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猪胸膜肺炎放线杆菌Ⅱ型毒素—抗毒素系统的鉴定与功能研究

华中农业大学硕士学位论文猪胸膜肺炎放线杆菌II型毒素-抗毒素系统的鉴定与功能研究Research on identification and function of type Ⅱtoxin-antitoxin system in Actinobacillus pleuropneumoniae 研究生 : 赵席功学号 : 2015302110163指导教师 : 贝为成教授指导小组：周锐教授申邦教授栗绍文副教授王喜亮副教授郑金水副教授专业：预防兽医学研究方向：动物传染病获得学位名称：农学硕士获得学位时间：2018年6月华中农业大学动物科技与动物医学院二○一八年六月猪胸膜肺炎放线杆菌II型毒素-抗毒素系统的鉴定与功能研究目录摘要 (i)Abstract (ii)缩略词表（Abbreviation） (iv)第1章文献综述 (1)1.1 胸膜肺炎放线杆菌 (1)1.1.1 病原学 (1)1.1.2 流行病学 (2)1.1.3 致病机理 (3)1.1.4 诊断及防治 (5)1.2 毒素-抗毒素系统（Toxin-antitoxin system, TAS） (6)1.2.1 毒素-抗毒素系统的研究进展 (6)1.2.2 胸膜肺炎放线杆菌中的II型TA系统 (7)第2章研究目的与意义 (9)第3章材料和方法 (10)3.1 实验材料 (10)3.1.1 菌株、质粒和培养条件 (10)3.1.2 实验所用酶、试剂和仪器 (15)3.1.3 主要培养基及抗生素配制 (15)3.1.4 主要溶液的配制 (16)3.1.5 引物 (17)3.1.6 实验动物 (19)3.2 实验方法 (20)3.2.1 生物信息学预测分析 (20)3.2.2 TA系统的共转录分析 (20)3.2.3 验证毒素的作用 (21)3.2.4 毒素的杀菌作用 (24)3.2.5 验证抗毒素的作用 (25)3.2.6 毒素抗毒素的相互作用 (25)3.2.7 大肠杆菌WM3064和β2155感受态细胞的制备 (26)3.2.8 抗毒素对TA操纵子的自动调节 (27)3.2.9 TA系统在APP各血清型中的分布 (29)3.2.10 突变株的构建与鉴定 (29)3.2.11 胸膜肺炎放线杆菌电转化感受态制备及电转化 (30)3.2.12 互补菌株的构建与鉴定 (31)3.2.13 突变株与互补菌株生物学特性 (31)第4章结果与分析 (33)4.1 猪胸膜肺炎放线杆菌TA系统的预测 (33)4.2 TA系统共转录分析 (33)4.3毒素在大肠杆菌生长中的毒性作用 (34)4.4抗毒素作用的评估 (36)4.5毒素抗毒素的相互作用 (37)4.6抗毒素对TA操纵子的自动调节作用 (38)华中农业大学2018届硕士研究生学位（毕业）论文4.7 TA系统在APP各血清型中的分布 (39)4.8突变株的构建与鉴定 (41)4.9突变株的遗传稳定性 (41)4.10互补菌株的构建与鉴定 (42)4.11互补菌株的遗传稳定性 (43)4.12突变株与互补菌株的生长特性 (43)4.13突变株对小鼠的存活实验 (44)第5章讨论 (45)第6章结论 (47)参考文献 (48)附录 (57)致谢 (58)猪胸膜肺炎放线杆菌II型毒素-抗毒素系统的鉴定与功能研究摘要胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）是一种能够引起临床上以急性出血和坏死性、慢性纤维素性胸膜肺炎为主要特征的高度接触传染性疾病猪传染性胸膜肺炎（Porcine Contagious Pleuropneumoniae，PCP）的病原菌，一旦发病，将给国内外养猪业带来很大的经济损失。

猪传染性胸膜肺炎的发病特点及综合防控

摘要：近年来，随着我国饲料禁抗令的实行，各类细菌性疾病在养殖业中的检出率呈上升趋势，对养殖业的危害日渐突出。

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的以猪只发生纤维素性出血性和坏死性胸膜肺炎为特征的呼吸道疾病，具有高度传染性和致死性。

该病在我国猪群中的感染率达30%以上，一旦感染，损失惨重。

为了能使广大养猪户更全面的了解该病的发病特点，掌握该病科学的预防和治疗措施，本文结合猪传染性胸膜肺炎近几年的研究进展，对该病的流行趋势及综合防治措施进行了详细总结，以期能为广大养猪业同行提供参考和借鉴。

关键词：猪；传染性胸膜肺炎；发病特点；综合防治猪传染性胸膜肺炎的发病特点及综合防控王华丽1，王俊杰2，安然3（1.荣成市港湾畜牧兽医站山东威海264308；2.荣成市人和畜牧兽医站山东威海264308；3.荣成市桃园畜牧兽医站山东威海264309）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.08.009收稿日期：2022-11-03作者简介：王华丽（1982.12—），女，山东荣成人，本科，兽医师，从事畜牧兽医工作。

