正常小鼠原代骨骼肌细胞培养
小鼠骨髓细胞原代培养的步骤
小鼠骨髓细胞原代培养的步骤嘿，朋友们！今天咱来唠唠小鼠骨髓细胞原代培养这档子事儿。
你可别小瞧这小小的骨髓细胞，这里头的门道可不少哩！首先呢，你得准备好一只健康的小鼠。
就像厨师要准备新鲜的食材一样，这小鼠可得精挑细选。
把小鼠麻醉了，然后小心翼翼地把它固定好，可别让它乱动。
接下来，就是关键的一步啦！找到小鼠的骨头，用手术器械精准地把骨头取出来。
这就好比是在挖掘宝藏，得小心谨慎，不能有一点儿马虎。
把骨头弄干净后，用合适的工具把骨头敲碎，就像敲碎一块硬糖一样。
然后呢，把敲碎的骨头放到培养液里。
这培养液就像是细胞的小窝，得让它们舒舒服服地待在里面。
这时候，就需要你耐心地等待啦，就像等待花儿开放一样。
在等待的过程中，你可得时刻关注着，看看细胞们是不是在乖乖地生长。
这可不像种花儿，能直接看到它们长大，得用一些特别的方法去观察。
等细胞们长到一定程度，就得给它们换个更宽敞的地方啦，也就是传代培养。
这就好比是给孩子们换个更大的房间，让他们能更好地成长。
你想想看，这小小的骨髓细胞，从一只小鼠的身体里出来，经过我们的精心培养，就能变成好多好多的细胞。
这多神奇呀！就像魔术师一样，能把一样东西变成好多好多。
培养骨髓细胞可不是一件容易的事儿，需要我们细心、耐心，还得有技巧。
就像骑自行车一样，一开始可能会摔倒，但只要坚持，就能骑得稳稳当当。
在这个过程中，要是有一个步骤没做好，那可能就前功尽弃啦。
所以呀，每一步都得认真对待，不能有丝毫的马虎。
总之呢，小鼠骨髓细胞原代培养可真是个有趣又有挑战性的事儿。
要是你也感兴趣，那就赶紧试试吧，说不定你也能成为这方面的专家呢！。
骨骼肌细胞原代培养
骨骼肌细胞原代培养骨骼肌细胞是我们身体中最重要的肌肉组织之一，通过细胞的原代培养可以帮助我们更好地研究肌肉的生理和病理过程。
本文将介绍骨骼肌细胞原代培养的方法和意义。
一、骨骼肌细胞原代培养的方法1. 细胞来源骨骼肌细胞可以从人体或动物体内获得。
人体来源的骨骼肌细胞可以通过手术获取，动物来源的骨骼肌细胞可以通过解剖或抽取组织获得。
2. 细胞分离将获得的骨骼肌组织进行消化，分离出单个的骨骼肌细胞。
常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶，通过适当的温度和时间来进行消化。
3. 细胞培养将分离出的骨骼肌细胞放入培养皿中，加入适当的培养基，提供细胞所需的营养物质和生长因子。
培养基的配方和组成会因实验目的的不同而有所差异。
4. 细胞传代原代培养的骨骼肌细胞会在培养过程中逐渐增殖，达到一定的细胞数量后，可以进行细胞传代。
传代可以保持细胞的稳定性和生物学特性。
二、骨骼肌细胞原代培养的意义1. 生理研究通过骨骼肌细胞原代培养，可以研究肌肉的生理功能和调控机制。
例如，可以研究肌肉收缩机制、肌肉代谢和能量平衡等方面的问题。
2. 病理研究骨骼肌细胞原代培养还可以用于研究肌肉疾病的发生机制和治疗方法。
例如，可以利用培养的肌肉细胞模拟某些疾病的发生过程，寻找治疗的靶点和药物。
3. 药物筛选骨骼肌细胞原代培养可以用于药物的筛选和评价。
通过在培养的肌肉细胞中加入不同的药物，观察细胞的反应和变化，可以评估药物的疗效和毒副作用。
三、骨骼肌细胞原代培养的注意事项1. 细胞来源的选择在进行骨骼肌细胞原代培养前，需要选择合适的细胞来源。
不同的细胞来源可能会影响培养结果和实验的可行性。
2. 培养条件的优化骨骼肌细胞原代培养需要适宜的培养条件，包括培养基的配方、温度、湿度和CO2浓度等。
这些条件需要根据实验的要求进行优化。
3. 细胞的纯度和活性在骨骼肌细胞原代培养过程中，需要保证细胞的纯度和活性。
细胞的纯度可以通过筛选和分离的方法进行提高，细胞的活性可以通过细胞活力试剂盒进行检测。
小鼠肌肉卫星细胞的原代培养和鉴定的开题报告
小鼠肌肉卫星细胞的原代培养和鉴定的开题报告一、研究背景与意义骨骼肌是人体最大的组织之一，具有收缩和运动的功能。
但是由于各种原因，骨骼肌组织受到损伤或者疾病的影响，会导致肌肉萎缩或者无法正常运动。
肌肉干细胞是骨骼肌组织修复和再生的重要来源，因此研究肌肉干细胞的生物学特性以及培养技术具有重要的理论和实践意义。
小鼠肌肉干细胞是目前应用最广泛的肌肉干细胞模型，具有大量的来源、较短的代谢时间和易于操作等特点。
因此，对小鼠肌肉干细胞的原代培养和鉴定研究，对于深入了解肌肉干细胞的生物学特性和开展相应的研究具有重要的意义。
二、研究内容1.小鼠肌肉干细胞的原代培养技术研究小鼠肌肉干细胞的原代培养是研究肌肉干细胞生物学特性和应用的前提，原代培养的关键是细胞来源、细胞分离和培养条件的优化等。
因此，本研究将通过细胞来源的筛选、细胞分离的优化和培养介质的改良，建立快速、高效、稳定的小鼠肌肉干细胞的原代培养技术，并评价培养细胞的生长状态和细胞增殖能力。
2.小鼠肌肉干细胞的鉴定和生物学特性分析肌肉干细胞的鉴定和生物学特性分析是研究肌肉干细胞应用的基础，包括干细胞的标记、差异表达基因的分析和功能实验等。
本研究将通过进行免疫细胞化学染色、流式细胞术和实时荧光定量PCR等技术，对小鼠肌肉干细胞的鉴定和生物学特性进行深入的分析。
三、研究方法（1）小鼠肌肉干细胞的来源筛选：采用小鼠胸肌组织、腿肌组织和膜肌组织等来源，筛选合适的肌肉干细胞来源。
（2）小鼠肌肉干细胞的分离和培养：采用胶原酶和胰酶等酶切法，分离小鼠肌肉干细胞，建立原代培养系统，包括细胞培养基的优化和培养条件的调节等。
（3）小鼠肌肉干细胞的鉴定和生物学特性分析：采用免疫细胞化学染色、流式细胞术和实时荧光定量PCR等技术，对小鼠肌肉干细胞进行鉴定和生物学特性分析。
四、研究预期结果该研究预期能够建立快速、高效、稳定的小鼠肌肉干细胞的原代培养技术，同时探究小鼠肌肉干细胞的特殊基因标记和功能特性，为深入开展肌肉干细胞研究提供新的理论和实践基础。
成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)解读
成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)【摘要】目的探索成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养方法。
方法取成年Wistar大鼠的后肢肌肉,利用组织块法培养成肌细胞。
并对培养细胞进行形态学研究和细胞鉴定。
