苕子蜜总酚酸和总黄酮含量测定及抗氧化活性的研究
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1.3.1 总酚酸含量的测定
2.0 y=147.87x+0.0188
1.5 R2=0.9992
1.0
0.5
0 0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.010 0.012 质量浓度 /(mg/mL) 图 1 原儿茶酸标准曲线 Fig.1 Standard curve of catechin
A Ⅰ－(A Ⅱ－ A Ⅲ) 清除 DPPH 自由基能力 /%= —————————× 100
AⅠ
阳性对照的测定：称取 0.01gVC，蒸馏水定容至 50mL 容量瓶中，配成 0.20mg/mL 溶液。分别取 0.00、 0.50、1.00、2.00、4.00、8.00mL 至 10mL 容量瓶中， 定容至刻度，摇匀。按样品溶液的测定方法进行测定。
Antioxidant Activities and Contents of Total Phenolic Acid and Total Flavonoids in Vicia villosa Roth Honey
WANG Hai-min，YU Hai-xia，DONG Rui，LI Wei，CONG Hai-di，ZHENG Yi-nan* (College of Chinese Medicinal Materia1, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)
0.025、0.05、0.10、0.20g/mL)样品 1mL，磷酸盐缓 冲溶液(0.2mol/L，pH6.6)2.5mL 和 1% 铁氰化钾 5mL，置 于 50℃水浴中反应 20min，然后加入 10% 的三氯乙酸 5mL，摇匀。吸取上清液 2.5mL，加入 2.5mL 蒸馏水 和 0.5mL 0.1% 的三氯化铁溶液。样品在 700nm 波长处 测定吸光度。反应物的吸光度增加表明还原力增强。
※基础研究
食品科学
2010, Vol. 31, No. 01 55
760nm A 510nm A
子蜜是云贵高原的珍贵蜜种，是蜜蜂从野生苕子的花蕊 中采集蜜汁与自身分泌物(主要是生物复合酶)结合后在蜂 巢中转化、脱水、酿造而成的。苕子蜜晶莹剔透，结 晶后清透若雪，细腻如脂，故有人又称其为小雪莲蜜， 雪脂莲蜜。苕子蜜既有普通蜂蜜的解毒润燥作用，又 有苕子清凉养颜、滋润肌肤、增强皮肤弹性、保持皮 肤柔软等独特功效，颇受女士的青睐。然而到目前为 止，关于苕子蜜的组成成分及药理活性方面的研究尚未 见报道。本实验测定 5 个样本苕子蜜中总酚酸及总黄酮 的含量，并进行抗氧化活性的研究，旨在发现苕子蜜 新的保健功能，为提供新的评价苕子蜜内在质量的指标 提供参考依据。
samples theoretically equivalent to that of catechin varied from 9.323 to 21.982 mg/100 g honey, and the content of total
flavonoids theoretically equivalent to that of rutin from 0.842 to 2.295 mg/100 g honey. All the honey samples exhibited some
Abstract：Five commercially available Vicia villosa Roth honeys were evaluated for contents of total phenolic acid and total
flavonoids, reducing power and DPPH radical scavenging activity. Results indicated that the content of total phenolic acid in the
antioxidant activity in a dose-dependent manner. A positive correlation was observed between total phenolic acid content and
DPPH radical scavenging activity or reducing power. This demonstrated that the antioxidant activity of these honeys may be
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 苕子蜜( Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ) 市售。 原儿茶酸、1 , 1- 苯基 - 2 - 苦肼基自由基( D PP H ·)
