坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a的测定与分析.
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
叶绿素A的测定
6.离心；将研磨液倒入离心试管中进 行离心，所得上清液倒入10ml的容 量瓶中，再往下层加入2-3ml丙酮， 再离心，将上清液再转入容量瓶中， 接着用丙酮溶液定容至10ml,摇匀。
叶绿素A测定的改良 测定过程中需加强质控。并要平行取样，
平行分析 。 测定叶绿素A时，样品应该尽快测定，
防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温 弱光条件下进行。
控制好提取时间，使得提取更充分，保 证较高的提取效率。
这个实验叫做叶绿素A的测定方法探 讨，实验误差较大，最佳的方法还在 不断地深入研究中，有兴趣的同学可 以查阅相关资料，开动大脑马达，提 出自己的见解。
叶绿素A的测定
目录
1
叶绿素A的测定原理
2
叶绿素A的测定方法
3
叶绿素A的测定步骤
4
叶绿素A的测定影响
叶绿素A的测定原理
有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中 的叶绿素，用分光光度计测定其吸光 度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用 相关公式计算其含量。
叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素B,前 者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素 B分子式为C55H70O6N4Mg。
2.研磨的损耗；研磨过程中会破坏藻 类细胞的细胞壁，其程度由研磨和转 移而引起的损耗量来决定。人为误差 太大，那么重复操作的精密度就会降 低。
3.酸化的影响；在抽滤浓缩过程中， 叶绿素A分子的酸化造成的叶绿素A的 降解，所以之前在水样中就要加入碳 酸镁浊液（防止酸化）。
4.离心管材料的影响；采用玻璃离心 管，因为丙酮会腐蚀塑料离心管，造 成测定结果偏高，所以采用玻璃离心 管。
感谢您的观看
祝你暑假愉快
2.水样处理；往水样中加入1%碳酸镁 悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。 水样应在低温弱光的环境下保存。
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法是一种常用的方法，用于测定富营养化湖泊中的藻类数量。
藻类是湖泊生态系统中不可或缺的一部分，它们是湖泊中的初级生产者，对水体性质的改变和生态系统的稳定起着重要作用。
通过测量叶绿素a的含量，我们可以快速、准确地评估湖泊中的藻量，为湖泊生态环境的恢复和管理提供科学依据。
在实际操作中，叶绿素a法主要是通过光谱测量的原理来确定叶绿素a 的浓度。
叶绿素a是藻类中最常见的一种叶绿素，其含量与藻类生物量呈正相关关系。
通过测定叶绿素a的浓度可以间接反映湖泊中藻类的数量。
叶绿素a法的测量过程相对简单，操作方便。
需要从湖水中取样，然后将样品过滤，提取出其中的叶绿素a。
接下来，使用光谱仪或叶绿素荧光仪对提取液的吸光度进行测量，并根据已有的标准曲线，计算出叶绿素a的浓度。
根据叶绿素a的浓度，结合湖泊的水量，可以计算出湖泊中的藻类数量。
通过叶绿素a法测定富营养化湖泊中的藻量，我们可以对湖泊生态系统的变化进行准确监测和评估。
在富营养化的湖泊中，藻类数量往往过多，导致水体浑浊，水质恶化，甚至引起水华等严重问题。
通过及时测定藻类数量，我们可以对湖泊中的富营养化程度进行评估，并针对性地采取相应的措施来改善湖泊生态环境。
然而，在使用叶绿素a法进行藻量测定时，也存在一些问题和限制。
叶绿素a法只能测定叶绿素a的浓度，而不能提供其他藻类的信息。
不同种类的藻类在湖泊中有不同的生态功能和生态作用，因此仅仅通过叶绿素a的浓度无法全面了解湖泊中藻类的组成和结构。
叶绿素a 法只能在湖泊表层水体中进行测定，无法对湖泊底泥和深层水体中的藻类进行评估。
在一些深水湖泊中，底泥中的藻类可能对湖泊生态系统的健康产生重要影响，但使用叶绿素a法无法直接获取这些信息。
叶绿素a法是一种快速、准确测定富营养化湖泊中藻量的有效方法。
它为湖泊生态环境的管理和恢复提供了重要的技术支持。
然而，我们也需要意识到叶绿素a法的局限性，进一步研究和探索其他方法，以便更全面地了解湖泊中藻类的数量和组成。
坛紫菜藻红蛋白α,β亚基基因的克隆和序列分析
关 键 词 ：坛 紫 菜 ； 红 蛋 白 ； 因克 隆 ； 列 分 析 藻 基 序
中 图 分 类 号 ：Ｐ７ １ １ ３．５ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：０ ５ — １ ３ （ ０ ７ ０ — １ ７０ ２ ３ ４ ９ 一 ２ ０ ） ２０ ６ — ６
１ 引 言
藻 胆蛋 白 （ ｈ ｃ ｂｌ ｒ ｔｉ ， Ｂ ） 原 核 藻 类 Ｐ ｙ ｏ ｉｐｏ ｅ Ｐ Ｐ 是 ｉ ｎ
研 究 根 据 Ｇｅ Ｂ ｎ 中 已 收 录 的 红 藻 藻 红 蛋 白 基 因 ｎ ａｋ
般 由 ａ和 Ｂ亚 基形 成 稳 定 的单 体 （ ｐ ， 由单 体 ａ ）再 白为三聚 体 （ ８ 。 六 聚 体 （ ８ ２． 们 各 自有 着 ａ ）或 ａ ）［ 它 ］
聚合 为多 聚体 （ Ｂ 从 蓝藻 和红 藻 中分 离 的 藻胆 蛋 ａ ）．
（ ０ １ ６） ２ ０５ ０ ．
序列 ， 计 简 并 引 物 ， 设 以坛 紫 菜 色 素 体 Ｄ ＮＡ 为 模 板 ， 过 Ｐ Ｒ技 术 克隆坛 紫 菜藻红 蛋 白主 要亚 基 基 通 Ｃ
独 特的 吸收光 谱 和荧 光 发 射 光谱 ． 从各 种 藻胆 蛋 白
的吸收光 谱 和藻胆 体 的荧光 激发 和发 射谱 推论 出藻 胆体 中能量 传 递 的 定性 顺 序 为 ： Ｅ Ｐ Ｐ — ｃ— ＡＰ — ｃ
在 受体 细胞 中大 量 表 达 ， 导 入 藻类 核 基 因组 中提 或
高 该 基 因 的 拷 贝 数 ， 而 获 得 大 量 基 因 表 达 产 物 的 从
亚基 和 Ｂ亚 基组成 ， 部分 藻 胆蛋 白中还存在 ７亚 基．
一
研究 ， 可能 成为 开发 利用 藻红 蛋 白的有 效途 径． 而坛 紫菜 藻红 蛋 白主要 亚 基 基 因 的 克 隆仍 未 见 报 道 ． 本
坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a的测定与分析
坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a的测定与分析史修周;徐燕;梁艳;谢潮添;纪德华;陈昌生;柳佩娟;王凤霞【期刊名称】《集美大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(013)003【摘要】研究了不同色泽坛紫菜在不同培养温度条件下含藻胆蛋白及其叶绿素a 量的差异,以及样品前处理过程中各因素(研磨、光照、被测定藻体的量等)对测定结果的影响.实验结果表明:1)不同色泽的坛紫菜叶状体在正常培养条件下,含藻胆蛋白和叶绿素a的量各不相同,其中褐红色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a的质量比最高,分别达114.87 mg/g和8.83 mg/g;绿色型藻体的藻胆蛋白的质量比最低(55.39 mg/g);桔红色型藻体的叶绿素a的质量比最低(4.58 mg/g).2)不同温度下培养的坛紫菜,其4种色素的含量存在一定的差异.在本实验条件下,随着培养温度的升高,坛紫菜色素含量也随之增加.3)在影响测定结果的各因素中,对坛紫菜4种色素含量的测定结果影响最大的是研磨,其次为光照.【总页数】6页(P221-226)【作者】史修周;徐燕;梁艳;谢潮添;纪德华;陈昌生;柳佩娟;王凤霞【作者单位】集美大学水产学院,福建,厦门,361021;集美大学水产学院,福建,厦门,361021;集美大学水产学院,福建,厦门,361021;集美大学水产学院,福建,厦门,361021;福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建,厦门,361021;集美大学水产生物技术研究所,福建,厦门,361021;集美大学水产学院,福建,厦门,361021;福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建,厦门,361021;集美大学水产生物技术研究所,福建,厦门,361021;集美大学水产学院,福建,厦门,361021;福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建,厦门,361021;集美大学水产生物技术研究所,福建,厦门,361021;集美大学水产学院,福建,厦门,361021;集美大学水产学院,福建,厦门,361021【正文语种】中文【中图分类】S968.4【相关文献】1.微波消解-ICP-AES法测定坛紫菜中重金属及近年坛紫菜金属污染调查 [J], 娄永江;丁仲仲;赵一霖;郭婷婷;刘志2.不同培养方式及换水频率对坛紫菜（Porphyra haitanensis）自由丝状体生长及藻胆蛋白含量的影响 [J], 丁兰平;颜泽伟;张全亮;徐佩杭;黄冰心3.坛紫菜中藻胆蛋白的性质与化学组成研究 [J], 高洪峰;曹文达4.不同生长期坛紫菜中藻胆蛋白的含量变化 [J], 高洪峰5.不同温度下CO2浓度增高对坛紫菜生长和叶绿素荧光特性的影响 [J], 刘露;丁柳丽;陈伟洲;邹定辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同光照强度对一种新紫菜孢子体的光合色素和叶绿素荧光参数的影响
验,采用 VSE 灭菌天然海水培养基。
不同的光照强度,分别为 10、20、40、80 和 160 μmol / (m2·s)。 将
新紫菜的孢子体放入 500 mL 培养瓶中,每个光照强度条件
下设置 3 个平行试验,温度 20 ℃ ,光周期为 12 h / 12 h。
பைடு நூலகம்
1. 3 试验方法
1. 3. 1 叶绿素 a(Chl a) 和类胡萝卜素( Car) 的测定。 新紫
紫菜孢子体的叶绿素 a 含量在 20 μmol / (m2·s)条件下达到了
最大值(281. 35 μg / g),之后开始随着光照强度的增加逐渐降
低。 20 μmol / (m2·s)条件下的叶绿素 a 显著高于其他光照强
度处 理 组, 在 160 μmol / ( m2 ·s ) 条 件 下 达 到 了 最 低 值
(173. 11 μg / g)。 在 20 μmol / (m2·s)条件下,类胡萝卜素含量
达到了最大值(53. 36 μg / g),之后开始随着光照强度的增加逐
渐降低,在 160 μmol / (m2·s)条件下达到了最低值(27. 07 μg / g)。
从图 1B 可以看出,不同光照强度下培养 30 d 的新紫菜
Chl a = 15. 65×A666 -7. 53×A653
其中,A470 、A653 和 A666 代表在对应波长下的吸光度。