猪传染性胸膜肺炎最早于1987年在我国首次报道，自此之后，在我国各个省市多次出现流行。

尤其是2000年以后，猪传染性胸膜肺炎在我国多地呈暴发性流行，以江浙、上海、湖南、湖北等地区最为严重[1]。

该病发病率高，传播迅速，且极易与猪伪狂犬病、猪圆环病毒病、副猪嗜血杆菌病、猪肺疫等混合感染，给疾病诊断带来了巨大挑战。

此外，抗生素的长期大量使用，不仅造成了耐药菌株的不断出现，还严重影响了公共卫生安全和生态环境的良性循环。

寻找猪传染性胸膜肺炎有效的防治途径，彻底消灭该病对养猪业的危害，成为广大科研工作者和一线兽医人员不断奋斗的目标。

本文结合猪传染性胸膜肺炎近几年的研究进展，对该病的流行趋势及综合防治进行了详细总结，以期能为广大养猪业同行提供参考和借鉴。

1猪传染性胸膜肺炎流行特点猪胸膜肺炎放线杆菌（actinobacillus pleuropneumoniae ，APP ）是一种嗜肺性革兰氏阴性短杆菌，共有16个血清型，各个菌株之间甚至同一血清型的不同菌株之间致病力差异较大，交叉保护能力复杂。

猪胸膜肺炎放线杆菌与副猪嗜血杆菌分离鉴定和药敏试验

中图分类号：８８２２６ｓ５．８．１
５０４；．１６２２福建农林大学动物科学学院，福建福州
文章编号：ｏ — ９７２０）１０４ — ２１２１５（０８０ — ０９００
３００）５０２
文献标志码：Ｂ
猪胸膜肺炎放线杆菌ｃｎｂｃｕｌｒ — 监察所。ｔｏａｉｓｐｕｏｉＵｅｐ
一
１．细茵的分离２打开胸腔，用无菌接种环挑取肺气管中的分泌
物和胸腔内纤维素性渗出物接种于巧克力培养基。置５０培养箱中３ ℃培养２。观察菌落状态，％Ｃ７４ｈ然后挑取可疑菌落进行纯培养。１细茵形态及生化特性检查．３１．形态学检查挑单菌落均匀涂布于有生理盐．１３水的载玻片上，革兰氏染色，镜检。１．培养特性将细菌接种于普通鲜血平板、．２３含Ｖ因子的鲜血平板、乳糖营养肉汤、Ｖ因子的营含养肉汤、ＳＴＡ平板、ｖ因子的ＴＡ平板、含Ｓ麦康凯培养基以及巧克力培养基中，察细菌的生长情况。观１．卫星现象试验将细菌接种于不含Ｖ因子．３３的鲜血琼脂平板上，用金黄色葡萄球菌垂直划线，置３Ｏ培养箱中２，７ｏＣＣ４观察细菌的生长状况。ｈ１．生化试验先于生化管中加入ｖ因子．．４３使其浓度达１０／Ｌ然后接种分离的细菌，Ｃ０ｇ，ｍ置Ｏ培养箱中，４２ｈ后观察生化反应情况。１．ＣＭＰ试验在鲜血平板上先划线接种金黄．５Ａ３色葡萄球菌，再垂直于金黄色葡萄球菌划线方向，间距３５ｍ处分别接种分离菌，置含５Ｏ培养箱～ｍ％Ｃ，中，７３ ℃培养２ｈ观察溶血现象。４，ｌ．ＰＲ鉴定根据Ｇｎａｋ上发表的序列，＿６Ｃ３ｅＢｎ设１材料与方法计了扩增副猪嗜血杆菌（ｌ２Ｐ、）Ｐ和胸膜肺炎放线杆菌ｌ试验材料的准备＿１胰大豆琼脂培养基（Ｓ）于北京普博欣公司；ＴＡ购Ｐ的引物，４）由广州赛百盛基因技术有限公司合巧克力平板培养基、鲜血平板培养基、普通琼脂平成弓物。Ｐ：ＧＴＴＧＡＡＴＧＣＣＣＡ一ｌ，一ＣＣｒＧＡＣｒＧＡＴＴＡ５板培养基由实验室自制；Ｖ因子（烟酰胺腺嘌呤二核３；２ＴＡＣＴＧＴＴＣＴＧＣ３，增长度Ｐ：一ＴＧＣＴＣＣｒＴＡＣ一扩５０ｐ；３５Ｔ＇ＡＴＩ苷酸）ＰＲ相关试剂购于大连宝生物工程有限公１９０ｂＰ：一ＡＴＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＣＡＴＩＴＧＧＣＡ、Ｃ司；微量生化鉴定管由杭州天和微生物试剂有限公Ｃ一３；：ＣＣＣＡＡＧＣＴｒＩＰ～５ＴＣＧＴＧＴＹＡＡＡＧＣＡＧＡＴＡＴ一扩增长度５２ｂ。２Ｄ检测副猪嗜血杆菌反应体系司提供；金黄色葡萄球菌标准菌株，自中国兽药Ｃ３，购为：０ＰＲＢｆｒ．，ＮＰ２ｍｌ），１１ｘＣｕｅ５２ＬｄＴｓ（．ｍｏＬ２Ｐ５／Ｌ收稿日期：０７ｌ～６收稿，０７１ —０修回２０一Ｏ１２０—０２（ｍｌ）Ｐ（ｍ１）０．，ａ（Ｉ／Ｌ２ｐｏＬ和２０ｐｏＬ各．ｐｒｑ５Ｕ￣）０／２］５ＬＴ作者简介：欣（９０）男，东临朐人，士，要研究方向张１８一，山硕主０２，．Ｌ模板１，Ｌ灭菌双蒸水１．。混合均匀后８Ｌ３为家畜传染病学．置核酸扩增仪中执行以下程序：９４℃ ４ｍｎ９ｉ，４℃ 通讯作者：罗满林，教授，主要从事动物传染病学研究．Ｅ— ｉｌｏ＠ｓ１ｄ．ｎｍａｌｕｍｌｃＩ．ｕｃ：ａｅ１ｎ５。ｍｉ０℃ １ｉ，ｎ２℃ ３ｍｎ运行３ｍ７ｉ，０个循环；最后

