弧菌属常规鉴定
弧菌的鉴定要点
弧菌是一类以弧状细菌形态为特征的微生物，其中最熟知的是弧菌属（Vibrio）和弧菌弯曲菌属（Campylobacter）。
下面是进行弧菌鉴定时的一些要点：形态特征：弧菌通常呈弧状或弯曲的形态，有时也会呈直杆状。
它们是革兰氏阴性菌，通常具有单一的极少鞭毛。
营养需求：弧菌属通常是好氧菌，需要氧气进行生长。
它们多数是嗜盐菌，喜欢在高盐浓度的环境中生长。
生理特征：弧菌通常是好氧发酵菌，能够利用多种碳源进行生长。
它们具有强烈的细胞外酶活性，可以产生一些特殊的酶，如溶血素、黏附素等。
生物化学试验：进行弧菌鉴定时，可以使用一系列生物化学试验，如氧化/发酵碳水化合物试验、氧化酶试验、羟基酸氧化试验等。
分子生物学方法：近年来，分子生物学方法在微生物鉴定中得到广泛应用。
可以使用PCR或基因测序等技术，通过特定基因的序列分析来确定是否为弧菌，并进一步确定其种属。
需要注意的是，弧菌具有多样性和复杂性，在鉴定时可能会遇到一些挑战。
因此，建议在进行弧菌鉴定时结合多种方法与技术，以提高准确性和可靠性。
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第十五章_弧菌科及检验
第十五章弧菌科及检验本章内容一、弧菌属（一）霍乱弧菌（二） O139 型霍乱弧菌（三）副溶血性弧菌（四）其他弧菌二、气单胞菌属与邻单胞菌属（一）气单胞菌属（二）邻单胞茵属革兰阴性直杆菌或弧菌有极端鞭毛氧化酶阳性动力阳性发酵葡萄糖弧菌属——分类根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：① O1群霍乱弧菌；②不典型O1群霍乱弧菌 : 能被 O1群血清凝集但不产生致病毒素；③非 O1 群霍乱弧菌；④其他弧菌：包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌。
大多数为非病原菌，对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
霍乱弧菌——生物学特性形态与结构形态：弧形或逗点状，“鱼群状”。
人工培养后呈杆状。
染色： G-。
特殊结构：有菌毛，无芽胞，部分有荚膜。
一端有一根粗而长的鞭毛，悬滴观察可见穿梭样或流星状运动。
·培养特性营养要求：不高，可无盐生长。
气体环境：兼性厌氧。
菌落特征：耐碱不耐酸。
pH8.5 的碱性蛋白胨水：培养6～ 9h，增菌形成菌膜。
碱性琼脂平板：较大圆形扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
硫代硫酸盐 - 柠檬酸盐 - 胆盐 - 蔗糖琼脂平板（ TCBS）：较大黄色菌落。
亚碲酸钾琼脂平板：还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。
庆大霉素琼脂：形成的菌落中心呈灰褐色。
·抗原·变异性：有形态变异、菌落变异、溶血性变异和毒力变异。
霍乱弧菌——微生物检验及鉴定·标本采集：以粪便（米泔水样便）为主，尽可能在用药之前采取。
及时接种适宜培养基。
常用的保存或运送培养基有碱性蛋白胨水、文- 腊二氏保存液和卡 - 布运送培养基等。
·形态学检查：①动力观察：米泔水样粪便悬滴观察可见流星或穿梭状运动的细菌。
②制动试验：加霍乱多价诊断血清后弧菌凝集，运动停止。
③涂片染色：革兰染色，观察革兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌。
弧菌
分 类
WHO腹泻控制中心将该菌属为四类
O-1群霍乱弧菌
不典型O-1群霍乱弧菌
非O-1群霍乱弧菌
其他弧菌
致病性
致病物质
定居因子：菌毛（acf、tcpA基因）、鞭 毛、溶血溶细胞蛋白（hlyA基因）、血 凝素（hap基因）、荚膜等 霍乱肠毒素（c为强烈的致泻毒素。
鉴定
根据霍或乱弧菌在各种选择培养基上的特点， 挑选可疑菌落进行鉴定。鉴定以血清学（玻 片凝集）为主，结合形态学、生化反应作出 判断。
