多糖的测定
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是一类重要的生物大分子,在生物体内发挥着重要的生物学功能,如能量储存和物质传递等。
由于多糖具有多种生物活性,在医学、食品、生物化学等领域都有广泛的应用。
准确测定多糖的含量对于科学研究和工业生产具有重要意义。
本文将综述几种常用的多糖含量测定方法,以期为相关领域的同行提供参考。
1. 酚-硫酸法酚-硫酸法是一种常用的多糖含量测定方法,其原理是将多糖与硫酸在酚存在下发生反应,生成紫蓝色的化合物,然后通过比色法测定色深与多糖含量的关系来确定多糖含量。
这种方法简单、快速、灵敏度高,适用于多种多糖的含量测定。
2. 高性能液相色谱法(HPLC)HPLC是一种在化学分离中广泛应用的方法,通过将样品溶解后注入色谱柱中,利用不同组分在色谱柱中的分配系数不同,使得组分在色谱柱中的停留时间不同,从而实现对不同组分的分离和测定。
HPLC方法具有高分辨率、高灵敏度和高准确性的特点,适用于各种多糖的含量测定。
3. 红外光谱法红外光谱法是一种通过测定物质在红外光谱区内的吸收峰来确定物质组成和含量的方法。
多糖分子中含有大量的羟基、甲基等官能团,这些官能团在红外光谱区内具有特征性吸收峰,通过测定这些吸收峰的强度来确定多糖的含量。
这种方法非常灵敏,并且不需要复杂的前处理步骤,适用于多种多糖的含量测定。
4. 显微镜观察法显微镜观察法是一种适用于纯度较高的多糖的含量测定方法,其原理是将多糖溶解后,通过显微镜观察多糖晶体形态来判断多糖的含量。
由于多糖的晶体结构与含量成正比,因此可以通过观察晶体的形态来判断多糖的含量。
这种方法简单、直观,并且不需要复杂的仪器设备,适用于一些实验室条件有限的情况。
多糖含量的测定方法
多糖含量的测定方法有多种,以下列举其中几种常用的方法: 1. 酚硫酸法:将样品与酚硫酸反应生成稳定的紫色化合物,通过测定紫色化合物的吸光度来确定多糖含量。
2. 蒽酮-硫酸法:样品经热水溶解后,乙醇沉淀,除去其他可溶性糖及杂质的干扰,用热水溶解沉淀物并稀释定容。
此法操作简便,测定速度快,可用于多糖的实时快速测定和定性分析。
3. 刚果红显色法:在一定条件下,刚果红显色剂能与乙酰甘露聚糖生成有色复合物,而不与麦芽糖糊精、蔗糖和葡萄糖等发生明显的显色反应。
由此可以建立定量分析芦荟多糖含量的刚果红显色分光光度法。
此外,还有其他方法如色谱法、光谱法等也可以用于多糖含量的测定。
具体使用哪种方法需要根据实验目的、样品性质和实验条件等因素进行选择。
多糖的测定
多糖含量测定
一、对照品溶液的制备
取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水溶解并定量制成每1ml中含90μg的溶液,即得。
二、标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.2ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml,分别置10ml具塞试管中,加水至1.0ml,精密加5%苯酚溶液1ml,摇匀,再精密加硫酸5ml,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,放入冰浴中冷却5分钟,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(附录 V A),在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。
三、供试品溶液的制备
取本品粉末(过三号筛)约0.3g,精密称定,加水200ml,加热回流提取2小时,提取液转移至250ml量瓶中,用适量水分次洗涤容器,洗液转移至同一量瓶中,放冷,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,精密吸取续滤液2ml,置15ml离心管中,精密加入无水乙醇10ml,摇匀,冷藏1小时,取出,离心(4000转/分钟)20分钟,弃去上清液,必要时滤过,沉淀加80%乙醇洗涤2次,每次8ml,离心,弃去上清液,沉淀加热水溶解并转移至25ml量瓶中,放冷,用水稀释至刻度,摇匀,即得。
四、测定法
精密量取供试品溶液1ml,置10ml具塞试管中,照标准曲线制
备项下的方法,自“精密加5%苯酚溶液1ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算,即得。
本品按干燥品计算,含铁皮石斛多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计,不得少于25.0%。
测定多糖含量测定方法
测定多糖含量测定方法
