食品中苯并[a]芘的测定

苯并[a]芘标准液
苯并[a]芘标准贮备液：100ug/mL
3、仪器
脂肪抽提器
层析柱（10cm×350cm）
层析缸
K-D浓缩器
紫外灯
荧光分光光度计
4、操作方法 （1）样品提取 粮食及低水分含量食品 回流抽提，碱皂化6~8h（90下） 皂化液趁热转移至分液滤斗 洗涤接收瓶（50mL95%乙醇） 加水（100mL）振摇提取 静置分层 下层二次提取（70mL环已烷） 合并环已烷 洗涤环已烷层（水，100mL×3） 洗涤水环已烷提取（30mL×2） 浓缩至40mL（60 ℃水浴中）
甲醇溶解、定容（１mL）
（４）测定
色谱条件：流动相甲醇：水（75:25）流速 1.5mL/min
4.6mm×250mm
色谱柱ODS
柱温30℃
食品中苯并[a]芘的测定
一、苯并[a]芘的结构与性质
简称为BaP
针状结晶，沸点310~320℃
溶解特性：水中溶解度为0.004~0.012mg/L
烷、苯、甲苯、
易溶于石油醚、环已烷、已
二甲苯、丙酮
稍溶于乙醇、甲醇
化学性质：稳定，常温下不与硫酸作用，能与硝酸、
高氯酸 反应
碱性条件下稳定
荧光特性：紫外线（360nm）下产生典型紫色荧光
测定标准斑点及样品斑点的荧光激发光谱 和发射光谱
读取F401nm、F406nm、F411nm
（５）计算
相F 对 F荧40光6 强(度F401 F411 ) / 2
x
ms F
( Fi
F0 )
m V2 V1
（二）HPLC法
１、原理
用KOH-甲醇水（1:1）溶液皂化样品中脂肪，环已烷
提取多环芳烃（PAH），再经60%硫酸净化，Sephadex LH-
过滤至分液滤斗
加水、 环已烷提取
环已烷重复提取
环已烷层洗涤（水，125mL×2）
浓缩至25mL
（2）净化 装柱 加样吸附 洗脱（苯30mL） 减压浓缩至0.1~0.5mL
（3）分离 点样 展开（95%乙醇：二氯甲烷=2：
1） 观察（紫外灯照射） 剪下斑点，加苯浸泡溶解。
（4）测定
➢ 工业废水、废气的污染
三废的排放
沥青的利用（沥青中苯并芘含量为
2.5~3.5%）
➢ 细菌、原生生物、淡水藻类及某些高等植物的组 织内合成
藻类、水生植物BaP含量为0.005 μg/kg
部分食品中的Bap含量（μg/kg）
种类
含量
种类
含量
熏奶酪
0.01~5.6
腊肉
0.86~27.6
熏鱼
1.3~15.2
二、食品中苯并[a]芘的来源 ➢ BaP是含碳燃料及有机化合物热解过程中的产
物，是煤、石油、天然气、木材等不完全燃烧 的产物。
空气中BaP含量为0.01~100μg/m3; 地表水中BaP含量为0.03~0.1μg/L; 土壤中BaP含量为0~400μg/kg
➢ 在熏烤、烘烤过程中形成
燃烧产物与食品的直接接触、烟尘与食品的直接接
烤牛肉
0.41~1.58
熏香肠
0.8~2.5
烤羊肉串 1~2.84
熏火腿
3.2
烤鸭皮
0.75~2.39
熏排骨
0.34~5.0
烤鸭
0.06
炸油条
1.4~11
香肠
0.3~0.5
烘大饼
3.0~7.0
蛋清肠
0.18~0.3
三、BaP的危害
BaP为致癌、致突变化学物质，可致多种癌症，并具
有致畸性和遗传毒性。
（一）分配柱层析净化荧光测定法
1.原理
样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取， 再将提取液经液－液分配或色谱柱净化，然后
在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘
在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后
有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，
用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。
样品
溶剂提取 皂化提取
液液分配 柱层析
纸层析
荧光分析
2、试剂
试剂需重蒸，并检查其荧光特性
吸附剂：硅镁型吸附剂 水洗并活化，加5% 水减活
（120℃ 4h）
中性氧化铝 活化
乙酰化滤纸制备：
滤纸（30cm×4cm）→乙酰化（180mL苯： 130mL乙酸酐：0.1mL硫酸）6h,并浸泡过夜→取出 风干
欧共体
0.03ug/kg
调料
德国
1.0ug/kg
肉及肉制品
意大利
食品及饮料
荷兰
1.0ug/kg
肉制品
北欧国家 肉制品
1.0ug/kg
3、一些国家的每日允许摄入量(ug)
0.03ug/kg
五、防治措施 ➢ 加强环境治理 ➢ 改变生产方式 ➢ 改进烹调和加工方法 ➢ 改变饮食习惯 ➢ 去毒处理
六、测定方法
触
粮食烘干
高温下脂肪、胆固醇等成分的热解或热聚（10~70
倍）
高温下食品的焦化或炭化
淀粉390℃时产生 0.7μg/kg 650 ℃时产生
17μg/kg
650 ℃下葡萄糖产生7mg/kg、脂肪酸产生88mg/kg
➢ 加工环节的污染
设备管道 酱油、醋、酒、饮料
纸
包装材料 糖果、面包、冷饮包装用蜡
润滑油等
四、限量标准 1、国家标准允许限量标准
品种
指标
品种
指标
肉 烧烤猪肉、禽肉 ≦5 制 品 叉烧肉、羊肉串 ≦5
植 豆油、花生油 物 植物油 油 茶油
≦10 ≦10
火腿、板鸭
≦5
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
其它油
≦10
烟熏鱼
≦5 粮 稻谷
≦5
熏鸡、熏马肉 ≦5 食 小麦
≦5
熏红肠、香肠 ≦5
大麦
≦5
2、其它一些国家、地区标准
20色谱柱富集样品中PAH，用高效液相色谱仪检测。
２、操作方法
（１）皂化
称取100g样品直接皂化
（２）提取、净化
环已烷萃取，甲醇水洗涤、水洗涤
浓缩
60%硫酸洗涤、水洗涤 过滤（过硅胶、无水硫酸钠）、滤液浓缩
（３）富集
加样于Sephadex LH-20柱上，
异丙醇洗脱
浓缩至干
植物油
环已烷100mL DMF40mL×3
称样20g
分液滤斗
提取
环已烷层 DMF层
环已烷40mL
DMF层
提取
环已烷层 弃去 2%硫酸钠240mL
DMF层
分液滤斗
环已烷100mL×2
混匀 提取
鱼、肉及其制品
称样，
加无水硫酸钠（1：1或1：2）搅拌
环已烷抽提取
蔬菜
称样、晾干、加丙酮（150mL）捣碎，