黄酮类化合物的提取和分离共27页文档
第三节 黄酮类化合物的提取与分离
2019-5-18
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槐米中芦丁的提取
槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍 量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至 pH8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热 抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。 合并滤液，在60~70℃下，用浓盐酸调至pH为5， 搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性， 60℃ 干 燥 得 芦 丁 粗 品 ， 于 水 中 重 结 晶 ， 70~80℃干燥得芦丁纯品。
2019-5-18
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分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小 大顺序洗脱。
分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分 子大小顺序洗脱。
总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷 游离苷元（极性小大）
2019-5-18
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葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有：
碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH）， 含盐水溶液(0.5mol/L NaCl等)。
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有时溶剂萃取过程也可以用逆流分 配法连续进行。常用的溶剂系统有： 水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。
溶剂萃取过程在除去杂质的同时， 往往还可以收到分离苷和苷元或极 性苷元与非极性苷元的效果。
2019-5-18
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（二）碱提取酸沉淀法
黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水， 但却难溶于酸性水，易溶于碱性水， 故可用碱性水提取，再于碱水提取液 中加入酸，黄酮苷类即可沉淀析出。 此法简便易行，如芦丁、橙皮苷、黄 芩苷的提取都应用了这个方法。
2019-5-18
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在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意 所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性 下，尤其加热时会破坏黄酮母核。在加 酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成 （金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物 又重新溶解，降低产品收率。
黄酮类化合物的提取与分离方法综述.总结
黄酮类化合物的提取和分离方法的综述摘要黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物,具有比较强的生物活性和生理作用,按结构可分为黄酮类和黄酮醇类、二氢黄酮类和二氢黄酮醇类、查尔酮类、双黄酮类、异黄酮类以及其它黄酮类等。
目前,黄酮类化合物的提取方法主要有溶剂提取法、微波提取法、超声波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法、半仿生提取法等,各种提取方法都有它的优缺点。
本文对上述几种提取方法近年来的应用及研究进展做了简单综述,旨在为黄酮类化合物的研究、开发、应用提借鉴关键词：黄酮类化合物；性质；提取；分离；前景黄酮类化合物又称黄碱素,广泛存在于自然界的植物中,属植物次生代谢产物,是一类具有种生物活性的多酷类化合物,其在植物体内大部分与糖结合成苷类,小部分以苷元的形式存在[1]。
许多研究己表明黄酮类化合物安全、无毒,具有抗菌、消炎、清热解毒、镇静、利尿等作用外,它是大多数氧自由基的清除剂,对冠心病、心绞痛等疾病的治疗效果显著。
特别是由基和抗癌、防癌的作用,使黄酮类化合物的研究进入了一个新的阶段。
随着食品工业的发展与消费观念的改变,天然活性成分的保健食品成为现代人追逐的目标,其中黄酮类化合物以纯天然、高活性、见效快、作用广泛等特点日益受到人们的关注。
1.黄酮类化合物的概述黄酮类化合物(flavonoids)指的是两个苯环(A-与B-环)通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。