多糖含量的测定方法有多种,以下列举几种常用的方法:
1. 酚-硫酸法:将待测样品加入酚-硫酸混合液中,经强酸催化后,产生深棕色或褐色色素,根据其吸收波长测定其光密度,即可得到多糖含量。
2. 比色法:将待测样品加入反应液中,经过酸或碱催化后,与磷钨酸等试剂发生比色反应,测定吸收波长,计算多糖含量。
3. 全甘蔗多糖含量测定法:利用全甘蔗多糖的特性,在酸性条件下能与硫酸基团结合产生黄色化合物,根据其吸收波长测定光密度,计算多糖含量。
4. 中性多糖含量测定法:利用中性多糖的特性,在加酸或碱后,能够水解为单糖,利用安替比林反应或酶法,测定水解产物里的糖含量,根据比例关系计算多糖含量。
5. 光学活性低分子糖含量测定法:利用光学活性低分子糖所具有的旋光性质,通过测定样品的旋光度,计算出其中低分子糖的含量,进而计算多糖含量。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述
多糖是一类由多个单糖分子组成的生物大分子,在生物体内具有重要的生理功能和生
物活性。
对多糖含量的测定是生物化学研究中的重要内容之一,也是食品、医药、环境、
农业等应用领域中的常见分析任务。
本文将综述多糖含量测定的一些常用方法。
1. 加热法测定:多糖溶液在高温下能够形成胶体物质,形成胶体物质的温度范围称
为胶化温度。
多糖溶液的胶化温度与多糖含量呈正相关关系。
可以通过测定多糖溶液胶化
温度来间接评估多糖含量。
2. 光密度法测定:多糖在特定波长下会吸收特定的光线,可以通过测定多糖溶液的
吸光度来计算多糖的含量。
这种方法需要使用特定的光密度仪器来进行测定。
3. 盐酸水解法测定:多糖可以通过与酸进行水解来得到单糖,再通过选择性的反应
来检测单糖的含量。
盐酸水解法可以利用酸来降解多糖,然后通过比色法或高效液相色谱
法来测定水解产物中的单糖含量。
5. 高效液相色谱法测定:高效液相色谱法是一种高效、灵敏的分离和测定方法,可
以用于测定多糖中的单糖含量。
在高效液相色谱仪上,多糖可以通过色谱柱进行分离,并
通过检测器进行检测和定量。
6. 离子色谱法测定:离子色谱法是一种常用的分析方法,在测定多糖含量方面也有
应用。
多糖中的单糖可以转化为对应的酸性或碱性离子,然后通过离子色谱仪进行分离和
测定。
多糖含量测定的方法包括加热法、光密度法、盐酸水解法、酶解法、高效液相色谱法、离子色谱法和比色法等。
根据实际需要和实验条件的不同,可以选择合适的方法来进行多
糖含量的测定。
多糖的测定
多糖的测定是一种常见的生物化学实验,旨在确定样品中多糖的含量。
多糖是由许多单糖单元组成的碳水化合物,包括淀粉、糖原、纤维素等。
以下是多糖测定的常见方法和步骤:
1.碘滴定法:这是测定淀粉含量的常用方法。
它利用碘对淀粉蓝色复合物形
成的特征进行测量。
样品首先与碘溶液反应,形成蓝色化合物,然后根据颜
色的深浅来测量淀粉的含量。
2.酚-硫酸法:该方法用于测定糖原的含量。
它涉及将样品与酚和硫酸混合,
形成特定颜色的复合物。
这种复合物的颜色可以通过光度计或比色计来测量,以确定糖原的含量。
3.酚硫酸法:这是一种用于测定纤维素含量的常见方法。
它包括将样品与酚
硫酸混合,生成一种具有特定吸光度的化合物。
吸光度可以用光度计或比色
计测量,从而确定纤维素的含量。
4.酚-硫酸-苯酚法:这是测定葡萄糖聚合物含量的方法。
它涉及将样品与酚、
硫酸和苯酚混合,产生特定颜色的复合物。
这种复合物的颜色可以通过光度
计或比色计来测量,以确定葡萄糖聚合物的含量。
这些方法提供了测定不同类型多糖含量的有效手段,可以通过定量分析来确定样品中多糖的含量。
在实际操作中,严格遵循实验室安全操作规程以及特定的实验步骤非常重要,以确保准确和可重复的测定结果。
多糖含量测定的方法综述5篇
多糖含量测定的方法综述5篇第1篇示例:多糖是一类重要的生物大分子,广泛存在于自然界中的生物体内,具有重要的生物学功能。
多糖含量的测定是研究多糖在生物体内作用机制的重要手段。
本文将综述多糖含量测定的方法,旨在为研究人员提供参考。
一、概述多糖是由多个单糖单元通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖在生物体内参与多种生物学过程,如能量储存、细胞结构、免疫调节等。
测定多糖含量对于研究多糖的生物学功能、生物合成途径具有重要意义。
二、多糖含量测定方法1. 硫酸-蒽醌法硫酸-蒽醌法是一种常用于测定多糖含量的方法。
该方法通过硫酸水解多糖,生成差向性的蒽醌,并用蒽醌的颜色深浅来反映多糖的含量。
该方法简单快捷,适用于多种多糖的含量测定。
3. 酚-硫酸-钼酸法酚-硫酸-钼酸法是一种用于测定多糖含量的方法。
该方法结合了酚-硫酸法和硅钼酸显色反应,能够提高多糖的测定精确度和灵敏度。
该方法简单易行,适用于各种类型的多糖。
