丝状真菌生长的测定
3微生物的生长1
壁的完整性和稳定性，有人认为这是因为细 胞壁在扩增过程中，肽聚糖层中双糖链是逐 步打开又逐步闭合的，因而在打开一层后， 其它几层仍保持其结构和功能的完整性。
细菌群体的生长
•由于细菌个体微小，难于测定其生长； •个体生长时间很短，很快就进入繁殖期，生长和 繁殖难于分开 因此通常是以群体数量的增加作为细菌生长的指 标。
在单细胞微生物中，细胞内的原生质和各种细胞结构 协调增加，细胞体积增大，这便是生长。 当细胞增大到一定程度时，细胞开始分裂，最后形成 两个基本相同的子细胞，这便是繁殖。生长的过程也 可以说是它的繁殖过程。
在多细胞的微生物中（如丝状真菌），如果细胞数目 增加的同时并不伴有个体数目的增加，那么此过程只 能称为生长，只有形成有性和无性孢子的过程才能称 为繁殖。
细菌群体的生长的测定方法：群体 生长表现为菌体数目的增多或细胞 物质的增加，所以群体生长的测定 都是围绕这两方面进行的。
测量菌体数目的方法有：
（1）显微镜直接计数法。
（2）稀释培养法。
（3）比浊法。
测量菌体细胞物质的方法：
（1）测定细胞的干物质。 （2）测定细胞的某种成分如氮的含量，DNA或
RNA的含量等。 （3）测代谢产物。以代谢产物作为生长量的指标， 只限于那些与生长有密切相关性的代谢产物才比较 正确（如测定乳酸菌的产酸量），因为并不是所有 的代谢产物都和生长有着准量的关系。
u
um
S Ks
S
Monod公式
Ks ：当u=1/2Um时的底物浓度，表示微生物对某 种限制性营养物的亲和力大小； S：底物浓度； U：比生长速率
反 应 速 度
底物浓度 比生长速率和限制性营养物浓度之间的关系
曲霉菌的实验报告
一、实验目的1. 了解曲霉菌的基本特征及其生长条件。
2. 掌握曲霉菌的分离、纯化和培养方法。
3. 分析曲霉菌在不同环境条件下的生长情况。
二、实验原理曲霉菌（Aspergillus）是一种广泛分布于自然界中的丝状真菌，属于子囊菌亚门。
曲霉菌具有丰富的种类，其中许多种类在食品、制药和生物技术等领域具有重要作用。
本实验旨在通过观察曲霉菌的形态特征和生长情况，了解其生长条件，为后续研究提供基础。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 曲霉菌菌种- 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基- 水浴锅- 灭菌锅- 显微镜- 纱布- 烧杯- 量筒- 移液管- 灭菌器2. 实验仪器：- 灭菌操作台- 高压蒸汽灭菌器- 紫外线消毒灯- 电子天平四、实验方法1. 曲霉菌的分离与纯化（1）取一小块曲霉菌菌种，用无菌镊子将其接种于PDA培养基平板中央。
（2）将平板置于28℃恒温培养箱中培养3-5天，待菌落长成后，用无菌接种环挑取单菌落，接种于新的PDA培养基平板上。
（3）重复步骤（2）2-3次，直至获得纯化的曲霉菌菌种。
2. 曲霉菌的培养与观察（1）将纯化的曲霉菌菌种接种于PDA培养基平板中央，置于28℃恒温培养箱中培养。
（2）定期观察曲霉菌的生长情况，记录菌落形态、颜色、质地等特征。
（3）利用显微镜观察曲霉菌的菌丝、分生孢子梗、分生孢子等形态特征。
3. 曲霉菌在不同环境条件下的生长情况（1）将纯化的曲霉菌菌种分别接种于不同温度（10℃、20℃、30℃、40℃）的PDA培养基平板中央。
（2）将平板置于恒温培养箱中培养，观察并记录曲霉菌在不同温度下的生长情况。
（3）重复步骤（1）和（2），分别改变培养基的湿度、pH值等条件，观察曲霉菌的生长情况。
五、实验结果与分析1. 曲霉菌的形态特征曲霉菌菌落呈放射状扩展，表面光滑，质地紧密，初期白色，后期逐渐变为灰白色或棕色。
菌丝细长，有隔膜，分生孢子梗直立，顶端产生分生孢子。
2. 曲霉菌在不同温度下的生长情况在28℃恒温条件下，曲霉菌生长旺盛，菌落直径可达5-7cm。
丝状真菌定量方法
丝状真菌定量方法
丝状真菌定量方法是一种用于测定样品中丝状真菌数量的科学技术方法。
以下列举了几种常用的丝状真菌定量方法：
1. 真菌培养方法：将样品接种在含有适宜培养基的培养皿中，以促进真菌生长。
经过一定时间后，可以通过观察菌落数量、形态和颜色的变化，来定量检测丝状真菌数量。
2. 过滤膜法：将样品通过过滤膜，然后将过滤膜置于含有适宜培养基的培养皿中。
经过一段时间后，可以通过观察过滤膜上真菌菌落的形成情况，来定量检测丝状真菌数量。
3. 分子生物学方法：使用分子生物学技术，如PCR（聚合酶
链反应）或实时荧光定量PCR，来检测样品中丝状真菌的特
定基因序列。