根据中央三碳链的氧化程度、B-环联接位置(2-或3-位)以及三碳链是否构成环状等特点,可将重要的天然黄酮类化合物分为黄酮类(flavone)、黄酮醇类(flavonol)、二氢黄酮类(dihy-droflavone)、二氢黄酮醇类(dihydroflavonol)、异黄酮类(isoflavone)等15种。
大部分学者认为黄酮的基本骨架是由三个丙二酰辅酶A和一个桂皮酰辅酶A生物合成而产生的,经同位素标记实验证明了A环来自于三个丙二酰辅酶A,而B环则来自于桂皮酰辅酶A。
黄酮类化合物的提取
黄酮类化合物的提取黄酮类化合物是一类具有重要药用价值的天然产物，其具有抗氧化、抗炎、降血压、降血脂等多种生物活性。
因此，黄酮类化合物的提取和分离一直是天然药物研究领域的热点之一。
本文将从黄酮类化合物的来源、提取方法以及提取过程中的优化等方面进行详细介绍。
一、黄酮类化合物的来源黄酮类化合物广泛存在于植物中，包括花、果实、叶子等部位。
其中，柑橘属植物中含有较为丰富的黄酮类化合物，如柚皮中含有丰富的柚皮素和橙皮素等。
此外，苦楝属植物也是黄酮类化合物的重要来源之一，如苦楝素和芦丁等。
二、黄酮类化合物的提取方法1.传统提取方法传统提取方法主要包括水浸提法、乙醇浸提法和超声波辅助浸提法等。
（1）水浸提法水浸提法是最为简单的提取方法之一，其操作简单、成本低廉。
但是，由于黄酮类化合物在水中的溶解度较低，因此水浸提法提取效率较低。
（2）乙醇浸提法乙醇浸提法是常用的黄酮类化合物提取方法之一。
乙醇具有良好的溶解性和挥发性，可有效地溶解黄酮类化合物。
但是，乙醇浸提法存在一定的毒性和燃爆风险。
（3）超声波辅助浸提法超声波辅助浸提法是一种新型的黄酮类化合物提取方法。
其利用超声波对植物细胞壁进行破碎，从而促进黄酮类化合物的释放和溶解。
该方法具有操作简单、高效快捷等优点。
2.现代提取方法现代提取方法主要包括超临界流体萃取法、微波辅助萃取法和固相萃取法等。
（1）超临界流体萃取法超临界流体萃取法是目前最为先进的黄酮类化合物提取方法之一。
其利用超临界流体对植物组织进行萃取，具有高效、环保等特点。
（2）微波辅助萃取法微波辅助萃取法是一种快速高效的黄酮类化合物提取方法。
其利用微波加热对植物组织进行破碎和溶解，具有操作简单、高效快捷等优点。
（3）固相萃取法固相萃取法是一种基于化学吸附原理的黄酮类化合物提取方法。
其利用具有亲和力的固相材料对黄酮类化合物进行选择性吸附，从而实现分离和提纯。
三、黄酮类化合物提取过程中的优化1.影响因素影响黄酮类化合物提取效率的因素主要包括原料质量、溶剂种类、浸提时间、浸提温度等。
黄酮类化合物的提取和分离
碱液(7 碱液(7或4’-OH黄酮) (7或 OH黄酮 黄酮)
碱液(一般酚OH黄酮) 碱液(一般酚OH黄酮) OH黄酮
乙醚液 脂杂） （脂杂）
碱液(3 碱液(3或5-OH黄酮) (3或 OH黄酮 黄酮)
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黄酮类化合物的提取和分离
金属盐络合法
原理： 原理：利用分子中某些特定官能团性质进行分离 具有邻二酚羟基的成分， 醋酸铅沉淀 具有邻二酚羟基的成分，用醋酸铅沉淀 不具有邻二酚羟基的成分， 碱式醋酸铅沉淀 不具有邻二酚羟基的成分，用碱式醋酸铅沉淀 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形 邻二酚羟基 成溶于水的硼酸络合物， 成溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其 它黄酮类化合物分离
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从柠檬果皮中分离降血压有效成分
柠柠柠槲2400g(相相增60个柠柠) 水用提
提取分离实例1 提取分离实例1
搅搅混搅搅，热水浓提，过滤 滤提 浓浓浓浓浓浓，增加加适EtOH，静放静静 过滤，滤提浓浓，冷冷冷冷 水用提混(183g) 提179.37g 目水:使主使使水使使混水 而使而而去,粘提去去粘混 沉沉去去 用500ml水混水，过滤
凝胶色谱法凝硅聚聚
n-BuOH用提混 (4.26g, 粗总总粗)
水聚
目的： 目的： 除去Pb Pb， 除去Pb，生成 PbCO3
凝硅过滤(TSKgel-HW-40)
Fr. A-H (pH5水硼水水洗水混)
Fr. I-P (pH7水水水洗水混)
Fr. O-R (pH9水的水水洗水混)
硅胶色谱法
硅硅聚聚
[L-5] rh a g lcO O OH OH O
282, 330
提取分离实例1 提取分离实例1
黄酮分离
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黄酮类化合物的提取和分离
金属盐络合法
原理： 原理：利用分子中某些特定官能团性质进行分离 具有邻二酚羟基的成分， 醋酸铅沉淀 具有邻二酚羟基的成分，用醋酸铅沉淀 不具有邻二酚羟基的成分，用碱式醋酸铅沉淀 不具有邻二酚羟基的成分， 碱式醋酸铅沉淀
具有邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成 邻二酚羟基 溶于水的硼酸络合物， 溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其它黄酮 类化合物分离。 类化合物分离。
黄酮类化合物的提取和分离
黄酮类化合物的检识和原理：黄酮类化合物的溶解性 原理：黄酮类化合物的溶解性和酸性 溶解性和 相似相溶与酸碱理论
提取
提取： 苷元：极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、 苷元：极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等