1. 3. 2 藻红蛋白(PE)的测定。 新紫菜孢子体培养至 15 和
30 d 后,称取 0. 1 g 左右的孢子 体 与 石 英 砂、磷 酸 缓 冲 液
(pH = 6. 8)研磨碎。 用磷酸缓冲液将其定容至 15 mL,4 ℃ 、
PE) of N. sp. sporophyte by 20 μmol / ( m 2·s) were relatively high during the cultivation period,and the F v / F m of Neoporphyra sp. sporophyte
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想一、前言在环境科学研究领域，对于湖泊水质的监测和评估一直是一个重要课题。
其中，富营养化湖泊中藻量的测定是其中的关键环节之一。
在现有的测定方法中，叶绿素a法作为一种常用的测定手段，被广泛运用于湖泊水质监测中。
本文将针对叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的相关概念和方法进行深入探讨，以期能够从多个角度全面理解这一测定方法的意义和应用。
二、叶绿素a法测定藻量的原理和方法1. 叶绿素a的作用和意义叶绿素a是植物和藻类进行光合作用的关键色素之一，其含量可以反映藻类的生物量和分布情况。
通过测定叶绿素a的含量，可以间接推算出藻类的生物量，从而评估湖泊水体中藻类的丰富程度和富营养化程度。
叶绿素a法成为了一种常用的测定富营养化湖泊中藻量的手段。
2. 叶绿素a法的测定步骤叶绿素a法的具体测定步骤主要包括样品采集、叶绿素提取、叶绿素含量的测定和数据处理等过程。
通过精确的实验操作和数据处理，可以获得准确的叶绿素含量数据，从而推算出藻类的生物量，进而对湖泊水质进行评估和监测。
三、叶绿素a法在富营养化湖泊中的应用1. 优势和局限性叶绿素a法作为测定湖泊藻量的常用方法，具有操作简便、成本低廉、结果快速等优点，因而在一定程度上适用于大规模的水质监测工作。
但叶绿素a法也存在一定的局限性，例如受光照和水体透明度影响大等。
2. 感想和展望通过对叶绿素a法的研究和实践，我深切感受到这一方法的重要性和局限性。
在今后的工作中，我愿意进一步探索和改进叶绿素a法，在提高测定精度的也能够更好地适用于不同类型的湖泊和藻类群落。
四、总结通过本文的探讨，我们全面了解了叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的原理、方法和应用。
也对这一方法的优势、局限性以及未来的发展方向有了更深入的认识。
在今后的工作中，希望能够结合实际情况，不断优化和改进叶绿素a法，并且结合其他测定方法，以期能更准确地评估湖泊的水质和生态环境。
（以上内容仅供参考，具体文章内容仍需根据实际情况进行撰写）：五、叶绿素a法的优势和局限性叶绿素a法作为一种常用的测定湖泊中藻量的方法，具有诸多优势。
叶绿素含量的测定实验报告
叶绿素含量的测定实验报告一、实验目的1、掌握叶绿素含量测定的原理和方法。
2、学会使用分光光度计测定叶绿素的含量。
3、了解叶绿素在植物光合作用中的重要作用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，包括叶绿素 a 和叶绿素 b 两种类型。
叶绿素在特定波长的光下有吸收峰，利用分光光度计分别测定叶绿素提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，根据朗伯比尔定律，可以计算出叶绿素 a 和叶绿素 b 的含量，进而得出叶绿素的总含量。
叶绿素 a 和叶绿素 b 在 665nm 和 649nm 波长下的吸光系数分别为8331 和 1675，在 649nm 波长下的吸光系数分别为 2454 和 4466。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的菠菜叶片。
2、实验仪器分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、剪刀等。
3、实验试剂95%乙醇、石英砂、碳酸钙。
四、实验步骤1、材料准备选取新鲜的菠菜叶片，用剪刀剪碎，称取 05g 左右，放入研钵中。
2、研磨提取在研钵中加入少量石英砂和碳酸钙，以及 10ml 95%乙醇，充分研磨成匀浆。
3、过滤将研磨好的匀浆用漏斗过滤到 25ml 容量瓶中，用少量 95%乙醇冲洗研钵和漏斗，将滤液收集到容量瓶中，直至刻度线，摇匀。
4、吸光度测定以 95%乙醇作为空白对照，用分光光度计分别测定提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，每个波长重复测定 3 次，取平均值。
五、实验结果与计算1、记录吸光度值665nm 波长下的吸光度平均值记为 A665，649nm 波长下的吸光度平均值记为 A649。
2、计算叶绿素含量叶绿素 a 的浓度（Ca，mg/L）＝ 1395×A665 688×A649叶绿素 b 的浓度（Cb，mg/L）＝ 2496×A649 732×A665叶绿素的总浓度（C，mg/L）＝ Ca ＋ Cb叶绿素含量（mg/g）＝（C×V）／（W×1000）其中，V 为提取液总体积（ml），W 为叶片鲜重（g）。
叶绿素a测定
实验三富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。
二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。
2、比色杯（1cm；4cm）。
3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。
6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。
7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。
8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。
9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。
采样点及采水时间同“浮游植物”。
2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。
加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。
如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。
塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。
5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。
叶绿素含量测定方法(精)
叶绿素含量测定方法---丙酮法由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。
藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。
叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。
取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。
采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。
按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。
定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：叶绿素a含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数叶绿素b含量用以下公式进行计算：Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数叶绿素总含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。
此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。
叶绿素提取方法提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300.一、直接浸提法：1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。
叶绿素a测定
实验三富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法)一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染,尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度,以考查其富营养化情况。
二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm,精度为0.5－2nm).2、比色杯（1cm；4cm)。
3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子)；冰箱5、匀浆器或小研钵。
6、蔡氏滤器;滤膜(0.45微克，直径47mm）。
7、真空泵(最大压力不超过300kpa）。
8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中.9、90%的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml,池塘300ml.采样点及采水时间同“浮游植物”。
2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解.3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤.待水样剩余若干毫升之前加入0。
2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。
加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上,同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。
如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。
4、提取;将滤膜放于匀浆器或小研钵内,加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆,以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90%丙酮,使管内总体积为10ml。
塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时.5、离心：提取完毕后,置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min,取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。
坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a的测定与分析
第13卷 第3期2008年7月集美大学学报(自然科学版)Journa l o f Ji m e iU n i versity (N atura l Sc ience)V o l 13 N o .3Ju.l 2008[收稿日期]2007-10-09[修回日期]2007-11-10[基金项目]国家海洋863资助项目(2006AA 10A 413);国家自然科学基金资助项目(40676077);福建省科技重大专项资助项目(2005NZ1025)[作者简介]史修周(1982 ),男,硕士生,从事紫菜生物学研究.通讯作者:陈昌生(1957 ),男,教授,从事海藻养殖与育种技术研究.E m a i:l cschen @j mu edu cn[文章编号]1007-7405(2008)03-0221-06坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a 的测定与分析史修周1,徐 燕1,梁 艳1,谢潮添1,2,3,纪德华1,2,3,陈昌生1,2,3,柳佩娟1,王凤霞1(1.集美大学水产学院,福建厦门361021;2.福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建厦门361021;3.集美大学水产生物技术研究所,福建厦门361021)[摘要]研究了不同色泽坛紫菜在不同培养温度条件下含藻胆蛋白及其叶绿素a 量的差异,以及样品前处理过程中各因素(研磨、光照、被测定藻体的量等)对测定结果的影响.实验结果表明:1)不同色泽的坛紫菜叶状体在正常培养条件下,含藻胆蛋白和叶绿素a 的量各不相同,其中褐红色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 的质量比最高,分别达114 87m g /g 和8 83m g /g ;绿色型藻体的藻胆蛋白的质量比最低(55 39m g /g);桔红色型藻体的叶绿素a 的质量比最低(4 58m g /g).2)不同温度下培养的坛紫菜,其4种色素的含量存在一定的差异.在本实验条件下,随着培养温度的升高,坛紫菜色素含量也随之增加.3)在影响测定结果的各因素中,对坛紫菜4种色素含量的测定结果影响最大的是研磨,其次为光照.[关键词]坛紫菜;藻胆蛋白;叶绿素a ;测定[中图分类号]S 968 4[文献标志码]A0 引言坛紫菜(P orphy ra ha itanensis)属暖温带性海藻,在我国东南沿海均有分布,是优良海藻栽培品种之一.但近年来坛紫菜种质退化、品质下降,造成生长期缩短、病害严重、产量降低.因此,选育高产、抗病、耐高温的紫菜新品种已成为亟待解决的问题.藻胆蛋白和叶绿素含量是紫菜品质选育方面的重要指标之一[1].藻胆蛋白是红藻、蓝藻和某些甲藻中的一类特有的光合作用天然色素,可分为藻红蛋白(PE )、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC )三大类[2].藻胆蛋白具有很高的开发利用价值,既可以作为天然色素用于食品、化妆品、染料等工业,也可以制成荧光试剂,用于临床医学诊断和免疫化学及生物医学等领域[3].叶绿素则是一类不稳定的化合物,叶绿素含量不仅与生长速度有很大关系,并且干紫菜中叶绿素含量的多少与感官测定紫菜优劣最为一致[4].细胞的叶绿素含量随种类和类群而有所不同,同时还受年龄、生长率、光照和营养条件的影响[5].自20世纪中叶发现藻胆蛋白以来,国内外学者对藻胆蛋白的性质和化学组成进行了大量的研究[3],而且对于海藻不同生长阶段藻胆蛋白的含量[6-7]以及氮源[8-10]、光照[11-12]对藻胆蛋白含量的影响进行了研究.但是,不同色泽紫菜品质的比较研究以及在实验过程中各测定条件对藻胆蛋白和叶绿素a 测定结果的影响,报道甚少.本实验旨在了解不同色泽坛紫菜在不同培养条件下的藻胆蛋白及其叶绿素a 含量的差异,以及测定过程中各因素对测定结果的影响,从而为坛紫菜优良品种的选育提供品质方面的指标.1 材料与方法1 1 材料各种不同品系的坛紫菜由集美大学水产学院坛紫菜种质改良及应用实验室提供,挑选藻体完整,集美大学学报(自然科学版)第13卷颜色正常,有光泽、弹性好的生长盛期藻体.1 2 不同色泽藻体的培养从褐红色、紫色、红色、桔红色、绿色5种不同色泽的藻体幼苗中挑选长度为3~5c m 、完整健康的藻体进行充气培养,实验室内温度维持在(20 1) ,并定期更换培养液.待藻体生长至长度为40~80c m 时,阴干后冷冻收藏备用.1 3 不同温度条件藻体的培养本温度实验设定了26、27、28、29、30 共5个高温实验组和1个对照组(21 ),实验藻体包括品系Z-17的F3、Z-26的F3、Z-61的F3、Z-81的F34个不同品系.挑选完整健康的实验藻体(3~5c m )放入锥形瓶中,在不同温度的光照培养箱中静置培养.光周期为12L 12D ,光强为1200~1400lx .培养期间每天观察记录叶状体生长状况和溃烂程度,摇动培养液2次以使其混合均匀.每组藻体培养10d ,藻体阴干后冷冻收藏备用.1 4 藻胆蛋白与叶绿素a 含量的测定藻胆蛋白的测定方法参照文献[13],略有改动.从冰箱中取出冷冻的藻体,称2~3g ,用适量蒸馏水快速洗涤3遍,平铺在干净干燥的纱布上约1~3层,在风扇前吹干或在空调室阴干,放在粉碎器中,间歇粉碎至粉末状.精确称取0 010g 和0 030g 各1份,放在研磨管中,加入适量的0 05m o l/L 磷酸钠缓冲液浸泡约3m i n ,研磨至充分,倒入50mL 烧杯中,用缓冲液冲洗研磨管3次以上,烧杯中液体总体积约为20mL,盖上铝箔盖子,放入冰箱冷冻(-20 ),然后室温避光解冻,如此反复冻融6次,将提取液用300目筛绢网过滤至50mL 离心管中,滤液于4 、10000r/m i n 离心20m in ,取上清液,定容至50m L ,摇匀后分别于565、615、650nm 波长下测定其OD 值.叶绿素a 含量的测定方法参照文献[14],略有改动.粉碎冰冻藻体的处理方法与测定藻胆蛋白的一致,然后精确称取0 010g 和0 030g 各1份,放在研磨管中,加入适量的90%的丙酮水溶液浸泡约3m i n ,研磨至充分(研磨过程应避免强光照射),倒入40mL 的棕色磨口瓶中,用90%的丙酮水溶液冲洗和研磨,盖上瓶盖,将棕色磨口瓶放在避光的地方室温提取叶绿素24h .提取液用300目筛绢网过滤至50m L 离心管中,滤液于4 、10000r /m in 离心20m i n ,取上清液,测定其体积,摇匀后分别于666、730nm 波长下测定其OD 值.1 5 阴干藻体烘干质量的测定称取阴干藻体0 100g ,放入培养皿中于105 烘干3h ,温度稍降后即称其质量(防止吸潮).1 6 不同前处理条件藻胆蛋白与叶绿素a 含量的测定1)研磨与粉碎.在对实验藻体进行处理时,一组进行研磨,另一组进行粉碎,其他实验条件均相同,分别进行藻胆蛋白与叶绿素a 含量的测定.2)黑暗与光照.在藻胆蛋白和叶绿素a 的提取过程中,一组避光(黑暗),另一组在3000l x 光照条件下提取,其他实验条件均相同,分别进行藻胆蛋白与叶绿素a 含量的测定.3)被测藻体的质量.被测藻体质量分别为0 010、0 030、0 050g .其他实验条件均相同,分别进行藻胆蛋白与叶绿素a 含量的测定.4)冻融次数.实验藻体研磨后,一组不冻融,放在4 冰箱中提取;一组冻融3次;一组冻融6次.其他实验条件均相同,然后分别进行藻胆蛋白含量的测定.5)研磨温度.在对实验藻体进行研磨时,一组在室温条件下研磨,一组用4 的冷水保持低温条件研磨.其他实验条件均相同,然后分别进行藻胆蛋白含量的测定.1 7 数据的计算与处理藻胆蛋白和叶绿素a 含量的计算参照文献[7,14]的公式计算;数据处理用SPSS13 0的单因素方差分析(one w ay anova)和t test 进行统计分析.222第3期史修周,等:坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a 的测定与分析2 结果2 1 不同色泽藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 含量的差异如图1、图2所示,不同色泽的坛紫菜藻胆蛋白和叶绿素a 的含量差异较大.在所进行测定的5种不同色泽的坛紫菜中,褐红色型坛紫菜的藻胆蛋白和叶绿素a 的质量比均为最高,分别达到114 87mg /g 和8 83m g /g ;紫色型的藻胆蛋白的质量比高达108 05m g /g ,但是叶绿素a 的质量比却较低(4 64m g /g);桔红色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 的质量比均比较低,分别为59 81m g /g 和4 58m g /g ;绿色型的藻胆蛋白的质量比最低(55 39m g /g).统计分析表明桔红色和绿色藻胆蛋白的质量比差异显著(P <0 05),其余色泽间差异极显著(P <0 01).2 2 不同培养温度对藻体色素含量的影响在不同温度的培养实验中,随着温度升高藻体容易出现溃烂.在28、29 培养的藻体颜色明显变淡,生长缓慢或者不生长.在4个不同品系的温度实验中,除Z-26的F3外,对照组藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 含量均低于高温培养条件下生长的藻体.除Z-17的F3的27 实验组外,各高温实验组藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 含量随着温度升高而增加(见表1).