PCR技术论文
PCR技术在分子生物学研究中的应用
PCR技术在分子生物学研究中的应用PCR（聚合酶链反应）技术是一种常用于分子生物学研究中的重要工具，它能够在体外复制和放大特定DNA序列。
PCR技术的应用广泛，涉及到基因检测、疾病诊断、基因工程、进化研究等领域。
本文将重点介绍PCR技术在分子生物学研究中的应用和意义。
首先，PCR技术在基因检测和疾病诊断中起着关键作用。
通过PCR技术，可以扩增特定的基因片段，并通过对扩增产物的分析来确定特定基因的存在与否。
这对于一些遗传疾病的诊断具有重要意义。
例如，在肿瘤学研究中，往往需要检测一些特定的突变基因，以确定患者是否患有某种类型的癌症。
通过PCR技术，可以迅速、准确地检测出特定的突变基因，从而对疾病进行确诊。
其次，PCR技术在基因工程领域的应用非常广泛。
基因工程是通过改变生物体内的基因组成来获得特定的功能。
通过PCR技术，可以迅速扩增需要的基因片段，并将其插入到目标生物体中，从而达到改变其基因组成的目的。
例如，在农业领域，通过插入某些耐逆性基因，可以使作物更加抗旱、抗虫害；在医学领域，可以通过插入某些治疗性基因，来治疗一些遗传疾病。
PCR技术的高效、高特异性，使得基因工程领域的研究更加便捷和高效。
此外，PCR技术还在进化研究中发挥着重要的作用。
通过PCR技术，可以从不同物种的DNA中扩增出特定的基因片段，比如核糖体RNA基因。
通过对这些基因片段的比对和分析，可以研究不同物种之间的进化关系和亲缘关系。
这对于了解物种的起源、演化以及物种间的亲缘关系具有重要意义。
PCR技术的高灵敏度和高特异性，使得这项研究变得更加容易和高效。
最后，PCR技术也在病毒学研究中发挥着重要的作用。
病毒是一类非常微小的生物体，其中的基因组相对较小。
通过PCR技术，可以快速、准确地扩增出病毒的基因组，从而研究其结构、功能和传播机制。
此外，PCR技术还可以用于病毒的诊断和监测。
通过扩增病毒的特定基因片段，可以迅速确定病毒类型，并对其传播进行监测和控制。
《与人遗传病相关的DNA重复序列PCR条件优化及遗传不稳定性的研究》范文
《与人遗传病相关的DNA重复序列PCR条件优化及遗传不稳定性的研究》篇一一、引言随着人类基因组学的深入研究，遗传性疾病逐渐成为了科学研究与临床实践的重要关注点。
遗传病与人类DNA中的特定重复序列有密切的关系。
其中，遗传不稳定性的问题尤为重要，涉及遗传物质的稳定性及可能引起的各种遗传病。
本篇研究论文主要探讨了与人遗传病相关的DNA重复序列PCR条件优化及遗传不稳定性的研究。
二、DNA重复序列PCR条件优化1. 引言在遗传性疾病的研究中，PCR（聚合酶链式反应）技术是常用的分子生物学技术之一，用于检测和分析DNA中的重复序列。
然而，由于DNA重复序列的特殊性，PCR反应条件的优化变得尤为重要。
2. PCR条件优化策略首先，通过生物信息学的方法对DNA重复序列进行分析，明确其结构和特征。
在此基础上，设计特异性引物，优化PCR反应体系中的各组分浓度，包括模板DNA、引物、dNTPs、缓冲液等。
同时，针对不同的重复序列类型，调整PCR反应的温度和时间等参数。
3. 实验方法与结果采用梯度PCR、实时荧光定量PCR等方法，对不同条件下的PCR反应进行优化。
实验结果显示，在特定条件下，PCR的特异性、灵敏度和可重复性均得到显著提高。
这为后续的遗传不稳定性的研究提供了可靠的实验方法。
三、遗传不稳定性的研究1. 遗传不稳定性的定义与特点遗传不稳定性是指基因组中遗传物质的改变和不稳定现象，包括基因突变、染色体变异等。
这些变化可能导致遗传性疾病的发生和发展。
2. 遗传不稳定性与DNA重复序列的关系研究表明，DNA重复序列的异常扩增、缩短或重组等变异可能与遗传不稳定性密切相关。
因此，本部分研究重点探讨DNA 重复序列变异与遗传不稳定性的关系及其可能的致病机制。
3. 研究方法与结果采用细胞遗传学、分子生物学等方法，对不同类型遗传病患者的DNA样本进行检测和分析。
实验结果显示，在部分患者中存在DNA重复序列的异常变异，这些变异与遗传不稳定性密切相关。
生物技术本科毕业论文pcr方法在apoe基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用
湖北中医药大学本科生毕业论文题目：PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用姓名：学号：专业：生物技术年级：2008级实习单位：武汉大学心血管病研究所指导老师：完成日期：2012 年5 月1 日PCR方法在ApoE基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用作者肖明瑶指导者张艳摘要目的为ApoE基因敲除鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。
方法设计两对引物扩增野生型ApoE基因和ApoE缺陷突变基因的DNA片段，用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度，然后用PCR鉴定方案检测小鼠基因型并将所得基因型结果与已经过经典的Southern blot方法检测得到的基因型结果比较。
结果野生型仅在155 bp处有一条条带，突变纯舍子仅在245 bp处有一条条带，杂合子则在155和245bp处出现两条条带。
用PCR方法获得的ApoE基因分析结果与经典的Southern blot方法获得的结果完全一致。
结论用PCR方法分析ApoE基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。
关键词聚合酶链反应基因型基因打靶载脂蛋白EGenotype identification of ApoE Gene Knockout Mice withPolymerase Chain ReactionObjective This study was to explore a simple and quick polymerase chain reaction（PCR）method for genotyping of ApoE knockout mice.Method Two pairs of primers were designed to amplify genomic DNA fragment of wild-type ApoE gene and the same region on ApoE targeting veceor respectively.A gradient PCR strategy was used to test the best annealing temperature. Results A 155bp band was found