台盼蓝染色法
细胞活力检测实验报告
一、实验目的细胞活力是细胞生物学研究中非常重要的指标，能够反映细胞在特定条件下的生长、代谢和功能状态。
本实验旨在通过多种方法检测细胞活力，了解细胞在不同条件下的生长情况，为后续实验研究提供依据。
二、实验材料1. 细胞：人胚胎肾细胞（HEK293）2. 试剂：台盼蓝染色液、CCK-8试剂盒、Resazurin细胞活力检测试剂盒、ATP含量测定试剂盒、细胞培养液、培养基、PBS缓冲液等3. 仪器：显微镜、酶标仪、细胞计数板、细胞培养箱、超净工作台等三、实验方法1. 台盼蓝染色法（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）用PBS缓冲液洗涤细胞，加入适量的台盼蓝染色液，室温孵育5分钟。
（3）用PBS缓冲液洗涤细胞，观察细胞染色情况。
2. CCK-8试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。
（3）加入10μl CCK-8试剂，避光孵育2小时。
（4）用酶标仪检测450nm波长下的吸光度（OD值）。
3. Resazurin细胞活力检测试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。
（3）加入10μl Resazurin试剂，37℃孵育4小时。
（4）用酶标仪检测570nm和600nm波长下的吸光度（OD值）。
4. ATP含量测定法检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl ATP含量测定试剂盒，室温孵育10分钟。
（3）用酶标仪检测560nm波长下的吸光度（OD值）。
四、实验结果与分析1. 台盼蓝染色法通过显微镜观察，活细胞不着色，死细胞被染成蓝色。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理
台盼蓝(Ｔrypan Blｕe) 就是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞就是否存活。
活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式:C34H24N6O１４S４Na4,分子量: 960、82,可溶于水(10mg/ml)。
实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。
因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞与死细胞。
台盼蓝就是组织与细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。
实验步骤:
1、配制4％台盼蓝母液:称取4ｇ台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至１０0ml,用滤纸过滤,4℃保存。
使用时用PＢS稀释至0、
4 %。
２、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。
3、染色:细胞悬液与０、4％台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
(终浓度0、04%)
4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞与死细胞。
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
注意:
1、保存条件:室温保存。
２、有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套与口罩操作。
台盼蓝染色实验原理和步骤
For personal use only in study and research; not forcommercial use台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
For personal use only in study and research; not for commercial use.Nur für den persönlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwendet werden.Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales.толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях.以下无正文仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和步骤台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
台盼蓝染色
台盼蓝染色操作步骤
2011／5／5来源：上海泛柯生物科技有限公司
台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。
还常用于细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，死细胞会被染成蓝色。
操作步骤：
1、制作4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至100ml,用滤纸过滤，4度保存。
使用时，用PBS 稀释至0.4%
2、胰酶消化单壁细胞，制备单细胞悬液，并适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合均匀。
（终浓度为0.04%）
4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞盒和死细胞
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，活细胞拒染呈无色透明状
6、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞数／（活细胞数＋死细胞数）×100%
PBS:磷酸缓冲液。
台盼蓝染色实验原理和顺序
台盼蓝染色实验原理和顺序蓝染是一种传统的织物染色工艺，其原理是利用蓝液中的染料与纤维物质发生化学反应，将染料牢固地固定在纤维素纤维上。
在蓝染过程中，主要包括浸泡、氧化和还原三个步骤。
下面将详细介绍蓝染色实验的原理和顺序。
实验原理：1.染料选择：蓝染色实验中一般选择天然蓝染料，如蓝靛。
这些染料在碱性条件下可以溶解并与纤维素纤维发生反应，形成稳定的染料-纤维素结合物。
2.碱性条件：蓝染实验中通常会添加碱液来改变染液的酸碱性，增强染料与纤维素纤维的反应性。
碱液还可以使染料变得更可溶于水，并提高染色的效果。
3. 氧化还原反应：蓝染实验中涉及到氧化还原反应。
染色初始阶段，染料经过氧化过程与纤维素发生反应，形成游离的蓝色阳离子离子（Indigo），此时纤维变为黄色。
接着，通过还原反应，将染料还原为无色的蓝靛并沉淀附着于纤维素上。
这个过程叫做“固定”。
实验顺序：1.准备：将天然蓝染料（如蓝靛）粉末溶解于适量水中，制成蓝液。
同时准备纱线、棉布等需要染色的织物。
2.处理织物：将织物酒精湿润，然后浸泡在碱性水溶液中，以增强织物吸收染料的能力。
3.浸泡：将处理好的织物放入蓝液中，使其完全浸泡。
浸泡时间根据需要染色的颜色深浅而定，一般为几分钟到几小时不等。
4.取出：将浸泡好的织物从蓝液中取出，让它自然晾干。
这个过程中，纤维上的染料阳离子会与氧发生氧化反应，生成蓝靛沉淀。
5.固定：取出已干燥的织物，将其暴露在空气中，蓝液中的染料阳离子会经过氧化还原反应，转化为稳定的靛蓝色素并与纤维素纤维牢固结合。
6.染色效果增强：染色后，如果需要加强染色效果，可将织物反复进行浸泡和晾干，直至达到理想的颜色深浅。
7.旋洗：完成染色后，可将织物用清水进行旋洗，以去除多余的染料。
8.干燥定型：最后将织物晾干，并进行烘干定型处理，以使染料与纤维更牢固地结合。
总结：蓝染色实验主要包括浸泡、氧化还原和还原三个步骤。
通过选择适当的蓝染料、调节酸碱度和控制染色时间，可以实现理想的染色效果。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量： 960.82,可溶于水（10mg/ml).