结果采用组织块培养成肌细胞的密度可达118/ml, 成肌细胞的分化鉴定显示94%以上的细胞呈骨骼肌特异的肌细胞。
结论利用组织块法成功培养成年大鼠原代骨骼肌成肌细胞,该方法实用性强,所得成肌细胞纯度高,为深入研究心力衰竭骨骼肌成肌细胞自体移植奠定了基础。
【关键词】骨骼肌成肌细胞原代培养大鼠成年【Abstract】 Objective： To explorean experimental method for primary culture of adult rat skeletalmuscle sarcoblast Methods: Muscle of posterior limb from wistar rat were cultured by tissue culture method. The cells were counted and observed by light microscopy combined with identification. Results:The number of skeletalmuscle sarcoblast118per millilitre. skeletalmuscle sarcoblast cell differentiation accredit showed that over 94% cells were stained positive for myogenin.Conclusions: Tissue culture method conveniently permits the purification and Proliferation of myoblast. These esults provide the basis for future studies to assess the ability of the cells to repair heart failure.【Key words】skeletalmuscle sarcoblast primaryculture rat adult心肌细胞是终末化组织，不能再生。
小鼠细胞原代培养取材方法
小鼠细胞原代培养取材方法原代培养是指直接从体内取下的细胞、组织和器官，经过清洗、剪切、分散等步骤后，立即进行培养的过程。
小鼠细胞原代培养取材方法主要包括以下步骤：1. 实验前准备：在超净工作台或生物安全柜中进行，确保无菌环境。
2. 取材：选择健康的成年小鼠，使用颈椎脱臼法处死小鼠。
用70-75%酒精对烧杯进行消毒，将整个小鼠浸入盛有纯酒精的烧杯中浸泡1分钟进行消毒。
3. 打开腹腔：取出小鼠，将其放在不锈钢手术盘中，用无菌手术剪打开腹腔。
4. 取出组织：小心将所需组织从体内取出，放入无菌培养皿中。
5. 清洗组织：用70-75%酒精擦拭培养皿外周后，将培养皿移至超净工作台或生物安全柜中，用含双抗的Hanks液洗涤组织数遍以去除血污。
6. 剪切组织：在体视显微镜下操作，用无菌手术器械去除多余组织，用解剖镊子或眼科剪将组织剪碎至1立方毫米的肉糜状。
7. 消化组织：将剪碎的组织放入含解离液或培养基的50ml离心管中，用10ml弯头滴管对组织进行吹打5-10次，然后用1ml枪头的吹打组织，最后用200μl的尖端进行吹打。
8. 过滤分散：将上述组织悬液通过70μm过滤器过滤，切碎和分散的组织悬浮液。
9. 离心收集细胞：在1200rpm、4℃下离心10分钟，弃掉上清液，加入配置好的细胞培养基重悬细胞。
10. 接种细胞：将细胞接种于经多聚赖氨酸预处理的培养瓶或培养板中，置于37℃、5%CO2的培养箱中进行培养。
注意事项：取材过程应在无菌环境中进行，确保整个过程不受到污染。
操作时要小心，避免损伤组织。
使用的仪器和器皿均应进行消毒处理。
培养基和试剂应选择适宜的种类和浓度。
培养条件要保持恒定，包括温度、湿度、CO2浓度等。
在实验过程中要密切观察细胞生长情况，及时发现和处理异常情况。
以上是小鼠细胞原代培养取材方法的简要步骤，具体操作可能因实验需求和条件而有所不同。
建议在进行实验前仔细阅读相关文献和资料，并咨询专业人士的建议和指导。
细胞工程实验三：乳鼠心肌细胞的原代培养-治
将细胞混悬液1 000 r/min离心10 min
去上层，收获细胞
实战程序 第四大步骤：清洗细胞，培养细胞
细胞沉淀用PBS溶液和DMEM清洗3次 弃上清液 加4ml含20%小牛血清的DMEM培养液制 成细胞悬液，置于培养瓶中 培养24 h后即可见细胞贴壁和细胞收缩
【注意事项】
组织块必须漂洗 2~3 次以除去组织的钙离 子、镁离子和血清对胰蛋白酶和 EDTA的抑 制作用。 胰蛋白酶浓度不宜过高，作用时间不能太长， 以避免毒性作用。 消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免 毒性产生，而且动作要轻，以避免蓬松的细 胞随漂洗而失去。
【实验结果与分析】
记录心肌细胞的培养及动态观察。
实验三 动物细胞的原代培养
【实验目的】
掌握实体组织材料的原代细胞培养的 基本思路。 掌握动物组织中细胞的分离和原代培 养的方法。
【实验原理】（参考教材P128）
原代细胞培养是从供体取得组织细胞在体外
进行的首次培养
是一项基本技术
是建立细胞系的第一步
【实验原理】
原代细胞的分离和制作常采用的方法
用镊子小心剥离心包膜
剪去心房（心脏上半部分）及主动脉
PBS溶液清洗心室组织3次（至没有血时）
将心室组织剪成1~3 mm3碎块后，转移至
离心管
用PBS清洗3遍
实战程序 第三大步骤：消化组织，获得细胞
加0.125%胰蛋白酶（2ml）
37℃水浴中旋摇消化10 min 吸上层（细胞在悬液中，未消化好的组织块在底层） 细胞悬液转至小烧杯 加等体积无血清培养基终止反应，反复3-5次
【实验材料与器材】
本实验用品
每组1个：乳鼠、解剖器械、小烧杯、细胞 培养瓶、移液枪（1ml）及枪头 每组2个：离心管、培养皿
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代之flamerking图文版[精华]很多战友发email或PM向我询问小鼠MSC的培养方法，我零零散散地一个个回复过几次，由于我平时时间不是很多，所以回答地时候有些内容写的不是很详细。
今天又有一个战友PM我，询问我培养方法。
看来做小鼠MSC的战友越来越多。