in wild-type ApoE mice,a 245 bp band in homozygous mutated ApoE mice and both bands in hetemzygous mice.The genotyping results were completely coincided with those from typical Southern blot. Conclusion PCR is a simple,fast and practical method for the genotyping of ApoE gene knockout mice.Key words Poiymerase Chain Reaction genotype gene targeting ApoE载脂蛋白(apolipoprotein，ApoE)是清除乳糜微粒和极低密度脂蛋白的受体的配体，因此，缺乏ApoE则会导致血液循环中富含胆同醇的物质积累而更加容易引起动脉粥样硬化(atl-rosclerosis，AS)病灶形成。
PCR论文
聚合酶链式反应（PCR）技术研究新进展生物与环境工程系09生物技术姓名：张玉红学号：0902021020摘要聚合酶链式反应（PCR）在生命科学的研究领域已经得到了广泛的应用，文中对PCR技术的一些最新进展进行了简要的综述，其中包括定量PCR、纳米PCR、PCR芯片、原位PCR和免疫PCR的原理和应用。
关键词定量PCR 纳米PCR PCR芯片原位PCR 免疫PCR1983年Mullis等发明了一种特异性DNA体外扩增技术—聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR），PCR是一种在体外模拟体内DNA复制的核酸扩增技术，以少量的DNA 分子为模板，经过变性-退火-延伸的多次循环，已接近指数扩增的形式产生大量的目标DNA 分子。
短短几十年，该技术已经成为最常用、也最重要的分子生物学技术之一。
其应用范围从基本的基因扩增，扩展到基因克隆、基因改造、传染病源分析、遗传指纹鉴定等，甚至扩展到许多非生物领域。
在该领域衍生出的新方法更是层出不穷。
本文简述近几年在PCR方法研究领域中的新进展，这些新方法有望弥补现有技术的缺陷，使PCR反应在特异性、速度、定量的准确性等方面得到进一步优化和提高。
1 高灵敏度的定量PCR技术随着应用范围的不断扩大认识的不断加深，研究者们不再满足于仅仅得知某一特异的DNA序列是否存在，他们还希望对其进行精确的定量，因而基于经典PCR衍生出一种新技术—定量PCR（quantitative PCR），以其实时监测、定量准确、灵敏度高、反应后不用电泳检测等优点成为分子生物学研究中的重要工具。
在PCR扩增过程中，随循环扩增产物的不断增加，与扩增产物结合的染料所产生的荧光也不断增强，可通过荧光剂检测到的荧光强度来测定扩增物产量。
在扩增物产量一定的情况下，起始模板数越多，所需循环数就越少。
以循环数为横坐标，以一系列标准DNA的起始拷贝数的对数值为纵坐标，可得到一条标准曲线。
PCR论文
4个甘蔗品种叶绿体DNA trnL-F基因的扩增及序列分析1摘要：为了对广西地区4个甘蔗品种进行研究分析，对其进行了叶绿体DNA trnL-F基因的扩增以及对其产物直接测序分析。
结果表明：4个甘蔗品种的trnL-F基因测序结果，长度约在900bp，而变异范围为895bp到901bp。
聚类分析表明四个甘蔗样品分为两支，其中一支为桂南亚08/162，另一支包括桂南亚08/163、桂南亚08/194和新台糖22，其中桂南亚08/163和新台糖22的同源性最大，它们之间有相近的亲缘关系。
关键词：甘蔗；PCR扩增；cpDNA trnL-F基因；直接测序Gene Amplification and Sequencing Analysis of cpDNA trn L-F Fene infour Species of Ficus SaccharumAbstract：In order to the region of four sugarcane varieties of research and analysis in guangxi.The DNA trnL-F gene amplification of their products and direct sequencing analysis.Direct sequenced results show that their length averaged of the four kinds of trnL-F gene products was 900 bp,Variation range from 895bp to 901bp. Clustering results shows that the four sugarcane samples are divided into two groups.guinanya08/162 is a specific and three other sugar cane gather for another one.Among of them,xintaitang22 has higher kinship with guinanya08/163,has similar genetic relationship between them.Key words：Sugar cane ; PCR amplification ; cpDNA trnL-F gene; Direct sequencing甘蔗是一种一年生或多年生宿根热带和亚热带草本植物，属C4作物[1]。
PCR技术-实验操作论文
分子生物学和生化实验操作、设计与技能论文——PCR技术一、原理聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA 片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。
因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：1.模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR 扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2.模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3.引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
二、最新进展数字PCR（Digital PCR-dPCR）技术是一种新的核酸检测和定量方法，与传统定量PCR （qPCR）技术不同，数字PCR采用绝对定量的方式，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数。