回流提取
苷及极性大的苷元： 苷及极性大的苷元：
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黄酮类化合物的提取和分离
葡聚糖凝胶柱色谱
规律： 规律： 苷元的羟基数越多，越难以洗脱。 苷元的羟基数越多，越难以洗脱。 吸附作用 苷的分子量越大, 苷的分子量越大,其上联结糖的数目 越多,容易洗脱。 越多,容易洗脱。 分子筛原理 苷比苷元先洗脱。 苷比苷元先洗脱。
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黄酮类化合物的提取和分离
3 苷类水解后的 光谱。 苷类水解后的UV光谱。 光谱
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黄酮类化合物的结构鉴定
UV
苯甲酰基 带II：220~280nm ：
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桂皮酰基 带I：300~400nm ：
不同类型黄酮的UV 不同类型黄酮的UV基本特征 UV基本特征
黄酮 黄酮醇
两者UV光谱图形相似，但带I位置不同。整个母核上氧 两者UV光谱图形相似，但带I位置不同。 UV光谱图形相似 取代程度越高，则带I将向长波方向位移（红移）。 取代程度越高，则带I将向长波方向位移（红移）。
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的植物次生代谢产物，被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。
本文将围绕黄酮类化合物的提取与分离工艺展开探讨。
一、黄酮类化合物的概述黄酮类化合物是一类含有两个苯环的多羟基化合物，具有较强的抗氧化作用和抗炎作用。
它们被广泛存在于许多植物中，如花朵、果实、根茎等部位。
由于其生物活性的独特性，研究人员对黄酮类化合物的提取与分离工艺进行了深入研究。
二、提取工艺的研究1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前较为常用的提取黄酮类化合物的方法之一。
该方法利用溶剂对植物样品进行浸提，使黄酮类化合物溶于溶剂中，然后通过浓缩和干燥等步骤得到目标产物。
常用的溶剂有乙酸乙酯、甲醇等。
此方法对设备要求较低，但可能导致有机溶剂残留和产物的破坏。
2. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种改进的提取方法，通过超声波的作用，可以增加植物样品与提取溶剂的接触面积和渗透速度，加速黄酮类化合物的溶解和迁移。
该方法提取效果较好，但对设备要求较高，操作难度也较大。
三、分离工艺的研究1. 柱层析法柱层析法是一种常用的分离黄酮类化合物的方法。
该方法利用固定相和流动相之间的相互作用，根据黄酮类化合物的不同物理化学性质进行分离。
常用的固定相有硅胶柱、C18柱等。
该方法分离效果较好，但操作较为繁琐。
2. 薄层层析法薄层层析法是一种简便、快速的分离方法。
该方法将样品溶液涂布在薄层层析板上，通过固定相对黄酮类化合物进行分离，然后用显色剂喷洒在薄层层析板上，可通过色谱带的出现判断黄酮类化合物的位置。
该方法缺点是分离效果较差，但操作简便。
四、工艺优化与产物应用在黄酮类化合物的提取与分离工艺研究中，工艺的优化是十分重要的。
通过对溶剂种类、提取温度、提取时间等参数的不断调整，可以提高黄酮类化合物的提取率和纯度。
此外，对于产物的应用也是研究的重点，黄酮类化合物广泛应用于医药领域的抗炎药物、抗氧化剂和化妆品中的护肤成分等方面。
34532黄酮类化合物的分离
O
OCH3
＞
OH O
OH O
橙皮查耳酮
橙皮素
OH OCH3
黄酮类化合物的提取分离
4）不同类型的黄酮类化合物，先后出柱顺序： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇
5）各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序： 水＜甲醇或乙醇＜丙酮＜稀氢氧化钠水溶液＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺
聚酰胺色谱法总结
吸附规律：与酚羟基的数目、位置及溶剂介质有关。 与溶剂介质的关系： 吸附力：水﹥甲醇乙醇（浓度由低到高）﹥碱性溶剂 洗脱规律： 与吸附规律正好相反，即吸附力越强，越难洗脱
例：
HO
O
OH
HO
OH O
OH
OH OH O
OH OH O
山柰酚
桑色素
黄酮类化合物的提取分离
2）当分子中羟基数目相同时，吸附力与形成氢键的位置有关。 例：
HO
O
HO
O
OH O
A
OHOΒιβλιοθήκη OHBO H
O CH3
黄酮类化合物的提取分离
3）分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附越强。
例：
OH
HO
OH
HO
1 pH梯度萃取法
总游离黄酮的乙醚液
依次以5%NaHCO3 、5%NaCO3、 0.2%NaOH、4%NaOH
5%NaHCO3 酸化
7，4`-二OH
5%NaCO3 酸化
7-或4`-OH
0.2%NaOH 酸化
一般酚OH
4%NaOH 酸化
5-OH
2 聚酰胺柱色谱（分离黄酮最理想的吸附剂）
分离原理：氢键吸附
黄酮类化合物的提取分离
二、 黄酮类化合物的分离
黄酮类化合物的提取与分离