鉴定
1） 玻片凝集试验：从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌 多价诊断血清作玻片凝集试验。诊断血清应稀释成1:321:64的效价使用，立即出现凝集者为阳性，同时设生理盐水
和阳性细菌株对照。
2） 形态学检查：取纯培养物涂片革兰氏染色，观察菌体形态 及染色性。用悬滴法或半固体穿刺法检测动力。
鉴定
3） 生化反应：霍乱弧菌氧化酶试验、靛基质试验、粘丝试验 和霍乱红试验均阳性。 ①粘丝试验：用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将0.5％去氧 胆酸钠水溶液于霍乱弧菌混匀制成浓厚菌液，1min内悬液由 混变清，并变得粘稠，以接种环挑取时可以拉出丝来。霍乱 弧菌古典生物型和El Tor生物型均呈阳性。
鉴定
② 霍乱红试验：出现蔷薇色，为霍乱红试验阳性。由
于霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性。 霍乱弧菌含有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，霍 乱弧菌液能还原硝酸盐为亚硝酸盐，因此当霍乱弧菌 培养在含有硝酸盐成分的蛋白胨水中，所产生的亚硝 酸盐可与吲哚结合成亚硝酸吲哚，滴加浓硫酸即可出 现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性）
免 疫 力
病后免疫力不强，可重复感染。
生物学性状
1、形态：弧状、杆状、丝状等多形性，G-，单端单鞭毛
微生物学--弧菌
分离培养与鉴定
分离培养 粪便或肛拭标本：直接接种改良Campy-BAP
选择平板 血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分离培
养基 微氧环境培养 不同细菌培养温度不同
Key Points
革兰阴性逗点状或S形的菌,运动活泼 微需氧：最佳生长环境为含5%O2、10% CO2、
85%N2 最适生长温度因菌种而异 营养要求高 氧化酶、触酶阳性，不能利用、不发酵各种糖类，
（3）快速诊断：O1和O139抗体做玻片凝集
（4）霍乱毒素的测定
二 分离培养和鉴定
初次分离用pH8.5碱性蛋白胨水，经4～6小时 液体表面大量繁殖，形成菌膜。
二 分离培养和鉴定
TCBS（硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板）
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成 发酵蔗糖的较大的黄色菌落
含亚碲酸钾的培养基：4号琼脂 庆大霉素琼脂
临床意义 (致病因素)
1.侵袭力
进入小肠，鞭毛、菌毛、分泌黏液，O139群有荚膜
穿过小肠黏膜表面黏液层
黏附于小肠黏膜上皮细胞刷 状缘的微绒毛上大量繁殖
临床意义 (致Βιβλιοθήκη 因素)2.霍乱肠毒素 MW：80000-90000 A1:活性亚单位 21812 A2:连接亚单位 5000 B：结合亚单位
霍乱弧菌肠毒素（CE, cholera enterotoxin）
鉴
定
定
生物学特性（培养特征）
需氧或兼性厌氧 营养要求不高，嗜盐（无盐不生长,最适盐浓度
3%） TCBS上形成绿色菌落
副溶血弧菌在TCBS 上菌落
鉴定特征
革兰阴性弧菌或杆菌，动力（＋） 氧化酶（＋），临床分离株脲酶常（＋） TCBS上绿色菌落、氯化钠生长试验 神奈川现象(+) 各种生化试验 TDH和TRH的检测：毒素和基因检测
水产养殖弧菌鉴别知识点
水产养殖弧菌鉴别知识点水产养殖业一直是我国重要的经济支柱之一，但随着养殖规模的不断扩大，水产养殖疾病也逐渐增多。
其中，水产养殖弧菌病是常见的疾病之一，对养殖业产生了较大的威胁。
为了及时有效地鉴别和防治水产养殖弧菌病，我们需要了解一些相关的知识点。