4. 紫外分光光度法紫外分光光度法是一种通过多糖在紫外光区域的吸收来测定多糖含量的方法。
该方法适用于对多糖进行定量和定性分析。
通过分析多糖在不同波长下的吸光度,可以得到多糖的含量和结构信息。
5. 碘液滴定法三、结语多糖含量的测定是研究多糖生物学功能的重要手段。
本文综述了常用的多糖含量测定方法,包括硫酸-蒽醌法、酚-硫酸法、酚-硫酸-钼酸法、紫外分光光度法和碘液滴定法。
研究人员可以根据不同类型的多糖选择合适的测定方法,以准确测定多糖含量。
希望本文能够为多糖研究领域提供帮助,促进多糖研究的进展。
第2篇示例:多糖是一类重要的生物大分子,包括淀粉、半纤维素、纤维素、果胶、均聚糖等多种成分。
多糖在食品工业、医药领域、环境保护等领域具有重要的应用价值,因此测定多糖含量的方法也备受关注。
本文将综述几种常用的多糖含量测定方法,包括酚-硫酸法、硫酸-酚法、差减酶法、红外光谱法等,希望能给相关研究者提供参考。
酚-硫酸法是一种经典的多糖含量测定方法。
多糖含量的测定方法
多糖含量的测定方法
多糖含量的测定方法有很多种,以下是常用的几种方法:
1. 偏光法:利用在特定波长下,糖溶液对光的旋光性质进行测定来确定多糖含量。
常用的仪器有偏光仪和旋光仪。
2. 毛细管电泳:将糖溶液置于细毛细管中,通过电场作用,使糖分子在毛细管中迁移,并测定迁移速度来确定多糖含量。
3. 酶解法:使用特定的酶对糖进行降解,然后测定产生的小分子糖或产生的酶活力来确定多糖含量。
常用的酶有α-淀粉酶、葡萄糖氧化酶等。
4. 光谱法:利用红外光谱或核磁共振等技术,通过检测糖分子特征吸收峰或共振信号来确定多糖含量。
5. 硫酸-苯酚法:将多糖与硫酸混合,然后加入苯酚,生成可测定的色素化合物,通过比色法测定吸光度来确定多糖含量。
以上方法都是常用的多糖含量测定方法,选择适合的方法需要根据实验目的、样品性质和仪器设备的可用性等因素综合考虑。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述
多糖是指由多个单糖单元通过糖苷键连接而成的生物大分子聚合物。
多糖广泛存在于
生物体内,包括植物和动物的细胞壁、粘液、胶原蛋白等组织中,对于维持细胞结构和功
能起着重要作用。
准确测定多糖含量对于研究生物过程和评估食物营养价值具有重要意义。
本文将综述常用的多糖含量测定方法。
1. 光度法
光度法是最常用于测定多糖含量的方法之一。
该方法基于多糖与酚类试剂(如苯酚硫
酸试剂)反应生成有色产物,通过测定产物的吸光度来间接测定多糖的含量。
这种方法简单、快速,适用于大多数多糖的测定,但不适用于含有酚类物质的样品。
2. 琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的多糖分析技术。
该方法将待测样品通过电泳在琼脂糖凝
胶上分离,根据多糖的电泳迁移率来判断其分子大小和含量。
这种方法可以同时测定多个
多糖组分,适用于多糖的组分分析和纯度检测。
3. 高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种高分辨率、高灵敏度的多糖分析技术。
该方法通过在色谱柱上
分离多糖组分,再通过检测器测定其浓度。
该方法灵敏度高,分离效果好,适用于多组分
多糖的测定。
多糖含量的测定方法多种多样,可以根据研究目的和样品性质选择适合的方法进行测定。
无论是光度法、电泳法还是色谱法,都对多糖的含量测定提供了有力的工具,为多糖
的研究和应用提供了重要的支持。
多糖分子量测定
多糖分子量测定引言:多糖是由若干个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖广泛存在于生物体内,具有重要的生物学功能。
测定多糖的分子量是研究多糖结构和性质的重要手段之一。
本文将介绍常见的多糖分子量测定方法及其原理。
一、凝胶渗透色谱法(GPC)凝胶渗透色谱法是一种常用的多糖分子量测定方法。
它利用凝胶柱的孔隙作用,根据不同分子量的多糖在凝胶柱中的渗透性差异进行分离和测定。
该方法操作简便,测定范围广,适用于大多数多糖的分子量测定。
二、动态光散射法(DLS)动态光散射法是一种基于多糖分子在溶液中的扩散速率来测定分子量的方法。
利用激光照射样品,测量样品中散射光的强度和时间的关系,通过斯托克斯-爱因斯坦公式计算多糖分子的扩散系数,从而得到多糖的分子量。
三、凝胶电泳法凝胶电泳法是通过多糖在电场中的迁移速率来测定其分子量的方法。
根据多糖的电荷性质和分子量大小,多糖在凝胶电泳胶中的迁移速率不同,从而实现多糖的分离和分子量测定。
四、核磁共振波谱法(NMR)核磁共振波谱法是一种精确测定多糖分子量的方法。
通过核磁共振技术,可以得到多糖分子中的氢、碳等核的共振信号,进而计算多糖的分子量。