（三）炭粉吸附法
主要适于苷类的精制工作。通常，在植 物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭， 搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄 酮反应时为止。过滤，收集吸苷炭末， 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/ 醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定 性检查（或用PPC鉴定）。
二、分离 较常用的分离方法有： （一）柱层析法
分离黄酮类化合物常用的吸附剂或
载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。 此外，也有用氧化铝、氧化镁及硅 藻土等。
1.硅胶柱层析： 此法应用范围最广，主要适于分离 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及 高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及 黄酮醇类。少数情况下，在加水去 活化后也可用于分离极性较大的化 合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。
2. 聚酰胺柱层析：
对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺
是较为理想的吸附剂。其吸附强度 主要取决于黄酮类化合物分子中羟 基的数目与位置及溶剂与黄酮类化 合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合 能力的大小。
聚酰胺柱层析可用于分离各种类型
的黄酮类化合物，包括苷及苷元、 查耳酮与二氢黄酮等。
黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时
Hale Waihona Puke 酸 性 :7 ， 4- 二 OH 溶 于 5%NaHCO3 液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）
（三）根据分子中某些特定官能团进 行分离
在黄酮类成分的混合物中，具有邻
二酚羟基成分与无此结构的成分， 可用铅盐法分离。有邻二酚羟基的 成分可被醋酸铅沉淀，不具有邻二 酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀， 达到分离的目的。
与黄酮类成分混存的其它杂质，如
分子中有羧基（如树胶、粘液、果 胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等） 或邻二酚羟基（如鞣质等）时，也 可被醋酸铅沉淀达到去杂目的。
黄酮类化合物的提取分离纯化和含量测定方法的研究进展
黄酮类化合物的提取分离纯化和含量测定方法的研究进展一、本文概述黄酮类化合物，作为一类具有广泛生物活性的天然产物，近年来在医药、食品、化妆品等领域引起了广泛关注。
这些化合物因其独特的抗氧化、抗炎、抗癌等生物活性，成为了科学研究的热点。
黄酮类化合物的提取、分离纯化以及含量测定方法的研究，对于深入了解其生物活性、开发新的应用领域以及实现黄酮类化合物的有效利用具有重要意义。
本文旨在全面综述黄酮类化合物提取、分离纯化以及含量测定方法的最新研究进展。
通过对不同提取方法（如溶剂提取、微波辅助提取、超声波提取等）的优缺点进行比较分析，探讨各种方法在提取黄酮类化合物中的应用前景。
本文还将关注分离纯化技术的发展趋势，如色谱技术、薄层色谱、高效液相色谱、超临界流体萃取等，分析这些技术在黄酮类化合物分离纯化中的应用及优缺点。
本文还将对黄酮类化合物含量测定方法的研究进展进行综述，包括光谱法、色谱法、免疫法等，为黄酮类化合物的质量控制和定量分析提供理论支持。
通过对黄酮类化合物提取、分离纯化以及含量测定方法的研究进展进行全面梳理和分析，本文旨在为相关领域的研究人员提供有价值的参考信息，推动黄酮类化合物的研究与应用取得更大进展。
二、黄酮类化合物的提取方法研究进展黄酮类化合物作为一类重要的天然产物，其提取方法的研究一直是黄酮类化合物研究领域的热点之一。
近年来，随着科学技术的进步和提取技术的不断创新，黄酮类化合物的提取方法取得了显著的进展。
传统的黄酮类化合物提取方法主要包括溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等。
这些方法虽然在一定程度上能够实现黄酮类化合物的提取，但存在提取效率低、时间长、溶剂消耗大等问题。
近年来，随着绿色化学和可持续发展的理念日益深入人心，新型的黄酮类化合物提取方法不断涌现。
其中，超临界流体萃取技术以其高效、环保、低能耗等特点，在黄酮类化合物的提取中表现出巨大的潜力。
超临界流体萃取技术利用超临界状态下的流体（如二氧化碳）作为萃取剂，通过调节压力、温度和流体组成等参数，实现对黄酮类化合物的选择性萃取。
黄酮类化合物的提取分离方法