一、水产养殖弧菌的病原特征1. 弧菌分类：水产养殖弧菌主要包括弧菌属（Vibrio）和非弧菌属（non-vibrio）。
其中，弧菌属包括了多个种类，如弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、副溶血弧菌（Vibrio vulnificus）和黑质弧菌（Vibrio harveyi）等。
2. 形态特征：水产养殖弧菌通常为革兰氏阴性杆菌，呈弯曲状。
观察其形态特征可以帮助鉴别不同种类的弧菌。
3. 病菌传播途径：水产养殖弧菌可以通过水源、饲料、病鱼及其排泄物等途径传播。
尤其是受到污染的水体和饲料是引起养殖弧菌病流行的主要原因。
二、水产养殖弧菌病的症状与防治1. 弧菌感染症状：养殖弧菌病的症状主要包括鱼体表面溃疡、肌肉出血、眼球凸出、鳃腔红肿、腹腔积液等。
不同种类的弧菌感染所引起的症状有所不同，需要通过临床观察来鉴别。
2. 防治措施：针对水产养殖弧菌病的预防与防治，主要包括以下几个方面：（1）加强饲养管理，做到合理投喂，避免过度饲养和饲料污染；（2）加强水质管理，定期进行水质检测，保持水体清洁；（3）强化养殖环境卫生，保持养殖场所的清洁和消毒；（4）采取合理的养殖密度，避免过度密集养殖，以减少感染风险；（5）定期进行病原菌检测，及时发现和处理病害。
三、水产养殖弧菌的鉴别方法1. 细菌学鉴别法：通过细菌培养和生化试验，可以鉴别不同种类的水产养殖弧菌。
例如，对菌落形态、生长速度、芽胞形成情况、产气情况等进行观察和测试，可以初步判断是属于弧菌属还是非弧菌属。
2. 分子生物学鉴别法：利用PCR技术、基因测序等分子生物学方法，可以对养殖弧菌进行准确的鉴别。
这些方法具有高度的特异性和敏感性，可以区分不同种类的弧菌，并确定其亚型和毒力基因。
致病性弧菌及检测
致病性弧菌及检测发布日期：2010-09-01 浏览次数：991一、致病性弧菌的流行病学1、致病性在众多的弧菌之中，致病性差距很大。
O1型霍乱弧菌被WHO定为国际一、致病性弧菌的流行病学1、致病性在众多的弧菌之中，致病性差距很大。
O1型霍乱弧菌被WHO定为国际检疫菌，而同时有许多种和生物型根本不具致病性。
生物分类学上的霍乱弧菌有许多血清型致病性很弱、甚至不具致病性。
1995年《美国临床微生物手册》第六版明确了弧菌属的致病菌为12种，它们的名称及致病情况如下表所示：表1. 致病性弧菌及所致疾病弧菌种类临床表现胃肠炎创伤感染耳感染败血症O1型霍乱弧菌O139型霍乱弧菌拟态弧菌河弧菌副溶血性菌霍利斯性菌++++++ ++++ ++ +++++++ ++ +溶藻弧菌弗尼斯菌创伤弧菌麦契尼可夫弧菌海鱼弧菌辛辛那提菌鲨鱼弧菌（+）+++++ （+）++ ++ （+）++++ （+）+++++注：+++：常见；++：不常见；+：罕见；带括号者为肠道感染的病因作用尚未确定。
12种致病性弧菌的致病性差别较大，所致疾病的种类和毒性差别较大。
在这12种致病菌中，最重要的，也是出问题最多的是O1型霍乱弧菌、非O1型霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌。
国内外均是如此。
美国FDA 在“食品微生物控制”中特别强调了这四种菌，欧洲的NMKL也对这四种菌提出了特别要求，并有专门方法NMKL No.156颁布。
2、美国FDA对霍乱、副弧、创伤弧菌的认识（见表2）3、致病性弧菌的控制弧菌和其它G-菌一样，是嗜温型菌，生长需较高的温度，高水活度，中性pH。
与其它不一样的是，生长需要盐，故而十分耐盐，但轻微热处理很易将其杀灭。
蒸煮控制，防止二次污染，防止时间/温度控制不当（注意冷藏），控制产品来源。
二、致病性弧菌的分类学位置和生物学性状1、致病性弧菌的分类根据伯杰氏细菌手册第九版的描述，12种致病性弧菌的分类学位置如下表所示：第5部分革兰氏阴性兼性厌氧杆菌弧菌科弧菌属致病性弧菌伯杰氏细菌手册将细菌分为35部分（Group），第5部分为革兰氏阴性兼性厌氧杆菌，包括弧菌科、肠杆菌科、巴斯德氏菌科、其他属，弧菌科包括弧菌属、发光杆菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和Enhydrobacter属。