一遍遍地重复写很费时间（想粘贴复制又找不到上次写的在哪～惨！），所以我想还是发贴公布一下。
其实我小鼠MSC在我的课题中不是主角，只是起一个control的作用，因此我在这方面的经验可能没有一些专门做小鼠MSC的战友丰富，不过我还是很愿意把我的经验写出来供大家参考，希望能够起到“抛砖引玉”的作用。
欢迎各位同道对我的方案进行批评和指正，与大家一起分享你们的经验和智慧。
提纲一，简版主要步骤及操作要点。
二，完整版1. 试剂及材料准备2. 动物手术及取材3. 原代细胞培养4. 细胞传代5. 讨论时间关系，今天先给个简版。
我先顶一下,由于我还是新手,故不能说是经验介绍,只好讲让你们指出缺点,谢谢斑竹1. 试剂及材料准备MEM,10%FCS,手术器械,培养瓶,200目滤网,5ml注射器2. 动物手术及取材CR小鼠1只,酒精浸泡5分钟,取股,胫,肱骨,用基培冲出骨髓,滤过,1000转离心,完培重悬,接种于25厘米培养瓶3. 原代细胞培养:,3天后首次换液,自己发现一周贴壁细胞就铺满达90%,自行传代4. 细胞传代:消化下来很少,能下来的增长很慢5. 讨论:没经验欢迎斑竹的继续讲解,希望有经验的老师们能不啬指教羽之无限版主,能有空再讲讲吗这几天,我的原代就是不长,42天了,25平方厘米的培养瓶还未铺慢,不能传代真是天天盼着你啊呵呵，不好意思，最近我的sony笔记本又坏了，上次坏了几次维修部修不好，给我换了台新的，结果以用了没2个月又不能启动了，真是麻烦，我的资料都在里面，最近实验又忙，没空去维修部……不过明天我就去了。
……呵呵，跑题了。
动物细胞原代培养过程
动物细胞原代培养一、剪取组织颈椎脱臼法处死小鼠，放在100ml的烧杯中用70％乙醇消毒3min。
用剪刀剪开腹部，取出肾、肝、脾（任意一种脏器）。
1、将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1‰ 新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。
2、将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔二、清洗在盛有PBS 液平皿中洗涤数次，剔除包膜、结缔组织，将剔除后脏器放入另一盛有PBS 平皿中。
三、剪切将肾、肝、脾剪成1mm3 （剪成肉末状）大小的组织块，再次清洗，洗去残留的血细胞，以备消化。
四、消化1、在50ml离心筒中加入0. 25％胰蛋白酶溶液25ml，在温暖的环境中或置于37 °水浴摇床中轻轻摇动15min，转速约为180r/min。
2、让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活胰蛋白酶。
（小牛血清在共用无菌操作台上取用）3、在离心管中残留未消化组织块中再次加入胰蛋白酶进行消化，重复步骤1和2。
五、制备单细胞悬液1、将混合的细胞悬液离心，1200rpm，5min，弃上清。
2、将沉淀用新鲜的无菌PBS重悬，再1000-1200rpm，5min离心。
3、用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止,然后再按照（1）进行离心，离心后弃去上清液，将沉淀用少量细胞培养液反复吹打。
制的细胞悬液。
六、接种1、将细胞悬液接种到细胞培养瓶中。
2、用滤器过滤RPMI1640再悬沉淀，并使终体积为20ml。
（RPMI-1640RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写，代指洛斯维.帕克纪念研究所。
RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。
其中含有10%胎牛血清。
）七、培养1、在培养瓶外做好标记（标明所培养细胞的名称和时间），2、置于CO2的孵箱中培养，3、72h后即可观察。
小鼠胚胎干细胞培养实验步骤
细胞的原代培养点击次数：540 作者：佚名发表于：2009-03-06 16:26转载请注明来自丁香园一、原代细胞培养原理原代细胞培养是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。
借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制以及细胞的衰老、死亡等生命现象。
• 幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养• 掌握无菌操作技术• 了解小鼠解剖操作技术• 了解原代细胞培养的一般方法与步骤•了解培养细胞的消化分散• 了解倒置显微镜的使用二、实验材料• 实验动物：孕鼠或新生小鼠• 液体：细胞生长液（内含20%小牛血清）0.25%胰蛋白酶平衡盐溶液70%乙醇•器材：灭菌镊子、剪刀若干把灭菌培养皿、细胞培养瓶、小瓶、烧杯若干个吸管若干支酒精灯原代细胞培养方法三、胰酶消化法（1）胰酶消化法操作步骤——取材a. 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。
b. 把整个孕鼠浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。
c. 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。
d. 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。
e. 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。
f. 漂洗胚胎，去掉平衡盐溶液。
继续用平衡盐溶液漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。
（2）胰酶消化法操作步骤——切割a. 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。
b. 然后用眼科手术剪刀小心地绞碎胚胎，直到成1mm3左右的小块，再用平衡盐溶液清洗，洗到组织块发白为止。
c. 静置，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。
（3）胰酶消化法操作步骤——消化、接种培养a. 视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