由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性，dPCR迅速得到广泛的应用，这项技术在极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面变现出的优势已被普遍认可，而其在基因表达研究、microRNA研究、基因组拷贝数鉴定、癌症标志物稀有突变检测、致病微生物鉴定、转基因成分鉴定、NGS测序文库精确定量和结果验证等诸多方面具有的广阔应用前景已经受到越来越多的关注。
浅谈PCR技术的发展
浅谈PCR技术的发展与创新历程姓名：娄旭学号：201218010015088单位：植物逆境生物学研究中心PCR又称聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction )，是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。
它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判断。
PCR的问世，引起了一场分子生物学的革命，它大大加快了各种生物基因组结构研究的过程，有力地推动了现代生物学由细胞水平向分子水平、基因水平的发展，在分子生物学史上具有跨时代的意义。
首先，我们来了解一下PCR技术的基本原理。
PCR技术是一种选择性体外扩增DNA 片段的方法，其特异性是由两个人工合成的引物序列决定的。
所谓引物就是与待扩增DNA 片段两翼互补的寡核苷酸。
待扩增DNA模板加热变性后，两引物分别与两条DNA的两翼序列特异复性。
在合适的条件下，由DNA聚合酶催化引物介导的DNA合成，即引物的延伸。
一个变性，退火，延伸的过程就是一个循环，PCR就是在合适条件下这种循环的不断重复，每一循环所得到的产物又可作为下一循环的模板，以此类推，以后每一循环模板均比前一循环增加一倍，理论上讲，PCR扩增DNA产物是呈指数上升的。
简单来说，PCR就是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。
接下来，我们来了解一下PCR技术产生的背景。
20世纪70年代，“遗传工程”、“重组DNA”和“克隆”等科学技术进步产物的兴起，使生物技术产业炙手可热，它以效率和创造性为标志，为科学和商业提供了声望和商机，在科学进展与新产品开发和卫生保健行业发展直接挂钩的投资氛围下，分子生物学在美国蓬勃发展起来，也产生了孕育PCR技术的大环境：（1）“重组工程”和其他分子技术的重大突破；（2）具备了鼓励科研成果快速向应用问题转化的法规环境；（3）政府资助的研究与寻求投资的风险资本密切结合，为分子生物学的研究和开发奠定了雄厚的基础。
PCR技术论文【范本模板】
合肥学院HEFEI UNIVERSITY题目: PCR技术论文系别: 生物与环境工程系专业：_ 12生物工程2班学号： 1202012043 姓名：乐一鹏指导教师: 阚劲松时间： 2014年11月27日PCR技术论文摘要：PCR技术又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，是基因扩增技术的一次重大革新。
PCR技术可将极微量的靶DNA 特异地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力，能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品，因而此方法立即在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域广泛应用和迅速发展。
关键词:PCR原理、PCR过程及应用、关于PCR技术要点1、PCR技术的基本原理DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链.因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
PCR的过程类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性-—退火（复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA 的变性:模板DNA经加热至93℃左右维持一定时间,使含有所需扩增分析序列的靶DNA 双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链，然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物，即左右引物。
此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段，一般需20-30个碱基对，过少则难保持与DNA单链的结合;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板——引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，于72℃左右,以4种三磷酸脱氧核苷（dNTP)为反应原料,靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，按5’到3'方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链.重复循环变性-—退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链"，每次循环延伸的模板又增加1倍，亦即扩增DNA产物增加1倍，经反复循环,使靶DNA片段指数性扩增。
pcr扩增仪的原理特点应用论文
PCR扩增仪的原理特点应用论文引言PCR（Polymerase Chain Reaction）扩增技术是一种基于酶的体外DNA合成技术，是分子生物学领域中最重要的实验方法之一。
PCR扩增仪作为PCR技术的关键设备，在分子生物学和遗传学研究中发挥着重要作用。
本文将介绍PCR扩增仪的原理、特点和应用。
PCR扩增仪的原理PCR扩增仪基于聚合酶链式反应原理实现DNA的体外扩增。
聚合酶链式反应是一种无需模板DNA的体外复制方法，能够通过酶的作用，扩增特定的DNA序列。
PCR扩增仪主要包括以下三个步骤： 1. 变性（Denaturation）：将DNA模板加热至高温，使双链DNA解链成单链； 2. 退火（Annealing）：降低温度，使引物与模板DNA的单链进行互补结合； 3. 延伸（Extension）：在合适的温度下，聚合酶作用下，引物在模板DNA上延伸合成新的DNA链。