霍乱弧菌的分离与鉴定
要注意同一标本存在 O1 群和 O139 群等多个血清群霍乱弧菌混合的可能，每 份标本至少挑选 5 个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。 4.1.2 氧化酶试验
试剂：1%盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸二甲基对苯二胺水溶液。 试验方法：取生长在非选择性培养基上的新鲜培养物涂抹在清洁的滤纸上， 然后滴加上述试剂，如培养物在 lmin～2min 内出现粉红—紫红—紫蓝色，有的 最后呈紫黑色，判断为氧化酶试验阳性；培养物不显色判为阴性。 4.2 菌株复核 经初筛阳性或可疑阳性的菌株，在发出初步鉴定报告的同时，应尽快送当地 疾病预防控制中心（CDC）进行复核鉴定。复核结果符合 O1 群或 O139 群霍乱弧 菌的菌株，按菌株管理的要求进行保存与上送；如复核结果出现疑问，应尽快将 菌株上送省级或以上 CDC（参比实验室）进行确认分析。菌株的复核鉴定应以纯 培养物为基础，至少应包括以下项目：血清凝集试验与血清分型、革兰氏染色、 粘丝试验、氧化酶试验、动力试验。对一次流行的首批病例菌株和玻片凝集反应 不典型的菌株应增做试管凝集试验。
10% NaCl
- - - - +/- - - - - - - -
O/129 敏感性
10μg
S① S R S R R R S R S R
150μg
S① S S S S S S S S S S S
①部分 O139 群霍乱弧菌为抗性（R）。
霍乱弧菌系统生化鉴定详见表 1。
表 1 部分弧菌科细菌的系统生化鉴定
霍拟副创溶河弗海 霍 麦 辛 鲨
项
乱态溶伤藻弧尼鱼 利 氏 辛 鱼
弧弧血弧弧菌斯弧 斯 弧 那 弧
目
菌菌弧菌菌
弧菌 弧 菌 提 菌
菌
菌
菌
弧
菌
水产养殖水体弧菌实用检测方法
水产养殖水体弧菌实用检测方法
弧菌实用检测方法
一、器材和试剂 (如图A)
电炉一台、培养皿（大）10个、100ml量筒1个、移液管1支、酒精灯1个、三角涂布棒1个、三角烧瓶500ml1个、250ml烧杯1个、天平1个、TCBS培养基1瓶、酒精1瓶，棉布2张。
二、样品采集
1、用无毒塑料瓶采集水下约10cm处水样，采好的水样需盖紧瓶。
2、采得的水样立即送检，否则，应将样品置于冰瓶或冰箱中，但也不得超过24h，否则将影响检验结果。
三、检验步骤
1、倒平板 (如图B)
1）称量100克TCBS弧菌琼脂粉和1000ml冷却开水，倒入三角烧杯中，加热搅拌，溶解琼脂粉，直至沸腾。
2）在灭菌操作台上，将沸腾后的培养基冷却到50~60℃，分别倒人经灭菌的各培养皿中，每个培养皿约10~12mL，待其冷却凝固，倒置于无菌泡沫箱内保存备用。
注意：倒好的平板内不能有水珠或水层。
2、菌液接种 (如图C)
在灭菌操作台上，取水样（可稀释）0. 05mL，滴入制好的培养皿培养基上，用灭菌的三角涂布棒将菌液涂抹均匀，平放于操作台上数分钟，使菌液渗入培养基。
3、弧菌培养 (如图D)
将接种培养皿倒置灭菌泡沫箱内培养20小时左右，取出计数菌落。
4、菌落计数 (如图E)
分别点数绿色菌落和黄色菌落数量，乘取水样的稀释倍数，即可得该水样的绿色和黄色弧菌总数。
5、废物处理 (如图F)
经计数后不用的培养基，需经灭菌煮溶后，方可到人排水沟。
经常性检测虾塘水体的弧菌密度。
要求总弧菌的密度控制在5000菌株/毫升以下，绿弧菌的密度控制在300菌株/毫升以下。
临床常见病原菌检验—弧菌属(微生物检验课件)
+++
-
-：无菌生长；+：有菌生长；+++：细菌生长茂盛
NaCl生长试验
第一节 弧菌属
二、副溶血性弧菌
嗜盐性试验：取待测菌、耐盐金黄色葡萄球菌和大肠埃 希菌培养液各一接种环，分别接种于无盐蛋白胨水和7 ％NaCl蛋白胨水中．置37℃培养6-12h，观察结果。
