人类免疫缺陷病毒HIV-RNA核酸定量检测.docx
人类免疫缺陷病毒检验
人类免疫缺陷病毒检验人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency vi-rus，HIY）又称艾滋病毒，是获得性免疫缺陷综合征即艾滋病（acpuired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，属逆转录病毒科（retroviridae）的慢病毒（lentivinrs）亚科，形态为典型的D病毒，主要通过性传播途径、血液传播途径和母婴传播途径传播。
HIV有HIV-1和HIV-2两种类型，目前在世界广泛流行的是HIV-1型。
HIV基因有高度的变异性，目前在全球流行的HIV-1毒株已出现3个组，即M 组、O组和N组，其中M组又分为A到J十个基因型。
HIV-2是逆转录病毒中的另一个病毒，也可引起人患上艾滋病，但症状多较HIV-1引起的为轻，HIV-2主要在西非国家流行，其与HIV-1在血清学上有一定的交叉反应。
艾滋病是以机会感染及局部肿瘤为特点的致死性传染病。
截止2000年底，我国累计报告HIV/AIDS22517例（AIDS880例），死亡496例，估计实际感染人数远超过已发现的感染者人数，加强艾滋病的预防与控制是我国以及全世界面临的一个紧迫的问题。
1 样本采集1.1血清（浆）样本1.1.1抗原、抗体检测静脉采血，血液样品应在l2h内做到：①送到初筛实验室；②分离出血清；③装入一干净试管内，盖上试管盖；④按标准编号贴上标签。
分离出的血清应立即进行筛查实验。
若因故不能立即检测，应将血清放置－20℃低温保存；无条件时亦可放置4℃，但不得超过3d。
检测后的血清应于－20℃或更低温保存，以用于确认实验。
1.1.2核酸检测使用EDTA抗凝血浆标本，抗凝后6h内分离血浆；如使用血清标本，则需在2h内分离血清，标本的保存应在－70℃下，并避免反复冻融。
1.2全血标本全血标本主要用于提取基因组核酸和病毒核酸，静脉取血后可于4℃下短期保存，如用于提取病毒RNA，则应在取血后尽快提取。
人类免疫缺陷病毒抗体检测(乳胶法)
人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体检测(乳胶法)【样本要求】静脉采血后离心获得血清、血浆样本，不同的抗凝剂如柠檬酸钠，肝素钠，EDTA，草酸钠，枸橼酸钠的血浆标本均可，在2-8℃条件下可保存一周，长期保存需-20C冷冻，应避免反复冻融，发臭、溶血等异常样本请勿使用。
【检验方法】在进行检测前必须先完整阅读使用说明书，并将试剂、样本和缓冲液恢复至室温(20℃-30℃)1.从原包装铝箔袋中取出试剂。
2.将试剂放在干净的平台上，用一次性塑料吸管吸取1滴血清、血(25 Ul)于加样孔(S)中，随后加入1滴缓冲液(的40ul)，开始计时。
3.等待红色条管的出现，检测结果应在15-20分钟判读，20分钟后判读结果无效【检验结果的解释】阳性(+)：两条红色条出现。
一条带位于检测区内(T)，另一条带位于质控区内(C)。
阴性(-)：仅质控区(C)出现一条红色条，在检测区内(T)无红色条带出现。
无效:质控区(C)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂已变质损坏。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂新检测。
如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系【检验方法的局限性】1.本试剂仅用于体外诊断2.本试仅用于检测人血清、直浆样本，用其它样本或溶液检测的结果可能有误。
3.本试剂为定性检测。
无法确定样本中HIV抗体的水平。
4.本试剂仅用于HIV抗体初筛检测，HIV抗体确认应遵循相关法规和标准在有资质的HIV确认实验室进行。
5.阳性结果须经相关确证方法的确认或经过国家法定的其他方式处理。
6.受分析灵敏度所限，阴性结果不能完全排除艾滋病毒感染的可能性，可能系样本中抗体浓度低于本产品的灵敏度所致，对于有怀疑的结果建议采用灵数度更高的其他类方法进行复核。
HIV-1病毒载量试剂1技术参数
HIV-1病毒载量试剂1技术参数1.名称：人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）。
2.用途：用于定量检测人血浆中人类免疫缺陷病毒（1型）。
3.原理：应用实时荧光定量聚合酶链式反应原理。
4.检测项目：HIV-1RNA定量检测。
5.检测亚型：HIV-1M、O组。
6.检测方法：全自动核酸分离纯化，全自动核酸扩增和实时荧光PCR方法。
7.适用样品种类：非肝素抗凝血浆。
8.定量方式：内部标准品定量。
9.质控品：提供阴性、弱阳性、强阳性对照质控品。
10.技术要求：a.检测灵敏度：≤20copies/ml,置信度≥95%。
b.检测范围：20-1×107copies/ml。
c.检测特异性：100%。
d.重复性：CV值≤0.3log。
e.规格:48T/盒。
f.即开即用型液体试剂。
11.试剂储存条件：2-8℃保存。
12.试剂组份：包括核酸提取、纯化、扩增和检测的全部试剂。
13.抗污染方案：采用UNG酶防止PCR产物污染。
14.样品处理能力：可以同时进行检测1-72个样品15.备件：含完整实验过程中所需的相关耗材及洗液。
16.适用设备：适用于CobasAmpliprepCobasTaqman全自动病毒载量检测系统。
17.认证文件：中国医疗器械进口注册证等文件。
18.供货计划：按用户要求数量准时分批供货，试剂到货时有效期大于10个月。