表1 不同温度培养的坛紫菜各品系4种主要色素的含量Tab 1 The con t en t o f four m a in p igmen ts in P ha i ta ne ns i s o f d iff e ren t stra ins a t d iff e ren t temperatures(m g g -1)品系温度/ 藻红蛋白藻蓝蛋白别藻蓝蛋白藻胆蛋白叶绿素aZ-17F 32124.14 1.52114.55 1.37110.52 1.55449.21 4.4354.74 0.0162639.31 1.56320.44 0.99716.77 0.75076.52 3.282**5.10 0.052*2738.11 0.23018.66 0.44615.94 1.03672.72 1.513**4.96 0.073*2845.95 2.81420.93 1.72416.98 1.60983.87 6.137**6.41 0.157**Z-26F 32134.46 0.90417.72 0.75711.16 1.15763.35 0.5116.82 0.2112628.89 0.43916.04 0.94311.98 2.36756.91 1.444**5.61 0.338**2735.85 0.76617.22 0.44514.49 3.13067.56 2.443*5.95 0.214**2841.64 1.29616.68 0.53210.72 0.70369.04 1.145**6.03 0.077**Z-81F 32122.34 0.99715.55 0.53910.44 0.43548.34 1.2024.67 0.1432626.21 6.26417.42 4.95811.79 3.41155.42 0.222**5.58 0.054**2728.75 2.03816.57 1.53110.62 0.97455.94 4.450**5.87 0.103**2831.16 1.71916.89 1.48112.49 0.48360.54 3.950**5.00 0.052**Z-61F 32130.43 2.69614.42 0.89410.88 0.83755.73 4.3026.23 0.1072637.81 4.98916.62 3.09711.24 1.44865.67 9.499*6.71 0.272*2747.24 0.88220.11 0.50814.89 0.27882.23 1.137**7.17 0.117**2848.24 1.10117.54 0.49913.13 0.59178.92 0.432**6.42 0.216 说明:*为差异显著(P <0.05),**为差异极显著(P <0.01).2 3 不同前处理条件对藻胆蛋白和叶绿素a 含量测定结果的影响1)研磨与粉碎.经过研磨藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 测定结果明显高于经过粉碎的.经过研磨,223集美大学学报(自然科学版)第13卷紫色型和桔色型藻体的总藻胆蛋白含量分别是经过粉碎的3 8倍和2 4倍.经过研磨藻体的叶绿素a 的质量比测定结果分别是经过粉碎的10 4倍和11 9倍(见表2).2)光照与黑暗.采取避光措施的紫色型和桔色型藻体的藻胆蛋白的质量比分别比在3000l x 光照条件下提取的高24 9%和26 6%.而光照对叶绿素a 测定结果的影响更大.在光照条件下提取的紫色型和桔色型藻体的叶绿素a 的质量比测定结果分别为0 48m g /g 和2 04m g /g ;而在铝箔包裹的棕色瓶中提取的藻体,叶绿素a 的质量比分别达到4 82m g /g 和5 47m g /g ,分别是光照下提取的10 0倍和2 7倍(见表2).表2 研磨及光照对4种色素测定结果的影响Tab 2 E ff ects o f gr ind and illu m ina tion on the resu lt s of f o ur p igmen t conten t(m g g -1)品系处理条件藻红蛋白藻蓝蛋白别藻蓝蛋白总藻胆蛋白叶绿素a紫色型桔色型研磨19.23 0.4575.36 0.4558.89 0.15433.48 0.2920.44 0.010粉碎67.06 0.69331.10 0.61727.77 0.189125.93 0.509**4.57 0.026**光照53.42 0.14527.81 0.13919.57 0.056100.80 0.2600.48 0.036避光67.06 0.69331.10 0.61727.77 0.189125.93 0.509**4.82 0.006**研磨14.86 0.0303.08 0.0967.59 0.25325.53 0.3760.46 0.010粉碎50.03 0.1401.76 0.2678.64 0.05060.43 0.184**5.47 0.021**光照39.59 0.2741.75 0.3916.40 0.14647.74 0.1852.04 0.004避光50.030.1401.760.2678.640.05060.43 0.184**5.47 0.021**说明:*为差异显著(P <0.05),**为差异极显著(P <0.01).3)被测藻体的质量.被测藻体的质量对藻胆蛋白和叶绿素a的质量比的测定结果没有明显的影响(见图3,表3).表3 藻体质量对测定叶绿素a 的质量比的影响Tab 4 The con t en t o f ch.l a w it h d ifferentwe i g h ts o f P ha it a ne ns i s(mg g -1)品系0.01g 实验组0.03g 实验组0.05g 实验组紫色型4.98 0.0064.80 0.0024.20 0.004桔色型4.74 0.0144.71 0.0084.66 0.0014)冻融次数与研磨温度.藻胆蛋白的含量随着冻融次数的增加而略有增加,研磨温度对藻胆蛋白的测定结果影响较小(见表4).表4 不同冻融次数和研磨温度对藻胆蛋白的质量比的影响Tab 4 The content o f phycob ilip ro t e in o f d iff e rent freeze t haw ing tm i es and temperature(m g g -1)品系处理条件藻红蛋白藻蓝蛋白别藻蓝蛋白总藻胆蛋白紫色型桔色型不冻融63.63 0.14026.99 0.40824.22 0.614114.84 0.261冻融3次66.76 0.16128.67 0.20124.67 0.528120.11 0.768*冻融6次67.06 0.69331.10 0.61727.77 0.189125.93 0.509*4 67.06 0.69331.10 0.61727.77 0.189125.93 0.509室温20 65.71 0.15730.59 0.24627.89 0.518124.19 0.414不冻融45.99 0.5964.30 0.17612.78 0.05663.07 0.420冻融3次51.18 0.1594.04 0.18812.83 0.22468.05 0.259冻融6次53.34 0.1664.61 0.19212.96 0.25470.91 0.5224 53.34 0.1664.61 0.19212.96 0.25470.91 0.522室温2049.820.3313.330.13312.820.09665.970.476* 说明:*为差异显著(P <0.05),**为差异极显著(P <0.01).224第3期史修周,等:坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a 的测定与分析3 讨论3 1 坛紫菜色素含量与生长的关系坛紫菜选育可以通过蛋白质、藻胆蛋白以及叶绿素a 含量、生长速度、藻体厚度等重要指标来确定其品种的优劣.藻胆蛋白是坛紫菜光合作用中重要的辅助色素蛋白,其中藻红蛋白在红藻的捕光色素系统中首先捕获光能,然后传递给藻蓝蛋白,再传递给别藻蓝蛋白;藻胆蛋白还可以作为藻体细胞的贮存蛋白,有利于藻类在自然界中的生存竞争[4].坛紫菜在不同生长期,藻胆蛋白总量占干坛紫菜的百分含量由初期到盛期基本不变,到末期大幅度减少.藻胆蛋白在藻体细胞中直接参与光合作用中的能量吸收和传递[7].叶绿素a 是坛紫菜重要的光合色素,含量的高低与藻体本身的营养生长旺盛与否密切相关.本实验结果表明不同色泽的坛紫菜4种主要色素的差异显著,其中褐色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 含量较高,相应地该品系的藻体生长较快;而生长相对较慢的桔红色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a 含量较低.这充分证明了藻胆色素和叶绿素a 作为紫菜光合作用的捕光色素,与紫菜生长的关系密切.3 2 测定条件对坛紫菜色素含量测定结果影响的分析藻胆蛋白属于胞内蛋白质,要破碎海藻细胞的细胞壁、细胞膜,才能使藻胆蛋白以溶解的状态释放出来,并注意保持其活性.细胞破碎程度越高,藻胆蛋白的得率和纯度也越高,不同的细胞破碎方法提取效果不同.因此,采用何种细胞破碎技术是直接影响藻胆蛋白提取效率的关键因素之一[15].本实验以藻胆蛋白含量测定结果为指标,对研磨法和反复冻融法的破壁效果进行比较,结果显示研磨法能破碎80%以上的细胞,若将研磨法和反复冻融法结合起来,先用研磨法破碎绝大多数的细胞,针对游离的细胞再用反复冻融法使其破碎,能更加准确地测定细胞的胞内物质含量.藻胆蛋白在受热或强光照射时易变性[16-18],叶绿素受光照时容易氧化分解[5],因此在提取过程中应避免光照并保持低温.3 3 坛紫菜主要色素的应用前景展望坛紫菜作为一种经济价值很高的红藻,具有多种生物活性成分,如紫菜的多糖具有降血脂、免疫调节、抗凝血等功能[19-20];紫菜的 -胡萝卜素能猝灭生物体内化学活性很高的自由基,从而降低因自由基诱发的过氧化作用,具有延缓衰老和抵抗癌症的作用.而且坛紫菜除了其食用、药用、营养和提取活性物质等价值外,不同色泽的坛紫菜在发展观赏业、提取色素和制成色泽鲜艳的食品等方面都具有重要的开发价值.藻胆蛋白作为紫菜体内的捕光色素蛋白和胞内储存蛋白,同样也具有重要的生理功能;而叶绿素不仅与生长速度有很大关系,并且干紫菜中叶绿素含量的多少跟感官评定紫菜优劣最为一致[1].因此,本研究能更加准确地测定藻胆蛋白和叶绿素a 含量,为紫菜优良品种的选育和应用提供依据.本研究还初步探讨了藻胆蛋白和叶绿素a 含量与培养环境的关系,但是,对于环境因素所引起的细胞在微观水平上的变化及生理机理,还有待于进一步的研究.[参考文献][1]黄秋,左正宏,李勇斌,等.60Co -r 诱变坛紫菜的海区栽培选育及品质性状初步分析[J].台湾海峡,2006,25(2):250 255.[2]曾呈奎,王素娟,刘思俭,等.藻类栽培学[M ].上海:上海科技出版社,1985:135 211.[3]高洪峰,曹文达,纪明候.坛紫菜中藻胆蛋白的性质和化学组成研究[J].海洋与湖沼,1993,24(4):351 355.[4]何培民,秦松,严小军,等.海藻生物技术及其应用[M ].北京:化学工业出版社,2007:199 211.[5]戴荣继,黄春,佟斌,等.藻类叶绿素及其降解产物的测定方法[J].中央民族大学学报,2004,13(1):75 80.[6]山川健重.海藻化学的研究[J].日本水产学会志,1953,18:478 482.[7]高洪峰.不同生长期坛紫菜中藻胆蛋白的含量变化[J].海洋与湖沼,1993,24(6):645 648.[8]FABREGAS J ,GA RCI A D,MORALES E ,et a.l R ene w a l ra te o f sem iconti nuous cultures of t he m icroa l ga P orphyridiu mcruentu m m odifies phycoery t hr i n ,exopo l y sacchar i de and fatty ac i d productiv it y [J].J F er m enta ti on &B ioeng i neeri ng ,225集美大学学报(自然科学版)第13卷1998,86(5):477 481.