试验菌
无盐蛋白胨水
7%NaCl蛋白胨水
待测菌（嗜盐菌）
-
+++
金葡菌（耐盐菌）
+
+
大肠埃希菌(非嗜盐菌)
第一节 弧菌属
二、副溶血性弧菌
（一）生物性状 1．形态染色 G-直或微弯的杆菌（盐度不适应时出现梨
状，丝状），单鞭毛、侧身周鞭毛（固体培养 基）。
第一节 弧菌属 2．培养特性
二、副溶血性弧菌
营养要求 不高，嗜盐性，最适盐浓 度3.5％NaCl，无盐培养基不生长；
耐碱，最适pH7.7~8.0，pH9.5仍能 生长，对酸敏感。
川现象。
待检菌
人O型血或兔血平板 马血平板（不溶血）
(我萋培养基：高盐7% NaCl、D-甘露醇)
β溶血
神奈川现象 +：致病株
第一节 弧菌属
二、副溶血性弧菌
（二）临床意义 常通过海产品、盐腌食物等致食物中
毒或急性肠炎，粪便呈水样或糊状、粘液血便。
耐热直接溶血素（TDH）
耐热相关溶血素（TRH）
第一节 弧菌属酶1 Nhomakorabea7
葡乳蔗甘阿水
10 萄 糖 糖 露 拉 杨
糖
醇伯苷
糖
+ + - - - - + + - - + + -+ - - + - -
弧菌科及检验
弧菌科及检验弧菌科共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖的革兰阴性直或微弯的杆菌。
弧菌科包括4个菌属，即弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属。
前三属细菌均可引起人类感染，发光杆菌属对人无致病性。
一、弧菌属弧菌属的细菌分布广泛，以水中最多。
世界卫生组织腹泻病控制中心根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型01群霍乱弧菌；③非01群霍乱弧菌；④其他弧菌（副溶血性弧菌）。
对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
（一）霍乱弧菌霍乱弧菌是霍乱的病原菌，该病为一种急性烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。
1.生物学特性（1）形态染色：本菌呈弧形或逗点状，无芽胞，有菌毛，有些菌株有荚膜。
一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼。
取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动。
液体培养物滴片染色镜检，可见排列如“鱼群状”革兰阴性弧菌。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。
耐碱不耐酸。
可在无盐环境生长。
碱性蛋白胨水中，经35℃培养6～9h，在液体表面大量繁殖形成菌膜，可达快速增菌的目的。
碱性琼脂平板上，经培养18～24h，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）上，形成较大黄色菌落。
含亚碲酸钾琼脂平板上，因还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。
庆大霉素琼脂上形成的菌落中心呈灰褐色。
（3）生化反应：能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，产酸不产气。
迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。
氧化酶、明胶酶试验和ONPG试验均阳性。
能产生靛基质，霍乱红反应（即亚硝基靛基质试验）阳性。
（4）抗原结构与分型：霍乱弧菌具有耐热的特异性0抗原和不耐热的非特异性H抗原。
H抗原为弧菌属所共有，特异性低。
O抗原特异性高，具有群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。