b. 加入3-5ml细胞生长液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
骨骼肌成纤维细胞分离培养
骨骼肌成纤维细胞分离培养
骨骼肌成纤维细胞（skeletal muscle fibroblasts）的分离和
培养是一种常用的实验技术，用于研究骨骼肌相关的生物学过程以及
肌肉疾病等。
以下是骨骼肌成纤维细胞分离培养的一般步骤：
1.准备离体骨骼肌组织。
从小鼠或人的骨骼肌中取出组织，最好是新鲜组织以确保细胞的活力。
2.组织消化。
将骨骼肌组织切成小块，用胶原酶或胰蛋白酶等消化酶进行消化，使细胞从组织中释放出来。
3.细胞筛选。
通过过筛网或离心的方式将消化后的细胞悬浮液筛选，去除大部分的纤维束和其他细胞类型。
4.细胞培养。
将筛选后的细胞悬浮液转移到培养皿中，添加含有合适培养基和补充物的培养液，将培养皿放置在适当的培养箱中。
5.培养条件。
骨骼肌成纤维细胞通常在37°C的孵育箱中，与5% CO2的空气保持湿润的环境中培养。
6.细胞生长和传代。
骨骼肌成纤维细胞会在培养皿中黏附并开始增殖。
当细胞达到一定密度时，可以进行传代，将细胞分离并分散到
新的培养皿中。
需要注意的是，分离和培养骨骼肌成纤维细胞需要一定的实验技巧和设备，以保证细胞的存活和生长。
同时，细胞的培养基选择和培
养条件的控制也对细胞的生长和功能有重要影响。
因此，在进行这项
技术时，需要按照具体实验要求和相关文献中的方法进行操作。
新生大鼠肌源性干细胞的原代培养和鉴定
新生大鼠肌源性干细胞的原代培养和鉴定（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的探讨骨骼肌源性干细胞体外培养、鉴定的方法。
方法采用I型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法分离大鼠骨骼肌源性干细胞，经差速贴壁法纯化后，培养液中培养。
倒置显微镜观察细胞形态，生长曲线分析肌源性干细胞的增殖能力，结蛋白细胞免疫荧光方法鉴定肌源性干细胞。
结果经过两步消化和差速贴壁后，成功培养出高纯度的肌源性干细胞，细胞免疫荧光结果为desmin(+)。
结论通过体外原代培养获得高纯度肌源性干细胞，结蛋白细胞免疫荧光可以对其早期鉴定，为组织工程的临床应用提供种子细胞。
【关键词】大鼠肌源性干细胞体外培养Abstract：Objective To establish the methods for culture and identification of rat muscle-derived stem cells in vitro.Methods By two-step method, the rat muscle was digested with type I collagen and trypsin, and the isolated cell suspension was purified by different adhesion time . The proliferation ability of muscle-derived stem cells wasanalysed through studying growth curve, and the obtained cells were identified with cell immunofluroescence technique．Results Highly purified MDSCs were harvested and they showed desmin(+) by cell immunofluroescence technique．Conclusions MDSCs can be cultured in vitro and can be identified by desmin stain and used to tissue engineering as “seed”cells.Key words：rat ; muscle derived stem cells ; culture in vitro 近年研究发现，成体骨骼肌中不但存在单能的成肌干细胞－卫星细胞，而且还含有多能的“肌源性干细胞”（muscle derived stem cells，MDSCs）。
成骨细胞原代培养
成骨细胞原代培养
成骨细胞是一类能够形成骨组织的细胞，它们可以通过原代培养的方法进行研究。
下面是成骨细胞原代培养的步骤：
1.选择合适的细胞来源：成骨细胞可以来源于小鼠、大鼠、人等，根据研究需要选择合适的动物或人类来源。
2.预处理组织：从动物或人体中取出骨骼组织，去除软组织和肌肉，然后将骨骼切成小块。
3.分离成骨细胞：用酶等物质对骨骼块进行消化，获得含有成骨细胞和间充质细胞的细胞悬液。
4.培养：将获得的细胞悬液接种在含有成骨细胞培养物的培养皿中，培养温度为37℃，CO2浓度为5%。
5.细胞传代：细胞在生长过程中会不断分裂，可以将细胞培养到达一定密度后用胰酶等物质分离，得到更多的细胞用于后续实验。
通过原代培养方法获得的成骨细胞具有更高的细胞活力和稳定性，适合用于体外研究成骨细胞的生物学特性和调控机制。
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代
小鼠骨髓间充质细胞原代培养及传代之flamerking图文版[精华]很多战友发email或PM向我询问小鼠MSC的培养方法，我零零散散地一个个回复过几次，由于我平时时间不是很多，所以回答地时候有些内容写的不是很详细。
今天又有一个战友PM我，询问我培养方法。
看来做小鼠MSC的战友越来越多。
一遍遍地重复写很费时间（想粘贴复制又找不到上次写的在哪～惨！），所以我想还是发贴公布一下。
其实我小鼠MSC在我的课题中不是主角，只是起一个control的作用，因此我在这方面的经验可能没有一些专门做小鼠MSC的战友丰富，不过我还是很愿意把我的经验写出来供大家参考，希望能够起到“抛砖引玉”的作用。
欢迎各位同道对我的方案进行批评和指正，与大家一起分享你们的经验和智慧。
提纲一，简版主要步骤及操作要点。
二，完整版1. 试剂及材料准备2. 动物手术及取材3. 原代细胞培养4. 细胞传代5. 讨论时间关系，今天先给个简版。