五、质谱法质谱法是一种高灵敏度、高分辨率的多糖分子量测定方法。
通过将多糖分子离子化,然后在质谱仪中进行离子分析,可以得到多糖分子的质荷比,从而计算分子量。
六、比色法比色法是一种常用的多糖分子量测定方法。
通过多糖与某些化学试剂反应产生的可比色化合物,利用比色计测定其吸光度,从而计算多糖的分子量。
七、荧光法荧光法是一种灵敏度高、选择性好的多糖分子量测定方法。
通过多糖与荧光染料结合形成荧光复合物,利用荧光光谱仪测定其荧光强度,从而计算多糖的分子量。
结论:多糖分子量的测定是研究多糖结构和性质的重要手段。
凝胶渗透色谱法、动态光散射法、凝胶电泳法、核磁共振波谱法、质谱法、比色法和荧光法是常用的多糖分子量测定方法。
不同的方法适用于不同类型的多糖和测定要求。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是一类广泛存在于动植物组织、细胞膜和微生物中的生物大分子,包括淀粉、纤维素、壳多糖、低聚糖等。
多糖在食品工业、医药工业、生物学研究等领域中有着广泛的应用。
因此,准确测定多糖含量是非常重要的。
目前,多糖含量测定的方法较多,本文将就其中常用的几种方法进行综述。
一、显色法显色法是测定多糖含量的一种简单、快速、经济的方法,可用于多种类型的多糖测定,包括淀粉、纤维素和壳多糖。
目前较为常用的显色法有三种:碘溶液显色法、酚硫酸显色法和亚硫酸还原显色法。
1.碘溶液显色法碘溶液显色法是测定淀粉和其他含碘能力的多糖的一种显色方法。
将待测物溶解于适当的溶液后加入碘溶液,多糖与碘发生空间结合,形成蓝黑色的复合物,比较准确地测定多糖含量。
测定过程:将待测样品溶解于适量的溶液中,加入适量的碘液,快速均匀搅拌,停留一段时间后读取吸光度。
测定时要注意,碘液应无色,且溶液的pH应在中性范围内,若PH超过范围会影响显色结果。
2.酚硫酸显色法酚硫酸显色法是测定纤维素含量的一种经典方法。
此法中,棕红色的多糖酚硫酸复合物会与多糖发生结合,从而产生蓝色的复合物。
本方法操作简单,准确性高,但对硫酸和酚的用量要求较高。
测定过程:取一定量的待测样品加入酚硫酸溶液,并适当加热。
混合搅拌直至均匀,并冷却。
最后度光密度,多糖含量与光密度成正比。
亚硫酸还原显色法在测定多糖含量时具有灵敏度和准确性。
此法中,亚硫酸会还原多糖羟基上的羟基,从而产生醛基,醛基与邻近的氨基酸或蛋白质结合,形成紫色复合物。
测定过程:将待测样品适当溶于适量的溶液中,加入亚硫酸溶液,并充分混合,之后再加入苯胺溶液混合反应,最后测定吸光度,获得样品中多糖的含量。
二、光化学检测法光化学检测法是一种新的多糖含量测定方法,在光学和化学技术的基础上,通过样品与化学反应后的荧光强度进行多糖含量测定。
光化学检测法可用于测定淀粉、葡聚糖、甘露聚糖等糖类物质的含量。
测定过程:将待测样品加入适当的试剂中进行混合均匀,之后将其迅速放入反应器中,启动荧光检测仪测定荧光强度。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖含量是指食品、药品、化妆品等中的多糖类化合物的含量,是衡量产品质量的重要指标之一。
常用的多糖含量测定方法包括光学法、化学法和生物学法等。
下面就这些方法进行综述。
光学法是一种常用的多糖含量测定方法。
它通过检测样品在特定波长下对光的吸收、散射或透过性来确定多糖的含量。
常用的光学法包括紫外可见光谱法、红外光谱法和荧光光谱法等。
紫外可见光谱法是通过研究样品在紫外可见光区域的吸收特性来确定多糖的含量。
红外光谱法则是通过测量样品对红外光的吸收特性来分析多糖的含量。
荧光光谱法是测定样品在激发光照射后发出的荧光来确定多糖的含量。
这些光学法具有测定速度快、无需破坏样品、不受样品组分限制等优点,但也存在一定的局限性,例如无法区分不同种类的多糖。
化学法是另一种常用的多糖含量测定方法。
化学法通过与特定试剂发生反应来测量多糖的含量。
常用的化学法包括酚酸法、显色剂法和酶法等。
酚酸法是利用多糖与酚酸发生酯化反应,在酸性条件下形成有色的酯,然后通过比色法或分光光度法测定酯的颜色强度来确定多糖的含量。
显色剂法是利用多糖与特定显色剂发生复杂化学反应,在特定条件下产生有色的络合物,然后通过比色法测定络合物的颜色强度来测定多糖的含量。
酶法则是利用特定酶对多糖进行降解,并测定产生的底物或产物的含量来确定多糖的含量。
化学法具有操作简便、灵敏度高的优点,但也存在某些试剂对部分多糖不敏感、需要处理大量样本等限制。
多糖含量测定的方法主要包括光学法、化学法和生物学法等。
这些方法各有优缺点,选择合适的方法需要根据样品的特性、测定的目的和实验室的设备条件来决定。
随着科学技术的发展,人们对多糖含量测定方法的研究和改进也将不断推进,以满足实际应用的需要。
鉴定多糖纯度的方法