弧菌属菌种的鉴定方法与制作流程
图片简介:本技术提供一种弧菌属菌种的鉴定方法，其中所使用的弧菌属菌种的可视化的鉴定区间标准，其建立方法如下：利用高效液相质谱联用仪采集不同菌种的LC MS代谢产物谱，将所得代谢物信息建立分析数据矩阵，用SIMCA P进行PCA分析，获得直观的聚类图和载荷图，利用OPLS DA模式分析，得到不同菌种的分布区间，建立不同菌株的可视化的鉴定区间。
本技术的方法以细菌代谢组学为基础，对细菌的代谢物进行分析，通过数据判别，得出了不同菌种的生物标志物，以此为参数，建立不同菌种的分布规律，从而建立了一种新的菌种鉴定方法，弥补现有方法的不准确性，具有高通量、高灵敏度、准确性高等特点。
技术要求1.一种鉴定弧菌属菌种的可视化的鉴定区间标准，其特征在于，所述的标准的建立方法如下：利用高效液相质谱联用仪采集不同菌种的LC-MS代谢产物谱，将所得代谢物信息建立分析数据矩阵，用SIMCA-P进行PCA分析，获得直观的聚类图和载荷图，利用OPLS-DA模式分析，得到不同菌种的分布区间，建立不同菌株的可视化的鉴定区间。
2.如权利要求1所述的鉴定区间标准，其特征在于，所述的代谢产物包含有1-磷酸岩藻糖，D-乳酸，dTMP，黄素单核苷酸，环磷酸肌醇，UDP-N-乙酰壁氨酰-L-丙氨酸，胞磷胆碱，UDP-L-鼠李糖，甘露聚糖，UDP-葡萄糖，叶酸，花生四烯酸，二磷酸肌苷，UDP-D-木糖，磷酸乙醛，γ-谷氨酰半胱氨酸，半乳糖酸，甘油酸，D-葡萄糖-1,5-内酯6-磷酸，5-羟基异尿酸盐，苯甲酰磷酸酯，L-色氨酸，5-磷酸氧基-L-赖氨酸，马来乙酸，乙醛酸，N-乙酰血清素，犬尿胺，乌头酸，脱氧胞苷，尿囊素，棕榈酸，1,7-二甲基鸟苷，乙醇酸，D-柠檬烯，2-羟基十四烷酸，脱氧肌苷，5α-胆甾烷醇，棕榈醛，鞘氨醇，3-甲基硫代丙酸，二十碳五烯酸，精胺，十四烷二酸，酵母氨酸，硬脂酸，5-戊二胺，十五酸，鞘胺醇，棕榈酰胺，亚油酸，球形烯醇，十八烷二酸，十九烷酸，花生酸，结核硬脂酸，维生素D3，半乳糖基鞘氨醇，D-乳酸，乳清苷，丁香酸，胞苷一磷酸，6-磷酸葡萄糖，鸟苷一磷酸，苯乙酰甘氨酸，胞壁酸，黄嘌呤，L-赖氨酸，羟基赖氨酸，3-甲氧酪胺，5-甲基胞嘧啶，α-D-葡萄糖，鸟氨酸，犬尿喹啉酸，山梨醇，β-丙氨酸，D-核糖，6-羟基烟酸，甘油和酪胺。
弧菌科及检验
最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜
TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色 菌落
一般血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到旳菌株95%以上在我妻琼脂上产生β
2024/9/22
21
O139霍乱弧菌病原体起源
EVC流行株O抗原变异 ? 非O1霍乱弧菌获产毒基因 ?
2024/9/22
22
全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发觉霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多种国家
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高下与病情轻重以及医疗条件、急救旳时 效性有关。病情重、医疗条件差、急救不及时病 死率可高达20%-50%
2024/9/22
18
霍乱预后及危害
霍乱属烈性传染病，一旦暴发和流行，累及 面广，病死率高，对人民身体健康以及国民 生活、生产秩序、社会稳定、投资环境、对 外贸易等造成直接影响
2024/9/22
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检验措施－显微镜检验
涂片染色： -标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列