猪放线杆菌性胸膜肺炎的诊治

行．时甚至呈暴发性流行另外由有于本病有致人类肺炎的特性．大地极威胁着人民群众的生命安全防治措施建议注意下列事项：由于本菌对抗生素容易产生抗药性．议早期用药．量要足．建药且
胸膜与心包粘连三原检查病分别取病死猪的肺、Ｊ及心血脯膜猪放线杆菌胸膜肺炎是由猪触片．革兰氏染色后镜检。革兰经见胸膜肺炎放线杆菌引起的一种伴有氏阴性卵圆形两极浓染球杆菌和长胸膜炎的出血性坏死肺炎．可发生于丝状菌存在四、对方法应仟何年龄的猪只，呈世界性分布。目该菌对复方新诺明、磺胺甲基嘧前已有３多个困家和地区报道有该Ｏ磺磺林病发生．国际公认的危害现代养啶、胺二甲基嘧啶、胺异噫唑、是结杆红土猪业五大重要传染病之一．其在集可霉素、晶紫、菌肽、霉素、尤用约化养猪场．旦发生会造成重大经霉索、那霉索高度敏感，药时可一、济损失．国该病的发病率有逐年增选以上药物．我发病猪群应立即隔离，死猪对加的趋势用江苏省近年来猪放线杆菌性胸只进行无害化处理清理圈舍。消对膜肺炎时有发生．大地同扰着养殖毒杀菌药消毒、发病猪只每头叭注极０磺支户．给养猪业带来了严重的损失、本卡邢霉素５万单位、胺类药物１，

猪传染性胸膜肺炎防控及净化策略探讨

猪传染性胸膜肺炎（Porcine Contagious Pleuropneumonia ， PCP ）是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae ，APP ）感染引起的一种传播迅速、传染性强的猪呼吸道传染病。

最急性型和急性型时，病猪无先兆症状，突然死亡。

耐过猪只可能转归为亚临床感染，不表现临床症状，但持续排出病菌，导致感染猪群中很难控制和根除该病（Bosse 等，2002）。

1 病原学胸膜肺炎放线杆菌（APP ）是一种典型球杆状菌体、有荚膜的革兰氏阴性菌。

根据体外生长时是否依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD ），APP 可分成生物Ⅰ型（NAD 依赖型）和生物Ⅱ型（NAD 不依赖型）两种。

根据细菌细胞壁外荚膜中荚膜多糖（CPS ）的成分不同，APP 分为19个血清型，但仍有一些菌株无法分型（Stringer 等，2021）。

2 流行病学在大多数案例中，猪传染性胸膜肺炎是由亚临床感染的猪只排菌引起（Klinkenberg 等，2014）。

本病一年四季皆可发生，但在冬春（寒猪传染性胸膜肺炎防控及净化策略探讨赵月桥 1，胡耀方 1，于学祥 1，陆时娟 2，王久红 3，李文涛 1，何启盖 1 *（1.华中农业大学动物科技学院动物医学院，湖北武汉 430070；2.广西扬翔股份有限公司，广西贵港 537000；3.湖北金林原种畜牧有限公司，湖北武汉 430200）基金项目：财政部和农业农村部：国家现代农业（生猪）产业技术体系（CARS-35）共同作者：赵月桥，女，硕士研究生；胡耀方，女，博士研究生*通信作者：何启盖，男，华中农业大学教授，E-mail ：*************** 冷）季节发病率高；各阶段猪只均对APP 易感，但90日龄左右猪只最为易感。

APP 在猪群内主要是通过口腔或是鼻腔分泌物接触传播，或通过0.5～3 μm 大小的气溶胶液滴在2 m 内短距离传播。

一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基、分离鉴定方法及培养方法[

专利名称：一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基、分离鉴定方法及培养方法
专利类型：发明专利
发明人：董发明,李凯明,邱妍,杨国栋,邢艳丽,梁立钦,李凯强
申请号：CN201910935161.2
申请日：20190929
公开号：CN110540953A
公开日：
20191206
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基、分离鉴定方法及培养方法，属于微生物分离培养技术领域。

本发明以鸡血清替代传统所用的牛、羊、马血清，制备猪传染性胸膜肺炎放线杆菌培养基，其中以5%左右的鸡血清的加入比例效果良好，该培养基价格便宜，来源广泛。

用其分离鉴定猪传染性胸膜肺炎放线杆菌，从56份病料中分离鉴定出猪传染性胸膜肺炎放线杆菌51株，其分离率为97%；而传统的牛血清培养基仅从56份病料中分离鉴定出42株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌，其分离率为75%；本发明的分离鉴定方法具有更高的分离效率。

申请人：河南科技大学
地址：471003 河南省洛阳市涧西区西苑路48号
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
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国家二类新兽药——泰地罗新

葩动态本栏目主要是及时报道国家批准的新兽药和企业內部研制的新产品（包括原料药、成品药、疫苗及各种检测试纸），为广大读者提供最新的兽药信息，着重介绍药物的特点、作用机理、作用用途及临床应用效果。