一.黄酮类化合物的提取分离方法按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取(2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸(3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.2.按提取条件不同分类(1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素(2)索式提取法----------柑橘属类黄酮(3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物(4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质(5)超滤法----------黄岑甙(6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率(7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油PH梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮高效液相色谱分析法：五味子、葛根高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位柱色谱法（1）硅胶柱色谱：姜黄素（2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊（3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿（4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计）方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法（1）槐米粗粉20g加约120ml的%硼砂水溶液，提碱搅拌下加入石灰乳至pH8-9，取溶1v1.0 可编辑可修改2 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布趁热滤过，反复2次提取液 药渣浓盐酸调pH2~3搅拌，静置放冷，滤过。
滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶芸香苷结晶碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图（2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。
合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。
黄酮类化合物的提取分离
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰 化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减 活性。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿
黄酮类化合物的提取_分离_纯化研究进展
３讨 论 ，
文献青海蕨麻中类黄酮的提取及其抗氧化性研究报道采用半 黄 酮类 化合物近年被 做为保健产品被越来越 多的国家开发 ， 大 微量超声波甲醇提取蕨麻类黄酮比常规索氏提取法的提取率高出 量 的新技术应用于提取分离黄酮类化合 物。
５ ４％ 嗍 。
１ ． １ ． １乙醇提取工艺 可重复利用 ， 已有树脂法被用于工业 生产 。
文献蕨菜黄酮类化合物的提取与分析报道 “ 用７ ０ ％的乙醇对 ２ ． ３ 溶剂萃取法 蕨菜浸提 ， 发现蕨菜的黄酮非常高， 可得到含量达百分之三十七点 利用化合 物在两种互 零三的蕨菜黄酮” 嘲 。文献葛根黄酮的提取与应用报道“ 对葛根黄酮 系数 的不 同 ， 使化合物从一种溶剂 内转移到另外一种溶剂 中。经过 进行乙醇提取研究， 得到百分之七点四三的总黄酮” 『 ３ 】 。文献报道在 反复多次萃取 ， 将绝大部分的化合物提取 出来 。可 以通过黄酮类化 提取银杏叶总黄酮过程中使用百分之七十乙醇提取明显高于水煎 合物极性 不同采用不 同极性 的有机溶剂进行萃取 ， 达到 分离黄酮的 法的收率。 目的 。
１ ． ２ 超 声提取法
法。 超声波产生的冲击流使植物细胞壁及整个生物体的破裂在瞬间 ２ ０ ０ ４ ， （ ６ ） ： １ － ４ ． 完成， 并释放出内含物质 ， 具有低温操作、 能耗低、 效率高、 传质速度 ［ ３ 降 洪雄 ，彭志远 ， 邹海英．葛根黄酮的提取与应用［ Ｊ 】 ． 吉首大学学 快、 溶解能力强、 不破坏有效成分的特点。 多篇文献报道超声提取葛 报（ 自然科学版） ， ２ ０ ０ ６， ２ ７ （ ３ ）： １ １ ３— １ １ ６． 根、 甘薯叶、 山楂叶、 元宝枫叶、 桑叶中的黄酮都得到很好的收率 。 ［ ４ ］ 韩志萍． 青海蕨麻 中类黄酮的提取及其抗氧化， 巨研究［ Ｊ 】 ． 食 品研 究
黄酮的提取与分离
（2）醇性溶剂展开时，同一类型苷元，
羟基越多，Rf越小，即Rf值依次为：
苷元 （Rf>0.7）> 单糖苷 > 双糖苷。
（3）醇性溶剂展开时，羟基被甲氧基取代， 因极性减小，Rf将增大。 （4）醇性溶剂展开时，如黄酮类化合物羟 基被苷化，因极性增大，Rf将下降。
5、大部分极性大的黄酮出现在滤纸的右上方， 极性小的黄酮则出现在滤纸的左下方。 6、大多数黄酮类化合物在纸色谱上用紫外光 灯检查时，可以看到有色斑点，以氨蒸汽处理 后常产生明显的颜色变化
⑤ 水层中含有较纯的黄酮苷类。
（四）聚酰胺吸附法
1、 聚酰胺对于黄酮类化合物是比较理想的 吸附剂
2、洗脱剂：不同浓度的乙醇、丙酮以及碱水
3、分离效果：粗分
例如：银杏叶黄酮的提取
（五）超临界流体萃取法
1、以CO2为单一流体萃取极性较低的游离黄酮