[9]S TEG L I CH C,BE HRENFELD M,KO BL IZEK M,et a.l N itrogen depr i vation strong l y affects photosyste m bu t notphycoe rythr i n l eve l i n t he d i v i nyl chlorophy ll b con tai n i ng cyanobac teriu m P ro c h lorococcus marinus [J].B i ochi m ica EtB iophys i ca A cta B i oenergetics ,2001,1503(3):341 349.[10]陈新美,梅兴国,房伟.培养条件对螺旋藻生长和藻胆蛋白含量的影响[J].氨基酸和生物资源,2003,25(1):21 24.[11]PO S T I U S C ,KENTER U,W ACKER A,e t a.l L ight causes selecti on among t w o phycoery t hr i n r i ch Synechococcus isolates fro m L ake Constance [J].J Fer m entati on and B i o eng i nee ri ng ,1998,86(5):477 481.[12]向文洲,吴伯堂,曾呈奎.海水钝顶螺旋藻藻胆蛋白的初步研究[J].热带海洋,1991,10(4):74 78.[13]汤朝晖,蒋加伦.钝顶螺旋藻藻胆蛋白的提取及特征初报[J].东海海洋,1993,12:49 54.[14]JENSEN.Phy si o l og ical and B iochen ical M ethods :Ch l o rophy lls and Ca ro teno i ds [M ].L ondon :Cambr i dge U n i v .press ,1978:59 70.[15]肖海芳,马海乐,孙进良,等.不同破壁方法对条斑紫菜提取效果的影响[J].食品研究与开发,2006,27(10):54 56.[16]张龙翔,张应芳,李令媛,等.生化实验方法和技术[M ].北京:高等教育出版社,1981.[17]彭卫民,商树田,刘国琴.钝顶螺旋藻(Sp-D )藻胆蛋白的提取[J].食品科学,1999(6):48 49.[18]王广策,周百成,曾呈奎.钝顶螺旋藻C -藻蓝蛋白和多管藻R -藻红蛋白的分离纯化及摩尔消光系数的测定[J].海洋科学,1996(1):52 55.[19]陈必链,林跃鑫,黄健.坛紫菜的营养评价[J].中国海洋药物,2001(2):51 53.[20]高淑清,单保恩.条斑紫菜生物学作用的研究进展[J].现代中西医结合杂志,2004,13(12):1661 1662.M easurem ent and Analysis of the Contents of Phycobili protei n andChlorophyl a i n Porphyra hait anensisSH I X iu zhou 1,XU Y an 1,LIANG Yan 1,X IE Chao tian1,2,3,JI De hua1,2,3,C H EN Chang sheng1,2,3,LIU Pe i juan 1,WANG Feng x ia1(1.F isheries C oll ege ,Ji m e iU n i ve rsity ,X ia m en 361021,Ch i na ;2.K ey L aboratory of Sc i ence and T echno logy forA quacu lture and Food Safety (Ji m e iU n i ve rs i ty),Fu jian P rov i nce ,X ia m en 361021,Chi na ;3.Instit ute o f A quacult ure B iotechno logy ,Ji m ei U niversity ,X ia m en 361021,China)Abst ract :The paper has stud ied the con tents o f phycob ilipr o te i n and c h l a in Por phy ra haitanensis w ith different co lors under d ifferent cu lture te m perature conditions ,and severa l factors in pre treat m ent affecting t h e m ensuration resu lts .The resu lts sho w ed tha:t 1)I n nor m a l cu lture conditi o n ,the contents o f phycob ilip rotein and chl a i n P orphyra hait a nensis t h allus w ith different co l o ur w ere differen.t The con tents o f phycobil i p rotein and chl a i n m arroon type w ere the h i g hes,t 114 87m g /g and 8 83m g /g respectively .The phyco bolopro tein o f green type w as the lo w est (55 39m g /g)and the chlorophyll o f redd ish ye ll o w type w as a lso the lo w est (4 58m g /g).2)The contents o f four pig m ents w ere d ifferen t i n P orphyra haitanensis tha ll u s at dif ferent cu ltivated te m perature .The h i g her the te m pert u re w as ,the higher t h e contents of p i g m ent w ere .3)Grind w as the m ost i m po rtant one of all the facto rs affecti n g the m ensure m en t resu lt o f t h e p i g m ent contents ,and the second one w as ill u m i n ation.K ey w ords :P or phyra haitanensis ;phycobili p rotein ;ch l o rophy l a ;m easure m ent(责任编辑 朱雪莲)226。
藻类叶绿素a的测定
藻类叶绿素a的测定一、实验名称藻类叶绿素a的测定二、实验目的——(水)环境化学中叶绿素a测定意义在地表水环境的富营养化的研究中，叶绿素a是表征浮游植物生物量的最常用的指标之一。
同时，叶绿素a也是用来衡量水体水质，评价水体富营养化水平的标准之一。
三、实验原理叶绿素介绍叶绿素是植物进行光合作用的主要脂溶性色素，它在光合作用的光吸收中起核心作用。
所有光合器官中都含有叶绿素。
叶绿素a和b都溶于乙醇、乙醚、丙酮等，难溶于石油醚，有旋光，主要吸收橙红光和蓝光。
因此，这两种光对光合作用最有效。
当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素不很稳定，光、热、酸、碱、氧、氧化剂等都会使其分解。
在酸性条件下，叶绿素中的镁原子很容易被其他酸代替，绿色消失而变黄，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，加热时反应加速。
叶绿素的实验室测量方法有分光光度法、荧光法、色谱法，其中以传统的分光光度法应用最为广泛。
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L 成正比，即：A =α?C?L式中：α为比例常数。
当溶液浓度以百分比浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。
各有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
（1）单色法已知叶绿素a的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm，已知在波长663nm下，叶绿素a在该溶液中的比吸收系数分别为82.04，因此CA=A663/82，可以计算出叶绿素a的含量(mg/L)。
（2）三色法已知叶绿素a、b的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，且两吸收曲线相交于652nm 处。
藻类叶绿素a的测定
藻类叶绿素a的测定一、实验名称藻类叶绿素a的测定二、实验目的——(水)环境化学中叶绿素a测定意义在地表水环境的富营养化的研究中，叶绿素a是表征浮游植物生物量的最常用的指标之一。
同时，叶绿素a也是用来衡量水体水质，评价水体富营养化水平的标准之一。
三、实验原理叶绿素介绍叶绿素是植物进行光合作用的主要脂溶性色素，它在光合作用的光吸收中起核心作用。
所有光合器官中都含有叶绿素。
叶绿素a和b都溶于乙醇、乙醚、丙酮等，难溶于石油醚，有旋光，主要吸收橙红光和蓝光。
因此，这两种光对光合作用最有效。
当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素不很稳定，光、热、酸、碱、氧、氧化剂等都会使其分解。
在酸性条件下，叶绿素中的镁原子很容易被其他酸代替，绿色消失而变黄，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，加热时反应加速。
叶绿素的实验室测量方法有分光光度法、荧光法、色谱法，其中以传统的分光光度法应用最为广泛。
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：A =α•C•L式中：α为比例常数。
当溶液浓度以百分比浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
（1）单色法已知叶绿素a的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm，已知在波长663nm下，叶绿素a在该溶液中的比吸收系数分别为82.04，因此C A=A663/82，可以计算出叶绿素a的含量(mg/L)。
（2）三色法已知叶绿素a、b的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，且两吸收曲线相交于652nm 处。
富营养化水体中藻类的测定叶绿素a法
（7）
CT为叶绿素的总浓度
（5） （6）
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实验仪器及材料
• 实验材料： • 富营养化水体中的藻类
• 实验仪器及试剂： • UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器；研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸；丙酮；石 英砂；CaCO3；
