荧光效率仪使用方法

植物发出的荧光强度随时间而变化， 植物发出的荧光强度随时间而变化 ， 在从暗适应到暴露在光下时， 在从暗适应到暴露在光下时 ， 荧光强度先 上升然后下降。 一般情况下， 刚暴露在光 上升然后下降 。 一般情况下 ， 下时的最低荧光定义为O点 下时的最低荧光定义为 点，荧光的最高峰 定义为P点，快速叶绿素荧光诱导动力学曲 定义为 点 线指的就是从O点到 点的荧光变化过程， 点到P点的荧光变化过程 线指的就是从 点到 点的荧光变化过程， 主要反映了PSII的原初光化学反应及光合 主要反映了 的原初光化学反应及光合 结构的结构和状态等的变化，而下降的
6. 按下探头一侧的遥控按钮，或从菜单中选 按下探头一侧的遥控按钮， 择测定功能进行测定。 择测定功能进行测定。 7. 待仪器测定完毕后（大约 秒），记录测定 待仪器测定完毕后（大约1秒），记录测定 数据的编号，然后点击OK。使用上下光标 数据的编号，然后点击 。 选择是否保存数据，数据保存完毕点击OK 选择是否保存数据，数据保存完毕点击 即可进入下一次测定。 即可进入下一次测定。
点击红圈中的按钮可看到O-J-I-P图
利用右上角“Plot settings”可设定一些参数。
如：X和Y轴范围
点击红圈中的图标
可以做出下图
ABS/ABS
TR/ABS ET/ABS
DI/ABS
090426-1-524
2 LM Scale: 1
并得到大量数据
五、应用实例
李鹏民, 高辉远, Reto J. Strasser (2005). 快速叶绿素荧光诱 导动力学分析在光合作用研究中的应用. 植物生理学与分 子生物学学报, 31 (6): 559-566 (重点参阅此文 重点参阅此文) 重点参阅此文 许珍, 李鹏民, 高辉远, 董树亭, 王空军, 张吉旺(2007). 玉米 不同朝向叶片原初光化学反应日变化的差异. 作物学报, 33(8): 1375-1379 孙山, 王少敏, 王家喜, 高辉远(2008). 黑暗中脱水对‘金太 阳’杏离体叶片和功能的影响. 园艺学报, 35(1): 1-6
4. 用配备的暗适应夹，对叶片进行充分的暗 用配备的暗适应夹， 适应。将叶片夹入暗适应夹中， 适应。将叶片夹入暗适应夹中，关闭适应 夹上的金属遮光片，暗适应10分钟以上 分钟以上。 夹上的金属遮光片，暗适应 分钟以上。
5. 将探头置于暗适应夹上的圆形槽之中，确 将探头置于暗适应夹上的圆形槽之中， 保探头与暗适应夹紧密接触，无光线进入。 保探头与暗适应夹紧密接触，无光线进入。 用手按紧探头与暗适应夹， 用手按紧探头与暗适应夹，拉开适应夹上 的金属遮光片。 的金属遮光片。
Fluorescence Raw Curv es 2000
2 1800 3 4 5 1 1600
1400
Fluorescence [mV]
1200
1000
800
600
400
200 0.01
0.05
0.10 0.1
0.30 1
2.00 10
30.00 100 1000
Time [ms]
O点
J点
I点
P点
三、数据传输与保存
1. 将仪器与计算机连接，点击 将仪器与计算机连接，点击on/off打开仪器。 打开仪器。 打开仪器 2. 双击打开数据传输软件
出现下图
点击图片进入
从HPEA中传出数据
如果要输入的数 据是第100-200 据是第 应在First 个，应在 file中输入 中输入100， 中输入 ， 在Last file中输 中输 入200，然后点 ， 击Transfer。 。
二、Handy-PEA使用说明 使用说明
1. 确定 确定HPEA主机电量充足并且连接好探头。 主机电量充足并且连接好探头。 主机电量充足并且连接好探头 2. 从菜单中选择协议 从菜单中选择协议(Protocol )选项（屏幕 选项（ 选项 ID#12）。应该有 个空的协议位置和 个默 ）。应该有 个空的协议位置和1个默 ）。应该有5个空的协议位置和 认的协议位置， 认的协议位置，按OK键，选择默认协议。 键 选择默认协议。 3. 按上下键，选择时间设定项 按上下键，选择时间设定项(Duration setting)，按OK键确认。键入所需的时间 键确认。 ， 键确认 选择范围： ～ 键结束。 （选择范围：1～300秒），按OK键结束。 秒），按 键结束 用同样的方法设定光源的强度为 3000mol.m-2.s-1。
打开文件后，点击下图中的“大脑”图标
工具栏功能增加，变为
选中待处理的数据
如果要保存数据，点击“Tools”
出现下图
点击上图中的红圈处的下拉箭头，选择 “MS-Excel File”
点击“YES”
选择路径，保存文件。用Excel可打开文件
如果想进一步看数据之间的差异，选择不 同的模式处理你的数据，具体可供选择的 有如下红色圆圈中的模式：
Handy-PEA 和 BiolyzerHP3 使用方法
崔国瑞
一、快速叶绿素荧光诱导动力学曲线 1. 简介
将暗适应的绿色植物或含有叶绿素的 部分组织突然暴露在可见光下之后就会观 察到，植物绿色组织发出一种暗红色， 察到，植物绿色组织发出一种暗红色，强 度不断变化的荧光， 度不断变化的荧光，荧光随时间变化的曲 线称为叶绿素荧光诱导动力学曲线。 线称为叶绿素荧光诱导动力学曲线。