动力观察： -压滴法或暗视野镜检，注意运动方式
制动试验： -诊疗血清与菌体结合，动力消失
2024/9/22
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形态染色
革兰阴性 弧形或逗点状 单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样” 无芽胞，无荚膜（O139有薄旳荚膜） 在新鲜粪便中成“鱼群样”排列
2024/9/22
35
鉴定
霍乱弧菌实验室检验技术
抗原构造
O139群霍乱弧菌不被已知的O1-O138群霍乱弧 菌诊断血清所汇集。表明本菌的抗原性与O1群 和其它非O1群霍乱弧菌有明显区别。 革兰氏阴性菌的抗原性都是由细胞壁的脂多 糖（LPS）所决定。通过对O139群霍乱弧菌的 LPS进行化学分析和血清学分析后发现O139群 霍乱弧菌缺少O1群霍乱弧菌LPS中的特异性成 分。 通过两者进行提取其LPS然后进行被动溶血试 验与被动溶血抑制试验检测，结果显示两者抗 原性有显著不同。O139群霍乱弧菌有荚膜而 O1群霍乱弧菌无荚膜。
2012-5-4
两者不同点：
群所致病中有44 O139群所致病中有 44.3% 可发生腹部痉 139 群所致病中有 44. 也有引起严重粘液性腹泻的， 挛 ， 也有引起严重粘液性腹泻的 ， 进入 外周血液可引起发热， 外周血液可引起发热 ， 出现菌血症或败 血症。 印度出现20 例病人中有17 例发热、 20例病人中有 17例发热 血症 。 印度出现 20 例病人中有 17 例发热 、 白细胞增多。 白细胞增多 。 而 O1 群引起的病人未曾见 过。 鉴别两者， 必须通过血清学诊断 来区分。 血清学诊断来区分 鉴别两者 ， 必须通过 血清学诊断 来区分 。 22群与 139群血清有交叉汇集反应 群与O 群血清有交叉汇集反应， O22群与O139群血清有交叉汇集反应，必 须用O22群弧菌吸收 群弧菌吸收， 须用O22群弧菌吸收，去除交叉汇集现象。
病，发病急、传播速度快、波及范 围广、危害严重的甲类传染病。 ♦ 是国内交通检疫传染病之一。 ♦ 也是当今三种国际检疫传染病中最 严重的一种。
2012-5-4
霍乱病原菌发现
♦ 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 ♦ 1905年埃及埃儿托检疫站首次分离到
一株文蛤弧菌的筛选及鉴定
单 菌 落 为 圆形 、 缘 、 润 、 透 明 、 挑取 ， 径 １ 全 湿 半 易 直 ～
２ｍｍ， 白色菌 落 。 乳
资助项 目： 江苏省海洋生物技术重点建设实验室开放课题项 目（ ０ ８ ０ ０ ； ２ ０ ＨＳ ２ ）南京农业大学 Ｓ Ｔ项 目（ ９ ７ ４ Ｒ ０ ０ Ａ１ ） 作者简介 ： 星（ ８ ）女 ， 士生 ， 孙 １７ 一 ， 博 ９ 研究方 向为近海资源与生态学． － ａｈ ０ ８ ０ ０ ｊｕｅｕａ Ｅ ｍ ｉ２ ０ ２ ３ ＠ ａ ． ．ｌ １ ６ ｄ ｌ 通讯作者 ： 刘兆普 ， 教授 ， — ａｌｓａ ｊｕｅｕｃ Ｅ ｍ ｉ ｅ＠ｎａ ． ． ： ｄ ｎ
病和食物 中毒的常见病原 。筛选到的弧菌对文蛤 的致病 性还 需要 通 过人 工 感染 试 验进 一 步确认 ， 因 文蛤生长期的原因， 此试验将在下面的工作进行 。
显阳性 ， 产生明胶酶使 明胶液化 ， 阳性 。甲基红 、 显 淀粉水解 、 柠檬酸 、 蔗糖 发酵 、 乳糖发酵 、 吲哚试验
１３ 菌 株 形态 观察 和 生化鉴 定 －
蛤患病后的死亡率非 常高 ，而且传播速度也非常
快 ， 般 ７ｄ左 右 就 能 引起 整个 养 殖 区文 蛤 的大 批 一 死亡 『 １ Ｉ 蛤一 旦 发 生大 批 死亡 ， 进 行水 体 消 毒 ， 。文 再
药物 泼洒 ， 已无 济 于事 ［ 试 验对 发病 文 蛤 中弧菌 进 ２ １ 。 行筛 选 ， 对 其生 理生 化 和 １Ｓｒ Ｎ 并 ６ Ｄ Ａ鉴 定 。 对鉴 定