欢迎来稿！E —mail:sysc.zn@引领兽药市场/直面兽药销售/沟通兽药产销/探索营销之道国家二类新兽药——泰地罗新齐鲁动物保健品有限公司根朋（韓甸粋刖条例》，该衬药符A 规定，准片辻.册，特•发此证.: >in V •注分类i 一真K * R.齐BJAVWAff »!»►«].齐費诵物伙公吋.屮诫鸵*矢？泰地罗新、泰地罗新注射液,2019年通过农业部审批获得国家二类新兽药,证号:（2019）新兽药证字 18、19号遥一、主要成分及其作用泰地罗新注射液最早于2011年5月在欧盟地区批准上市，在猪上主要用于治疗和补救性预防由对泰地罗新敏感的胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸系统疾病；在牛上用于治疗和预防由对泰地罗新敏感的溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和睡眠嗜组织菌引起的牛呼吸系统疾病遥2012年5月,美国FDA 批准了其在牛的使用遥在中国，齐鲁动物保健品有限公司研发的泰地罗新原料及注射液在国内首家上市,被农业部批准为国家二类新兽药,制剂商品名为昂乐欣,靶动物为猪遥（一）理化性质及作用机制泰地罗新（20,23-di-piperidinyl-mycaminosyl-tylonolide ）,是最新动物专用的大环内酯类半合成抗生素，为泰乐菌素的衍生物遥分子式为C^H^O s ,分子量为734.02,白色至淡黄色粉末,泰地罗新以多晶型物存在，微溶于水，可溶于极性有机溶剂（如甲醇、丙酮等）遥泰地罗新作用机理同其他大环内酯类药物,能与敏感菌的核糖体50S 亚基结合，通过对转肽作用和/或mRNA 位移的阻断而抑制肽链的合成和延长,影响细菌蛋白质的合成,进而起到抑菌和杀菌作用遥ch 3新药动态词编辑部电话：*************业务微信131****1261 编辑微信alili108913（二）药效学泰地罗新为广谱抗菌药,对支原体、革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均具有抗菌活性,主要包括引起猪呼吸系统疾病的胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌,以及引起牛呼吸系统疾病的溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和睡眠嗜组织菌遥EAMA提供了2005-2010年间不同欧洲国家（德国,法国，荷兰,匈牙利，西班牙，比利时，丹麦，波兰和英国）中影响牛（n=349）和猪（n=256）呼吸道疾病的分离菌株中与流行病学无关的靶病原的MICs,总结如下表遥表1-1菌株名称菌株数MIC结果(|ig/ml)MIC50(gg/ml)MIC90(gg/ml)猪胸膜肺炎放线杆菌1002~1688支气管败血波氏杆菌870.5-824多杀性巴氏杆菌990.125-20.51副猪嗜血杆菌630.032〜40.51对大部分细菌而言，与替米考星比较有更强的抗菌活性，对于在2005-2010期间，欧洲不同国家感染呼吸疾病的牛和猪中，分离出的病原体对泰地罗新进行了最小抑菌浓度测试,泰地罗新对分离细菌抑菌效果良好遥（三）药动学泰地罗新注射液单剂量颈部肌内注射后，其平均消除半衰期Twp约为121.90±24.35h,达峰时间丁唤和峰值浓新药动态EI9表1-2最小抑菌浓度（MIC；ng/ml）比较菌种泰地罗新替米考星金黄色酿脓葡萄球菌193 3.130.39金黄色葡萄球菌FDA209p 6.250.39金黄色葡萄球菌史密斯12.5 1.56藤黄微球菌PCI10010.780.2枯草杆菌25 1.56大肠杆菌 3.1325肺炎杆菌 3.1325痢疾志贺菌 6.25100肠炎沙门氏菌0.78 6.25产气肠杆菌 6.25100灵杆菌100100变形杆菌 6.25100溶血巴斯德菌0.39 1.56度Cmax分别为0.167±0.00h和1116.49±48.90ng/ml,平均药时曲线下面积AUCg为5.62±0.48ug・h・ml-1,AUC。

关于一起猪传染性胸膜肺炎案例的思考

摘要：2022年10月26日，四川省渠县某猪场发生育肥猪呼吸道疾病死亡事件。

为了解疫病状况，查明原因并采取针对性措施以减少猪场的经济损失，赴现场开展了调查。

综合流行病学调查信息、生猪的临床症状和剖检变化，以及实验室检测结果判断其死亡原因是传染性胸膜肺炎引起。

通过药物治疗，并改善饲养管理，猪群发病死亡情况得到有效控制。

该案例提示，良好的饲养环境和管理，才能应对气候等应激因素的变化，从而降低本病的危害程度。

关键词：传染性胸膜肺炎；猪；调查；防治关于一起猪传染性胸膜肺炎案例的思考何丽霞1，邢云云2，何勇君3，师清博4，赵小波5*（1.渠县动物疫病预防控制中心四川达州635200；2.山东德青制药有限责任公司山东德州251200；3.城固县老庄镇农业农村综合服务中心陕西汉中723200；4.汉中市动物疫病预防控制中心陕西汉中723000；5.达州市动物疫病预防控制中心四川达州635000）收稿日期：2023-03-26*通信作者doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.02.060猪传染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumonia ）是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触性、致死性呼吸道传染病[1]。

病猪以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征。

潜伏期，自然感染1~2d ，各种年龄、性别的猪均易感，但以6周至6月龄的猪多发，发病率和死亡率通常在50%以上，最急性型的死亡率可高达80%~100%。

病猪和带菌猪是本病的传染源。

本病传播迅速，多为最急性型或急性型，突然死亡。

常发生于4—5月和9—11月，具有明显的季节性。

主要传播途径是气源感染，以飞沫方式在猪群间传播[2]。

目前在全球范围内流行，给养猪业造成了巨大经济损失，是国际公认的危害现代养猪业的重要传染病之一。

2022年10月26日，渠县动物疫病预防控制中心接到报告，某猪场近期生猪大量发病死亡。

放线杆菌实验报告

一、实验背景猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的一种猪呼吸道疾病，具有高度的传染性和致死性。