HIV-1病毒载量试剂2技术参数1．名称：人类免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸（RNA）提取及检测试剂盒2．用途：用于定量检测人血浆中人类免疫缺陷病毒（1型）。
3．检测方法：应用RT-PCR和Real-time实时荧光定量检测技术HIV-1型各组病毒载量。
4．检测项目：HIV-1RNA定量检测。
5.检测亚型：HIV-1型M组(A-H)、O组、N组。
6.适用设备：m2000sp自动核酸提取仪，m2000rt实时荧光定量PCR仪; 7．定量方式：外部标准品定量8．技术要求8.1检测灵敏度:≤40copies/mL（0.6mL、1.0mL样本体系）8.2特异性：100%(95%CI99.28-100%)8.3检测范围:40-107copies/mL8.4适用样本种类:血浆(ACD-A或EDTA抗凝)8.5检测样本体积:可选0.2mL、0.5mL、0.6mL和1.0mL8.6检测方式:96孔PCR反应板8.7检测批量：一次检测批量可选24，48，72和968.8内测标准差(SD):≤0.25log copies/mL8.9内参要求：与样本一起提取和扩增，质控整个实验过程;9.认证文件：中国医疗器械进口注册证等文件。
全国人类免疫缺陷病毒检测技术规范(2023年修订版)
全国人类免疫缺陷病毒检测技术规范(2023年修订版)引言本文档是全国人类免疫缺陷病毒（HIV）检测技术规范的修订版，旨在规范全国范围内HIV检测的质量和准确性，以提高HIV 感染者的早期发现和治疗。
1. 范围本技术规范适用于全国范围内所有医疗机构、疾病预防控制中心、实验室等单位进行HIV检测。
2. 术语定义- HIV：Human Immunodeficiency Virus，人类免疫缺陷病毒。
- HIV抗体：人体对HIV感染产生的免疫反应所产生的抗体。
- HIV抗原：HIV感染人体内HIV病毒产生的抗原。
- HIV核酸：HIV病毒的遗传物质（RNA）。
3. 检测方法3.1 HIV抗体检测- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV抗体检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
3.2 HIV抗原检测- HIV抗原检测可作为HIV感染早期诊断的辅助方法。
- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV抗原检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
3.3 HIV核酸检测- HIV核酸检测可作为HIV感染确认和病毒负载监测的方法。
- 检测方法应使用经国家药品监督管理部门批准的HIV核酸检测试剂盒。
- 检测过程应严格按照检测试剂盒说明书进行操作。
- 检测结果应根据检测试剂盒说明书的判断标准进行解读。
4. 质量控制4.1 检测设备- 检测设备应符合国家标准和相关法规的要求。
- 设备应定期进行校准和维护，确保其准确性和稳定性。
4.2 检测人员- 检测人员应具备相关专业知识和技能，经过专业培训并持有相关资质证书。
- 检测人员应定期参加质量控制和技术培训，保持技术能力和水平。
4.3 质量控制物质- 检测过程中应使用经国家质量控制中心认证的质控物质，以保证检测结果的准确性和可靠性。
人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书
人类免疫缺陷病毒抗体定量测定作业指导书一、目的：规范人类免疫缺陷病毒抗体测定的标准操作程序，确保人类免疫缺陷病毒抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的人类免疫缺陷病毒抗体。
三、临床意义人类免疫缺陷病毒（俗称艾滋病病毒，英文名称是Human Immunodeficiency Virus，缩写为HIV）是一种能生存于人的血液中并攻击人体免疫系统的病毒。
HIV侵入人体后主要攻击的是一种带有CD4表面抗原的淋巴细胞（T4淋巴细胞），这种细胞是免疫系统的基本组成部分，HIV通过大量、不断地复制与释放，导致T4淋巴细胞大量死亡，使人体内T4淋巴细胞明显减少，感染者免疫功能遭到严重破坏，造成免疫缺陷，降低或失去对各种致病因素的抵抗能力，临床表现为各种机会性感染与肿瘤[1]。
有的发生神经系统病变或症状，可能与神经系统的机会性感染（弓形虫病、新隐球菌感染等）有关，同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。
最终，病人通常死于严重的感染和肿瘤[2]。
四、方法原理本试剂盒采用双抗原夹心法原理进行检测。
以HIV 抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5. 2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估
