 离 ,且 整 个 血膜 周 边 应 留有 光 滑 连 续 的 空 白 区 。可 用 热 吹 风 等 方 式 使 血 膜 快 速 干 燥
(避 免 温度 过 高或 时 间过 长 )。
8.3 在低倍 镜下 (总 的放 大倍 数 为 100倍 )先 浏 览 血 膜 的细胞 分 布 情 况 ,以 确认 细胞 均 匀地 分 布 于 适 当
的计 数 区域 内 ,然 后 在 油 镜 下 计数 血 膜 上 的红 细胞 ,如 出现 任 何 干 扰 因素 (女口疟 原 虫 、H⒍ nz小 体 ),则 不
适 用 于参 考方法 。
9 计数
9.1 要 获得 准确 的计 数 结 果 ,就 必须 把 每个 视野 中 的成 熟 红 细胞 和 网织 红 细胞 准确地 区分 开来 。要 求