通过不断重复这三个步骤，可以在短时间内扩增特定DNA序列。
PCR扩增仪通过精确控制温度和时间，实现PCR扩增反应的自动化、高效化。
PCR扩增仪的特点PCR扩增仪具有以下特点： - 精确控制温度：PCR扩增仪能够精确控制反应体系的温度，在不同步骤之间快速切换，满足PCR反应的温度要求。
- 可编程控制：PCR扩增仪通常配备可编程控制器，用户可以根据需要设置不同的温度和时间参数，满足不同扩增反应的要求。
- 高温均匀性：PCR扩增仪内部采用特殊的加热系统和温度传感器，能够实现高温均匀性，确保PCR反应的稳定性和可靠性。
- 自动化操作：PCR扩增仪具有自动化的操作功能，可以自动完成变性、退火、延伸等步骤，无需手动干预，提高实验效率。
- 安全性：PCR扩增仪在设计上考虑了安全因素，如过高温度时的自动停止功能，防止设备和实验物品损坏。
- 小型便携：PCR扩增仪通常具有小型便携的特点，方便携带和移动，适用于实验室和野外等不同环境。
PCR扩增仪的应用PCR扩增仪在分子生物学和遗传学研究中具有广泛的应用。
PCR技术介绍范文
PCR技术介绍范文PCR（聚合酶链式反应）是一种应用广泛的分子生物学技术，通过扩增目标DNA序列从而大量产生该DNA分子，以便于后续的研究和分析。
PCR技术的原理是在体外重复进行DNA的复制和扩增，使得从一小段目标DNA序列扩增为数以亿计的复制体。
PCR技术迅速发展并广泛应用于基因测序、基因突变检测、遗传性疾病诊断、DNA指纹鉴定等领域。
PCR的原理基于DNA的双链结构和核酸酶解作用。
PCR反应中需要用到模板DNA、引物和聚合酶。
PCR反应一般分为三个步骤：变性、退火、延伸。
首先，通过一段高温（通常为94-98℃）对DNA进行变性，将其双链解开。
然后，降温至50-65℃，使引物与DNA模板序列杂交，引物的序列分别与目标DNA序列的两端互补。
接下来，在35-75℃左右的适温下，聚合酶开始合成新的DNA链，利用杂交在模板DNA上定位的引物作为启动物。
延伸过程中，引物和聚合酶依次结合模板DNA的杂交部位，并在每个引物的5'末端合成新的DNA链。
这个循环反复进行，每一轮产生的DNA 数量比前一轮多一倍。
经过30-40轮循环后，产生的DNA分子数量就足够可检测和分析。
PCR技术有很多不同的变种，根据应用需要可以进行相应的改进和优化。
其中，标准PCR是最常见和最基础的PCR技术。
实时荧光PCR则通过在PCR反应中加入荧光染料，实时监测PCR产物的积累，从而获得实时的扩增数据，具有高灵敏度和快速分析的优势。
逆转录PCR是从RNA模板合成DNA的一种PCR技术，常用于分析基因表达和检测RNA病毒。
多重PCR 技术可以同时扩增多个目标序列，用于多位点基因突变检测和检验分型。
病毒检测PCR是利用PCR来检测病毒和病毒相关基因的存在和数量，常用于病毒感染的诊断。
PCR技术的应用广泛而多样。
在基因测序中，PCR技术可以用来扩增需要测序的DNA片段，从而减少样本需求和提高测序效率。
遗传性疾病诊断中，PCR可以用于检测特定基因的突变和变异，从而帮助确定疾病的遗传基础。
临床检验中PCR技术应用论文
临床检验中PCR技术的应用【中图分类号】r446.33【文献标识码】a【文章编号】1672-3783（2012）10-0134-01医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代实验诊断技术。
60年代dna双螺旋结构及半保留复制模式的出现，70年代基因重组及体外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展。
特别是1985年mullis发明了聚合酶链式反应（pcr）技术，使医学界真正兴起了基因诊断技术热，成为现代医学发展的又一里程碑。
用于临床检验的pcr技术与经典的pcr反应在操作上稍有区别，有其自己的特色。
一般在样品处理上，多采用非离子去污剂一次加热处理，这种方法对dna纯化有限，但适应临床微量、快速的特点。
另外pcr反应体系中各组成成份往往都预分装到反应管中，既减少操作者的工作强度而且也减少了污染的机会，具有极高的使用价值。
pcr检测的临床应用范围：用于疾病的早期诊断，疾病的鉴别诊断，疾病的病因确定，药物疗效的评价，治疗效果的评价，治愈标准的确定。
通常用pcr法检测血清中的乙肝病毒。
pcr法检测乙肝的优势表现在：①早期诊断，因为pcr扩增极其敏感，理论上可检出100cid/ml 乙肝病毒的患者血清，在感染潜伏期即可被pcr法检出。
②对低持续感染乙肝病人的诊断，有些乙肝病人体内的病毒长期低复制感染，血清病毒浓度极低，一般酶标试剂无法检出，可以用pcr法检出。
③疗效跟踪及病程判断，因为pcr能半定量检测乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其数量多少的最直接指标。
在治疗过程中通过监测血清或白细胞中病毒基因存在与否及其动态变化即能准确地了解病情。
丙型肝炎病毒在血清中的浓度很低，丙肝病毒的分离尚未成功。
目前用于丙肝病毒检验的方法主要是elisa法测定血清中的hcv抗体。
由于hcv尚无法分离纯化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，这些人工抗原与天然病毒抗原有一定的区别，理论上是存在假阳性或假阴性。
学科论文~PCR技术的研究发展及其广泛应用
PCR技术的研究发展及其广泛应用贾金凤（哈师大生命科学与技术学院，哈尔滨，150025）摘要：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）简称PCR 技术，是一种体外酶促合成, 扩增特定DNA 片段的方法。
现已广泛应用于分子生物学等各个领域。
传统的PCR技术有许多的不足，所以多重PCR技术已经应运而生。
本文主要是就PCR技术的研究发展及其应用做简要介绍，并对其未来的进步与改革提出展望。
关键词：PCR；多重荧光PCR；应用；前景随着生物技术的发展，以物种间基因差异为基础的分子学鉴定方法成为研技术究的热点。
主要原因是: ①DNA 比蛋白质的耐热性强，高温处理过的食品中仍能提取出小片段的DNA; ②分子学鉴定方法不依赖于组织和细胞的类型; ③不同的基因片段进化效率不同，可以根据实验目的选择不同的目的基因进行研究;④DNA 比蛋白质具有更高的种间多态性，有利于品种鉴定。
传统PCR技术最早于1985年由美国的K array 等创立并由美国Cetus公司开发。
其基本原理是将待扩增的DNA置于高温下使之解链，人工合成的两个寡核苷引物在低温下分别与目的片段两侧的两条链互补结合；DNA聚合酶在72℃将单核酸从引物的3’端开始掺入，沿模板5’→3’端方向延伸，合成DNA的新互补链。