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实验步骤
1. 提取叶绿素
于天平上称取0.5g藻体，（也可用打孔器打取一定数量的 叶圆片，计算总的叶面积），剪碎后置于研体中，加入 5ml 80%丙酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀 浆，用滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量筒内， 并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀，用移液管小心 抽取5ml转入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至 25ml（最终植物材料与提取液的比例为W：V＝0.5： 50＝1：100，叶色深的植物材料比例要稀释到1： 200）。
在海岸或海湾中，引起“赤潮”的藻类主要是甲 Ceratium ）、环沟藻属
（Gymnodinium）、膝沟藻属（Gonyaulax
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水体富营养化
•评价水体富营养化的指标
❖ 测定水域中光合作用强度与呼吸作用强度之比
❖测定藻类生产潜在能力（AGP） ❖黑❖其它评价富营养化的方法
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水体富营养化
水体形成富营养化的指标是：水体中含氮量大于0.2-0.3 mg/L ，含磷 量大于0.01~0.02mg/L ，生化需氧量（BOD5 ）大于10mg/L。在pH值7~9 的淡水中细菌总数达到105个／ml，标志藻类生长的叶绿素a大于10g／L。
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坛紫菜R-藻红蛋白的分离纯化及其稳定性研究的开题报告
坛紫菜R-藻红蛋白的分离纯化及其稳定性研究的开
题报告
一、研究背景和意义
坛紫菜是一种富含藻红蛋白的海藻，在食品加工和生物医药等领域具有广泛的应用价值。
藻红蛋白是一种天然色素，具有良好的红色稳定性和抗氧化性能，在食品工业中被广泛应用于肉类制品、沙拉酱、果汁等食品的着色和保鲜。
同时，藻红蛋白还具有一定的药物和保健功能，可用于治疗贫血、改善血液循环、降低血压等方面。
因此，对坛紫菜R-藻红蛋白的分离纯化及稳定性研究具有重要的理论和应用意义。
二、研究目标和内容
1.研究坛紫菜R-藻红蛋白的提取及分离纯化方法;
2.分析不同分离纯化方法对藻红蛋白的产率和纯度的影响;
3.研究不同因素（如pH值、温度、盐浓度等）对藻红蛋白的稳定性影响及其机理。
三、研究方法和技术路线
1.采用离心和超声法对坛紫菜进行初步提取;
2.采用对流层析、阳离子交换层析、逆向相色谱等方法进行分离纯化;
3.对分离纯化所得的藻红蛋白进行纯度检测和结构分析，并评估其在不同条件下的稳定性。
四、研究预期结果
1.建立一种高效的坛紫菜R-藻红蛋白的提取和分离纯化方法;
2.获得高纯度的藻红蛋白，并分析不同分离纯化方法的影响；
3.研究不同条件（如pH、温度、盐浓度）对藻红蛋白的稳定性影响，了解其分子机理。
五、研究的意义和难点
1.研究结果对于坛紫菜藻红蛋白的应用以及生物学、医学领域的研
究具有一定的推广和应用价值；
2.由于坛紫菜R-藻红蛋白具有一定的色泽和抗氧化性能，其在放射
性消除、肿瘤治疗等领域中有着广泛的应用前景；
3.研究中的难点主要在于坛紫菜R-藻红蛋白提取和分离纯化方法的
优化以及对其稳定性的深入探究。
一种坛紫菜叶状体测定新方法研究
１ 材 料 与方 法 １ ． １ 材料
坛紫菜于 ２ ０ １ ５ 年１ １ 月采于象山． 当天进行挑
中国高校优秀科技期刊
一
种坛紫菜叶状体测定新方法研究
俞辰泽， 骆 其君 ，余 贝，严 小军
（ 宁波大 学 海洋学院，浙江 宁波 ３ １ ５ ２ １ １ ）
摘要：通过一 系列试验探究坛紫菜不 同生物量的指标，以期用测量叶面积的方式来替代传统测
量指 标 ． 研 究 了环 境 的光 、 温、 湿度 对 于叶 面积 测定 结果 的影 响 ，明确 其适 用 范 围；设 计 了相 关
体现植物生长 、营养状况 的重要指标， 也直接影响
植物 的受光， 是植物群体结 构合理 性的重要标 志 之一 ， 又是决定生物量和产量 的关键 因子 ［ 引 ． 叶
材料培养 ： 将复苏后紫菜放入 自然海水 中培 养， ２ ４ ｈ 充气， 培养温度 １ ６ ℃， 光暗时间 １ ２ Ｌ ： １ ２ Ｄ ，
比值 的试验， 探究这一测定方法的可行 陛，以期得
某个单因素试验时， 其他 ２ 个因素不变） ， 随机挑选 ５条复苏后的紫菜， 每条紫菜重复测量 ５次， 无显
著差异的因素取平均值． 温度试验： 设置 ０ ， １ ０ ， ２ ０ ， ３ ０ ｏ Ｃ 等４ 个温度梯 度， 其他条件同上．
光照 强度 １ ０ ０ ０ｌ ｘ ．
１ ． ２ 测 量环 境
面积 的测量在高等植物 中应用较多 ， 且已有研究 证明小麦的干重与叶面积 的相关性较高【 ９ ¨ ． 坛紫 菜叶状体 由单层细胞组成， 呈薄膜状 ［ １ ， 最后 的收
叶绿素a的测定(B)
内江市环境保护监测站实验报告分析人员：质量负责人：技术负责人：报告单位：内江市环境保护监测站报告日期：2010 年8月2日叶绿素a的测定（B）一、样品名称：叶绿素a编号：叶绿素a考核任务来源：四川省环保厅上岗考核组实验目的：四川省监测人员上岗考核实验日期：2010年7月27日报告日期：2010年7月27日二、实验目的叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。
通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。
在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。
三、水样的采集与保存可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。
湖泊，水库采样500ml，池塘300ml，采样量视浮游植物的分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。
采样点及采样时间同“浮游植物”。
水样采集后应放置在阴凉处，避免日光直射。
最好立即进行测定的预处理，如需进过一段时间（4~48h）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0~4℃）避光处。
在没升水样中假如1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。
水样在冰冻情况下（-20℃）最长可保存30d。
四、仪器设备（1）分光光度计（2）真空泵（3）离心机（4）乙酸纤维滤膜（孔径0.45ug）（5）抽滤器（6）组织研磨器或其他细胞破碎器（7）碳酸镁粉末（8）90%丙酮五、实验步骤(1)以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。
倒入定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大（约为50kpa）。
水样抽完后，继续抽1~2min，以减少滤膜上的水分。
如需段时期保存1~2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存（30d），则应放入低温冰箱（-20℃）保存。
(2)取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6~8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2~3ml90%的丙酮，充分研磨，提取液绿色a。
用离心机（3000~4000r/min）离心10min。
将上清液倒入5ml或10ml容量瓶中。
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第13卷第3期2008年7月集美大学学报(自然科学版)JournalofJimeiUniversity(NaturalScience)Vol 13 No.3Ju.l2008[文章编号]1007-7405(2008)03-0221-06坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a的测定与分析史修周,徐燕,梁艳,谢潮添1111,2,3,纪德华1,2,3,陈昌生1,2,3,柳佩娟,王凤霞11 (1.集美大学水产学院,福建厦门361021;2.福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建厦门361021;3.集美大学水产生物技术研究所,福建厦门361021)[摘要]研究了不同色泽坛紫菜在不同培养温度条件下含藻胆蛋白及其叶绿素a量的差异,以及样品前处理过程中各因素(研磨、光照、被测定藻体的量等)对测定结果的影响.实验结果表明:1)不同色泽的坛紫菜叶状体在正常培养条件下,含藻胆蛋白和叶绿素a的量各不相同,其中褐红色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a的质量比最高,分别达11487mg/g和8 83mg/g;绿色型藻体的藻胆蛋白的质量比最低(55 39mg/g);桔红色型藻体的叶绿素a的质量比最低(4 58mg/g).2)不同温度下培养的坛紫菜,其43)种色素的含量存在一定的差异.在本实验条件下,随着培养温度的升高,坛紫菜色素含量也随之增加.在影响测定结果的各因素中,对坛紫菜4种色素含量的测定结果影响最大的是研磨,其次为光照.[关键词]坛紫菜;藻胆蛋白;叶绿素a;测定[中图分类号]S968 4[文献标志码]A0 引言坛紫菜(Porphyrahaitanensis)属暖温带性海藻,在我国东南沿海均有分布,是优良海藻栽培品种之一.但近年来坛紫菜种质退化、品质下降,造成生长期缩短、病害严重、产量降低.因此,选育高产、抗病、耐高温的紫菜新品种已成为亟待解决的问题.藻胆蛋白和叶绿素含量是紫菜品质选育方面的重要指标之一.藻胆蛋白是红藻、蓝藻和某些甲藻中的一类特有的光合作用天然色素,可分[2]为藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)三大类.藻胆蛋白具有很高的开发利用价值,既可以作为天然色素用于食品、化妆品、染料等工业,也可以制成荧光试剂,用于临床医学诊断和免疫化学及生物医学等领域[3][1].叶绿素则是一类不稳定的化合物,叶绿素含量不仅与生长速度[4]有很大关系,并且干紫菜中叶绿素含量的多少与感官测定紫菜优劣最为一致.细胞的叶绿素含量随种类和类群而有所不同,同时还受年龄、生长率、光照和营养条件的影响.自20世纪中叶发现[3]藻胆蛋白以来,国内外学者对藻胆蛋白的性质和化学组成进行了大量的研究,而且对于海藻不同生长阶段藻胆蛋白的含量[6-7][5]以及氮源[8-10]、光照[11-12]对藻胆蛋白含量的影响进行了研究.