该病在全世界范围内广泛流行，给养猪业造成了巨大的经济损失。

APP的主要致病因子包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白和溶血毒素（Apx）。

其中，溶血毒素Apx在APP的致病过程中起着重要作用。

本研究旨在提取纯化APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ，并研究其对小鼠的致病性和免疫原性，为研制有效的疫苗提供理论依据。

二、实验材料1. 实验动物：SPF级昆明小鼠，体重18-22g。

2. 菌株：猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）血清10型、血清7型、血清3型。

3. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA连接试剂盒、限制性内切酶、DNA聚合酶、Taq酶、琼脂糖、琼脂糖凝胶回收试剂盒、DNA marker、蛋白marker、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、Western blot试剂、抗体等。

4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、超净工作台、孵育箱、培养箱、显微镜等。

三、实验方法1. APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的提取与纯化（1）分别将APP血清10型、血清7型、血清3型接种于LB液体培养基，37℃培养过夜。

（2）收集菌液，12,000r/min离心10min，弃上清，收集菌体。

（3）将菌体用PBS缓冲液重悬，加入溶菌酶，37℃水浴处理1h。

（4）12,000r/min离心10min，收集上清液。

（5）对上清液进行Sephadex G-50凝胶柱层析，收集ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ峰。

（6）对ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ峰进行透析，去除盐分。

（7）对透析后的ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ进行SDS-PAGE电泳，鉴定纯度。

2. APP溶血毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ对小鼠的致病性研究（1）将小鼠分为A、B、C三组，每组10只。

（2）A组：正常小鼠。

猪传染性胸膜肺炎的诊断和治疗

猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的一种高度接触性、致死性呼吸道传染病，临床上以急性败血症、发热、咳嗽、高度呼吸困难为特征，是被国际公认的危害现代养猪业的重要疫病之一，给集约化养猪业带来了巨大的经济损失；特别是近年来本病的流行呈迅速上升且混合型感染趋势，危害日趋严重，务必引起高度重视。

一、病原与流行病学猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种呼吸道传染病。

APP 是革兰氏阴性、有荚膜的多形球杆菌，迄今已发现两个生物型共15个血清型，其中生物Ⅰ型中的1、5、9、10、11五种血清型致病力最强，生物Ⅱ型中的13和14致病性比生物Ⅰ型要弱。

我国以1、3、7血清型为主，免疫学研究证明，由于主要血清型之间缺乏交叉免疫保护作用，给本病的诊断及疫苗防治带来一定的困难。

不同品种、性别及年龄的猪对该病都有易感性，其中6周龄至5月龄的猪较多发，但以3月龄仔猪最为易感，病猪和带菌猪是本病的传染源。

APP 主要通过空气飞沫传播，在感染猪的鼻汁、扁桃体、支气管和肺脏等部位是病原菌存在的主要场所，病菌随呼吸、咳嗽、喷嚏等途径排出后形成飞沫，通过直接接触而经呼吸道传播；也可通过被病原菌污染的车辆、器具以及饲养人员的衣物等间接接触传播；小啮齿类动物和鸟类也可能传播本病。

该病的发生具有明显的季节性，多发生于4～5月和9～11月，在恶劣气候条件下极易暴发流行；此外，饲养环境突然改变、猪群的转移或混群、拥挤或长途运输、通风不良、密度过大、湿度过高、气温骤变等应激因素，均可引起本病发生或加速疾病传播，使发病率和死亡率增加。

二、流行特点近年来，随着规模化养猪业的兴起，猪传染性胸膜肺炎呈现以下新的流行特点。

1．由于饲养管理条件差，断奶仔猪发病率和死亡率明显增高。

以往虽然仔猪发病率较高，但病情一般不太严重，死亡率也较低，现在仔猪发病率和死亡率都有明显增加的趋势。

特别是不少中小型养殖户，断奶后刚转入保育舍的仔猪，由于饲养管理条件差，在气候突变、分群、变换饲料等产生的应激因素下，极易导致该病的发生，常常造成大批仔猪死亡。

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验

１０２
养猪ＳＷＩＮＥＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ（６）
２０１６
猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验
车勇良，陈如敬，吴学敏，王晨燕，王隆柏，刘玉涛，周伦江
（福建省农业科学院畜牧兽医研究所／福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建福州３５００１３）
收稿日期：２０１６ — ０９ — １９基金项目：福建省公益类科研专项（２０１０Ｒ１０２５ — ２）；福建省生猪
为０％，保育猪成活率也为７０％，肥育猪成活率为８０％。剖检病变显现为出血性肺炎、胸膜炎和心包炎，支气管和气管内分泌物增多。
１．３试验方法
１．３．１细菌分离与纯化用火焰灭菌的接种针挑取病猪肺脏，划线接种于ＴＳＡ培养板，并在接种线的垂直方向划线接种金黄色葡萄球菌，放置于３７℃恒温箱中培养２４～４８ｈ后，观察菌落形态并挑取可疑菌落进行革兰氏染色镜检。并将可疑单菌落接种于ＴＳＡ培养基进行纯化培养，直至菌落形态大小均一、
色泽一致为止。１．３．２生化试验
使用微生物生化管进行生化鉴
定，包括尿素酶接触试验、溶血性试验、过氧化氢
试验、卫星现象等，糖发酵反应试验包括：木糖、甘露醇、棉子糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖、果糖和葡产业体系萄糖等。作者简介：车勇良（１９７６一），男，江西临川人，副研究员，主要从事１．３＿３细菌基因组ＤＮＡ提取挑取纯化后的单个预防兽医学研究．Ｅ — ｍａｉｌ：ｃｙ１１９７６０８１０＠１６３．ｃｏｍ菌落接种于含５％小牛血清和０．００５％ＮＡＤ的ＴＳＢ通讯作者：周伦江（１９７３一），男，福建周宁人，研究员，博士，主要从液体培养液中，３７℃振荡培养过夜。离心沉淀后加事畜禽传染病防控研究．Ｅ — ｍａｉｌ：ｌｕｎｊｉａｎｇ＠１６３．ｃｏｎｒ