我先顶一下,由于我还是新手,故不能说是经验介绍,只好讲让你们指出缺点,谢谢斑竹1. 试剂及材料准备MEM,10%FCS,手术器械,培养瓶,200目滤网,5ml注射器2. 动物手术及取材CR小鼠1只,酒精浸泡5分钟,取股,胫,肱骨,用基培冲出骨髓,滤过,1000转离心,完培重悬,接种于25厘米培养瓶3. 原代细胞培养:,3天后首次换液,自己发现一周贴壁细胞就铺满达90%,自行传代4. 细胞传代:消化下来很少,能下来的增长很慢5. 讨论:没经验欢迎斑竹的继续讲解,希望有经验的老师们能不啬指教羽之无限版主,能有空再讲讲吗这几天,我的原代就是不长,42天了,25平方厘米的培养瓶还未铺慢,不能传代真是天天盼着你啊呵呵，不好意思，最近我的sony笔记本又坏了，上次坏了几次维修部修不好，给我换了台新的，结果以用了没2个月又不能启动了，真是麻烦，我的资料都在里面，最近实验又忙，没空去维修部……不过明天我就去了。
……呵呵，跑题了。
小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养和鉴定_代阳
第21卷 第1期 天 津 农 学 院 学 报 V ol. 21，No. 1 2014年3月 Journal of Tianjin Agricultural University March ，2014收稿日期：2013-12-19基金项目：国家自然科学基金项目“牛骨骼肌卫星细胞成肌分化相关miRNAs 的鉴定和功能研究”（31201021）；天津市自然科学基金项目“microRNA-1对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控作用研究”（13JCQNJC14600） 作者简介：代阳（1988-），女，内蒙古通辽人，硕士在读，研究方向为动物胚胎与转基因工程。
E-mail: aq19881209@。
文章编号：1008-5394（2014）01-0001-04小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养和鉴定代阳1，王轶敏1，2，刘新峰1，樊晗璐1，李吉霞1，郭宏1，丁向彬1，通信作者（1. 天津农学院 动物科学与动物医学学院，天津 300384；2. 西北农林科技大学 生物工程研究所，陕西 杨凌 712100）摘 要：采用胶原酶和胰酶联用的酶消化法分离小鼠骨骼肌卫星细胞，应用差速贴壁法进行纯化，并利用RT -PCR和免疫荧光染色方法对分化前后细胞的标志基因进行鉴定。
结果显示：分离出的肌卫星细胞生长状态良好，RT -PCR和免疫荧光染色显示肌卫星细胞Pax7和MyoD呈阳性表达，诱导分化形成肌管后，分化标志基因MyoG和MHC呈阳性表达。
本研究成功从小鼠肌肉组织中分离出了肌卫星细胞，并具有很好的体外分化能力，可以为肌肉的发育分化和损伤修复研究提供良好的细胞模型。
关键词：小鼠；骨骼肌卫星细胞；细胞培养；鉴定中图分类号：Q813.1 文献标识码：AIsolated Culture and Identification of Mouse Skeletal Muscle Satellite CellsDAI Yang 1, WANG Yi-min 1,2, LIU Xin-feng 1, F AN Han-lu 1, LI Ji-xia 1,GUO Hong 1, DING Xiang-bin 1,Corresponding Author(1. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China; 2. Institute ofBioengineering, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaa n xi Province, China )Abstract: In this study, mouse skeletal muscle satellite cells were isolated by collagenase and trypsinase digestion method. Then the satellite cells were purified and induced to differentiate into myotubes, and the marker genes of the cells before or after the differentiation were detected by RT-PCR and immunocytochemistry technology. The results show that the isolated muscle satellite cells were healthy, and expressed the marker genes of paired protein box (Pax7) and myogenic differentiation antigen (MyoD ). After inducing to the myotubes, myogenin (MyoG ) and myosin heavy chain (MHC )showed positive expression. The results indicate that mouse skeletal muscle satellite cells of high purity, which can provide cell sources for muscle development and damage repair study, are successfully isolated.Key words: mouse; skeletal muscle satellite cell; cell culture; identification骨骼肌卫星细胞（skeletal muscle satellite cell）是骨骼肌中具有分化增殖潜能的肌源性干细胞，通常以静息状态存在于肌纤维肌膜与基底膜之间[1]，在一定条件下可以被激活，发生增殖和分化，形成骨骼肌细胞。
小鼠骨骼肌卫星细胞分离与纯化的改良
小鼠骨骼肌卫星细胞分离与纯化的改良作者：李小雷葛新玲来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第03期【摘要】目的：建立一种快速高效的小鼠骨骼肌卫星细胞的提取、纯化的实验方法，为进一步研究肌损伤与修复再生机制建立离体损伤模型奠定基础。