某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估李梅;王静【摘要】Objective To evaluate the variation and stability of a new domestic nucleic acid quantitative detec-tion kit for human immunodeficiency virus type 1( HIV-1) .Methods A total of 247 blood samples were detected by both the tested kit and the contrast kit approved by SFDA ,when different results were obtained ,the sample was re-examined with HIV-1 vrral load kit producted by Rochecompany .Results The results of 233 samples from the test-ed kit and the control kit were consistant ,and 14 samples were not consistent(8 samples were proved to be positive by the tested kit but to be negative by the control kit .Another 6 samples showed that the difference of the lg values between the two kits were more than 1) .The results weren't consistent reexamined by the revcew kit were in consis-tency with the results from the tested kit .The consistency of the evaluated kit with the control kit and the reexamined ki was 100% .There was a strong overall correlation of the test results between the two methods (r=0 .976 1) .Con-clusion High qualitative consistency and strong correlation between the tested kit and the control kit were found , and the tested kit showed the same sensitivity ,accuracy and consistency with the reexamined kit .%目的：对某国产人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）的临床应用性能进行评估。
人类免疫缺陷病毒(HIV) 检测
④检测时，先将硝基纤维素膜细条恢复室温，再与待检血清（用稀释 液稀释后）共同浸泡，37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑤取出硝基纤维素膜细条，用洗涤液洗涤5次，每次5min（用振荡摇 床）。 ⑥加酶标记抗人IgG 抗体，于37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑦洗涤同⑤。 ⑧加酶底物，显色10～20min。终止反应（放置于室温观察）。
第 4页
（1）ELISA 间接法检测HIV 抗体：将待测的血清稀释后按HIV 酶标诊断试剂盒的说明进行操作；该法的特异性和敏感性强， 操作简单、快速安全，比较适合大批量标本和筛选实验，但对 HIV 感染初期病人不能检测到抗体是其不足之处。
第 5页
（2）蛋白印迹试验：ELISA 法确诊的阳性标本应做蛋白印迹试 验以确证。
人类免疫缺陷病毒（HIV） 检测
第 1页
人类免疫缺陷病毒（HIV）是引起人类艾滋病（获得性免疫缺 陷综合征，AIDS）的病原体。
第 2页1.方法第 Nhomakorabea页有检测HIV 抗原和检测HIV 抗体两种。前者可用组织细胞培养 法、核酸检测法及免疫酶标法；后者有凝集试验、免疫荧光试 验、蛋白印迹试验及放射免疫试验和免疫酶标技术等。 目前世界上常用酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法作为经典筛 选试验，蛋白印迹试验作为确证试验。
第 12 页
谢谢大家！
第 13 页
第 10 页
（2）蛋白印迹试验：AIDS病人血清中的抗HIV 抗体与HIV的 多肽片段（外膜蛋白与核心蛋白）特异性结合后可形成多条蛋 白区带。强阳性反应显示HIV 几个基因组编码的全部蛋白带， 弱阳性反应显示两条或几条显色较弱的蛋白带，阴性反应则无 任何蛋白带显示。
第 11 页
3.注意事项 （1）使用公认的HIV 酶标诊断试剂盒，不同厂家的试剂盒有可 能操作有异，应严格按说明书操作；不同厂家的产品有不同的 阳性判断标准，应按说明书慎重判断。 （2）鉴于HIV 及有关试验过程的特殊危险性，应严格规范实验 室操作规程，增加试验结果的准确性；严格规范安全防范措施， 防止感染；阳性结果应重复试验。
国内某人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)核酸检测试剂盒的自动化应用性能评估
Ｈ ｅ ｎ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ， Ｈ ｅ ｎ ａ ｎ ４ ５ ０ ０ １ ６ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：０ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｖ ｌ ａ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ａ ｕ ｔ ｏ ｍ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｋ ｉ ｎ ｄ ｏ ｆ ｄ ｏ ｍｅ ｓ ｔ ｉ ｃ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ
・
３ ０ ５ ４。
中国卫生检验杂志
Hale Waihona Puke ２ ０ １ ５年 ９月第 ２ ５卷第 １ ８期
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ Ｌ ａ ｂ Ｔ ｅ ｃ ， Ｓ ｅ ｐ ． ２ ０ １ ５， Ｖ ｏ １ ．２ ５ ，Ｎ ｏ ．１ ８
・
实 验 研究 ・
国 内某 人 类 免 疫 缺 陷病 毒 Ｉ 型（ Ｈ Ｉ Ｖ一１ ） 核 酸 检测 试 剂 盒 的 自动 化 应 用性 能评估
Ｅｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈｅ ａ ｕｔ ｏ ｍａ ｔ ｉ ｃ ａ ｐｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ａ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｎｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｋｉ ｔ ｆ ｏ ｒ ＨＩ Ｖ － － １
HIV定量检测（病毒载量）
HIV定量检测（病毒载量）HIV载量人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）属于单股正链核糖核酸（RNA）逆转录病毒科慢病毒亚科，是艾滋病的主要病原体，主要传播途径为性传播、血液传播和母婴传播。
至今，艾滋病仍然是无有效疗法的致命性传染病。
HIV基因组是两条相同的正链RNA，每条RNA长约9.2-9.8kb。
HIV载量是指血浆中的病毒负荷，即体内复制的病毒的数量，它可以准确地反映血液中病毒的活跃程度。
病毒载量检测的重要性在艾滋病的预防过程中，艾滋病高危人群的诊断是“防艾”的关键环节。
血清中HIV RNA是病毒复制和艾滋病进程的确切标志。
所以血清中HIV RNA的检测已经成为诊断艾滋病的金标准方法，也是通过国家认证的临床PCR实验室常规检测项目之一，在艾滋病确诊、用药、疗效预判以及康复治疗过程中具有重要的指导意义。
检测HIV-1病毒载量可以监控和预测病程，指导艾滋病病人的HAART治疗，包括确定治疗时机、选择治疗方案、评价治疗效果；并且结合疾病临床症状和其他实验指标，还可用于早期感染的辅助诊断。
另外，检测血浆HIV-1病毒载量还可作为婴儿早期HIV感染的辅助诊断以及采供血机构样品的窗口期检测方法。
具体来说包括：⑴ 监测抗病毒药物治疗效果。
抗病毒药物治疗前后，定期病毒载量分析和监测，结合CD4+T淋巴细胞计数，有助于抗病毒药物治疗方案的确定和修改。
⑵ 监测疾病进展。
定期检测HIV-1病毒载量，有助于监测感染者和病人的病程变化，结合CD4+T淋巴细胞计数，为抗病毒药物治疗提供病毒学依据。
⑶ 诊断急性HIV-1感染。
针对HIV-1抗体筛查阴性、近期有流行病学史的个体，或确证结果不确定，核酸定量检测可用于诊断HIV-1急性期感染。
⑷ 确定HIV-1感染。
针对HIV-1抗体筛查阳性或确证结果不确定的个体，结合流行病、和临床病史和CD4+T淋巴细胞计数等，使用核酸定量检测帮助确定HIV-1感染。
人类免疫缺陷病毒
HIV-2和HIV-1的O组和N组主要局限于西 非等地。
变异性
*HIV的显著特点之一是它的高度 变异性，HIV的反转录酶无校正 功能、错配性高是导致HIV基因 频繁变异的重要因素。
单核细胞和巨噬细胞感染后不 被溶解，长期携带HIV，使病毒向其 他组织播散。
临床特点
*潜伏期长，大约10年左右。 *临床感染过程分为4个时期：
1.急性感染期：约2～3周 2.无症状潜伏期：10年左右 3.AIDS相关综合征：开始出现症状 4.免疫缺陷期：典型AIDS期——合 并机会致病菌感染和AIDS相关恶性肿瘤。
anti-retrovial therapy, HAART）。
鸡尾酒疗法
• 华裔科学家何大一发明的； • 两种核苷类药和一种非核苷类药 ； • 目前“鸡尾酒”可以控制病人体内
的HIV病毒，使得病人的免疫系统 有机会修复，恢复功能，但不能清 除或治愈疾病。
2.预防
研制安全、有效的HIV疫苗，但目前尚无有效疫苗上市。 ①普遍开展预防AIDS的宣传教育； ②建立全球和地区性HIV感染的监测网，及时掌握疫情； ③对献血、献器官、献精液者必须做HIV抗体检测； ④禁止共用注射器、注射针、牙刷和剃须刀等。 ⑤提倡安全性生活； ⑥HIV抗体阳性妇女，应避免怀孕或用母乳喂养婴儿等。
我国的传播特点
* 吸毒、性传播和采供血途径传播并存 * 经性传播途径呈上升趋势 * 自高危人群向普通人群扩散
致病机制
*主要感染细胞： CD4＋ T淋巴细胞、单核-巨噬细胞、树 突状细胞、神经细胞等。
*引起机体免疫系统的进行性损伤。
人类免疫缺陷病毒(I型)HIV-RNA核酸定量检测SOP
人类免疫缺陷病毒（I型）核酸定量检测系统标准操作程序1. 目的：规范超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒（HIV-I RNA）的检测过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 检测方法和原理2.1 检测方法：TaqMan探针荧光定量PCR法。