实验原理:正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞.台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量.台盼蓝染色只需3—5分钟即可完成，并且操作非常简单.
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至
0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9：1混合混匀。
（终浓度
0。
04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状.
6、统计细胞活力:活细胞率（％）= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1。
保存条件：室温保存。
2。
有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作.。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和步骤一、原理台盼蓝染色实验是利用台盼蓝（Toluidine Blue）染料与细胞或组织中的核酸结合，形成紫蓝色染色体。
台盼蓝染色的染料溶液带有酸性成分，其酸羧基在酸性条件下可与细胞核酸中的碱基形成氢键结合。
台盼蓝染料主要染色核酸，使得细胞核、细胞核周围的细胞质和一些细胞器着色，从而能够观察到细胞核结构、核仁和核膜的位置和形态，以及纤维蛋白、蛋白多肽和糖蛋白的酸性地带。
二、步骤1.组织固定：将需要染色的组织切片取出，用4%的冷醇固定液浸泡20分钟。
2. 渗透：将固定的组织切片用0.1%的Tween 20溶液处理3次，每次5分钟。
Tween 20可以增加细胞膜的通透性，有利于染料进入细胞内。
3.染色：用0.05%的台盼蓝染料溶液将组织切片浸泡5-10分钟，让染料与组织中的核酸结合形成染色体。
染色时间可以根据需要调整，一般情况下5分钟就足够。
4. 洗涤：用去离子水或者含有0.1%Tween 20的PBS缓冲液洗涤组织切片3次，每次5分钟。
这一步是为了去除多余的染料。
5.脱水：用70%、85%和95%的无水酒精将组织切片脱水，每个浓度的酒精浸泡3-5分钟。
6.透明化：将组织切片用苯酚-甲苯中透明化数小时。
透明化液一般是苯酚和甲苯的混合物，可以使组织切片变得透明，便于观察。
7.封片：将透明的组织切片取出，放到玻璃切片上，用封片胶将其封住，然后放置干燥。
8.观察：将封好的玻璃切片放在显微镜下观察，可以用不同倍数的物镜来观察不同部位的细胞和组织结构。
三、注意事项1.染色过程中注意避免阳光直射，避免光照会影响染色效果。
2.处理切片要轻柔，避免切片碎裂或变形。
3.实验操作要严格遵守安全规范，注意保护实验人员的安全。
4.封片时要避免出现气泡，以免影响观察。
综上所述，台盼蓝染色实验是一种常用的染色方法，通过与细胞核酸结合，可以使细胞和组织结构得到清晰可见。
实验步骤简单，但是在操作过程中需要注意一些细节，确保染色效果和实验安全。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和步骤蓝染是一种传统的染色技术，起源于中国，在日本也有悠久的历史。
蓝染色实验是为了研究蓝染工艺的原理和步骤，以便更好地理解和应用蓝染技术。
下面是台盼蓝染色实验的原理和步骤。
一、实验原理：蓝染是利用大蓝（天然靛蓝）的还原性能，将其氧化为淡蓝或蓝紫色，再使其还原为不溶于水的颜料沉淀物质，直接着色于织物纤维上，形成美观、持久、不退色的蓝色。
二、实验步骤：步骤一：准备材料1.织物：选择一块白色的纯棉织物，洗净晾干。
2.大蓝：购买或制作大蓝溶液。
步骤二：还原大蓝1.在小瓶中加入约10毫升的浓度为2%的氧化还原剂，如明矾溶液。
2.将少量大蓝溶液加入小瓶中，摇动均匀，待溶液变为淡黄色。
步骤三：染色1.将纯棉织物完全浸泡在还原后的大蓝溶液中，确保织物彻底湿透。
2.取出织物，轻轻拧干，不要使其过于湿润。
3.将湿润的织物悬挂在通风良好的地方，等待氧化。
步骤四：氧化1.将湿润的织物悬挂在通风良好的地方，等待氧化。
2.等待数小时，直至织物逐渐变蓝。
步骤五：固色1.取出已经氧化的织物，以冷水冲洗，以去除未结合的颜料。
2.将固色剂溶液（如明矾溶液）浸泡在蓝染织物中，以固定颜色。
3.用清水冲洗织物，直至水清澈。
步骤六：晾干将蓝染织物晾干，确保颜料完全固定在织物上。
通过以上步骤，就可以进行台盼蓝染色实验，获得漂亮的蓝色织物。
补充说明：1.在进行实验中，需要注意安全，避免溶液溅入眼睛或皮肤。
2.在进行染色过程时，要尽量保持环境洁净，以避免杂质进入织物。
3.实验中使用的材料可以根据需要进行调整和替换，以探索更多的蓝染效果。
4.实验所述的步骤是一种基本的蓝染方法，实际应用中可能包括更多的步骤和技巧。
总结：台盼蓝染色实验可以帮助我们理解蓝染工艺的原理和步骤，从而更好地应用蓝染技术。
通过实验，我们可以亲自体验到蓝染的魅力，并了解到大蓝的还原性能和氧化过程，以及固色剂在蓝染工艺中的作用。
蓝染作为一种古老的染色技术，在现代仍然具有广泛的应用和价值，通过实验的学习和实践，我们可以更好地传承和创新蓝染技术。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理之答禄夫天创作台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，经常使用于检测细胞膜的完整性，还经常使用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不克不及够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最经常使用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，而且操纵非常简单。