鉴定多糖纯度的方法多糖纯度的鉴定方法可以根据不同的多糖类型及应用范围而有所不同。
下面将介绍几种常用的鉴定多糖纯度的方法。
1. 红外光谱法(IR法):红外光谱法是一种常用的鉴定多糖纯度的方法。
通过测量样品在红外波段的吸收光谱,可以确定糖分子中的特定化学键种类和结构,并由此判断多糖的纯度。
多糖纯度的高低可以通过红外光谱的吸收峰的强度和峰面积来评估,纯度较高的多糖样品其吸收峰较多且峰高峰面积大。
2. 高效液相色谱法(HPLC法):高效液相色谱法是一种常用的检测多糖纯度的方法。
利用色谱分离技术,将多糖样品分离成单糖或低聚糖,再通过检测样品中特定糖分子的峰面积或峰高来评估多糖的纯度。
高效液相色谱法可以对不同类型的多糖进行准确和定量的分析,广泛应用于多糖产品的质量控制与研究中。
3. 凝胶渗透色谱法(GPC法):凝胶渗透色谱法是一种利用分子大小差异的色谱技术来分析多糖的纯度。
将多糖样品溶解在流动相中,通过凝胶柱,较大分子的多糖将在凝胶柱中较快地渗透,多糖的分子量与其在凝胶柱中的停留时间有关。
通过比较样品峰的面积或高度,可以评估多糖样品的分子量分布和纯度。
这种方法适用于测定多糖样品的分子量和纯度,但需要根据具体实验设计选择合适的操作参数。
4. 核磁共振法(NMR法):核磁共振法是一种非常准确的鉴定多糖纯度的方法。
通过测定多糖样品中的核磁共振信号,可以确定样品的组成和结构信息,并由此判断多糖的纯度。
核磁共振法对于鉴定多糖样品的结构和纯度具有高分辨率和高准确性,但操作相对较为复杂,并且对于大分子量多糖的分析难度较大。
总结来说,上述几种方法中,红外光谱法和高效液相色谱法是常用的多糖纯度鉴定方法,凝胶渗透色谱法和核磁共振法则可以更准确地评估多糖样品的分子量和纯度。
在选择合适的方法时,需要考虑对多糖的结构特征、检测的准确性和操作的便利性进行综合权衡,以确保多糖纯度的准确鉴定。
多糖含量测定方法
多糖含量测定方法-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1多糖含量的测定粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定,还原糖用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定,多糖含量 = 总糖 - 还原糖。
1、总糖含量测定实验原理:多糖在硫酸作用下,先水解成单糖,并脱水生成糖醛衍生物,与苯酚生成橙黄色溶液,在490nm处有最大吸收,吸收值与糖含量呈线性关系。
试剂:浓硫酸(分析纯)、5%苯酚溶液(分析纯)、标准葡萄糖。
操作步骤:①制作标准曲线:准确称取105 ℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成mg/ml 的标准溶液,用蒸馏水分别配成0、、、、、mg/ml。
1 ml 标准液分别加入5% 苯酚溶液1 ml,并迅速加入浓硫酸5 ml,静置10 min。
摇匀,30℃放置30 min后于490nm测定OD值,以葡萄糖含量为横坐标,OD值为纵坐标,制作得到标准曲线。
②样品含量测定:吸取样品液,按照上述步骤操作测定OD490,并代入标准曲线计算样品的总糖含量。
2、还原糖含量实验原理碱性条件下,DNS可与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
此物质在煮沸条件下成棕红色,且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。
据此可通过测定OD值确定还原糖含量。
试剂及配制:浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
DNS显色液:称取 DNS溶于少量蒸馏水中并转移至500ml容量瓶中,加入2mol/L的NaOH溶液,再加入的丙三醇,摇匀,加蒸馏水定容至500ml,摇匀。
操作步骤①标准曲线制作:在6支试管中分别加入1mg/ml葡萄糖标准溶液,,,,,,补蒸馏水至,然后加入DNS试剂,充分混匀。
置于沸水浴中煮沸5min,然后迅速流水冷却,并分别向试管中加入4ml蒸馏水,混匀。
在540nm处读OD值。
以葡萄糖浓度(μg/ml)为横坐标,以OD值为纵坐标制作标准曲线,得到其线性回归方程。
②样品含量测定:吸取样品液,按照上述步骤操作测定OD值,并代入回归方程中计算样品中的还原糖含量。
多糖的测定实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖的提取方法;2. 熟悉多糖的检测原理和操作步骤;3. 通过实验了解多糖在生物体中的分布和功能。
二、实验原理多糖是一类高分子碳水化合物,广泛存在于动植物体内,具有多种生物活性。