行这种变性、退火和延伸反应循环，可使两引物限定范围内的DNA序列以指数形式扩增。
但随着科技的发展，PCR技术也在进行着不断的完善。
多重PCR( Multiplex Polymerase Chain Reaction，MPCR)技术是在常规PCR 基础上发展起来的新技术，它是在同一个反应体系中加入一对以上引物，分别扩增不同的模板，得到不同的目的片段。
这种方法既保留了常规PCR 方法的特异性、敏感性，又减少了操作步骤及试剂用量，可以在同一反应中检测多种致病菌的特异基因。
利用一次多重反应，可同时检测、鉴别出多种病原体。
不论在致病微生物引起的传染病诊断方面，还是在环境中致病微生物的检验领域，多重PCR 技术都具有较广阔的应用前景，在临床混合感染的鉴别诊断上具有独特的优势和极高的实用价值。
医学检验技术专业优秀毕业论文范本荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究
医学检验技术专业优秀毕业论文范本荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究在医学检验技术专业中，荧光定量PCR技术被广泛应用于病原微生物的检测。
本文将探讨荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用，并提供一份优秀毕业论文范本供参考。
一、引言随着医学科技的不断进步，病原微生物的准确检测对于疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。
荧光定量PCR技术作为一种高灵敏度、高特异性的检测方法，被广泛应用于病原微生物的快速检测和定量分析。
二、荧光定量PCR技术概述荧光定量PCR技术是PCR技术的一种改进和升级，它结合了PCR扩增和荧光探针技术的优势。
通过引入特定的荧光探针，可以实现对PCR产物的实时监测和定量分析，从而提高了检测的准确性和灵敏度。
三、荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究1. 病原微生物的筛查和鉴定荧光定量PCR技术可以通过引入特定的引物和探针，快速筛查和鉴定病原微生物。
例如，在流行病学调查中，可以利用荧光定量PCR技术迅速检测出特定的病原微生物，并对其进行定量分析，为后续的疫情防控提供科学依据。
2. 药物耐药基因的检测病原微生物的耐药性是制约抗生素治疗疗效的重要因素。
荧光定量PCR技术可以检测和定量分析病原微生物耐药基因的存在和表达水平，从而为制定个体化的治疗方案提供重要参考。
3. 感染病的早期诊断许多感染疾病在早期症状不明显，传统的检测方法往往需要较长时间才能得出结果。
而荧光定量PCR技术具有高灵敏度和快速性的优势，可以在早期对患者进行感染病的检测和诊断，有助于及时采取有效的治疗措施。
四、结论荧光定量PCR技术作为一种高灵敏度、高特异性的检测方法，在病原微生物的检测中具有广泛的应用前景。
其在筛查和鉴定病原微生物、检测药物耐药基因和早期诊断感染病等方面表现出巨大的优势，为疾病的预防和治疗提供了重要的支持和依据。
附：医学检验技术专业优秀毕业论文范本论文题目：荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用研究摘要：本研究旨在探索荧光定量PCR技术在病原微生物检测中的应用，并通过实验验证了其在病原微生物鉴定和药物耐药基因检测方面的准确性和可行性。
PCR技术的研究
PCR技术发展与应用的研究进展摘要：聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)是最常用的分子生物学技术之一，通过变性、退火和延伸的循环来完成核酸分子的大量扩增。
定量PCR技术是克服了原有的PCR技术存在的不足，能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等，快速PCR技术快速PCR在保证PCR反应特异性、灵敏性和保真度的前提下，在更短时间内完成对核酸分子的扩增。
近年来已经开展了许多这方面的研究工作，本文就定量PCR 技术、快速PCR技术作一综述，以便更好地理解及应用这项技术。
关键字：定量PCR；竞争性PCR；荧光PCR；快速PCR1.前言聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术由于简便易行、灵敏度高等优点，该技术被广泛应用于基础研究。
但是，由于传统的PCR技术不能准确定量，且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点，使其在临床上的应用受到限制[1]。
鉴于此，对PCR产物进行准确定量便成为迫切的需要。
几经探索，先后出现了多种定量PCR (quantitative PCR，Q-PCR)方法，其中结果较为可靠的是竞争性PCR和荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR)。
随着生命科学和医学检测的不断发展，人们越来越希望在保证PCR反应特异性、灵敏性、保真度的同时，能够尽量缩短反应的时间，即实现快速PCR(Rapid PCR or Fast PCR)。
快速PCR技术不仅可使样品在有限的时间内可以尽快得到扩增，而且可以显著增加可检测的样品数量，显然，在大批量样本检测和传染病快速诊断等方面将会有重要的应用前景。
现将定量PCR技术、快速PCR技术研究情况作一综述作简要综述。
2.定量PCR技术定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。
广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。
Long Range PCR技术的方法学研究与初步应用
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｗｅ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ＰＣＲ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ，ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ
ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒｓ ｕｓｅｄ，ｔｈｅ Ｍ９２＋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ
３０ｓｅｃ，ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｔｅｍｐｒａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎｎｅａｌｉｎｇ－ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｔ ａｂｏｕｔ ６８。Ｃ，ｔｈｅ
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pcr技术论文
pcr技术论文有些网友觉得pcr技术论文难写，可能是因为没有思路，所以小编为大家带来了相关的例文，希望能帮到大家!PCR技术的研究与现状分析篇一摘要：PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。
因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，该技术已经广泛地应用于水产、微生物检测、临床微生物、基因表达、肿瘤免疫、微小残留病变的检测，DNA拷贝数的测量、基因组变异和多态性等许多方面。
本文主要介绍4种PCR技术及其在各个领域的应用现状。
关键词：PCR技术;分类;研究现状;应用;Research and Application Status of PCR TechnologyClass 1 Bio-engineering 10 Student: Lao Yangyan Student ID: 1031250019 Tutor: Wei Dongmei Abstract: PCR is an in vitro enzymatic synthesis，amplification of specific DNA fragment. Because of its high-strength specificity and sensitivity，detection speed and good accuracy，it has been widely applied in many fields such as the aquatic，microbial detection，clinical microbiology，gene expression，tumor immunology，detect ion of minimal residual lesion，measurement of DNA copy number，genome mutation，polymorphism and so on. This article summarize 4 kinds of PCR technology，with its application status is analysed.Keywords: PCR technology;Category;Progress research;Application引言聚合酶链反应( PCR) 技术问世20多年以来, 已经在生物学研究领域内得到了巨大的发展并不断的完善, 不仅广泛应用在基础研究领域, 在疾病诊断等方面也有了越来越广泛深入的研究和应用。
pcr技术应用研究进展(综述)2000字
目录一、概述二、PCR技术的发展历程三、PCR技术的原理四、PCR技术的应用及研究进展1. 医学领域2. 生物学领域3. 法医学领域4. 食品安全领域5. 环境监测领域五、PCR技术存在的问题及展望一、概述PCR（Polymerase Ch本人n Reaction）聚合酶链式反应技术是一种通过酶解反应，精确复制DNA片段的重要实验技术。
PCR技术的发明是生物学领域的重大突破，它不仅在基因工程、医学、生物科学等领域有着广泛的应用，也对人类社会的发展产生了重大影响。
二、PCR技术的发展历程PCR技术最早由美国生物化学家凯瑟琳·福尔和基里·穆利斯共同发明于1983年，他们首先提出了PCR的理论基础。
此后，美国科学家卡里·墨利斯在1985年发表了PCR技术的具体操作方法，从而为其在实验室中的应用奠定了基础。
随着PCR技术的不断改进和完善，其应用领域也不断扩展，成为现代生命科学中不可或缺的重要技术手段之一。
三、PCR技术的原理PCR技术是一种通过酶反应合成DNA的技术，其原理主要包括以下几个步骤：1. 双链DNA的变性：将待扩增的DNA双链在高温下变性，得到两条单链DNA。
2. 引物结合：将两个引物结合到待扩增的DNA的两条单链上。
3. DNA合成：通过DNA聚合酶的作用，使引物逐渐向前延伸，合成新的DNA链。
通过上述步骤，可以在短时间内迅速扩增出大量特定的DNA片段。
四、PCR技术的应用及研究进展PCR技术在医学、生物学、法医学、食品安全、环境监测等众多领域都发挥着重要作用，并且不断展现出新的应用前景。
1. 医学领域PCR技术在医学领域有着广泛的应用，如临床诊断、疾病预防、药物研发等方面。
利用PCR技术可以快速、准确地检测出病原体的存在，对临床诊断和治疗起到了重要的辅助作用。
2. 生物学领域在生物学领域，PCR技术被用于基因突变分析、基因表达分析、DNA 指纹鉴定等方面，为研究者提供了一种便捷、高效的实验手段，推动了生物学领域的发展。
关于PCR技术及其应用实例和前景
PCR技术及其应用实例和前景检验0905郭媛媛PCR是我们研究分子生物学的重要方法和工具，随着医学科技的不断发展，这种技术越来越被人们看重，越来越多的应用到我们的科技研究之中，作为医学检验工作者，这种技术也是我们必须掌握的从这篇文章中让我们了解一下它在实践之中的前景。
摘要：PCR (ploymerse chain reaction)技术[1]，即聚合酶链反应技术，又称基因体外扩增技术或和核酸体外扩增技术，利用两种与相反链杂交并利用附着于目标DNA两端的寡核苷酸引物在高温(95°C)使目标DNA片断的DNA双链变性，分解为单链，在较低温度(37-63°C)与引物退火，然后变温到72°C左右。
在耐高温DNA聚合物酶的作用下引物被沿样板DNA单链延伸合成互补链，然后有变性→退火→延伸反复进行。
引物大大过量，dNTP过量，酶在高温中是较稳定的，这样经过几十个循环，目标DNA片断就按2的n次方递增，用此法可以从mRNA中，cDNA库中扩出目标基因。
总之，生物体内核酸的复制是半保留复制，PCR技术就是在体外对此进行复制模拟。
关键词：PCR技术；DNA；应用；工程效益扩大1 引言人类利用微生物的实践具有悠久的历史，公元前，人类就已经利用天然的微生物（酶）生产奶酪和酒。
进入工业革命时代，人们开始对天然微生物进行筛选和诱变，生产某些简单的代谢产物，氨基酸，维生素和抗生素。