实验步调：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保管。
使用时用PBS稀释至0.4%。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保管条件：室温保管。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操纵。
台盼蓝染色实验原理和步骤
For personal use only in study and research; not forcommercial use台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
For personal use only in study and research; not for commercial use.Nur für den persönlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwendet werden.Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales.толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях.以下无正文仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。
台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至
100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至0.4 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度0.04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理和步骤一、实验原理：台盼蓝(TAE)是一种经典的缓冲液，在DNA电泳中具有良好的缓冲性能。
而台盼蓝染料则是能够与DNA结合形成复合物，在紫外线下发出蓝色荧光。
实验通过台盼蓝染色将DNA可视化，从而测量DNA的存在和浓度。
二、实验步骤：1.准备实验材料和设备：-台盼蓝染色缓冲液(TAE缓冲液)-加载缓冲剂-DNA样品（待测样品）-DNA分子量标准品-DNA电泳仪-薄胶片-吸取器-紫外线照射器2.准备电泳槽：在电泳槽中注入足够的TAE缓冲液，以覆盖电泳槽的整个底部，然后添加加载缓冲剂到电泳槽中。
3.准备DNA样品：将待测样品和DNA分子量标准品分别加入到不同的试管中。
通常，待测样品需要经过DNA提取和纯化等预处理步骤。
4.加载样品：取一定数量的待测样品和分子量标准品，分别加入到电泳槽中的凹槽中，在同一凹槽中加入适量的台盼蓝染色缓冲液。
5.进行电泳：将电泳槽盖上，并将其连接到电泳电源上。
设置电压和时间参数，开始电泳过程。
6.取出胶片：电泳结束后，将胶片从电泳槽中取出，将其放在薄胶片上。
然后在紫外线照射器下观察胶片上的DNA带。
7.获得结果：根据DNA带的迁移距离和颜色强度，可以判断DNA的存在和浓度。
通常，DNA带的迁移距离与分子量呈反比，而颜色强度则与DNA的浓度成正比。
需要注意的是，实验过程中需要严格控制实验的环境和操作，以避免DNA污染和损伤。
总结：台盼蓝染色实验是一种常用的染色实验，可以用于检测DNA的存在和浓度。
通过将DNA样品与台盼蓝染色缓冲液混合后进行电泳，然后观察电泳胶片上的DNA带，可以得出DNA的存在和浓度。
实验准备工作较为简单，但实验过程需要严格控制环境和操作，以确保实验结果的准确性。
细胞生死状态的鉴定——台盼蓝法
4、根据染色结果计算活细胞率：
依据死细胞染成蓝色、活细胞不着色的原则计数死细 胞数和细胞总数，以如下公式计算细胞存活率： 活细胞率（%)=（细胞总数-死细胞数）/细胞总数 ×100%
五、注意事项
1、用乙醇清洁计数板及专用盖玻片，然后用绸布轻轻拭 干。 2、务必使细胞分散成单个细胞，趋于计数前，应充分混 匀细胞悬液。显微镜下计数时，遇到两个以上细胞组成的 细胞团。应按单个细胞计算。如果细胞团>10%。说明细 胞分散不充分。 3、台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则活细胞也会逐 渐积累染料而染成颜色，会干扰计数。最好在三分钟以内 计数。
作用,保护生物蛋白的结构及生物特性，一般的有活性的生物制剂都要 用它来稀释)
3、器材 载玻片、盖玻片、倒置相差显微镜、试管、培养瓶（皿） 、滴管、血球计数板
四、实验方法：
1、试剂配制：用生理盐水配制0.4%台盼蓝染液，备用。
称取4克台盼蓝，加入少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100毫升 ，用滤纸过滤，4℃保存。 使用液：使用时，用PBS稀释母液至0.4％即可。
正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之
不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的 通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色，通常认为细胞膜完整性丧
失，即可认为细胞已经死亡。
三、实验用品
1、材料 贴壁细胞 2、试剂 0.4%的台盼蓝染液、0.25%的胰酶、含10%血清的1640 培养液、PBS(磷酸缓冲盐溶液,一般作为溶剂，起溶解保护试剂的
细胞生死状态的鉴定 ——台盼蓝法
一、实验目的：
掌握血球计数板细胞计数法以及死活细胞鉴定 的原理和常用方法。
二、实验原理：
