网织红计数的方法与原理

2.2显微镜计数法（玻片法、试管法和Miller窥盘计数 法） 。
.试管法
1.取小试管滴加2滴10g/L的煌焦油蓝生理盐水，混 匀；
2.加等量（2滴）血液（末梢血或EDTA-K2抗凝静脉 血），混匀；
3.置37℃静置15-20Min后，取一滴制成玻片； 4.油镜下至少计数1000个红细胞中网织红细胞数； 5.计算：网织红细胞=计数1000个红细胞中的网织红
嗜碱性物质少，呈 主要存在与外周血 分散的细颗粒，短 中 丝状
2 检测原理及方法
2.1检测原理
网织红细胞的核糖核酸以弥散胶体状态存在。常 规细胞染色法在涂片及染色过程中对细胞进行了 固定，使网织红细胞的核酸物质即使着色也难于 在普通显微镜下识别。Ret须经活体染色或荧光染 色后才可用显微镜识别或经仪器计算分离。 因此就有两大类计数方法：显微镜计数法和仪器 计数法。
4．在低倍镜下选择红细胞分布均匀，网织 红细胞着色较好的部位，按一定顺序移动 视野，用油镜计数大方格内的网织红细胞 数，同时计数小方格内的红细胞数。压线 细胞计数：数上不数下，数左不数右
5.当小方格内计数的红细胞达到>=111时， 即相当于至少观察了1000个红细胞，记录 在此过程中计数到的所有网织红细胞数
6．计算：网织红细胞百分数=大方格内的 网织红细胞数÷（小方格内的红细胞数 ×9 ）×100%
7.报告方式：百分数（%）或绝对值（个/L）
网织红细胞绝对值=红细胞浓度数（ 1012 /L） ×网织红细胞百分数
2.4仪器法 包括流式细胞仪法、网织红细胞计 数仪法和血液分析仪法
网织红细胞计数仪法：根据荧光强度对RNA进 行定量分析，精确计数网织红细胞占成熟红细 胞的百分数（Ret%），可将Ret分为 HFR,MFR,LFR三类,见下图：
ICSH根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将 Ret分为4型：
分型
形态特征
正常存在部位
Ⅰ型（丝球型） Ⅱ型（网型） Ⅲ型（破网型） Ⅳ型（点粒型）
RBC几乎被网织物 仅在正常骨髓 充满
位于RBC中央、线 大量存在与骨髓， 团样，结构松散 外周血中很难见到
网状结构稀少，呈 少量存在与外周血 不规则点状排列 中
网织红细胞绝对数： 成人和儿童：（24~84）×109 /L
6.临床意义
6.1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型 6.2. 评价疗效 6.3. 放疗和化疗的监测
3.方法学评价
检测方法
评价
普通显微镜法 玻片法 试管法
简便、成本低，可直观细胞形 态；影响因素多，重复性差
水份易蒸发，染色时间短，结 果偏低
易掌握，重复性好，易复查
Miller窥盘计数法 仪器法
规范计算区域，减少了实验误 差，ICSH推荐方法
检测细胞多，精密度高，与手 工法相关性好，易标准化，仪 器贵；出现Howell-jolly小体， 有核红细胞，巨大血小板可是 结果假性增高。
4质量控制
4.1显微镜计数法：影响因素有操作人员对网织红 细胞的识别能力，血涂片质量好坏，计数红细胞 数量，计数方法等；Miller窥盘计数网织红细胞 误差可减小。 4.2仪器法：出现Howell-jolly小体，有核红细胞， 巨大血小板可是结果假性增高。
5参考值
网织红细胞百分数： 成人和儿童：0.005~0.025； 新生儿：0.02~0.06
Fra Baidu bibliotek网织红细胞计数
马强虎
网织红细胞计数
1 概念、分型及形态特征 2 检测原理及方法 3 方法学评价 4 质量控制 5 参考值 6 临床意义
1 概念、分型及形态特征
1.1概念：
网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间 的过渡阶段细胞，略大于成熟红细胞，直径 8.0~9.5um，其胞质中残存的嗜碱性物质核糖核酸 （RNA）源自有核红细胞，嗜碱性物质RNA经碱 性染料（煌焦油蓝或新亚甲蓝等）活体染色，形 成蓝色或紫色的点粒状或丝网状结构沉淀物，故 称作网织红细胞。
网织红细胞自骨髓释放到外周血后仍具有合成血红蛋白
的能力约1~2d后，其核算物质消失殆尽，过渡为成熟红 细胞。
晚幼红细胞
网织红细胞
成熟红细胞
1.2分型及形态特征： 在红细胞发育过程中，RNA含量有明显的规律 性变化，即有原始阶段较为丰富，然后逐渐减
低，至细胞完全成熟后消失或接近消失，即红 细胞中网线状结构越多，表示细胞越幼稚。
细胞数÷1000 ×100%
网织红细胞
2.3 Miller窥盘计数法（ICSH推荐使用的Ret显微镜 计数法）
1．标本采集：真空采血管或普通空针采静脉血， 用EDTA-K2抗凝（1.5~2.2mg/ml）
2．标本处理：同试管法 3将Miller窥盘置于目镜内
直径19mm，厚1mm的圆形玻璃