20世纪60年代至今，随着人类虽微生物认识的加深，DNA重组技术的出现，发酵技术的提高：更多的微生物可产生各种各样的抗生素，应用于医学微生物学(Medical Microbiology)中；更多微生物被发现可产生促生物质，有利于人和动植物的生长，对农业科学(Agriculture)有着极重要的支持；还有些微生物的代谢产物是重要的化工原料，加速了化工产业(Chemical Industry)的完善；再有些微生物被广泛应用于法医鉴定(Forenic)、医学(Medical Science)、环境监测(Environment Supervise)分子克隆(Member Clone)、序列分析(Alignment Analysis)、考古研究(Archaeology Search)等重要学科，具有广泛的应用前景，这就是我要介绍的PCR技术。
关于PCR总结范文
关于PCR总结范文PCR（聚合酶链式反应，Polymerase Chain Reaction）是一项用于使微量DNA扩增至大量可检测的技术。
该技术的发明者科里·穆利斯（Kary Mullis）于1983年获得了诺贝尔化学奖。
PCR在现代生物学和医学研究中被广泛应用，可以用于DNA克隆、基因测序、疾病诊断等领域。
PCR的原理是利用DNA聚合酶（DNA polymerase）在一系列特定的温度条件下反复复制目标DNA序列。
PCR需要以下三个基本组分：模板DNA （待扩增的目标DNA），引物（起始扩增的两端这一目标DNA的DNA片段），以及DNA聚合酶。
PCR过程分为三个步骤：变性、退火和扩增。
在变性步骤中，反应混合物先加热至95°C，使双链DNA分离为两个单链。
在退火步骤中，反应混合物降温至50-65°C，使合成的引物与目标DNA序列特异性结合。
在扩增步骤中，反应混合物被提高至72°C，此温度下，DNA聚合酶在引物的引导下开始合成新的DNA链，将目标DNA序列扩增。
PCR扩增的结果是指数级增加，可通过反应循环数目的增加而得到进一步的扩增。
通常，PCR需要25-40个循环来扩增数亿倍的DNA。
扩增得到的产物可以通过凝胶电泳等方法进行分离和检测。
当然，为了增强PCR的特异性，还可以使用特定的引物设计、引入缓冲液和共同扩增等技术。
PCR有许多应用。
首先，在基础研究中，PCR可以扩增特定的基因片段，方便DNA测序、基因重组和基因克隆等实验。
其次，在医学诊断中，PCR可用于检测特定的病原体DNA，并快速准确地诊断出感染性疾病。
此外，PCR还可用于判断基因突变、遗传疾病等。
此外，PCR还用于法医学、环境监测等领域，起到重要作用。
虽然PCR技术具有许多优势，如高灵敏度、高特异性和高复制效率等，但也存在一些局限。
首先，PCR扩增的结果可能受到一些因素的干扰，如酶抑制物质、未知污染物等，可能造成假阳性或假阴性结果。
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合肥学院HEFEI UNIVERSITY题目: PCR技术论文系别: 生物与环境工程系专业:_ 12生物工程2班学号: ********** **: *******: ***时间： 2014年11月27日PCR技术论文摘要：PCR技术又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，是基因扩增技术的一次重大革新。
PCR技术可将极微量的靶DNA 特异地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力，能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品，因而此方法立即在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域广泛应用和迅速发展。
关键词：PCR原理、PCR过程及应用、关于PCR技术要点1、PCR技术的基本原理DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。
因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
PCR的过程类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右维持一定时间，使含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链，然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物，即左右引物。
此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段，一般需20-30个碱基对，过少则难保持与DNA单链的结合；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以4种三磷酸脱氧核苷（dNTP）为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，按5'到3'方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，每次循环延伸的模板又增加1倍，亦即扩增DNA产物增加1倍，经反复循环，使靶DNA片段指数性扩增。
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
2、PCR技术的反应体系与反应条件（一）标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液 10ul4种dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA 0.1～2ugTaq DNA聚合酶 2.5uMg2+ 1.5mmol/L加双或三蒸水至 100ul（二）PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+（1）引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA 互补的程度。
理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。
ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
⑧引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
（2）酶及其浓度。
目前有两种Taq DNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。
催化一典型的PCR反应约需酶量2。
5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。
（3）dNTP的质量与浓度。
dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。
dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。
HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。
多次冻融会使dNTP降解。
在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。
浓度过低又会降低PCR产物的产量。
dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。
（4）模板(靶基因)核酸。
模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。
SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。
提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。
一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。
RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。
（5）Mg2+浓度。
Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。
Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。
（三）PCR反应条件的选择：PCR反应条件为温度、时间和循环次数。
温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。
在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。
对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。
①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。
一般情况下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性，若低于93℃则需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。
此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。
②退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。
变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。
由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。
退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。
对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。
引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度：Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T)复性温度=Tm值-(5～10℃)在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。
复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。
③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性：70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子70℃ 60核苷酸/S/酶分子55℃ 24核苷酸/S/酶分子高于90℃时， DNA合成几乎不能进行。
PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。
PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够的3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。
延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。
对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。
循环次数的设置：循环次数决定PCR扩增程度。
PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。
一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。
3、PCR反应的基本步骤标准的PCR过程分为三步：1。
DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。
2。
退火（复性）（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3。
延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP 为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。
现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。
4、PCR技术的应用PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速,应用之广泛,表明其具有强大的生命力。
近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途。
反向PCR反向PCR是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段。
实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引物进行PCR,其扩增产物将含有两引物外未知序列,从而对未知序进行分析研究。
不对称PCR不对称PCR是用不等量的一对引物,PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA)。