图 １ 。在 Ｎ Ｂ 上 通过 Ｂａｔ ） ＣＩ ｌ 比对 ，与 Ｖｂｉ ａ ｉ ｓ ｉｒ ｌ — ０ ｇ
ｎｌｔ ｕ （ 录 编 号 Ｄ ２ ９ １ ） １Ｓ ｒ Ｎ 基 因 ｏ ｉ ｓ登 ｙｃ Ｑ ６ ２ １ 的 ６ Ｒ Ａ
弧菌属检验实验报告
弧菌属检验实验报告1. 引言弧菌属（Vibrio）是一类革兰氏阴性的海洋细菌，它们常存在于水体中，包括海洋、河流和湖泊等环境中。
有的弧菌属细菌可以引起人和动物的疾病，因此对其进行检验是十分重要的。
本实验旨在通过一系列实验和检测方法，鉴定和确认水样品中是否存在弧菌属细菌，并进一步确定其种类和数量。
希望通过实验结果能为水质监测和疾病防治提供可靠的依据。
2. 实验材料与方法2.1 实验材料- 弧菌属细菌培养基- 水样品- 实验仪器：恒温培养箱、显微镜等2.2 实验方法1. 取少量水样品制备悬浮液。
2. 用不同培养基接种悬浮液。
3. 将接种后的培养皿放入恒温培养箱，以适当的温度进行培养。
4. 确认弧菌属的存在，观察菌落形态和颜色。
5. 进一步通过显微镜观察细胞形态和运动情况。
3. 实验结果3.1 菌落形态观察根据实验结果，我们观察到在某些培养基上出现了呈现黄绿色或灰绿色的菌落，符合弧菌属的特征。
这些菌落呈圆形或不规则形状，具有光滑的边界。
3.2 显微镜观察通过显微镜观察，我们进一步观察到菌落中存在大量弧状细胞，这也是弧菌属的典型特征。
这些细胞呈弧形或弯曲状，具有鞭毛，可以自由游动。
4. 结论根据实验结果，我们可以得出以下结论：- 水样品中存在弧菌属细菌，其菌落形态和细胞形态均符合弧菌属的特征。
- 弧菌属细菌具有一定的运动能力，通过观察弧状细胞的游动情况可以进一步确认其存在。
5. 实验总结通过本次实验，我们成功鉴定出水样品中存在的弧菌属细菌，并通过相应的检验方法确定了其存在和数量。
这对于水质监测和疾病防治具有重要意义。
在今后的实验工作中，我们可以进一步探索弧菌属细菌的特性和生活习性，通过更加精细的检验方法和技术手段，提高弧菌属细菌的鉴定准确性和效率，为保护水资源和人类健康做出更大贡献。
*注：本文中所提及的实验方法和实验结果仅为示例，实际操作需根据具体情况进行调整和修改。
*。
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弧菌属常规鉴定
:弧菌属分类上归弧菌科.
生物学特性::革兰氏阴性菌,直或弯曲.月牙形大部分菌种为兼性厌氧.氧化酶实验为阳性.具有鞭毛.运动活泼如穿梭状.
常规鉴定分两步:与相近的菌属鉴别.定属后在做种的鉴定
一,与相似的菌属的区别:
弧菌属的弧菌科,同科中有气单胞菌属,邻单胞菌属,均为氧化酶阳性,F,弧菌与其的区别,可依嗜血性,甘露醇,氧化酸盐O/129敏感性的区别见表:
弧菌科3个菌属特性的鉴别
特性气单胞菌属邻单胞菌属弧菌属
甘露醇+ - +/-
鸟氨酸- + +/-
精氨酸+/- + +/-
嗜血性- - +/-
O/129敏感R R S
弧菌属的鉴定:
目前我院临床细菌室对霍乱弧菌的鉴定,一般的作初步鉴定,方法如下:
1.直接涂片:
2.悬滴检查:取患者粪便做悬滴标本(亦可用压滴法),检查细菌的动力,呈极活泼的穿梭性运
动,O1型霍乱血清制动试验阳性,可做早期推测性报告.
3.染色检查:取米泔样粪便的酶化物,黏液部分涂片,干燥后用乙醇固定,分别用革兰氏染液
1/10稀释的石炭酸副虹染色,干后,油镜镜检,观察有无革兰氏阴性,呈鱼群排列的弧菌,涂片检查,只能做初步参考,不能作确诊依据.
4.玻片凝集试验:自分离平板上挑取可疑菌落,与霍乱多价诊断血清(既O1群霍乱多价血清),
做玻片凝集试验,所用血清效价应在1/80~1/160之间,如过浓,则稀释后再做凝集.
将稀释的血清滴加在清洁的玻片上,挑取可疑菌落混匀于血清中,即刻(一般不超过10S),可见肉眼可见的明显凝集为阳性菌落应以出现销价对照,应不发生血凝
为了提高阳性率应多挑取可疑菌落进行涂片凝集试验.做初步鉴定试验后将此疑似菌退卫生防疫站做最后鉴定.
[编写者]:
日期
[科主任签字]:。