但是,不同色泽紫菜品质的比较研究以及在实验过程中各测定条件对藻胆蛋白和叶绿素a测定结果的影响,报道甚少.本实验旨在了解不同色泽坛紫菜在不同培养条件下的藻胆蛋白及其叶绿素a含量的差异,以及测定过程中各因素对测定结果的影响,从而为坛紫菜优良品种的选育提供品质方面的指标.1 材料与方法1 1 材料各种不同品系的坛紫菜由集美大学水产学院坛紫菜种质改良及应用实验室提供,挑选藻体完整, [收稿日期]2007-10-09 [修回日期]2007-11-10[基金项目]国家海洋863资助项目(2006AA10A413);国家自然科学基金资助项目(40676077);福建省科技重大专项资助项目(2005NZ1025)[作者简介]史修周(1982 ),男,硕士生,从事紫菜生物学研究.通讯作者:陈昌生(1957 ),男,教授,l222 集美大学学报(自然科学版)第13卷颜色正常,有光泽、弹性好的生长盛期藻体.1 2 不同色泽藻体的培养从褐红色、紫色、红色、桔红色、绿色5种不同色泽的藻体幼苗中挑选长度为3~5cm、完整健康的藻体进行充气培养,实验室内温度维持在(20 1) ,并定期更换培养液.待藻体生长至长度为40~80cm时,阴干后冷冻收藏备用.1 3 不同温度条件藻体的培养本温度实验设定了26、27、28、29、30 共5个高温实验组和1个对照组(21 ),实验藻体包括品系Z-17的F3、Z-26的F3、Z-61的F3、Z-81的F34个不同品系.挑选完整健康的实验藻体(3~5cm)放入锥形瓶中,在不同温度的光照培养箱中静置培养.光周期为12L 12D,光强为1200~1400lx.培养期间每天观察记录叶状体生长状况和溃烂程度,摇动培养液2次以使其混合均匀.每组藻体培养10d,藻体阴干后冷冻收藏备用.1 4 藻胆蛋白与叶绿素a含量的测定藻胆蛋白的测定方法参照文献[13],略有改动.从冰箱中取出冷冻的藻体,称2~3g,用适量蒸馏水快速洗涤3遍,平铺在干净干燥的纱布上约1~3层,在风扇前吹干或在空调室阴干,放在粉碎器中,间歇粉碎至粉末状.精确称取0 010g和0 030g各1份,放在研磨管中,加入适量的0 05mol/L磷酸钠缓冲液浸泡约3min,研磨至充分,倒入50mL烧杯中,用缓冲液冲洗研磨管3次以上,烧杯中液体总体积约为20mL,盖上铝箔盖子,放入冰箱冷冻(-20 ),然后室温避光解冻,如此反复冻融6次,将提取液用300目筛绢网过滤至50mL离心管中,滤液于4 、10000r/min离心20min,取上清液,定容至50mL,摇匀后分别于565、615、650nm波长下测定其OD值.叶绿素a含量的测定方法参照文献[14],略有改动.粉碎冰冻藻体的处理方法与测定藻胆蛋白的一致,然后精确称取0 010g和0 030g各1份,放在研磨管中,加入适量的90%的丙酮水溶液浸泡约3min,研磨至充分(研磨过程应避免强光照射),倒入40mL 的棕色磨口瓶中,用90%的丙酮水溶液冲洗和研磨,盖上瓶盖,将棕色磨口瓶放在避光的地方室温提取叶绿素24h.提取液用300目筛绢网过滤至50mL离心管中,滤液于4 、10000r/min离心20min,取上清液,测定其体积,摇匀后分别于666、730nm波长下测定其OD值.1 5 阴干藻体烘干质量的测定称取阴干藻体0 100g,放入培养皿中于105 烘干3h,温度稍降后即称其质量(防止吸潮).1 6 不同前处理条件藻胆蛋白与叶绿素a含量的测定1)研磨与粉碎.在对实验藻体进行处理时,一组进行研磨,另一组进行粉碎,其他实验条件均相同,分别进行藻胆蛋白与叶绿素a含量的测定.2)黑暗与光照.在藻胆蛋白和叶绿素a的提取过程中,一组避光(黑暗),另一组在3000lx光照条件下提取,其他实验条件均相同,分别进行藻胆蛋白与叶绿素a含量的测定.3)被测藻体的质量.被测藻体质量分别为0 010、0 030、0 050g.其他实验条件均相同,分别进行藻胆蛋白与叶绿素a含量的测定.4)冻融次数.实验藻体研磨后,一组不冻融,放在4 冰箱中提取;一组冻融3次;一组冻融6次.其他实验条件均相同,然后分别进行藻胆蛋白含量的测定.5)研磨温度.在对实验藻体进行研磨时,一组在室温条件下研磨,一组用4 的冷水保持低温条件研磨.其他实验条件均相同,然后分别进行藻胆蛋白含量的测定.1 7 数据的计算与处理藻胆蛋白和叶绿素a含量的计算参照文献[7,14]的公式计算;数据处理用SPSS13 0的单因素方差分析(one wayanova)和t test进行统计分析.第3期史修周,等:坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a的测定与分析 223 2 结果2 1 不同色泽藻体的藻胆蛋白和叶绿素a含量的差异如图1、图2所示,不同色泽的坛紫菜藻胆蛋白和叶绿素a的含量差异较大.在所进行测定的5种不同色泽的坛紫菜中,褐红色型坛紫菜的藻胆蛋白和叶绿素a的质量比均为最高,分别达到114 87mg/g和8 83mg/g;紫色型的藻胆蛋白的质量比高达108 05mg/g,但是叶绿素a的质量比却较低(4 64mg/g);桔红色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a的质量比均比较低,分别为59 81mg/g和4 58mg/g;绿色型的藻胆蛋白的质量比最低(55 39mg/g).统计分析表明桔红色和绿色藻胆蛋白的质量比差异显著(P<0 05),其余色泽间差异极显著(P<0 01).2 2 不同培养温度对藻体色素含量的影响在不同温度的培养实验中,随着温度升高藻体容易出现溃烂.在28、29 培养的藻体颜色明显变淡,生长缓慢或者不生长.在4个不同品系的温度实验中,除Z-26的F3外,对照组藻体的藻胆蛋白和叶绿素a含量均低于高温培养条件下生长的藻体.除Z-17的F3的27 实验组外,各高温实验组藻体的藻胆蛋白和叶绿素a含量随着温度升高而增加(见表1).表1 不同温度培养的坛紫菜各品系4种主要色素的含量Tab 1 ThecontentoffourmainpigmentsinP haitanensisofdifferentstrainsatdifferenttemperatures(mg g-1)品系温度/ 藻红蛋白藻蓝蛋白别藻蓝蛋白藻胆蛋白叶绿素a2124.14 1.52114.55 1.37110.52 1.55449.21 4.4354.74 0.016**2639.31 1.56320.44 0.99716.77 0.75076.52 3.2825.10 0.052*Z-17F32738.11 0.23018.66 0.44615.94 1.03672.72 1.513**4.96 0.073*2845.95 2.81420.93 1.72416.98 1.60983.87 6.137**6.41 0.157**2134.46 0.90417.72 0.75711.16 1.15763.35 0.5116.82 0.211**2628.89 0.43916.04 0.94311.98 2.36756.91 1.4445.61 0.338**Z-26F32735.85 0.76617.22 0.44514.49 3.13067.56 2.443*5.95 0.214**2841.64 1.29616.68 0.53210.72 0.70369.04 1.145**6.03 0.077**2122.34 0.99715.55 0.53910.44 0.43548.34 1.2024.67 0.143**2626.21 6.26417.42 4.95811.79 3.41155.42 0.2225.58 0.054**Z-81F32728.75 2.03816.57 1.53110.62 0.97455.94 4.450**5.87 0.103**2831.16 1.71916.89 1.48112.49 0.48360.54 3.950**5.00 0.052**2130.43 2.69614.42 0.89410.88 0.83755.73 4.3026.23 0.107*2637.81 4.98916.62 3.09711.24 1.44865.67 9.4996.71 0.272*Z-61F32747.24 0.88220.11 0.50814.89 0.27882.23 1.137**7.17 0.117**2848.24 1.10117.54 0.49913.13 0.5916.42 0.21678.92 0.432**说明:*为差异显著(P<0.05),**为差异极显著(P<0.01).2 3 不同前处理条件对藻胆蛋白和叶绿素a含量测定结果的影响.224集美大学学报(自然科学版)第13卷紫色型和桔色型藻体的总藻胆蛋白含量分别是经过粉碎的3 8倍和2 4倍.经过研磨藻体的叶绿素a的质量比测定结果分别是经过粉碎的10 4倍和11 9倍(见表2).2)光照与黑暗.采取避光措施的紫色型和桔色型藻体的藻胆蛋白的质量比分别比在3000lx光照条件下提取的高24 9%和26 6%.而光照对叶绿素a测定结果的影响更大.在光照条件下提取的紫色型和桔色型藻体的叶绿素a的质量比测定结果分别为0 48mg/g和2 04mg/g;而在铝箔包裹的棕色瓶中提取的藻体,叶绿素a的质量比分别达到4 82mg/g和5 47mg/g,分别是光照下提取的10 0倍和2 7倍(见表2).表2 研磨及光照对4种色素测定结果的影响Tab 2 Effectsofgrindandilluminationontheresultsoffourpigmentcontent处理条件研磨粉碎紫色型光照避光研磨粉碎光照避光品系藻红蛋白19.23 0.45767.06 0.69353.42 0.14567.06 0.69314.50.39.50.86 03 59 030.0.0.0.030140274140藻蓝蛋白5.36 0.45531.10 0.61727.81 0.13931.10 0.6173.1.1.1.08 76 75 760.0.0.0.096267391267别藻蓝蛋白8.89 0.15427.77 0.18919.57 0.05627.77 0.1897.8.6.8.59 64 40 640.0.0.0.253050146050总藻胆蛋白33.48 0.292125.93 0.509**100.80 0.260125.93 0.509**25.53 0.37660.43 0.184**47.74 0.18560.43 0.184**(mg g-1)叶绿素a0.44 0.0104.57 0.026**0.48 0.0364.82 0.006**0.46 0.0105.47 0.021**2.04 0.0045.47 0.021**桔色型说明:*为差异显著(P<0.05),**为差异极显著(P<0.01).3)被测藻体的质量.被测藻体的质量对藻胆蛋白和叶绿素a的质量比的测定结果没有明显的影响(见图3,表3).表3 藻体质量对测定叶绿素a的质量比的影响Tab 4 withdifferent weightsofP haitanensis(mg g-1)品系紫色型桔色型0.01g实验组4.98 0.0064.74 0.0140.03g实验组4.80 0.0024.71 0.0080.05g实验组4.20 0.0044.66 0.0014)冻融次数与研磨温度.藻胆蛋白的含量随着冻融次数的增加而略有增加,研磨温度对藻胆蛋白的测定结果影响较小(见表4).