或黄酮的碳苷类；
2、在CO2中加入水、乙醇等作为夹带剂，萃取
③ 硅胶中混存少量金属离子，应预先用浓 盐酸处理除去，以免干扰分离效果。 ④ 分离黄酮苷元时，用氯仿-甲醇混合溶
剂做移动相；
⑤ 分离黄酮苷时，用氯仿-甲醇-水或乙酸
乙酯-丙酮-水做移动相。
2. 聚酰胺柱色谱
① 可用于分离各种类型的黄酮类化合物， 包括苷与苷元、查耳酮与二氢黄酮等。 ② 分离的机理: 主要为氢键吸附 ，其吸附
主峰 245-270 主峰 270-295 220-270
O CH O
肩峰 300-400
O
二氢黄酮（醇） 查耳酮类
OH O
O
橙酮类
主峰 查耳酮 2’-OH 使带 340-390 或 I 向红移影响大 340-390(Ia) 300-320(Ib) 主峰 370-430 常显 3-4 个峰
黄酮类化合物的提取分离方法
抽滤，少量水洗涤沉淀
滤液沉淀（粗品芦丁）
（4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙
二.槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些？（设计）
方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法
（1）槐米粗粉20g
加约120ml的0.4%硼砂水溶液，
搅拌下加入石灰乳至pH8-9，
并保持该pH值煮沸20分钟，四层纱布趁热滤过，反复2次
提取液药渣
浓盐酸调pH2~3
搅拌，静置放冷，滤过。
一.黄酮类化合物的提取分离方法
1.1 按所用溶剂不同分类
(1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取
(2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸
(3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.
2.按提取条件不同分类
(1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素
滤液沉淀
热水或乙醇重结晶
芸香苷结晶
碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图
（2）取30g槐花米，置于250mL烧杯中，加入0.4%硼砂沸水200ml，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。
(2)索式提取法----------柑橘属类黄酮
(3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物
(4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质
(5)超滤法----------黄岑甙
(6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率
(7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油
天然产物化学全套---黄酮类化合物的提取与分离
第五章 黄酮类化合物 （Flavonoids）
天然药化教研室 主讲教师：宋少江
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本章内容
第一节 概述 第二节 理化性质及显色反应
第三节 提取与分离 第四节 检识与结构鉴定 第五节 结构研究实例
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第三节 提取与分离
一、提取与粗分
苷元：用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取。 苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、 甲醇、醇-水加热提取。 提取黄酮苷类成分时，应避免发生水解，可按一般 苷的提取方法先破坏酶的活性。
A> B > C > D D>B>C>A
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第三节 提取与分离
（三）根据分子中某些特定官能团进行分离
如：醋酸铅沉淀法（目前已不使用） ➢ 具有邻二酚羟基，可被醋酸铅沉淀 ➢ 不具有邻二酚羟基，可被碱式醋酸铅沉淀
二、分离
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第三节 提取与分离
二、分离
黄酮类化合物在Sephadex LH-20(甲醇)上的Ve/V0
黄酮类化合物 芹菜素
木樨草素 槲皮素 杨梅素
山奈酚-3-半乳鼠李糖-7-鼠李糖苷 槲皮素-3-芸香糖苷 槲皮素-3-鼠李糖苷
取代图式 5,7,4'-三羟基 5,7,3',4'-四羟基 3,5,7,3',4'-五羟基 3,5,7,3',4',5'-六羟基
第三节 提取与分离
二、分离
（一）柱色谱法
1、硅胶柱色谱 主要用于分离弱极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。 吸附规律：极性大的物质易于被吸附 一般洗脱顺序：苷元＞单糖苷＞双糖苷＞多糖苷
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第三节 提取与分离
二、分离
6.6-黄酮类化合物 -分离技术.