S i g m a 公司；钨酸钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸、溴 水、硫酸锂、碳酸钠、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化 钠、三氯乙酸、铁氰化钾、三氯化铁、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、无水乙醇均为分析纯 北京化学试剂公 司。XAD-2 大孔树脂 上海摩速科学器材有限公司。 1.2 仪器与设备
54 2010, Vol. 31, No. 01
食品科学
※基础研究
苕子蜜总酚酸和总黄酮含量测定及 抗氧化活性的研究
王海敏，虞海霞，董 蕊，李 伟，丛海迪，郑毅男 *
(吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118)
摘 要：以市售 5 个样本苕子蜜为研究对象，在测定其总酚酸及总黄酮含量的基础上，研究苕子蜜对 DPPH 自由 基的清除作用，并测定苕子蜜的还原力。结果表明：5 个样本苕子蜜总酚酸含量在 9.323～21.982mg/100g 之间，总 黄酮含量在 0.842～2.295mg/100g 之间。各样本苕子蜜均有一定的抗氧化活性，呈现量效关系。总酚酸含量、还 原能力与抗氧化能力三者成正相关，表明蜂蜜的抗氧化活性可能与其所含的总酚酸有关。总黄酮和总酚酸含量与还 原能力、抗氧化能力之间无明显相关性。 关键词：苕子蜜；酚酸；黄酮；还原力；抗氧化活性
BP211D 电子分析天平 Sartorius 公司；DK-98-1 型 电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司； N-722 可见分光光度计 上海精密仪器科学有限公司；EYELA 真空旋转蒸发仪 东京理化公司；KQ-250DB 型超声波 清洗器 昆山超声仪器有限公司；UPWS 超纯水器 杭 州永洁达净化科技有限公司。 1.3 方法
苕子蜜蜜源为光叶苕子和毛叶苕子，学名分别为广 布野豌豆(V.cracca L.)和长绒毛野豌豆(V.villosa L.)。苕
收稿日期：2009-02-01 基金项目：吉林省科技厅资助项目(20040201-1-2) 作者简介：王海敏(1981 —)，女，硕士，研究方向为天然产物化学与新药开发。E-mail：7932132@163.com * 通信作者：郑毅男(1945 —)，男，教授，博士，研究方向为天然产物化学与新药开发。E-mail：zhenyinan@tom.com
样品溶液的配制：10g 苕子蜜，水定容至 25mL 容 量瓶中，摇匀。分别吸取 0.00、0.50、1.00、2.00、 4.00、8.00mL 至 10mL 容量瓶中，水定容至刻度，摇匀。
最大吸收波长的选择：将 DPPH 自由基溶液与水混 合，用乙醇和水混合溶液做空白对照，进行全波长扫 描，在 529nm 波长处有最大吸收，故采用 529nm 波长 为样品溶液的测定波长。
1.3.4 DPPH 自由基清除实验 DPPH 自由基溶液的配制：取 0.01g DPPH 自由基用
无水乙醇定溶至 50mL 容量瓶中作为母液，取 10mL 母液
56 2010, Vol. 31, No. 01
食品科学
※ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ础研究
定溶于 50mL 容量瓶中，最终质量浓度为 0.04mg/mL，避 光，现用现配。
Key words：Vicia villosa Roth honey；phenolic acid；flavonoids；reducing power；DPPH radical scavenging activity
中图分类号：O623.54
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2010)01-0054-04
蜂蜜是公认的具有多种生物学活性的天然食品。近 年来对蜂蜜的研究主要集中在黄酮类成分、酚酸类成 分、脱落酸、氨基酸及抗氧化活性能力方面[5-8]。蜂蜜 中的黄酮类化合物主要来自植物花蜜、花粉和蜂胶，主 要是以配基和糖苷形式存在。酚酸是蜂蜜中主要酚类化 合物。由于蜂蜜蜜源植物的不同，蜂蜜中的黄酮类和 酚酸类的含量和种类也有很大差异[5-6,8-9]。
linked to the total phenolic acid content. In addition, total flavonoids content had no obvious correlation with total phenolic acid
content, reducing power or DPPH radical scavenging activity.