方法：两步酶消化法结合差速贴壁技术并对其改良，分离出骨骼肌卫星细胞，并进行免疫组化鉴定。
结果：改良后提取、纯化所得到的肌卫星细胞纯度可达到90%，明显高于普通方法。
结论：本实验通过改良骨骼肌卫星细胞培养方法，使肌卫星细胞纯度明显增高。
【关键词】肌卫星细胞；分离；纯化Mauro等[1]1961年首次在蛙骨骼肌中发现，肌卫星细胞是一种源于胚胎中胚层的干细胞。
在发育成熟的个体，呈小单核梭形分布于肌纤维浆膜和基底膜之间，在正常情况下处于静息状态。
当肌肉受到损伤等刺激时，则可进入有丝分裂循环，形成肌肉修复所需的细胞[2～4]。
新生细胞可以相互融合形成新肌束，或融入已有肌束，以修复肌组织损伤。
正是由于卫星细胞的这些特性，使其成为肌肉组织工程、基因工程和胚胎发育研究的新热点[5～6]。
但肌卫星细胞的分离与纯化也成了亟待解决的问题，普通方法分离时含有大量的杂质细胞，本实验旨在提高肌卫星细胞的纯度。
1 材料与方法1.1 材料4～6周龄清洁级C57 BL/6小鼠（15～17 bg），雄性，由中国科学院上海实验动物中心提供。
DF培养基、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶（Trypsin）均购自美国Gibico BRL公司。
小牛血清（FCS）购自Hyclone公司。
1.2 方法1.2.1 准备取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒30 min。
开始操作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
5～7日龄C57BL/10小鼠2只，DMEM/F12培养基，10% FCS+5% FBS，PBS缓冲液，0.25%胰蛋白酶，0.1%Ⅰ型胶原酶。
1.2.2 处理组织将小鼠断颈处理，碘伏浸泡后，75%酒精浸泡消毒5 min，用消毒剪刀剪开下肢皮肤，剪断后肢，分离出股四头肌，将其置于培养皿中，PBS缓冲液漂洗2～3次，去除血污（如怀疑组织有污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30～60 min）去除筋膜、神经、脂肪和肌腱等，将股四头肌置于青霉素小瓶中用剪刀反复剪碎约1 mm组织3块。
小鼠成纤维细胞原代培养
实验—小鼠成纤维细胞得原代培养一、实验目得１.掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养中得取材、消化及无菌操作等基本实验技术与操作过程。
2。
熟悉在倒置相差显微镜下观察培养细胞得形态与生长状况得方法．3。
了解细胞原代培养与传代培养得原理与方法。
二、实验原理自１７世纪下半叶Robｅrt Hooｋｅ提出“细胞"概念直至2０世纪中叶，细胞培养(Cell culture)才逐渐发展起来.现代生命科学以及相关领域得研究前提就是细胞得维持与增殖，因此,细胞培养不仅就是细胞生物学得密不可分得组成部分,而且已经成为生物化学、生物物理学、遗传学、免疫学、肿瘤学、生理学、分子生物学与神经科学、甚至临床医学得重要内容。
细胞培养也就是细胞生物学延伸至相关学科得一条主要途径。
如今,细胞培养已经成为生命科学与医学研究最常用得基础技术之一。
细胞培养就是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下,使其生存、生长、繁殖与传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题得研究。
细胞培养得直接目得就是维持或扩增细胞数量。
依据取材于动物组织或培养细胞,细胞培养分为原代培养与传代培养．1.原代培养(pｒimary culture)就是从供体取得组织或细胞后在体外进行首次培养直至成功地进行首次传代之前得培养。
但实际上通常把第一代至第十代以内得培养细胞统称为原代细胞培养.原代培养就是建立细胞系得第一步,其最基本得方法有两种：组织块培养法与消化培养法.组织块培养法就是指直接从机体取下组织与器官,通过组织块直接长出单层细胞,该培养法就是最常用得原代培养方法，其将刚刚离体得、生长活力旺盛得组织剪成小块接种在培养瓶中作为实验材料，一天后细胞可从贴壁得组织块四周游出并生长。
组织块培养法操作过程简便、易行,培养得细胞较易存活，适用于一些来源有限、数量较少得组织得原代培养。
消化培养法利用酶或机械方法将组织分散成单个细胞后，在不加任何粘附剂得情况下，直接移植在培养瓶壁上,加入培养基立即进行培养得方法。
骨骼肌卫星细胞的原代、传代培养和鉴定
骨骼肌卫星细胞的原代、传代培养和鉴定作者：宋策来源：《新教育时代》2015年第08期一、骨骼肌卫星细胞简介骨骼肌卫星细胞最初被人们认为是骨骼肌的定向祖细胞，对骨骼肌的生长和伤后再生起重要作用。
1961年，Mauro在对青蛙的胫前肌做研究时，利用电子显微镜，从肌膜和基底膜之间发现了骨骼肌卫星细胞。
一般情况下，这些细胞处于静止状态，当骨骼肌受损、坏死或负荷过重等应激出现时，卫星细胞就能被激活，开始迁移至受损部位，然后增殖分化形成肌管，从而达到修复肌肉的目的。
二、骨骼肌卫星细胞的原代培养取SD大鼠一只，使用10%浓度水合氯醛进行腹腔注射麻醉，其计量约为0.4ml/100g。
静置大鼠数分钟直至其结膜反射消失，用镊子将其浸泡在75%酒精中消毒2-3分钟后，仰卧位固定，使用采血针吸除血液，提取腓肠肌和比目鱼肌，置入事先消毒并预冷的生理盐水中，然后迅速转移至超净工作台，取冰袋置于操作容器下方。
使用双抗PBS骨骼肌清洗液对获得的肌肉清洗3-4次，快速清除血管、肌筋膜以及脂肪等组织后，将肌肉均匀剪碎至1mm3 大小左右。
再次加入骨骼肌清洗液清洗，静置后弃漂浮物。
将适量的II型胶原酶消化液（0.1%）加入被剪碎的肌肉中，使用37℃磁力搅拌机让肌肉均匀消化约60分钟，转移至离心管，以1000rpm离心10分钟，吸除上清液。
根据沉淀体积加入适量的胰酶细胞消化液，磁力搅拌消化约20分钟，加入细胞种植液终止消化，将此时的肌肉悬液转移至离心管，以1000rpm离心10分钟，吸除上清液，在肌肉沉淀中加入10ml细胞种植液，均匀吹打成细胞悬液。
将细胞悬液依次加入200目、400目的细胞筛中过滤纯化。
