最新soft agar assay protocol软琼脂克隆形成实验教学内容

1.软琼脂克隆形成实验

1)配制1.2%和0.7%的琼脂糖，高压灭菌后置于55℃水浴中，使其保持融化状

态。

2)配含20%FBS、2×抗生素的2×RPMI 1640培养基，37℃预热。

3)灌下层胶：1.2%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合，加入到6孔板中，每孔3ml，

室温放置待其凝固。

4)等待下层胶凝固过程中消化B16 con shRNA与B16 Myo7a shRNA稳转细胞，

计数，用无血清培养基调整浓度为5×104/ml，每孔用100μl细胞，设3个平行孔。

5)下层胶凝固后灌上层胶：0.7%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合(温度约40℃

左右)，加入100μl细胞悬液，即5000个细胞，混匀，加入孔板中，每孔3ml。

6)37℃5% CO2培养，约2-3周收细胞，0.1%结晶紫染色，计数并比较两组克

隆形成情况。

1、人生最重要的不是努力，不是奋斗，而是抉择。

2、老板只能给一个位置，不能给一个未来。舞台再大，人走茶凉。

3、意外和明天不知道哪个先来。没有危机是最大的危机，满足现状是最大的陷阱。

4、所见所闻改变一生，不知不觉断送一生。

5、生意，可以掌控努力与投资，却无法掌控结果。人生得意时找出路，失意时才有退路，宝马都有备胎，您的人生呢？

6、世界上有多少有才华的失败者，世界上有很多高学历的无业游民—是因为选择错误。

7、下对注，赢一次；跟对人，赢一世。

8、学识不如知识，知识不如做事，做事不如做人。

9、不识货，半世苦；不识人，一世苦。

10、生命不在于活得长与短，而在于顿悟的早与晚。

11、做人处事，待人接物：重师者王，重友者霸，重己者亡。

12、没有目标的人永远为有目标的人去努力。

13、人生三阶段：比才华；比财力；比境界。

14、人若把自己框在一定的范围内，就容易限制了自己的思维和格局。

15、今天的优势会被明天的趋势代替，把握趋势，把握未来。

16、读万卷书不如行千里路，行千里路不如阅人无数，阅人无数不如名师指路。经师易得，人师难求。

17、学历代表过去，财力代表现在，学习力代表将来。

18、人生能走多远，看与谁同行；有多大成就，看有谁指点。

19、聪明的人看得懂，精明的人看得准，高明的人看得远。

20、做人不成功，成功是暂时的；做人成功，不成功也是暂时的。

记住这些话他会帮你变得更完美

记住：

再烦，也别忘微笑；再急，也要注意语气；

再苦，也别忘坚持；再累，也要爱自己。

低调做人，你会一次比一次稳健；高调做事，你会一次比一次优秀。成功的时候不要忘记过去；失败的时候不要忘记还有未来。

有望得到的要努力，无望得到的不介意，则无论输赢姿态都会好看。生活不是单行线，一条路走不通，你可以转弯。

泪水和汗水的化学成分相似，但前者只能为你换来同情，后者却可以为你赢的成功。

变老是人生的必修课，变成熟是选修课。

以锻炼为本，学会健康；以修进为本，学会求知；

以进德为本，学会做人；以适应为本，学会生存。