第二章微生物的纯培养和显微技术

以抑制非需要菌的生长，促进需要菌的生 长，这种培养基叫选择培养基。 • 高氏一号培养基加10%酚数滴，抑制其它 菌的生 长，分离出放线菌 • 马丁氏培养基加链霉素以抑制其它菌生长， 分离出真菌。
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蛋白酶产生菌的分离
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具有氨苄青霉素抗性 的大肠杆菌
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五、选择培养分离
5·2 富集培养：不同微生物间的有不同特点，根据这些特点 制定特定的环境条件，使需要的微生物生长旺盛，数量增 加，从而更容易分离到该微生物。
菌落的大小、形状、边缘状况、质地、光泽、颜色 及透明度等是微生物分类、鉴定的重要依据。 菌苔：固体培养基表面众多菌落连成一片，呈片状， 这就是菌苔。 平板：即培养平板，指盛有固体培养基的平皿。
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二、用固体培养基分离纯培养
2·1纯种微生物的分离：在自然界中，各种各样的微生物总 是混杂在一起的，要研究和利用某一微生物，就必须把它 同其他微生物分开，才能得到只含有同一种微生物的纯种 微生物。这种方法叫纯种微生物的分离
菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其
生长，因此在微生物学研究中更常用的纯
种分离方法是涂布平板法。
视频
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思考：两者的结果有什么不同？
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平板划线分离法
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平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
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划线分离结果
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4、厌氧微生物的分离
稀释摇管法
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三、用液体培养基分离纯培养
群体。
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五、选择培养分离 选择培养分离：根据微生物的营养、生理、 生长条件等特点，通过选择培养进行微生物 的分离与纯化技术。
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五、选择培养分离
微生物群落中数量占少数的微生物的分离纯化：
抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离的微生物生长更快；
使待分离的微生物在群落中的数量上升， 方便用稀释法对其进行纯化。
（3）无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止 其被其它微生物污染的技术称为无菌技术。
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一、无菌技术
1·1微生物培养的常用器具及灭菌 • 常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿等
注：所有器皿使用前都要灭菌！ • 培养基：培养微生物营来自百度文库物质。
注：配制好后要及时灭菌。 • 常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌、
干热灭菌
2·2纯种微生物的分离方法 ·稀释到平板法 ·涂布平板法 ·平板划线分离法 ·稀释摇管法
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1. 稀释倒平板法（pour plate method） 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如
1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然后分别 取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼 脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待 琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一 定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或 琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可 能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个 菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。
待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制
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五、选择培养分离
1. 利用选择平板进行直接分离
牛奶平板：分离蛋白酶产生菌； 颜色反应：分离特定的菌株； 利用特定细菌的滑动特点进行
分离纯化；
待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物
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5·1用选择培养基进行直接分离 选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，
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接种方法：烧环—冷却—开管—沾菌和塞 管—开另管—涂菌—塞管—火焰烧环
要点：在火焰上方或附近 13
斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
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二、用固体培养基分离纯培养
概述
菌落：由单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部 生长、繁殖到一定程度后，形成肉眼可见的、有一定 形态结构的子细胞生长群体。
（没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一 切生物 生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选 择性的。）
使待分离的微生物生长“突出”；
直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养。30
五、选择培养分离
1. 利用选择平板进行直接分离
高温下培养：分离嗜热细菌； 培养基中不含N：分离固氮菌； 培养基加抗生素：分离抗性菌；
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试管及斜面培养物
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培养皿
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三角烧瓶
烧杯 玻璃吸管
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高压蒸汽灭菌（P153）
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干热灭菌
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一、无菌技术
1·2接种操作 • 接种：在无菌条件下，用接种环或接种
针等工具把微生物从一个器皿转接到另 一个器皿，叫做接种。是最常用的基本 操作。
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无菌操作环境
无菌箱和超净台 11
常用工具
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
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2. 涂布平板法
其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌 平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一 定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板 表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散 至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落
由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中
再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而
且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧
• 加富培养基：一般指在培养基内加入额外的营养物质，使 需要的微生物营养更充分，生长的更快，这种培养基叫加 富培养基。
稀释法：适用于原生动物和藻类的分 离和培养。 特 点：高度稀释、多做平行对照。 思考：有什么缺陷性？ 有些目的微生物尤其是含量较少的微 生物往往被稀释掉！ 此时可采用单细胞分离法。
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四、单细胞分离
• 显微分离法——单细胞 分离法
• 用毛细管提取单个原生 动物个体
• 用显微操作仪分离单个细菌 单细胞分离器 • 适用于分离混杂微生物中弱势
第二章 微生物的纯培养和显微技术
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微生物的纯培养和显微技术
• 重点：微生物的分离和纯培养技术，常 用的菌种保藏方法。细菌、放线菌、霉 菌、酵母菌的形态特征。
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第一节微生物的分离和纯培养
一、无菌技术
概述
（1）培养物：微生物学中，在人为规定的条件下培养、 繁殖得到的微生物群体称为培养物。
（2）纯培养物和纯培养的概念：微生物学中，将由一 个细胞（或一种微生物）繁殖所得到的后代称为纯培 养物。对微生物这种纯种的培养，称为微生物的纯培 养。