高效液相色谱仪

高压泵应具有以下性能
✓ 流量稳定，精度在1%左右 ✓ 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa ✓ 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 ✓ 能抗溶剂腐蚀 ✓ 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 ✓ 操作方便、容易维修
✓ 根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱， 样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。 六通进样阀具有使用方便，进样量准确等优点。
C H 2
C H 2 C H 2 C H 2
H 2 C
H 2 C H 2 C H 2 C
C H 2
C H 2 C H 2 C H 2
H 2 C
H 2 C H 2 C H 2 C
C H 2 H 2 C
H 2 C C H 2 H 2 C C H 2 H 2 C C H 2
H H 3 C S C iH 2 C H 3 H H 3 C S C iH 3 C H 3 H H 3 C S C iH 2 C H 3 H H 3 C S C iH 2 C H 3 H H 3 C S C iH 2 C H 3 H H 3 C S C iH 3 C H 3 O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S O iO O S iO O O S O iO H O S O iO
样品环(Loop)
规格：有10µL、20µL、50µL等不同容积， 可以根据需要选 配。 作用：用来贮液，也用来测量样品溶液的体积。
将样品环装满后进样，进样量即为样品环的容积，此种 进样方式称为“满环进样”或“定量环进样”。 用定量环进样精密度好，在使用外标法时，应使用此种操 作方式。
自动进样器
•键合类型
化学性质 •碳覆盖率 •封端
正相柱和反相柱
正相柱：固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团，如胺基(NH2)和
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
（3） 色谱柱
色谱柱是高效液相色谱的心脏，在HPLC的使用中， 保持色谱柱的柱效，延长柱子的使用寿命非常重要。
色谱柱流速方向
色谱柱的参数
色谱柱（Column） 结构：柱管多用不锈钢制成，色谱柱两端的柱接头内装有 筛板，目的是防止填料漏出。 填料：多以硅胶为基质，适用PH 2～8 粒度多为0.2～20 μm(以5～10μm居多) 。
预柱和保护柱
从泵来的流动相
预柱
进样口
保护柱
预柱是针对流动相来保护色谱柱
保护柱是针对样品来保护色谱柱
分 析
柱
precolumn——预柱，guard column——保护柱 安装位置不同：预柱是泵后进样口前，途经流动相；保护柱
是进样口后分析柱前，途经样品和流动相。
作用不同：预柱则只能起到过滤颗粒物作用，防止颗粒物堵
主要是由于修饰到硅胶上的硅烷化 试剂不同。 C8是修饰的带8个碳原子的硅烷， C18是修饰的带18个碳原子的硅烷。
C18较C8极性小，C18更适合分析中等到小极性的化合物， C8更适合中等偏大极性 化合物。
C18柱（C8柱）性能影响因素
wenku.baidu.com物理性质
•硅胶纯度 •色谱柱尺寸 •颗粒形状 •粒径 •表面积 •孔径
气动放大泵（恒压泵） 往复泵（恒流泵）是目前液相色谱使用最普遍的一种 高 压泵。其中又分单头往复泵和双头往复泵。 往复泵的优点是泵头内腔体积小，容易洗净，故更换 溶剂十分方便，尤其适合做色谱条件试验时使用。
气动放大泵
往复柱塞泵
(2) 进样装置
手动进样阀通常使用耐高压的六通阀 (美国Rheodyne 公司专利技术)， 其结构如图所示：
高效液相色谱
2010/8/21
一、高效液相色谱仪
Agilent 1100
Waters 2487
二、高效液相色谱法的特点
借助气相色谱 的理论演变
经典的柱色谱
高效液相色谱的模块
20世纪70年代后发展迅速，它在技术上采用高压泵，高效固定相 和高灵敏度的检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先 被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多）
制备柱 （21.2mm、30mm、50mm） 半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）
C18柱（C8柱）
H 3 C
H 3 C H 3 C H 3 C
特点：高压、高效、高速
分离对象：适用高沸点、热不稳定有机及生化试样分 离分析 （与GC区分）
1.
流程
三、流程及主要部件
2. 主要部件
(1) 高压输液泵
单元泵
双元泵
高压泵作用：输送流动相。 也即是贮液瓶中的有机溶剂或缓冲溶液靠高压泵送入
色谱柱。由于色谱柱的阻力很大，高压泵必须克服阻力 以恒定流速输送流动相，这是保证色谱仪精确度的前提。
常用的压力范围：150～350×105 Pa 欧美等国家习惯使用psi作单位 PSI英文全称为Pounds per square inch。 定义为英镑/平方英寸， 它们之间的换算关系为： 1bar≈14.5psi =105Pa ， 145psi = 1Mpa 1psi = 6.895kPa=0.06895bar