1.3.2 总黄酮含量的测定 苕子蜜总黄酮含量的测定采用比色法[10]。称取 100g
蜂蜜，水稀释过 XAD-2 大孔树脂柱，水洗除去水溶性 杂质，收集甲醇洗脱部分，减压浓缩至干，甲醇定容 至10mL。精密吸取2.5mL至25mL容量瓶中，加5% NaNO2 溶液 1mL，使混匀，放置 6min，加 10% Al(NO3)3 溶液 1mL，摇匀，放置 6min，加 4% NaOH 溶液 10mL，再 加水至刻度，摇匀，放置 15min。在 510nm 的波长处 测定吸光度。将对照品配制成质量浓度为 0.2mg/mL 的标 准溶液，准确吸取 0.00、0.500、1.00、2.00、3.00、 4.00、5.00mL，按照上述方法制定标准曲线。以芦丁 质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准的曲 线见图 2，回归方程：y=10.457x － 0.002 (R2=0.9994)。 样品中总黄酮的含量在标准曲线中查出相应的值，苕子 蜜总黄酮含量以芦丁的相对量表示。
苕子蜜总酚酸含量的测定采用 Foiln-Ciocalteu 法(用 原儿茶酸作标准物)[2]。准确移取 3mL 稀释后的苕子蜜溶 液(0.1g/mL)，加入 1mL Folin-Ciocalteu 显色剂，然后加 入 5mL 1mol/L 碳酸钠水溶液，用蒸馏水定容至 10mL，
混合均匀后，室温下避光放置 1h，在 760nm 波长处测 定吸光度。将对照品原儿茶酸配成 0.1mg/mL 的标准溶 液，准确量取上述标准液 0.00、0.20、0.40、0.60、 0.80、1.00mL，按照上述方法制定标准曲线。以原儿 茶酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准的曲 线见图 1，回归方程：y=147.87x+0.0188 (R2=0.9992)。样 品中总酚酸的含量在标准曲线中查出相应的值，蜂蜜总 酚酸含量以原儿茶酸的相对量表示。
黄酮类和酚酸类化合物是人类日常饮食中普遍存在 的两种化合物。黄酮类和酚酸类化合物所具有的保健功 能主要表现在清除体内自由基、舒张血管、抗癌、抗 病毒、抗菌消炎、抗过敏等方面。目前，由于其具有 抗氧化和清除自由基的活性受到了广泛的关注[1-3]。人类 多种疾病的发生与发展均与体内的过量的自由基有关， 长期摄入一定量的抗氧化剂可以有效地降低心脑血管疾 病和癌症发病率[4]。因此，国内外许多学者的研究集中 在从日常食物中寻找抗氧化剂。
0.5 y=10.457x － 0.002 0.4 R2=0.9994 0.3
0.2
0.1
0 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 质量浓度 /(mg/mL) 图 2 芦丁标准曲线 Fig.2 Standard curve of rutin
1.3.3 还原能力的测定[11] 在 10mL 试管中分别加入不同质量浓度(0.0125、
样品溶液的测定：按Ⅰ. 2mL 水 +2mL DPPH 自由基 溶液；Ⅱ.2mL 样品 +2mL DPPH 自由基溶液；Ⅲ. 2mL 样品 +2mL 无水乙醇溶液加入反应液，摇匀后于室温避 光静止 30min，转移至比色皿内测吸光度。每组做 3 个 平行计算个样品对 DPPH 自由基的清除率。通过 IC50 值 软件，计算出 I C 50 值。
2.0 y=147.87x+0.0188
1.5 R2=0.9992
1.0
0.5
0 0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.010 0.012 质量浓度 /(mg/mL) 图 1 原儿茶酸标准曲线 Fig.1 Standard curve of catechin
A Ⅰ－(A Ⅱ－ A Ⅲ) 清除 DPPH 自由基能力 /%= —————————× 100
AⅠ
阳性对照的测定：称取 0.01gVC，蒸馏水定容至 50mL 容量瓶中，配成 0.20mg/mL 溶液。分别取 0.00、 0.50、1.00、2.00、4.00、8.00mL 至 10mL 容量瓶中， 定容至刻度，摇匀。按样品溶液的测定方法进行测定。
Antioxidant Activities and Contents of Total Phenolic Acid and Total Flavonoids in Vicia villosa Roth Honey
WANG Hai-min，YU Hai-xia，DONG Rui，LI Wei，CONG Hai-di，ZHENG Yi-nan* (College of Chinese Medicinal Materia1, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)
0.025、0.05、0.10、0.20g/mL)样品 1mL，磷酸盐缓 冲溶液(0.2mol/L，pH6.6)2.5mL 和 1% 铁氰化钾 5mL，置 于 50℃水浴中反应 20min，然后加入 10% 的三氯乙酸 5mL，摇匀。吸取上清液 2.5mL，加入 2.5mL 蒸馏水 和 0.5mL 0.1% 的三氯化铁溶液。样品在 700nm 波长处 测定吸光度。反应物的吸光度增加表明还原力增强。
※基础研究
食品科学
2010, Vol. 31, No. 01 55
760nm A 510nm A
子蜜是云贵高原的珍贵蜜种，是蜜蜂从野生苕子的花蕊 中采集蜜汁与自身分泌物(主要是生物复合酶)结合后在蜂 巢中转化、脱水、酿造而成的。苕子蜜晶莹剔透，结 晶后清透若雪，细腻如脂，故有人又称其为小雪莲蜜， 雪脂莲蜜。苕子蜜既有普通蜂蜜的解毒润燥作用，又 有苕子清凉养颜、滋润肌肤、增强皮肤弹性、保持皮 肤柔软等独特功效，颇受女士的青睐。然而到目前为 止，关于苕子蜜的组成成分及药理活性方面的研究尚未 见报道。本实验测定 5 个样本苕子蜜中总酚酸及总黄酮 的含量，并进行抗氧化活性的研究，旨在发现苕子蜜 新的保健功能，为提供新的评价苕子蜜内在质量的指标 提供参考依据。
samples theoretically equivalent to that of catechin varied from 9.323 to 21.982 mg/100 g honey, and the content of total
flavonoids theoretically equivalent to that of rutin from 0.842 to 2.295 mg/100 g honey. All the honey samples exhibited some