本实验采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,该方法利用苯酚与多糖在酸性条件下发生缩合反应,生成蓝紫色化合物,通过比色法测定其含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:玉米淀粉、葡萄糖、纤维素酶、苯酚、硫酸、蒸馏水等;2. 仪器:恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 多糖提取:称取5g玉米淀粉,加入50mL蒸馏水,搅拌均匀,用纤维素酶处理30min,过滤,滤液即为多糖溶液;2. 标准曲线绘制:分别配制0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg/mL的多糖标准溶液。
取5mL标准溶液,加入5mL苯酚溶液和5mL硫酸溶液,混匀,在沸水浴中反应5min,取出冷却,于波长620nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,多糖浓度为横坐标绘制标准曲线;3. 样品测定:取5mL多糖溶液,按照步骤2的操作进行测定,从标准曲线上查出多糖浓度;4. 计算多糖含量:根据样品中多糖浓度和样品质量,计算多糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制:以吸光度为纵坐标,多糖浓度为横坐标绘制标准曲线,得到线性方程:y = 0.0038x + 0.0178,R² = 0.9987;2. 样品测定:按照实验步骤,测定样品中多糖含量,得到样品多糖浓度为0.05mg/mL;3. 计算多糖含量:根据样品中多糖浓度和样品质量,计算多糖含量为2.5mg。
六、实验结论本实验采用苯酚-硫酸法测定了玉米淀粉中的多糖含量,结果显示样品中多糖含量为2.5mg。
该方法操作简便、准确度高,适用于多糖含量的测定。
七、实验讨论1. 在多糖提取过程中,纤维素酶的添加有助于提高多糖的提取效率;2. 实验过程中,苯酚与硫酸的比例对测定结果有一定影响,需严格控制;3. 实验结果与理论值存在一定差异,可能是由于实验操作过程中的误差或样品本身纯度等因素所致。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述
多糖是一类具有高分子结构的碳水化合物,由许多单糖分子通过化学键连接而成。
多
糖广泛存在于自然界中,包括植物、动物、菌类等生物体内。
不同种类的多糖具有不同的
生物功能和生理作用,如保持细胞结构、调节免疫反应等。
因此,多糖含量的测定在医学、生物学、食品科学等领域中有着广泛的应用。
本文将对常用的多糖含量测定方法进行综述,包括酚硫酸法、发热法、硫酸盐浓度法、偏光测量法等。
1. 酚硫酸法
酚硫酸法是一种基于多糖分子与酚硫酸反应的测定方法。
在酚硫酸的强酸性条件下,
多糖分子会被酚硫酸加热水解成单糖分子,进而使得溶液的吸光度发生变化。
利用可见光
分光光度计可以测定样品溶液的吸光度,进而计算出样品中多糖的含量。
2. 发热法
发热法也称为琼脂糖反应法,是一种基于多糖分子与琼脂糖之间的作用,进而使得溶
液的凝胶化程度发生变化。
利用琼脂糖溶液的凝胶化可以测定样品溶液中多糖的含量。
4. 偏光测量法
偏光测量法是一种基于多糖分子与偏光片之间的作用测定多糖的含量的方法。
多糖分
子可以旋光偏光片的光线,进而使得通过偏光片的光线发生变化。
利用偏光片的光线变化
可以测定样品溶液中多糖的含量。
以上四种方法均可用于多糖含量测定。
不同方法的具体应用因样品性质、实验条件等
因素而异。
在选择合适的测定方法时,需要考虑实验的准确性、可重复性、成本等方面的
因素。
高效液相色谱法测定多糖
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种常用的多糖分析方法,其测定多糖的步骤如下:
1. 样品制备:将待测多糖样品加入适量的水中,加热至溶解,过滤去除杂质,得到待测样品溶液。
2. 色谱柱选择:根据待测多糖的性质和分子量,选择合适的色谱柱,如凝胶过滤色谱柱、离子交换色谱柱、亲和色谱柱等。
3. 流动相选择:根据色谱柱的选择,选择合适的流动相,如纯水、缓冲液、有机溶剂等。
4. 样品进样:将待测样品溶液注入进样器中,通过自动进样器或手动进样器将样品进入色谱柱中。
5. 色谱分离:将进样器中的样品通过色谱柱进行分离,不同的多糖分子会在不同的时间点出现峰值。
6. 检测:通过紫外检测器或荧光检测器等检测器检测出不同峰值的多糖分子,得到各个多糖分子的峰面积或峰高度。
7. 数据分析:根据峰面积或峰高度计算出各个多糖分子的含量或相对含量,得到多糖的测定结果。
需要注意的是,不同的多糖分子可能需要不同的色谱柱和流动相,因此在测定多糖时需要根据具体情况进行选择。