双击打开 BiolyzerHP3 分析软件
点击close
点击图片
点击
选择文件
注意，此处可能出现错误！ 正确如下，可点击“是”
错误如下，出现原因是：测定数据存在异 常数值，在传输软件HPEA中将异常数值删 除即可。
用HPEA传输软件打开出现错误的文件，选 中异常数值，右键点击Cut selected lines即 可，然后再次保存数据。
以上是一些中文应用实例，可用于入门学 以上是一些中文应用实例， 更多应用实例可根据需要自行查阅。 习。更多应用实例可根据需要自行查阅。
结 语
以上是对荧光效率仪的简单介绍，还有 很多功能有待大家在使用过程中去开发和 利用。 由于它具有获得信息量大、操作简便、 易于重复等特点，所以是深入研究光合作 用原初反应的一种有力而便捷的工具。
的电子用于固定 的电子用于固定CO2或其它途径。在此基础 或其它途径。 上发展起来的数据处理称为“ 上发展起来的数据处理称为“JIP-test”。 。 JIP-test为我们提供了被测样品材料的大量 为我们提供了被测样品材料的大量 信息。快速叶绿素荧光诱导动力学曲线包 信息。 含丰富和复杂的信息。 含丰富和复杂的信息。
的信息（Force et al，2003；Lazár， 的信息（ ， ； ， 2006），通过对曲线荧光参数的分析，可 ），通过对曲线荧光参数的分析 ），通过对曲线荧光参数的分析， 以知道植物不同发育时期光合结构的变化。 以知道植物不同发育时期光合结构的变化。 为了能更好地反映动力学曲线和被测 样品材料的关系， 样品材料的关系，Strasser和Strasser 和 （1995）以生物膜能量流动为基础，通过 ）以生物膜能量流动为基础， 计算能量流和能量比率来衡量在给定物流 状态下样品材料内部变化， 状态下样品材料内部变化，建立了高度简
传输完毕，点击“Close”
保存数据
保存文件，自定义文件名
点击OK，完成数据保存。
在对话框中 输入描述数 据的字符， 据的字符， 字符不超过 250个即可。 个即可。 个即可
如何打开保存文件？打开传输软件，点击
在文件夹中找到目标文件，打开即可
点击OK，即可打开文件查看数据。
四、BiolyzerHP3 使用说明
息，如O-P变化过程中的另外两个拐点（J 变化过程中的另外两个拐点（ 变化过程中的另外两个拐点 点和I点）。从照光后的 从照光后的10 到 点和 点）。从照光后的 s到5 min内不 内不 同时间的荧光信号都能被按时记录。 同时间的荧光信号都能被按时记录。在对 快速叶绿素荧光诱导动力学曲线作图时， 快速叶绿素荧光诱导动力学曲线作图时， 为了更好地观察J点和 点和I点 结果得到O-J-I为了更好地观察 点和 点，结果得到 P诱导曲线。 诱导曲线。 诱导曲线 植物快速叶绿素荧光诱导曲线中包含 着大量关于PSII反应中心原初光化学反应 着大量关于 反应中心原初光化学反应
化的能量流动模型图。依照能量流动模型， 化的能量流动模型图。依照能量流动模型， 天线色素（ 天线色素（Chl）吸收的能量（ABS）的一 ）吸收的能量（ ） 部分以热能和荧光（ ）的形式耗散掉， 部分以热能和荧光（F）的形式耗散掉，另 一部分则被反应中心（RC，在JIP-test中 一部分则被反应中心（ ， 中 RC指有活性的反应中心）所捕获（TR）， 指有活性的反应中心） 指有活性的反应中心 所捕获（ ）， 在反应中心激发能被转化为还原能， 在反应中心激发能被转化为还原能，将QA 还原成Q 后者又可以被重新氧化， 还原成 A-，后者又可以被重新氧化，从而 产生电子传递（ ）， ），把传递 产生电子传递（ET），把传递
参考文献
Force L, Critchley C, van Rensen JJS. 2003. New fluorescence parameters for monitoring photosynthesis in plants. Photosynth Res, 78: 17~33 Krause GH, Weis E. 1991. Chlorophyll fluorescence and photosynthesis: the basics. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol, 42: 313~349 Lazár D. 2006. The polyphasic chlorophyll a fluorescence rise measured under high intensity of exciting light. Functional Plant Biology, 33: 9~30 Strasser BJ, Strasser RJ. 1995. Measuring fast fluorescence transients to address environmental questions: the JIP-test. In: Mathis P (ed) Photosynthesis: from Lingt to Biosphere. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, 5: 977~980