氟苯尼考治疗猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的临床应用

以妊娠期的动物禁用６临床案例
本品吸收迅速，分布广泛，半衰期长，血药维持时间长。肌内注射ｌ小时后血液中可达到治疗剂量，两小时左右达到药物峰浓度，半衰期一般
１３一
今日畜牧兽医２０１３．１１
６．１发病情况
大于规定的阴性对照ＯＤ值的２．１倍，结果为阳
性。６．４诊断结果
２０１３年１Ｏ月邯郸市峰峰矿区某养殖厂养殖
２０００头猪，起初个别猪发病，主要以６周龄至６
月龄的猪较多，此后其他猪相继发病，发病猪病
氟苯尼考治Ｉ亨猪传染性胸膜肺炎放线扦菌的临床应用
张玉果．付亚峰
（１．邯郸市神康药业有限公司，河北邯郸０５６０１１；２．邯郸农业高等专科学校，河北邯郸０５７１５０）
氟苯尼考是氯霉素类的广谱抗菌药，９０年代
衰期猪为６．７小时，牛为２．６小时。氟苯尼考生物
利用度高，能通过血脑屏障。对动物的细菌性脑
膜炎的治疗效果较好。氟苯尼考无其他氯霉素的毒性作用，不会造成再生障碍性贫血的危害。本品主要经肝、肾代谢，少量随粪便排出。
和氟苯尼考胺均为最高．结果表明肝脏和肾脏是
氟苯尼考的靶器官。

胸膜炎放线杆菌菌毛研究进展

目前，研究人员已经从胸膜肺炎放线杆菌中鉴定到了许多毒力因子，其中包括４种ＲＸ毒Ｔ素、荚膜多糖（Ｐ、脂多糖（Ｐ）Ｃ）ＬＳ、外膜蛋白（）ＯＭＰ、转铁结合蛋白（ｂ）Ｔｐ、溶血素（ｌ）Ｈｙ、粘附素、蛋白酶等［虽然鉴定出如此之多的毒力因子，１１，但是人们对胸膜肺炎感染的分子致病机理还不是
Hale Waihona Puke 动子在体内产生活性，其活性比在体外条件下要高ｌ倍之多。说明体内环境下ＡＰ菌毛的表达５Ｐ
相对容易。
不能产生具有凝血活性的血凝素。目前已经在大量革兰氏阴性菌中鉴定到了Ｉ序列为例，介绍胸膜肺炎放线杆菌菌毛基因簇的Ｖ型菌毛，且这些菌毛明显可以分为两组（Ａ组和Ｂ构成。组１ｖ型Ａ组菌毛多是在绿脓杆菌、多杀性巴。Ｉ血清型７胸膜肺炎放线杆菌菌毛基因簇大型小为５３３ｂ，含有ａｆ，ａｆ，ａｆ０ｐｐＡｐＢｐＣ和ａｆｐＤ等［收稿日期］０６０－５２０－３２４个亚单位基因，以及部分假定的ｒｄａＡ基因和［作者简介］郭洋（７－１８），男，硕士，现任沈阳农业大学畜牧兽医学９ｙｃａＥ基因。其中ａｆａｆｐＡ，ｐＢ，ａｆｐＣ和ａｆ基因ｐＤ
中图分类号Ｓ５．１８２６＋９文献标识码Ａ文章编号１７ — ６２２０）６０６— ４６２９９（０６０— ０１０
胸膜肺炎放线杆菌（ｃｉｏａｉｕｌｕｏ— Ａｔｂｃｌｓｐｅｒｐ氏杆菌、莫拉杆菌、流感嗜血杆菌及嗜肺性军团ｎｌｎｕｏｉ，ＡＰｅｍｎｅＰ１是引起猪传染性胸膜肺炎的致杆菌中发现，而ＩａＶ型Ｂ组菌毛则广泛存在于嗜病菌，能够引起各个年龄阶段的猪发生急性或慢血杆菌属、放线杆菌属和巴氏杆菌属等多个物种内。根据菌毛亚单位Ｎ末端序列可以判断胸膜肺一性感染。

猪放线杆菌性胸膜肺炎的诊治

猪放线杆菌性胸膜肺炎的诊治猪放线杆菌性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌引起的一种伴有胸膜炎的出血性坏死肺炎，可发生于任何年龄的猪只，呈世界性分布。