同时,样品制备和进样过程中也需要注意避免污染和样品损失。
测定多糖的方法范文
测定多糖的方法范文多糖是由许多单糖分子组成的高分子化合物,包括淀粉、糖类和纤维素等。
测定多糖的方法主要有光学法、理化法和生物学法等。
1.光学法:光学法是根据多糖溶液对光的旋光性质进行测定,可分为旋光法和偏振光法。
旋光法是利用多糖溶液对平面偏振光产生旋转的现象来测定其浓度。
常用仪器有旋光仪和比色计。
首先测定空白试验,然后将待测多糖溶液注入试管或比色皿,然后用旋光仪测量旋光度,或用比色计测定吸光度。
通过对比空白试验和待测样品的数据,计算出多糖的浓度。
偏振光法是利用偏振光在多糖分子结构中的旋转和偏振现象来测定多糖的含量。
常用仪器有偏光仪和光度计。
该方法同样需要进行空白试验,并通过测量光强的变化来计算多糖的浓度。
2.理化法:理化法是基于多糖与其他化学物质发生反应或物理作用来测定多糖含量的方法,包括聚合度测定、硫酸铵测定、酚硫酸法等。
聚合度测定是通过测定多糖分子链的平均长度来间接测定多糖含量的一种方法。
常用的方法有淀粉的碘溶液比色法和葡聚糖的硫酸酶法等。
硫酸铵测定是利用硫酸铵溶解多糖后的氨基氮含量来测定多糖含量的方法。
首先将多糖与硫酸铵共煮制成酸解液,然后测定氨基氮含量。
由于多糖中的氨基氮主要来自于蛋白质的污染物,因此可以通过测定蛋白质含量来校正。
酚硫酸法是以酚作为多糖与硫酸反应生成紫色产物,通过测定紫色产物的吸光度来测定多糖含量的方法。
该方法灵敏度高,但只适用于部分多糖。
3.生物学法:生物学法是利用特定的酶对多糖进行降解并产生可测定的反应物,从而间接测定多糖含量的方法。
常用的酶包括淀粉酶、葡聚糖酶和纤维素酶等。
淀粉酶是用于测定淀粉含量的酶,可以将淀粉降解为葡萄糖。
通过测量葡萄糖的含量来计算淀粉的含量。
葡聚糖酶是用于测定葡聚糖含量的酶,也可以将葡聚糖降解为葡萄糖进行测定。
纤维素酶是用于测定纤维素含量的酶,可以将纤维素降解为葡萄糖。
通过测量葡萄糖的含量来计算纤维素的含量。
综上所述,测定多糖的方法有光学法、理化法和生物学法等。
多糖的测定
多糖的测定
溶液的配制
1.浓硫酸:分析纯,95.5%
2.80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。
3.6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。
(每次测定均需现配)
7.6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8.6mol/L 盐酸
样品含量测定
1.制作标准曲线:准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0ml 置于50ml 容量瓶定容,准确吸取该系列溶液各2ml ,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm 测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。
2. 样品的测定:取去完蛋白的样液2ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度。
请将吸光度控制在0.2-0.8
多糖计算:
类似茶多酚,请大家根据标准曲线算出多糖的含量,然后根据体积算到香菇的里面,单位mg/g。
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第九章多糖的测定
第一节淀粉的测定
●一、测定淀粉含量对于决定用途具有重要意义:
●1、淀粉是供给人体热量的主要来源。
●2、淀粉在食品中的作用是作为增稠剂、胶体生成剂、保潮剂、乳化剂、粘合剂等。
●二、淀粉的测定方法:
●(一)淀粉的物理检验法:淀粉因其品种不同,淀粉的大小和形状也不同。
用显微
镜分析法可鉴别不同品种的淀粉。
●(二)淀粉含量的测定方法:
●1、酶水解法:
●(1)概念:淀粉用麦芽淀粉酶水解成二糖,再用酸将二糖水解为单糖,然后测定由
水解所得到的单糖。
(还原糖)
●(2)常用于液化的淀粉酶是麦芽淀粉酶。
它是⍺—淀粉酶和ß—淀粉酶的混合物。
●(3)酸直接水解法:淀粉的测定方法也可采用酸直接水解法,但酸水解法不仅是淀
粉水解,而且也能分解半纤维素,结果产生了具有还原力的木糖、阿拉伯糖等单糖,使淀粉测定所得的结果较实际含量偏高。
●(4)酶水解法的优点:在一定条件下,用⍺—淀粉酶处理样品,则能使淀粉与半纤
维素等某些多糖分开来。
因为⍺—淀粉酶具有严格的选择性,它只使淀粉液化变成低分子糊精和可溶性糖分,而对半纤维素不起作用。
在用⍺—淀粉酶液化淀粉除去半纤维素等不溶性残留物后,再用酸水解使生成葡萄糖,所得结果比较准确。