用途：分离各种类型的黄酮类成分，包括苷及苷元、
查耳酮、二氢黄酮等 。
双重色谱
相似相溶
水溶性相差较大
氢键吸附
水溶性相差不大
聚酰胺分离黄酮苷与黄酮苷元的规律性
①苷元相同时，洗脱先后顺序一般为：三糖苷 ＞双糖苷＞单糖苷＞苷元。 ②母核上羟基越多，洗脱速度相应减慢。 ③母核上羟基数目相同时，其位置的不同也影 响洗脱顺序。一般洗脱先后顺序为：邻位＞对 位或间位。 ④不同类型黄酮类成分，先后洗脱顺序一般为： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇。 ⑤分子中芳香核、共轭双键多者较难被洗脱， 如查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。
5%NaHCO3
乙醚液 乙醚液 乙醚液 乙醚液 （脂杂）
5%Na2CO3
碱液(7,4’-二OH黄酮)
0.2%NaOH
碱液(7或4’-OH黄酮)
4%NaOH
碱液(一般酚OH黄酮)
碱液(或5-OH黄酮)
（3）柱色谱法
柱填充剂：聚酰胺、硅胶、氧化铝、氧化 镁、硅藻土、纤维素等。
① 聚酰胺柱色谱
原理：氢键吸附
黄酮类化合物分离技术
林 玲
黄酮类成分常用的提取、分离技术 醇提取法 热水提取法 碱溶酸沉法 溶剂萃取法 pH梯度萃取法 柱色谱法
2. 黄酮类化合物的分离
极性 差异
酚羟基
酸性 强弱
溶剂法 硅胶柱色谱
聚酰胺色谱
pH梯度
黄酮类化合物的分 离主要根据其极性 差异、酸性强弱、 相对分子质量大小 和有无特殊结构等， 采用适宜的分离方 法。
硅胶柱色谱
分离原理：极性吸附
适用范围：分离黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高
度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类
吸附规律：极性大吸附强
第十一章黄酮类化合物讲课文档
黄酮类化合物的理化性质
硼酸显色反应：
样品 硼酸
黄色，无荧光
现在三十九页，总共四十四页。
黄酮类化合物的理化性质
碱性试剂显色反应
➢ 碱：氨蒸汽 可逆； 碳酸钠水溶液 不可逆
➢ 二氢黄酮类 开环 橙色~黄色
➢ 黄酮醇类 黄色~棕色（通入空气）其他黄酮无次反应 ➢ 含有邻二羟基或3,4’-二羟基取代的黄酮类
3 黄酮类化合物的理化性质
4 黄酮类化合物的提取和分离
5 黄酮类化合物的检识和结构鉴定
现在八页，总共四十四页。
黄酮类化合物的结构和分类
结构特征：
母 核：
9(8a)
10(4a)
现在九页，总共四十四页。
生物合成基本途径
现在十页，总共四十四页。
黄酮类化合物的结构和分类
分类标准:
a.中央三碳链的氧化程度
黄酮类化合物的理化性质
还原反应：
❖ HCl-Zn反应
二氢黄酮醇、黄酮醇-3-O-糖苷 （+）红~紫色 ❖ 四氢硼钠（钾）反应
二氢黄酮类化合物的专属性还原剂 （+）紫-紫红色
现在三十六页，总共四十四页。
黄酮类化合物的理化性质
络合反应：
➢ 铝盐：1% AlCl3或Al（NO2）3 黄色 定性、定量
➢ 铅盐：1%醋酸铅或碱式醋酸铅 黄~红色 沉淀
ห้องสมุดไป่ตู้现在二十一页，总共四十四页。
黄酮类化合物的结构和分类
黄酮苷 黄酮
氧 苷
异黄酮
碳 苷
现在二十二页，总共四十四页。
黄酮类化合物的生理活性
（一）对心血管系统的作用 1、降低血管脆性及异常的通透性 芦丁、橙皮苷 2、扩冠作用 如：槲皮素、葛根素 3、降低血脂及胆固醇的作用 木犀草素