Abstract：Five commercially available Vicia villosa Roth honeys were evaluated for contents of total phenolic acid and total
flavonoids, reducing power and DPPH radical scavenging activity. Results indicated that the content of total phenolic acid in the
antioxidant activity in a dose-dependent manner. A positive correlation was observed between total phenolic acid content and
DPPH radical scavenging activity or reducing power. This demonstrated that the antioxidant activity of these honeys may be
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 苕子蜜( Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ) 市售。 原儿茶酸、1 , 1- 苯基 - 2 - 苦肼基自由基( D PP H ·)
S i g m a 公司；钨酸钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸、溴 水、硫酸锂、碳酸钠、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化 钠、三氯乙酸、铁氰化钾、三氯化铁、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、无水乙醇均为分析纯 北京化学试剂公 司。XAD-2 大孔树脂 上海摩速科学器材有限公司。 1.2 仪器与设备
54 2010, Vol. 31, No. 01
食品科学
※基础研究
苕子蜜总酚酸和总黄酮含量测定及 抗氧化活性的研究
王海敏，虞海霞，董 蕊，李 伟，丛海迪，郑毅男 *
(吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118)
摘 要：以市售 5 个样本苕子蜜为研究对象，在测定其总酚酸及总黄酮含量的基础上，研究苕子蜜对 DPPH 自由 基的清除作用，并测定苕子蜜的还原力。结果表明：5 个样本苕子蜜总酚酸含量在 9.323～21.982mg/100g 之间，总 黄酮含量在 0.842～2.295mg/100g 之间。各样本苕子蜜均有一定的抗氧化活性，呈现量效关系。总酚酸含量、还 原能力与抗氧化能力三者成正相关，表明蜂蜜的抗氧化活性可能与其所含的总酚酸有关。总黄酮和总酚酸含量与还 原能力、抗氧化能力之间无明显相关性。 关键词：苕子蜜；酚酸；黄酮；还原力；抗氧化活性
BP211D 电子分析天平 Sartorius 公司；DK-98-1 型 电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司； N-722 可见分光光度计 上海精密仪器科学有限公司；EYELA 真空旋转蒸发仪 东京理化公司；KQ-250DB 型超声波 清洗器 昆山超声仪器有限公司；UPWS 超纯水器 杭 州永洁达净化科技有限公司。 1.3 方法
苕子蜜蜜源为光叶苕子和毛叶苕子，学名分别为广 布野豌豆(V.cracca L.)和长绒毛野豌豆(V.villosa L.)。苕
收稿日期：2009-02-01 基金项目：吉林省科技厅资助项目(20040201-1-2) 作者简介：王海敏(1981 —)，女，硕士，研究方向为天然产物化学与新药开发。E-mail：7932132@163.com * 通信作者：郑毅男(1945 —)，男，教授，博士，研究方向为天然产物化学与新药开发。E-mail：zhenyinan@tom.com
样品溶液的配制：10g 苕子蜜，水定容至 25mL 容 量瓶中，摇匀。分别吸取 0.00、0.50、1.00、2.00、 4.00、8.00mL 至 10mL 容量瓶中，水定容至刻度，摇匀。
最大吸收波长的选择：将 DPPH 自由基溶液与水混 合，用乙醇和水混合溶液做空白对照，进行全波长扫 描，在 529nm 波长处有最大吸收，故采用 529nm 波长 为样品溶液的测定波长。
1.3.4 DPPH 自由基清除实验 DPPH 自由基溶液的配制：取 0.01g DPPH 自由基用
无水乙醇定溶至 50mL 容量瓶中作为母液，取 10mL 母液
56 2010, Vol. 31, No. 01
食品科学
※ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ础研究
定溶于 50mL 容量瓶中，最终质量浓度为 0.04mg/mL，避 光，现用现配。
Key words：Vicia villosa Roth honey；phenolic acid；flavonoids；reducing power；DPPH radical scavenging activity
中图分类号：O623.54
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2010)01-0054-04
蜂蜜是公认的具有多种生物学活性的天然食品。近 年来对蜂蜜的研究主要集中在黄酮类成分、酚酸类成 分、脱落酸、氨基酸及抗氧化活性能力方面[5-8]。蜂蜜 中的黄酮类化合物主要来自植物花蜜、花粉和蜂胶，主 要是以配基和糖苷形式存在。酚酸是蜂蜜中主要酚类化 合物。由于蜂蜜蜜源植物的不同，蜂蜜中的黄酮类和 酚酸类的含量和种类也有很大差异[5-6,8-9]。
linked to the total phenolic acid content. In addition, total flavonoids content had no obvious correlation with total phenolic acid
content, reducing power or DPPH radical scavenging activity.