表4 不同冻融次数和研磨温度对藻胆蛋白的质量比的影响Tab 4 Thecontentofphycobiliproteinofdifferentfreezethawingtmiesandtemperature (mg g-1)品系处理条件不冻融冻融3次冻融6次4 室温20 不冻融冻融3次冻融6次4 室温20 藻红蛋白63.63 0.14066.76 0.16167.06 0.69367.06 0.69365.71 0.15745.51.53.53.49.99 18 34 34 820.0.0.0.0.596159166166331藻蓝蛋白26.99 0.40828.67 0.20131.10 0.61731.10 0.61730.59 0.2464.4.4.4.3.30 04 61 61 330.0.0.0.0.176188192192133别藻蓝蛋白24.22 0.61424.67 0.52827.77 0.18927.77 0.18927.890.51812.12.12.12.12.78 83 96 96 820.0.0.0.0.056224254254096总藻胆蛋白114.84 0.261*120.11 0.768*125.93 0.509125.93 0.509124.19 0.41463.68.70.70.65.07 05 91 91 970.0.0.0.0.420259522522*476紫色型桔色型*.)).第3期史修周,等:坛紫菜藻胆蛋白及叶绿素a的测定与分析 225 3 讨论3 1 坛紫菜色素含量与生长的关系坛紫菜选育可以通过蛋白质、藻胆蛋白以及叶绿素a含量、生长速度、藻体厚度等重要指标来确定其品种的优劣.藻胆蛋白是坛紫菜光合作用中重要的辅助色素蛋白,其中藻红蛋白在红藻的捕光色素系统中首先捕获光能,然后传递给藻蓝蛋白,再传递给别藻蓝蛋白;藻胆蛋白还可以作为藻体细胞的贮存蛋白,有利于藻类在自然界中的生存竞争[4].坛紫菜在不同生长期,藻胆蛋白总量占干坛紫菜的百分含量由初期到盛期基本不变,到末期大幅度减少.藻胆蛋白在藻体细胞中直接参与光合作用[7]中的能量吸收和传递.叶绿素a是坛紫菜重要的光合色素,含量的高低与藻体本身的营养生长旺盛与否密切相关.本实验结果表明不同色泽的坛紫菜4种主要色素的差异显著,其中褐色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a含量较高,相应地该品系的藻体生长较快;而生长相对较慢的桔红色型藻体的藻胆蛋白和叶绿素a含量较低.这充分证明了藻胆色素和叶绿素a作为紫菜光合作用的捕光色素,与紫菜生长的关系密切.3 2 测定条件对坛紫菜色素含量测定结果影响的分析藻胆蛋白属于胞内蛋白质,要破碎海藻细胞的细胞壁、细胞膜,才能使藻胆蛋白以溶解的状态释放出来,并注意保持其活性.细胞破碎程度越高,藻胆蛋白的得率和纯度也越高,不同的细胞破碎方法提取效果不同.因此,采用何种细胞破碎技术是直接影响藻胆蛋白提取效率的关键因素之一[15].本实验以藻胆蛋白含量测定结果为指标,对研磨法和反复冻融法的破壁效果进行比较,结果显示研磨法能破碎80%以上的细胞,若将研磨法和反复冻融法结合起来,先用研磨法破碎绝大多数的细胞,针对游离的细胞再用反复冻融法使其破碎,能更加准确地测定细胞的胞内物质含量.藻胆蛋白在受热或强光照射时易变性[16-18],叶绿素受光照时容易氧化分解[5],因此在提取过程中应避免光照并保持低温.3 3 坛紫菜主要色素的应用前景展望坛紫菜作为一种经济价值很高的红藻,具有多种生物活性成分,如紫菜的多糖具有降血脂、免疫调节、抗凝血等功能;紫菜的 -胡萝卜素能猝灭生物体内化学活性很高的自由基,从而降低因自由基诱发的过氧化作用,具有延缓衰老和抵抗癌症的作用.而且坛紫菜除了其食用、药用、营养和提取活性物质等价值外,不同色泽的坛紫菜在发展观赏业、提取色素和制成色泽鲜艳的食品等方面都具有重要的开发价值.藻胆蛋白作为紫菜体内的捕光色素蛋白和胞内储存蛋白,同样也具有重要的生理功能;而叶绿素不仅与生长速度有很大关系,并且干紫菜中叶绿素含量的多少跟感官评定紫菜优[1]劣最为一致.因此,本研究能更加准确地测定藻胆蛋白和叶绿素a含量,为紫菜优良品种的选育和应用提供依据.本研究还初步探讨了藻胆蛋白和叶绿素a含量与培养环境的关系,但是,对于环境因素所引起的细胞在微观水平上的变化及生理机理,还有待于进一步的研究.[19-20][参考文献][1]黄秋,左正宏,李勇斌,等.25(2):250 255.[2]曾呈奎,王素娟,刘思俭,等.藻类栽培学[M].上海:上海科技出版社,1985:135 211. 1993,24(4):351 355.199 211.2004,13(1):75 80.[3]高洪峰,曹文达,纪明候.坛紫菜中藻胆蛋白的性质和化学组成研究[J].海洋与湖沼,[5]戴荣继,黄春,佟斌,等.藻类叶绿素及其降解产物的测定方法[J].中央民族大学学报,[6]山川健重.海藻化学的研究[J].日本水产学会志,1953,18:478 482.[7]高洪峰.不同生长期坛紫菜中藻胆蛋白的含量变化[J].海洋与湖沼,[8]FABREGASJ,GARCIAD,MORALESE,ti1993,24(6):645648.&ieta.lRenewalrateofsemicontinuousculturesofthemicroalgaPorphyridium60Co-r诱变坛紫菜的海区栽培选育及品质性状初步分析[J].台湾海峡,2006,[4]何培民,秦松,严小军,等.海藻生物技术及其应用[M].北京:化学工业出版社,2007:lity2261998,86(5):477 481.集美大学学报(自然科学版)第13卷[9]STEGLICHC,BEHRENFELDM,KOBLIZEKM,eta.lNitrogendeprivationstronglyaffe ctsphotosystem butnotBiochimicaEt2003,phycoerythrinlevelinthedivinyl chlorophyllb containingcyanobacteriumProchlorococcusmarinus[J].BiophysicaActa Bioenergetics,2001,1503(3):341 349.[10]陈新美,梅兴国,房伟.培养条件对螺旋藻生长和藻胆蛋白含量的影响[J].氨基酸和生物资源,25(1):21 24.[11]POSTIUSC,KENTERU,WACKERA,latesfromLakeConstance[J].eta.lLightcausesselectionamongtwophycoerythrin richSynechococcusiso1991,10(4):74 78.49 54.London:CambridgeUniv.2006,JFermentationandBioengineering,1998,86(5):477 481.[12]向文洲,吴伯堂,曾呈奎.海水钝顶螺旋藻藻胆蛋白的初步研究[J].热带海洋,[14]JENSEN.[13]汤朝晖,蒋加伦.钝顶螺旋藻藻胆蛋白的提取及特征初报[J].东海海洋,1993,12:PhysiologicalandBiochenicalMethods:ChlorophyllsandCarotenoids[M].pres s,1978:59 70.[15]肖海芳,马海乐,孙进良,等.不同破壁方法对条斑紫菜提取效果的影响[J].食品研究与开发,27(10):54 56.[16]张龙翔,张应芳,李令媛,等.生化实验方法和技术[M].北京:高等教育出版社,1981.[17]彭卫民,商树田,刘国琴.钝顶螺旋藻(Sp-D)藻胆蛋白的提取[J].食品科学,1999(6):48 49.[18]王广策,周百成,曾呈奎.钝顶螺旋藻C-藻蓝蛋白和多管藻R-藻红蛋白的分离纯化及摩尔消光系数的测定[J].海洋科学,1996(1):52 55.2004,13(12):1661 1662.[19]陈必链,林跃鑫,黄健.坛紫菜的营养评价[J].中国海洋药物,2001(2):51 53.[20]高淑清,单保恩.条斑紫菜生物学作用的研究进展[J].现代中西医结合杂志, MeasurementandAnalysisoftheContentsofPhycobiliproteinand ChlorophylainPorphyrahaitanensisSHIXiu zhou,XUYan,LIANGYan,XIEChao tianCHENChang sheng(1.FisheriesCollege,3.1,2,311111,2,3,JIDe hua11,2,3,,LIUPei juan,WANGFengxiaJimeiUniversity,Xiamen361021,China;2.KeyLaboratoryofScienceandTechnologyforJimeiUniversity,Xiamen361021,China)AquacultureandFoodSafety(JimeiUniversity),Fu jianProvince,Xiamen361021,China;InstituteofAquacultureBiotechnology, Abstract:Thepaperhasstudiedthecontentsofphycobiliproteinandchl ainPorphyrahaitanensiswithdifferentcolorsunderdifferentculturetemperatureconditions,a ndseveralfactorsinpretreatmentaffectingthemensurationresults.Theresultsshowedtha:t1)Innormalculturecondit ion,thecontentsofphycobilip roteinandchl ainPorphyrahaitanensisthalluswithdifferentcolourweredifferen.tThecontentsofphycobil iproteinandchl ainmarroontypewerethehighes,t114 87mg/gand883mg/grespectively.Thephyco boloproteinofgreentypewasthelowest(5539mg/g)andthechlorophyllofreddishyellowtypewasalsothelowest(458mg/g).2)ThecontentsoffourpigmentsweredifferentinPorphyrahaitanensisthallusatdif ferentcultivatedtemperature.Thehigherthetemperturewas,thehigherthecontentsofpigment were.3)Grindwasthemostimportantoneofallthefactorsaffectingthemensurementresultofth epigmentcontents,andthesecondonewasillumination.Keywords:Porphyrahaitanensis;phycobiliprotein;chlorophyla;measurement(责任编辑朱雪莲)。