细胞死活鉴定的方法有很多种，常用的有染色法和仪 器分析法。染色法简便，易于操作。但是通过直接的形态 来鉴定细胞死活，实验结果很容易受主观因素的影响，存 在一定的误差，因此，在实际操作中也常用一些仪器来进 行精确的批量检测。 不同的鉴定方法有不同具体的反应机理，但都是利用 了死活细胞在生理机能和性质上的差异。 染色法分化学染色法和荧光染色法。 根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活 细胞着色。死细胞着色法（台盼蓝、氨基黑、赤藓红B） 、活细胞着色法（结晶紫、亚甲基蓝、甲苯胺蓝）。荧光 染色（吖啶橙-活细胞细胞核呈黄绿色或亮绿色荧光死细 胞细胞核呈红色荧光).
用台盼蓝拒染法计数活细胞
用台盼蓝拒染法计数活细胞:
1. 彻底混合细胞悬液，取100礚样本至一支试管中.
2. 台盼蓝染色有两种方法。
一是首先用细胞培养液稀释细胞样本，然后用台盼蓝溶液(产品号#07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）。
或者直接用台盼蓝溶液稀释样本。
例如：1/40稀释样本
加入50礚细胞悬液至950礚IMDM+2% FBS (1/20 稀释)，混合，然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。
或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。
3. 涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。
4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。
5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室。
6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。
7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室。
不要过满或不足。
8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞。
分别死细胞和活细胞。
死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏，细胞吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。
9. 活细胞计数按以下方法计算：
每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL
10.活细胞百分比计算方法如下：
活细胞数÷(活细胞数+死细胞数)x100 =活细胞百分比。
台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。
活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: ，可溶于水（10mg/ml)。
实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。
通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。
因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。
使用时用PBS稀释至 %。
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。
3、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
（终浓度%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。
2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
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材料：
1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管；
2. 试剂：0.4%台盼蓝染液；
3. 台盼蓝（Trypan blue）：0.4g；
4. 生理盐水：100ml；
操作步骤：
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；
2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞；
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液；
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）；
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min；
6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察；
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。
活细胞不着色并保持正常形态，有光泽；
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目；
9. 统计未染色细胞。
可按公式计算出细胞活率。
细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。
注意事项：
1. 染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使监测结果偏低；
2. 另可结合细胞计数方法，同时进行细胞计数和活力检测。