这种酶水解作用,叫作选择性水解。
●(5)酶水解法测定淀粉的具体步骤:
●a:样品的处理:将磨碎样品置漏斗中,用乙醚50ml分数次洗涤,除去脂肪,再用10%
乙醇洗去可溶性糖分,先5次。
●b:酶水解:将滤纸上残留物用水移至烧杯内,水浴加热直到淀粉糊化。
冷却至60℃,
加麦芽汁20ml在60℃保温1小时,再重复加热冷却,保温冷却过滤,将滤液定容250ml。
●c:酸水解,吸取滤液加入1:4硫酸,放在120—130℃油浴中保持沸腾5—6min用
40%NaOH 滴定至碱性。
●d:用非林氏试剂测定葡萄糖含量,同时做空白试验。
●e:计算:淀粉=[(A-B)*0.9*100]/[W*(50/250)*(V/100)*100]
A:样品中淀粉相当于还原糖重量(mg)
B:空白相当于还原糖的重量0.9:还原糖换算为淀粉因数
V/100:样液酸解后稀释100ml取Vml W:样品重量(g)
第二节纤维的测定
●植物性食品内含有粗纤维,它集中存在于谷类的麸、糠、果蔬的表皮及其纤维样组
织之中。
从现代营养学的观点来看,我们膳食中每天需要摄入一定数量的纤维(称为膳食纤维),它可防止包括阑尾炎、心脏病和结肠癌等多种疾病,所以,深入了解膳食纤维的特性及其分析方法更具有迫切的现实意义。
此外,粗纤维的含量是果蔬制品的一项质量指标,借此可以鉴定果蔬的鲜嫩度。
例如:青豌豆按其鲜嫩程度分为三级,其粗纤维含量分别为:一级1.8%左右,二级2.2%左右,三级2.5%左右。
●一、概念:
●粗纤维:指动物饲料中那些对稀酸、稀碱难溶的,家畜(特别是反刍动物)不容易
消化的部分,其中主要的成分是果胶、半纤维、纤维素和木质素。
测定粗纤维,可估算出食品中不能消化的部分,借此可评定该食品的营养价值及其经济价值,历来的食品成分表都提供植物性食品的粗纤维含量。
●膳食纤维:是指人们的消化系统或者消化系统中的酶不能消化、分解、吸收的物质。
包括纤维素、半纤维素、木质素、果胶物质。
●二、粗纤维的测定
●测定粗纤维常用的方法是将热的稀酸稀碱与样品相继共煮,并分别经过滤、
洗涤残留物等操作。
这时,酸可将淀粉、果胶物质和部分半纤维素水解除去;而碱能溶解除去蛋白质、部分半纤维素及部分木质素,还除去了脂肪。
●1、测定原理:在硫酸作用下,样品中的糖、淀粉、果胶质和半纤维素水解除去后,
再用碱处理除去蛋白质和脂肪酸,残留物为粗纤维,如其中含有不溶于酸、碱的杂质,可灰化后除去。
●2、具体步骤:
●(1)取20—30g捣碎样品,移入500ml锥形瓶,加入200ml煮沸1.25%硫酸溶液,
维持30min
●(2)过滤(亚麻布)用沸水洗至洗液不呈酸性
●(3)再用200ml煮沸12.5g/L KOH将麻布上残留物洗入原锥形瓶中,煮沸30min,
取下过滤、洗涤。
放入重融坩埚(漏斗)中抽滤。
再依次用乙醇和乙醚洗涤一次。
●(4)将坩埚和内容物放在105℃烘箱中烘干称重至恒重。
●(5)计算:x%=G/m *100
●G----残余物的质量
●M----样品重量
第三节果胶物质的测定
●果胶物质是一种植物胶,可作为食品生产中的胶冻材料和增稠剂,它的用途甚广.
●一、果胶主要用途:
●1、用果胶制造果冻和糖果。
●2、果胶物质是影响果酱制品稠度和凝冻性的重要因素。
●3、果胶在柑桔汁生产中对混浊体起稳定剂的作用等。
果胶在医药上的应用,也具有
重要意义。
●4、它可以作为治疗胃肠道及胃溃疡等疾病的良好药剂。
●5、果胶,特别是低甲氧基果胶,因为它能与铅、汞等有害金属形成人体不能吸收的
溶解物,因而可用作金属中毒的一种良好解毒剂和预防剂。
●二、果胶的测定方法
●1、重量法:是用沉淀剂使果胶物质沉淀析出,而后测定重量的方法。
●(1)沉淀剂有两类:电解质、如氯化钠、氯化钙
●有机溶剂:如甲醇、乙醇、丙酮等。
●(2)测定步骤:
● a.准确称取新鲜样品,加水煮沸一小时。
冷却后定容250ml.
● b.过滤吸取滤液25ml,加入0.1molNaOH溶液100ml,再加入50ml1mol醋酸溶液,
和50ml2molCacL2溶液,加热沸腾5min后立即用烘干至恒重的滤纸过滤,用热水洗。
c.把带滤渣的滤纸放在预先烘干至恒重的称量瓶内,置105℃烘箱中烘至恒重。
● d.计算:
●果胶质(%)=(0.9235*G)/[W*(25/250)]*100
●G:滤渣重量克数=W1-W2
●W:样品重量克数
●W1---以果胶酸钙重和玻璃灯芯漏斗
●W2 ---玻璃灯芯漏斗
●0.9235:果胶酸钙换算为果胶质的系数
●2、咔唑比色法:基于果胶物质水解,生成物一(半乳糖醛酸)在强酸中与咔唑的缩
合反应。
生成紫红色化合物,其呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比。
可进行比色定量测定。