目前已有30多个国家和地区报道有该病发生，是国际上公认的危害现代养猪业五大重要传染病之一，尤其在集约化养猪场，一旦发生会造成重大经济损失。

我国该病的发病率有逐年增加的趋势。

江苏省近年来猪放线杆菌性胸膜肺炎时有发生，极大地困扰着养殖户，给养猪业带来了严重的损失。

本文就该病的诊治与预防做一介绍。

一、临诊症状猪只突然发病，体温41～42℃，食欲降低直至废绝；精神沉郁，卧地不起；有短期轻度呕吐和腹泻；咳嗽，张口呼吸，口腔和鼻腔流出大量带血的泡沫样分泌物；呈犬坐姿势，逐渐出现呼吸衰竭；耳、鼻、颈、胸腹、四肢直至全身皮肤发绀。

二、病理变化剖检病死猪只均可见败血症变化；粘膜、浆膜出血，鼻腔、喉头及气管、支气管粘膜充血，内有大量血色气泡；肺充血、肿胀、出血，呈暗红色，切面易碎，间质充满血色胶样液体，肝变明显；可见纤维素性出血性胸膜肺炎，全身淋巴结肿大、充血；心包有淡黄色积液，胸腔内有大量血色液体，胸膜与心包粘连。

三、病原检查分别取病死猪的肺、胸膜及心血触片，经革兰氏染色后镜检，见革兰氏阴性卵圆形两极浓染球杆菌和长丝状菌存在。

四、应对方法该菌对复方新诺明、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异?f唑、林可霉素、结晶紫、杆菌肽、红霉素、土霉素、卡那霉素高度敏感，用药时可选以上药物。

发病猪群应立即隔离，对死亡猪只进行无害化处理。

清理圈舍，用消毒杀菌药消毒。

对发病猪只每头肌注卡那霉素50万单位、磺胺类药物1支，早晚各1次。

对未发病猪群，圈舍消毒杀菌，对猪只密切观察，如发现有症状猪只，立即进行药物注射、隔离。

发病猪只一般得到两次治疗后，可基本痊愈，再巩固治疗1~2次，均未再发，可停药。

五、体会近几年来，我国各地均有猪放线杆菌性胸膜肺炎的发病报道，本病已成为近一时期危害养猪业的重要传染病之一。

猪传染性胸膜肺炎的治疗与诊断分析

临症资料20237260猪传染性胸膜肺炎的治疗与诊断分析王洪华，王荣芳（内蒙古通辽市开鲁县种畜繁育中心，内蒙古通辽 028400）摘要：猪传染性胸膜肺炎是生猪养殖期间常见、高发的呼吸道疾病，具有较强的传染性，该病呈世界流行性，病猪的典型症状表现包括胸膜炎性渗出、呼吸困难及缺氧等。

急性感染具有较高的致死率，慢性通常耐过，发病后通常会导致大范围危害，对养殖户造成严重经济损失，严重阻碍养殖业的发展。

受到饲养管理不完善、应激因素等影响，该疾病在生猪养殖时愈发常见。

主要对猪传染性胸膜肺炎的治疗、诊断等方法进行阐述，以提高疾病防治水平。

关键词：猪传染性胸膜肺炎；治疗；诊断；预防中图分类号：S858.28 文献标志码：B 文章编号：1003-8655（2023）07-0046-03猪传染性胸膜肺炎目前已成为是世界范围内生猪养殖的常见、高发疾病。

近几年，猪传染性胸膜肺炎在我国也表现为广泛流行，由于养殖环境和外部环境日益复杂，该病发病率呈逐年升高趋势。

猪传染性胸膜肺炎主要为胸膜放线杆菌感染致病，病猪伴有呼吸困难、咳嗽等症状，病情严重可导致死亡，同时随着病情进展也会导致消瘦、生长迟缓等其他症状，严重阻碍生猪养殖业的发展。

因此，养殖管理人员应加强对疾病防治工作的重视，发现后采取有效的方式准确诊断，不断提高防治水平，最大限度减少经济损失，为养殖业的发展夯实基础。

1 胸膜肺炎放线杆菌概述猪传染性胸膜肺炎主要为病菌感染引发，致病菌为胸膜肺炎放线杆菌，是一种革兰染色阴性菌，通过显微镜进行观察，可发现微小至中等大小的病菌，一些呈丝状，进行染色处理，两极浓度显著升高，观察表面可发现荚膜，并未出现芽孢，无运动能力，体外培养需要充足的营养，同时其性质厌氧，生长环境对CO2的需求非常高。

多数情况下，其在60 ℃的高温环境下20 min内即可被杀死；75℃下病菌存活时间约5 min。

目前发现该菌有诸多血清型，代谢阶段产生一定数量的毒力因子，常见的有蛋白毒素、脂多糖等，具有一定的毒力。

接种疫苗有益于改善低死亡率的放线菌胸膜肺炎

篇题目为《膜炎检测的新方法》胸的文章介绍了一种
对猪胸膜炎研究非常有用的新方法。该方法是由Ｉｉｔｓｔｏｔｕｚ０ｒｌｔ０ｐｒｅｔｍａｉｅｌｍｇａ０Ｄｏａｉｅｉｎａｌｂｒａｄｅｉｒａｎ发ｉｆｔｃｓｍｋｏｄｍｉｏａ
在２０年５月出版的第２０７３卷第４期＜ｉ＜ｇＰＰｏｒｓ》文见本刊第２卷第５ｒｇｓ觯７期第４４４～５页），上有
一
明，全称为屠场胸膜炎评价体系（ａｇｔｈｕｅｌｒｙＳｕｈｅｏｓｅｉｌｒＰｕｓＥａａｏｙｔ）简称为ＳＥ，ｖｌｔｎＳｓｍ，ｕｉｅＰＳ这种方法能够让研究人员根据病变的部位、外观症状和范围对胸膜炎病变进
果，以及其对猪胸膜炎的特定水平将产生怎样的响应。
两项研究都表明免疫接种可有效地预防猪胸膜炎。
１病因
胸膜肺炎放线杆菌是猪胸膜肺炎的病原菌，该病是
一
一ｌ＿Ｉ至；ｌ三三；ｌ＿ｌｌ
■
种呼吸系统疾病，在意大利北部地区的大体型猪群中
平均为０１而非免疫组的平均值为１显著高于免．，９．１１，
维普资讯
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疫组。
・健保・
此外，在对具有严重病变分达到３４的病猪）～分的次级组进行分析后发现，Ａｐ未免疫组中，有此在ｐ具类严重病变的猪只占了该组的１．％，Ａｐ５５而ｐ免疫组中此类猪只仅占１．％，１７在两个试验组问病变严重程度存在着显著的差异。当对病变严重程度评分为２３４、或（不