2.2 检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型）核算定量检测试剂盒（PCR-荧光法）采用核酸扩增技术，定量检测人血浆中HIV-I RNA。
该方法包括三个主要步骤：（1）样品制备以分离HIV-I RNA；（2）靶RNA的逆转录形成互补DNA（cDNA）；（3）靶（cDNA）的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。
3. 标本要求3.1 标本类型：血浆（EDTA抗凝）。
3.2 标本的采集与处理3.2.1 标本采集量：采集患者静脉血6 mL（EDTA抗凝真空采血管）。
3.2.2 标本处理：标本采集后应在2小时内送至实验室，实验室收到标本后在1小时内处理标本。
3.2.2.1签收：门诊、住院以及CDC标本签收条码，并做好相关登记工作。
3.2.2.2编号：对标本进行唯一编号，内容如下：“年月日6位数字+标本号3位数字”，例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为：“180101401”。
3.2.2.3离心：800-1600g,20min离心标本。
3.2.2.4标本保存：血浆在室温（25-30℃）最多存储1天；2-8℃最多存储6天；-20℃—-80℃可存储6周。
将待检血浆以2管每管1200 uL量存储于2.0mL戴螺旋盖的无菌聚丙烯管，在管壁编写如3.2.2.2的编号。
未检标本放置于专用样本盒中，冻存于-80 ℃冰箱。
已检血浆置-80ºC冰箱保存2个月，到期后按科室有关程序作废弃标本处理。
4.仪器和试剂4.2 试剂：（配套封闭试剂）4.2.1 试剂盒（包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR 检测试剂组分）保存于2-8℃环境下，有效期22个月。
人类免疫缺陷病毒抗体定量测定
一、目的：规范人类免疫缺陷病毒抗体测定的标准操作程序，确保人类免疫缺陷病毒抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的人类免疫缺陷病毒抗体。
三、临床意义人类免疫缺陷病毒（俗称艾滋病病毒，英文名称是Human Immunodeficiency Virus，缩写为HIV）是一种能生存于人的血液中并攻击人体免疫系统的病毒。
HIV侵入人体后主要攻击的是一种带有CD4表面抗原的淋巴细胞（T4淋巴细胞），这种细胞是免疫系统的基本组成部分，HIV通过大量、不断地复制与释放，导致T4淋巴细胞大量死亡，使人体内T4淋巴细胞明显减少，感染者免疫功能遭到严重破坏，造成免疫缺陷，降低或失去对各种致病因素的抵抗能力，临床表现为各种机会性感染与肿瘤[1]。
有的发生神经系统病变或症状，可能与神经系统的机会性感染（弓形虫病、新隐球菌感染等）有关，同时可能是亲神经型HIV毒株的直接作用造成的。
最终，病人通常死于严重的感染和肿瘤[2]。
四、方法原理本试剂盒采用双抗原夹心法原理进行检测。
以HIV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HIV抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HIV抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5. 2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。
5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明七、仪器与材料7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
人类免疫缺陷病毒I型HIVRNA核酸定量检测SOP
人类免疫缺陷病毒（I型）核酸定量检测系统标准操作程序1. 目的：规范超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒（HIV-I RNA）的检测过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 检测方法和原理2.1 检测方法：TaqMan探针荧光定量PCR法。
2.2 检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型）核算定量检测试剂盒（PCR-荧光法）采用核酸扩增技术，定量检测人血浆中HIV-I RNA。
该方法包括三个主要步骤：（1）样品制备以分离HIV-I RNA；（2）靶RNA的逆转录形成互补DNA（cDNA）；（3）靶（cDNA）的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。
3. 标本要求3.1 标本类型：血浆（EDTA抗凝）。
3.2 标本的采集与处理3.2.1 标本采集量：采集患者静脉血6 mL（EDTA抗凝真空采血管）。
3.2.2 标本处理：标本采集后应在2小时内送至实验室，实验室收到标本后在1小时内处理标本。
“年月日6位数字+标本号3位数字”，例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为：“”。
℃）最多存储1天；2-8℃最多存储6天；-20℃—-80℃℃冰箱。
已检血浆置-80oC 冰箱保存2个月，到期后按科室有关程序作废弃标本处理。