均匀吹打滤液并接种于6孔细胞培养板中，置于培养箱（5%CO2，37℃，100%空气湿度）中培养2小时，细胞进行第一次差速贴壁后，将细胞液转移至新的6孔板中继续在培养箱（5%CO2，37℃，100%空气湿度）里培养2小时。
然后将细胞悬液转移至提前用0.001%多聚赖氨酸工作液包被过的6孔板中。
骨骼肌的原代培养法
骨骼肌的原代培养一.试剂1.包被用多聚赖氨酸poly-lysine的配制与包被1）准备0.94%硼酸溶液称取0.94硼酸粉末溶于80ml水中，用NaOH将pH值调至8.4，再定容。
2）按每4.9mg多聚赖氨酸粉末溶解于98ml0.94%硼酸溶液配制100ml.3）0.22µM过滤分装，-20°C储存，避免反复冻融。
4）包被：按10cm皿用4ml包被液进行包被，4°C过夜或37°C 2 小时后，吸干，回收包被液，包被过的皿置4°C保存可达一个月，临用前用PBS或灭菌的去离子水洗3遍再使用，整个包被过程均为无菌操作。
多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。
也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。
多聚赖氨酸包被培养板使用前是用灭菌的去离子水稀释，最好不要用双蒸水或别的，因为多聚赖氨酸包被的原理是通过改变器皿表面的电荷而促进细胞的黏附。
2. 0.1% I型胶原酶（1mg/ml）100mg I型胶原酶溶于100ml D-hank’s液中，过滤后4°C保存。
3. D-hank’s液（可以直接购买使用）KCl 0.40g，KH2PO4 0.06g，NaCl 8.00g, NaHCO30.35g, NaH2PO4·7H2O 0.09g，酚红0.01g。
以上均为分析纯，加三蒸水定容至1L后高压灭菌，4℃分装备用;4. 血清的灭活:常用的血清要先在56℃水浴中灭活30min方可使用。
灭活后-20℃保存备用;5. 细胞生长液的配制(100mL):即含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液。
取20ml灭活的血清，再加青、链霉素各100IU，然后用DMEM/F12培养基补充到100 mL，4℃保存备用。
6. 0.1%胶原酶II(100 mL)的制备:称取胶原酶II 100mg用100mL DMEM/F12液充分溶解，0.22µM过滤后分装备用，-20℃保存;7. 75%乙醇8. Mini-Q(超纯水)--灭菌无离子水二.实验器械1、培养皿2、培养瓶3、直剪和眼科剪4、眼科镊和止血钳5、烧杯6、15ml离心管三、正常小鼠原代骨骼肌细胞培养实验流程取肌肉于平皿，Hank’s洗3次↓剔除脂肪、结缔组织↓肌肉标本剪约0.1cm3小块↓移至离心管，Hank’s洗3次↓静置1min，弃去上层液及漂浮组织↓0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次↓生长培养基终止消化，反复吹打，依次100，200，400目过筛↓离心，1000rmp,10min，弃去上清↓重悬，计数细胞，接种密度以5 × 105个/ml↓悬液加入未经PPL包被培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度，1h↓转移包被瓶中，生长培养基培养，培养37℃，5%CO2↓4d换液，以后每天换四、实验操作1、新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s 洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块；2、将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织；3、向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化；4、反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min；5、弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d 换液，以后每天换液1次。
【2017年整理】小鼠肾脏原代细胞的分离和计数
一小鼠肾脏原代细胞的分离及细胞计数(一)原理细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。
由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。
原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。
一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。
(二)操作1．取材用颈椎脱位法使小鼠迅速死亡。
然后，把整个动物浸入盛有75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。
用消过毒的剪刀剪开用乙醇再次消毒后的皮肤，剖腹取出肾脏。
置于无菌平皿中。
2．切割用灭菌的PBS液将取出的脏器清洗三次，然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎，直到成1 mm左右的小块，再用PBS清洗，洗到组织块发白为止。
移入无菌离心管中，静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。
3．消化吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液1 ml，加入离心管中，与组织块混匀后，加上管口塞子，37℃水浴中消化30分钟，每隔5分钟摇动一下试管，使组织与消化液充分接触，静止，吸去上清。
4．制备单细胞悬液向含有经消化的肾组织的离心管中加入2-3 ml PBS，用吸管吸打数次，直到看不到块状组织。
5．细胞计数1 盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。
2 将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3 统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大格（每个大格含有16个中格）中的细胞数目。