传染性胸膜肺炎的发病特点及综合防控

中国动物保健2023.06疾病防治摘要：传染性胸膜肺炎是临床养殖过程中动物常见的呼吸道传染病之一，在世界范围内分布广泛，给养殖业造成了巨大的经济损失。

最近几年，我国养殖业集约化、规模化水平飞速提高，但是广大养殖户对传染性胸膜肺炎的认识还不充分，导致传染性胸膜肺炎的防控受到阻碍，一定程度上制约了我国养殖业的健康发展。

为了能使广大养殖户更全面地了解常见动物传染性胸膜肺炎的发病特点，掌握该病科学的防控措施，本文对传染性胸膜肺炎近几年的研究进展，及综合防治措施进行了总结，以期能为该病的防控提供一些数据支撑。

关键词：牛；羊；猪；马；传染性胸膜肺炎；发病特点；综合防治传染性胸膜肺炎的发病特点及综合防控吴文君（江苏省南通市如东县岔河畜牧兽医站江苏南通226400）收稿日期：2022-11-04作者简介：吴文君（1986.10—），女，江苏如东人，副站长，本科，兽医师，从事动物防疫技术服务、动物产地检疫、畜禽粪污资源化利用和畜牧兽医技术推广等。

doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.06.0161临床常见动物传染性胸膜肺炎概述1.1羊传染性胸膜肺炎羊传染性胸膜肺炎又名羊支原体肺炎（mycoplasmal pneumoniaof sheep and goat ，MPSG ），俗称“烂肺病”，是由支原体感染引起的羊群的高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（WOAH ）列为法定报告动物疫病。

1922年，我国新疆地区首次报道山羊传染性胸膜肺炎感染，随后便开始在华北，西北地区广泛流行[1]。

近年来关于羊感染传染性胸膜肺炎的病例报道增多，2017年，吴锦艳等[2]对我国12个省份的山羊传染性胸膜肺炎流行病学调查发现，11个省份都出现了不同程度的感染，其中以山东（22.5%）、河南（35.1%）、河北（27.5%）流行最为严重。

各个品种、各个日龄的羊群都是传染性胸膜肺炎的易感宿主，患病动物是主要的传染源，主要通过吸入被污染的气溶胶感染健康动物。

盐酸多西环素与土霉素对胸膜肺炎放线杆菌的体外抑菌效果研究

盐酸多西环素与土霉素对胸膜肺炎放线杆菌的体外抑菌效果研究王德功;魏丽娟;杨国辉;刘欣;吴聪明;贾国宾【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2016(0)9【摘要】为研究盐酸多西环素、土霉素对胸膜肺炎放线杆菌的抗菌活性,本试验采用微量肉汤稀释法,对胸膜肺炎放线杆菌进行了体外药敏试验.结果显示,盐酸多西环素对胸膜肺炎放线杆菌的MIC范围为0.125～1.0g/mL,土霉素对胸膜肺炎放线杆菌的MIC范围为0.125～1.0 g/mL,两种药物对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性相当.结果表明,盐酸多西环素和土霉素对胸膜肺炎放线杆菌具有良好体外抑菌作用.【总页数】4页(P16-19)【作者】王德功;魏丽娟;杨国辉;刘欣;吴聪明;贾国宾【作者单位】河北远征药业有限公司,河北石家庄050041;河北省兽药工程技术研究中心,河北石家庄050041;河北远征药业有限公司,河北石家庄050041;河北省兽药工程技术研究中心,河北石家庄050041;河北远征药业有限公司,河北石家庄050041;河北省兽药工程技术研究中心,河北石家庄050041;河北远征药业有限公司,河北石家庄050041;河北省兽药工程技术研究中心,河北石家庄050041;中国农业大学,北京 100193;河北远征药业有限公司,河北石家庄050041;河北省兽药工程技术研究中心,河北石家庄050041【正文语种】中文【中图分类】S855.12【相关文献】1.土霉素对中华绒螯蟹螺原体的体外抑菌试验及其抑菌机理 [J], 封琦;王权;王建国;叶建生;王文;顾伟;沈辉;朱云干2.氟苯尼考与盐酸多西环素体外联合抑菌效果研究 [J], 王乐乐;邹明;张启迪;邹本革;李晓飞;毕可东3.氟苯尼考与盐酸土霉素体外联合抑菌效果研究 [J], 周文中;毕可东;邹本革;李红;邹明;张启迪4.氟苯尼考与盐酸多西环素体外联合抑菌效果研究 [J], 王乐乐5.氟苯尼考单用及联用对副猪嗜血杆菌和胸膜肺炎放线杆菌的体外抑菌效果 [J], 唐万勇;刘洁;侯博;朱秀高;丁文格;陈翠兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。