1.3.2 总黄酮含量的测定 苕子蜜总黄酮含量的测定采用比色法[10]。称取 100g
蜂蜜，水稀释过 XAD-2 大孔树脂柱，水洗除去水溶性 杂质，收集甲醇洗脱部分，减压浓缩至干，甲醇定容 至10mL。精密吸取2.5mL至25mL容量瓶中，加5% NaNO2 溶液 1mL，使混匀，放置 6min，加 10% Al(NO3)3 溶液 1mL，摇匀，放置 6min，加 4% NaOH 溶液 10mL，再 加水至刻度，摇匀，放置 15min。在 510nm 的波长处 测定吸光度。将对照品配制成质量浓度为 0.2mg/mL 的标 准溶液，准确吸取 0.00、0.500、1.00、2.00、3.00、 4.00、5.00mL，按照上述方法制定标准曲线。以芦丁 质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准的曲 线见图 2，回归方程：y=10.457x － 0.002 (R2=0.9994)。 样品中总黄酮的含量在标准曲线中查出相应的值，苕子 蜜总黄酮含量以芦丁的相对量表示。
苕子蜜总酚酸含量的测定采用 Foiln-Ciocalteu 法(用 原儿茶酸作标准物)[2]。准确移取 3mL 稀释后的苕子蜜溶 液(0.1g/mL)，加入 1mL Folin-Ciocalteu 显色剂，然后加 入 5mL 1mol/L 碳酸钠水溶液，用蒸馏水定容至 10mL，
混合均匀后，室温下避光放置 1h，在 760nm 波长处测 定吸光度。将对照品原儿茶酸配成 0.1mg/mL 的标准溶 液，准确量取上述标准液 0.00、0.20、0.40、0.60、 0.80、1.00mL，按照上述方法制定标准曲线。以原儿 茶酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准的曲 线见图 1，回归方程：y=147.87x+0.0188 (R2=0.9992)。样 品中总酚酸的含量在标准曲线中查出相应的值，蜂蜜总 酚酸含量以原儿茶酸的相对量表示。
黄酮类和酚酸类化合物是人类日常饮食中普遍存在 的两种化合物。黄酮类和酚酸类化合物所具有的保健功 能主要表现在清除体内自由基、舒张血管、抗癌、抗 病毒、抗菌消炎、抗过敏等方面。目前，由于其具有 抗氧化和清除自由基的活性受到了广泛的关注[1-3]。人类 多种疾病的发生与发展均与体内的过量的自由基有关， 长期摄入一定量的抗氧化剂可以有效地降低心脑血管疾 病和癌症发病率[4]。因此，国内外许多学者的研究集中 在从日常食物中寻找抗氧化剂。
0.5 y=10.457x － 0.002 0.4 R2=0.9994 0.3
0.2
0.1
0 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 质量浓度 /(mg/mL) 图 2 芦丁标准曲线 Fig.2 Standard curve of rutin
1.3.3 还原能力的测定[11] 在 10mL 试管中分别加入不同质量浓度(0.0125、
样品溶液的测定：按Ⅰ. 2mL 水 +2mL DPPH 自由基 溶液；Ⅱ.2mL 样品 +2mL DPPH 自由基溶液；Ⅲ. 2mL 样品 +2mL 无水乙醇溶液加入反应液，摇匀后于室温避 光静止 30min，转移至比色皿内测吸光度。每组做 3 个 平行计算个样品对 DPPH 自由基的清除率。通过 IC50 值 软件，计算出 I C 50 值。