4 计算原细胞悬液的细胞数（按照下面公式计算细胞密度）：（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个大格子细胞数/4)×104说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
mpc5细胞培养方法
mpc5细胞培养方法MPC5细胞是一种小鼠骨骼肌前体细胞系，常用于研究肌肉发育和再生。
在进行MPC5细胞培养之前，需要准备培养基和相应的培养器具。
以下是MPC5细胞培养的详细方法。
1.制备培养基MPC5细胞的培养基可以使用Dulbecco's修改Eagle培养基（DMEM）添加10%胎牛血清（FBS）、1% L-谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素混合抗生素来制备。
将DMEM加热到37°C，然后添加适量的FBS和抗生素。
2.接种细胞MPC5细胞可以从冻存库中解冻，也可以从新鲜组织中分离获得。
将细胞解冻后，在无菌条件下进行操作。
将细胞转移到50mL离心管中，用预先制备的培养基转悬浮细胞，使其浓度约为1×10^5个细胞/mL。
3.培养细胞将细胞悬浮液均匀地分配在无菌的细胞培养瓶或细胞培养皿中。
将细胞培养在37°C、5%CO2的培养箱中。
每两到三天更换一次完全培养基，保持细胞的健康生长。
4.维持细胞的稳定增长当细胞密度达到80-90%时，需要将细胞进行分裂。
用无菌胰蛋白酶进行细胞的解离，然后用预先加热的新鲜培养基稀释细胞。
将细胞重新分配在新的细胞培养瓶或培养皿中。
5.细胞冻存在培养细胞达到一定数量之后，可以进行细胞的冻存。
用离心管收集细胞，用无菌10%二甲基亚砜（DMSO）溶液缓慢冷冻细胞。
将细胞置于液氮中保存，并通过特定的程序进行解冻和复苏。
6.鉴定细胞纯度和应用可以通过免疫组化或流式细胞术等方法鉴定MPC5细胞的纯度和表型。
这些细胞可以用于肌肉发育和再生的研究，可以进行分化实验、基因表达分析及细胞迁移和扩散等功能实验。
注意事项：-培养器具全部要经过高温高压灭菌处理。
-操作要在无菌条件下进行，防止细胞受到细菌和真菌的污染。
-培养皿或培养瓶应保持干燥洁净。
-注意观察细胞的形态和生长情况，及时更换培养基。
-在进行实验前，需要确保细胞的纯度和活性。
总结：MPC5细胞的培养方法相对简单，但仍需要严格的无菌操作和定期的培养基更换。
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PriCells –正常小鼠原代骨骼肌细胞培养
一、实验试剂
1、培养基：PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement
2、冻存液：PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO
3、洗涤液：1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S
4、染色液：0.4% Trypan Blue
5、消化液：PriCells Isolation of Primary Cell Kit
6、检测试剂：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）单克隆抗体
二、实验器械
1、培养皿
2、培养瓶
3、直剪和眼科剪
4、眼科镊和止血钳
5、烧杯
6、15ml离心管
三、实验流程
取肌肉于平皿，Hank’s洗3次
↓
剔除脂肪、结缔组织
↓
肌肉标本剪约0.1cm3小块
↓
移至离心管，Hank’s洗3次
↓
静置1min，弃去上层液及漂浮组织
↓
0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次
↓
生长培养基终止消化，反复吹打，依次100，200，400目过筛
↓
离心，1000rmp,10min，弃去上清
↓
重悬，计数细胞，接种密度以5 × 105个/ml
↓
悬液加入未经PPL包被培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度，1h
↓
转移包被瓶中，生长培养基培养，培养37℃，5%CO2
↓
4d换液，以后每天换
四、实验操作
1、新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块；
2、将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织
3、向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化；
4、反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min；
5、弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d换液，以后每天换液1次。
五、细胞鉴定
1、显微鉴定：刚分离出的原代细胞比较小，呈球形，折光性强。
12h后，细胞开始贴壁，72h后贴壁完全，细胞逐渐延展成梭形，随着培养时间的延长，细胞增殖、迁移并逐渐规律性地沿一个方向排列。
当细胞融合80%以上后，开始形成肌管。
2、免疫细胞化学染色1：肌卫星细胞胞浆中含有结蛋白（desmin），可采用鼠抗人及小鼠desmin 一抗对卫星细胞进行免疫染色鉴定。
3、免疫细胞化学染色2：采用骨骼肌特异性的肌球蛋白（myosin）单克隆抗体检测。
取含骨骼肌细胞盖玻片常规处理后进行myosin的细胞免疫化学染色，PBS代替一抗做阴性对照。
结果判定：以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性染色。
六、注意事项
1、胰酶消化过程中，也可采用15min两步消化的方法进行。
根据所取组织个体年龄决定，一般成年大小鼠采用两步消化效果好，幼鼠一步消化和两步消化差别不大。
2、传代培养代数不要太多，骨骼肌细胞传代能力有限，容易死亡。
3、骨骼肌细胞培养过程中，形态会发生较大变化。
4、肌肉组织要尽可能剔除表面的膜和脂肪组织。