4.仪器和试剂4.2 试剂：（配套封闭试剂）4.2.1 试剂盒（包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR 检测试剂组分）保存于2-8℃环境下，有效期22个月。
℃条件下不超过30天。
4.2.4 主要组成成份：5.标准操作5.1 COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 的配置如下：6.2. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48上使用试剂及耗材的保存及注意事项：1). 所有试剂（HIV-I test试剂）2-8℃保存，即拿即用；2). 试剂启用后，可保存28 days (2-8℃)；3). 试剂启用后，在Cobas Ampliprep上累计使用时间最多64 hrs；4). CTM(-)阴性质控、L(+)弱阳性质控、 H(+)强阳性质控，使用后的废弃；5). 洗液2-30℃保存，打开后可使用28 days；6). 耗材（S-tube/样本条码/K-tip/K-tube/SPU）常温保存。
人免疫缺陷病毒抗体测定
人免疫缺陷病毒抗体测定1．样品的接收、登记和处理1.1 采血3-4ml，收集到促凝管中（可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝）1.2检查样品的状况，有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。
如果污染过重或者认为样品不能被接受，要将样品情况立即通知送样人。
1.3仔细核对样本与送检单,然后编号1.4样品为全血（抗凝），用3.000r/min离心15min，血清/血浆备用。
打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。
样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。
同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。
1.5 每天上午进行样品的检测。
节假日（短期1周内）进行检测的样品存放于2～8℃，需长期存放的样品，应置于-20℃以下。
需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。
2.检测方法和步骤2.1检测方法（一）酶联免疫吸附试验（ELISA）2.1.1 基本原理以珠海丽珠试剂股份有限公司的ELISA（双抗原夹心法）为例。
采用双抗原夹心ELISA方法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体。
在微孔条中预包被高纯度HIV（1+2）抗原，通过检品中抗HIV抗体桥连作用，与后面加入的HRP 标记抗原结合，HRP对底物TMB作用显色。
通过酶标仪检测吸光度（OD值）从而判定检品中是否存在抗HIV抗体。
2.1.2检测步骤实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18～23℃)，平衡30分钟后使用。
配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。
准备实验原始记录表2.1.3 实验操作2.1.3.1装好所需使用数目的孔条,每孔均加入50μl样品稀释液。
留一孔作空白对照,暂不加任何液体。
另设3个阴性对照孔，1个HIV-1阳性对照孔，若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。
2.1.3.2每孔加入50μl待检样品及对照（对照要后加），加样时吹打混匀则效果更佳。
人类免疫缺陷病毒1型RNA定量参考品的研制
人类免疫缺陷病毒1型RNA定量参考品的研制张春涛;宋爱京;李秀华;李娟;王佑春【期刊名称】《中华实验和临床病毒学杂志》【年(卷),期】2004(018)004【摘要】目的研制人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)RNA核酸国家参考品及制定相应标准.方法收集各地HIV感染者阳性血浆和HIV非感染者血浆,应用HIV、HCV 抗体和HBsAg检测试剂进行筛选,对HIV抗体筛查阳性者用新加坡Genelabs公司的HIV BLOT 2.2确证试剂进行确证.以世界卫生组织(WHO)推荐的HIVRNA标准品对国家HIV核酸参考品中定量样品进行标定,并对其稳定性进行研究.结果经过筛选,选出8份样品为阴性参考品,8份样品为阳性参考品,3份为定量参考品,6份为灵敏度参考品,5份为线性参考品.几次独立标定,得到定量参考品HIV RNA的国际单位(IU),其中b1～b3的国际单位的对数值在-x±s以内,表明结果可靠.稳定性实验数据表明,该核酸参考品在4℃以下可存放4 d.结论初步建立了HIV核酸参考品,这将对HIV核酸诊断试剂的质量评价提供重要依据.【总页数】4页(P321-324)【作者】张春涛;宋爱京;李秀华;李娟;王佑春【作者单位】100050,北京,中国药品生物制品检定所细胞室;100050,北京,中国药品生物制品检定所细胞室;100050,北京,中国药品生物制品检定所细胞室;100050,北京,中国药品生物制品检定所细胞室;100050,北京,中国药品生物制品检定所细胞室【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.原癌基因c-met mRNA实时荧光定量PCR参考标准的构建2.风疹病毒RNA TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法及参考标准的建立3.第二代HCV RNA国家参考品的研制4.不同部位的人类免疫缺陷病毒1型的RNA定量检测5.检测HCV RNA的PCR试剂质控试行参考品的建立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
人类免疫缺陷病毒（I 型）核酸定量检测系统标准操作程序1.目的：规范超敏 PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒（ HIV-I RNA）的检测过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2.检测方法和原理检测方法： TaqMan探针荧光定量PCR法。
检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型）核算定量检测试剂盒（PCR-荧光法）采用核酸扩增技术，定量检测人血浆中HIV-I RNA。
该方法包括三个主要步骤：（1）样品制备以分离HIV-I RNA；（ 2）靶 RNA的逆转录形成互补 DNA（ cDNA）；（ 3）靶（ cDNA）的 PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。
3.标本要求标本类型：血浆（EDTA抗凝）。
标本的采集与处理标本采集量：采集患者静脉血 6 mL（EDTA抗凝真空采血管）。
标本处理：标本采集后应在 2 小时内送至实验室，实验室收到标本后在 1 小时内处理标本。
签收：门诊、住院以及CDC标本签收条码，并做好相关登记工作。
编号：对标本进行唯一编号，内容如下：“年月日 6 位数字 +标本号 3 位数字”，例如2018年1 月 1 日收到一个 HIV-RNA 标本即编号为：“ 1”。
离心： 800-1600g,20min 离心标本。
标本保存：血浆在室温（ 25-30 ℃）最多存储 1 天； 2-8 ℃最多存储 6 天； -20 ℃— -80 ℃可存储6 周。
将待检血浆以 2 管每管 1200 uL 量存储于戴螺旋盖的无菌聚丙烯管，在管壁编写如的编号。
未检标本放置于专用样本盒中，冻存于-80 ℃冰箱。
已检血浆置-80oC 冰箱保存2 个月，到期后按科室有关程序作废弃标本处理。
4.仪器和试剂试剂：（配套封闭试剂）试剂盒（包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR 检测试剂组分）保存于2-8 ℃环境下，有效期22 个月。
试剂开瓶后，在室温条件下放置时间不应超过72 小时；2-8 ℃条件下不超过30 天。
主要组成成份：组份名称规格数量1000μL/1阴性质控品管质控品1000μL/1临界阳性质控品管1000μL/1强阳性质控品管HIV2CS148 测试1HIV2CS248 测试1HIV2CS348 测试1HIV2CS448 测试15. 标准操作COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 的配置如下：配置实验所需的架子和耗材相应位置COBAS AmpliPrep_ a. K-tubes 放在样本架上F-H COBASTaqMan 48 b.带有 K-tips的 K-tip 架M-Pc将带有样本或质控的S-tubes 放在样本架上F-Hd.带有 SPUs 的 SPU-架J-Le. CS1 放在一个试剂架Af. CS2, CS3, CS4放在一个试剂架B-Eg.将空的 K-carrier放在 K-carrier架上M-P样本核酸提取完成后：K-carrier上的K-tubes手工转移(M-P) . COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 上使用试剂及耗材的保存及注意事项：1).所有试剂（ HIV-I test试剂） 2- 8℃保存，即拿即用；2).试剂启用后，可保存28 days (2-8℃) ；3).试剂启用后，在 Cobas Ampliprep上累计使用时间最多64 hrs ；4). CTM(-) 阴性质控、 L(+) 弱阳性质控、 H(+) 强阳性质控，使用后的废弃；5).洗液 2- 30℃保存，打开后可使用28 days ；6).耗材（ S-tube/ 样本条码 /K-tip/K-tube/SPU）常温保存。
. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 上使用样本的保存及注意事项：1).需要的样本为血浆；2).血样在2～25℃下运输，24hrs 内 (HIV RNA) 收集出血浆 ( 室温 800-1600g 离心 20 分钟)；3). HIV RNA检测：血浆可在室温下(25- 30℃) 保存最多 1 天，在 2～8℃最多保存6 天，或者-20~- 80℃下长期保存，至少 6 周；4).血浆建议倒取 1100- 1200μL 进行保存；5).血浆冷冻时，最多冻融 5次不损失 HIV RNA。
. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 HBV DNA 定量检测操作流程：A仪器初始化及维护打开 COBAS AmpliPrep和COBASTaqMan 开关，等待仪器初始化完成，为A1stand-by状态登陆电脑及AMPLILINK 软件登陆 Windows? XP操作系统（User ID和password）A2a)双击桌面上 AMPLILINK 软件图标b) 登陆 AMPLILINK 软件（ User ID和password）A3通过软件 Status 界面检查洗液量是否足够，如不够需要更换新的洗液检查软件维护界面Due 按钮下列出的需要进行的维护内容，按照维护手册进行相A4应内容的维护工作， COBAS AmpliPrep 仪器自动进行系统初始化工作加载试剂将所有试验需要的试剂匣从2- 8°C冰箱拿出，立即放在试剂架上并放入COBASAmpliPrep仪器中，试验开始前在仪器上平衡至少30分钟。
不要将试剂匣放在仪B器外进行温度平衡，以免在试剂匣表面形成水凝结，造成条码的损坏。
如果在试剂匣表面有水凝结，不要对条码部位进行擦拭，以免损坏条码造成仪器无法对条码进行辨识。
将 CS1 试剂匣放在一个试剂架上，将试剂匣CS2, CS3 和 CS4 放于另一个试剂架B1上B2将放有 CS1的试剂架放入到 COBAS AmpliPrep 仪器中的 A位置将放有 CS2, CS3 和 CS4的试剂架放入到COBAS AmpliPrep 仪器中的 B、 C、 D、 E B3的任一位置C加载耗材注意：根据检测的样本数计算需要的COBASAmpliPrep试剂匣数目,样本处理单元 (SPU),样本管(S-tube),K- 枪头 (K-tips)和K-管 (K-tubes)的数量。
每个样本或质控分别需要一个 SPU,一个 S-tube,一个 K-tip和一个 K-tube。
加载样本处理单元(SPUs)计算需要 SPU数量，一个样本或质控需要一个SPU将SPUs 放入到 SPU 架中，向下压 SPU的边缘部分（不要碰到 S-tip 的部分）使 SPUC1 完全坐稳在 SPU架的底部确认 SPUs 正确的放入在 SPU 架中 ( 若 SPUs放置不正确，可能造成仪器运行中停止 )将 SPU 架放入到 COBAS AmpliPrep仪器的 J, K或 L位置使用 COBASTaqMan 48分析仪时，将 K-carriers放在 K-carrier架上，放在 COBAS C3AmpliPrep的 M, N, O或 P 位置C4加载 K-tip架于 COBAS AmpliPrep 上M, N, O或 P 位置D创建命令和加载样本样本架准备，将样本的条码夹放在样本架上相应有样本管(S-tube) 的地方将专用于质控的条码夹放在样本架上与阴性质控(-) C,弱阳性质控 L(+) 和强D1阳性质控相对应的地方注意对相应的质控使用正确的质控条码夹通过 AMPLILINK 软件创建命令（见下图）D2在软件orders界面下的Sample rack按钮下创建样本及质控的命令&选择相应的检测项目，并进行保存D3打印创建好的样本及质控工作表在生物安全柜中进行样本准备涡旋混匀样本及质控 3-5 秒，将 1000 μl 样本及质控品转移到相应的样本管D4S-tube 中；避免将颗粒或凝块状物质转移到样本管S-tube 中&装有样本及质控的样本管放到样本架相应的位置（与创建好的命令工作表中的D5位置一致）；确保质控条码上的 lot 号码与质控的 lot号码一致；确保相应的质控使用正确的质控条码夹；避免样本或质控污染样本管S-tube 的上部D6加载带有样本管的样本架于COBAS AmpliPrep 仪器的 F, G或H位置E开始运行 COBAS AmpliPrep 仪器在 AMPLILINK 软件上启动运行 COBAS AmpliPrepE1检查 Status界面下，确保没有样本、质控或试剂被锁住确保所有的样本和耗材都已加载到COBAS AmpliPrep中，点击 Start按钮COBAS AmpliPrep 仪器运行结束后，手工转移提取好的样本到COBAS TaqMan48 F中，应避免将所有提取好的样本及质控直接放置于日光或光源下F1检查 AMPLILINK 软件中可能显示的标记flags及错误信息F2在 COBASAmpliPrep 处理好的样本及质控必须在120 分钟内转移到 COBASTaqMan48 中开始反应，不要冷冻或在2- 8°C储存处理好的样本及质控。
F3丢弃 COBAS AmpliPrep仪器中的废物G加载处理好的样本及质控G1加载处理好的样本及质控到COBAS TaqMan 48 中–通过 K-carrier转移工具，手工转移带有 K-carrier的 K-carrier架到 COBAS TaqMan 48 中H开始运行 COBAS TaqManH1打开扩增仪的外部盖子，将 K-carrier放入到扩增模块中并关闭盖子，开始运行COBAS TaqMan 48I COBAS TaqMan 48 运行结束运行结束，打印结果报告I1检查结果中的标记 flags或错误信息接受结果，数据自动备份(archive)I2将检测完毕的 K-tubes从COBASTaqMan 48的废物盒中拿出，根据实验室规定进行相应处理或丢弃7.质量控制阴性质控品：必须产生“没有检测到目标”的结果。
如果有标记标为无效，那么整个批次都是无效的。
阳性质控品：阳性质控品的检测值应该落在其指定的范围内，如果一个或两个质控品标记表示无效，那么整个批次无效。
8. 结果报告批次可能包括有效和无效样品的结果，这取决于每个样品是否得到标记和/ 或注释。
样品结果解释如下：测定结果解释没有检测到目标HIV-I 的 CT值超出该检测的界限之上或者未能获得HIV-I 的CT值。
报告为“ HIV-I RNA not detected”。
<+01cp/mL计算所得的 cp /mL 结果低于该检测试剂检测限。
报告为“ <20cp /mL”≥+01 cp/mL 且≤ +07 cp/mL该区间为检测系统的线性范围>+07 cp /mL结果超出线性范围。
报告“ >+0 7 cp /mL”。