根据目标基因序列的检测结果，可以定量评估丝状真菌的存在情况和数量。
4. 基于荧光信号的定量方法：使用荧光标记的探针结合真菌特定的核酸或蛋白质分子，来检测样品中的丝状真菌。
通过读取荧光信号的强度或数量，可以定量评估丝状真菌的存在和数量。
以上所列举的方法仅为常用的丝状真菌定量方法之一，实际的选择应根据具体的研究目的和样品类型来确定。
发酵菌体生长的几种检测方法
发酵菌体生长的几种检测方法微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。
概述一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。
如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。
如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。
随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。
微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。
微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。
微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。
因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。
所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。
既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。
微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。
生长量测定法体积测量法：又称测菌丝浓度法。
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
5-真菌的生长
第五章真菌的生长菌丝生长生长时向四周呈辐射状延伸，所以真菌在培养基上通常形成圆形的菌落。
曲霉菌落青霉菌落菌丝变态一、丝状真菌的生长（一）菌丝顶端生长的泡囊学说1. 菌丝顶端细胞的超微结构◆顶部区域含泡囊(vesicle)，◆泡囊与细胞质膜相融合小的、易染色的或有折射力的小球，（三）顶端生长的驱动力泡囊向顶端迁移的原因是什么？对细胞质流、微管和电位势梯度的研究解释了泡囊移动现象第一，细胞质的流动驱使和带动泡囊移向顶端；第二，泡囊借助于顶端和亚顶端区域之间水的电位势梯度而驱动第三，在菌丝细胞中，微管与菌丝生长方向平行，因此，可能微管运输泡囊到菌丝顶端，如果菌丝顶端细胞有顶体的话，可能先运输到顶体部位，然后由顶体直接运动这些泡囊到质膜。
二、真菌的分枝生长（一）真菌的分枝与真菌分枝行为有关的现象大多数菌丝的分枝是在菌丝顶端之后的某一距离发生，而且新的分枝总是向前或朝向菌落的边缘，于是菌丝的整个系统像是松柏树枝，这一规律显示了真菌的顶端优势２、菌丝的顶端彼此分离使菌丝间充满间隙，这保证了菌丝对营养的要求，同时它们会从存活菌丝营养耗尽的区域撤离。
（二）分枝是如何产生的两种基本假设来解释分枝形成的模式泡囊和特殊的细胞质区段之间的电位势引起局部的泡囊积累；当菌丝顶端泡囊与质膜合并的速率低于泡囊产生的速率时，泡囊将大量积累，那么，一旦细胞质的体积超过临界量，过量的泡囊无论在菌丝的哪个部位，都将引起产生一个新的分枝生活史的类型芽体脱落之后，形成芽体的部位上新合成的壁像汽球膨胀一样裂殖开始之前，母体的一端或两端拉长，形成一个园柱体并进行A.一旦芽体形成，芽、母体相连的部位形成隔膜。
B-C.原生质膜和初生的几丁质隔膜向心生长。
D.葡聚糖-甘露聚糖的次生隔膜在芽、母体形成。
E.在隔膜分开时，初生隔膜残留于母体形成芽痕，次生隔膜残留于芽体胎痕。
几丁质仅在隔膜上出现，近年来注意的焦点是几丁质合成机理几丁质合成是在一个特殊部位和生活循环的特殊周期被触发的啤酒酵母中几丁质的合成是限定在原生质膜上，参与合成几丁质的酶是无活性的或是以酶原的形式存在于膜上认为泡囊携带激活因子与母体和芽体接合部这个部位几丁质合成酶被激活。
微生物生长的测定方法
微生物生长的测定方法作者：刘华来源：《神州·下旬刊》2013年第02期摘要：微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量（biomass）的变化来评价。
通过微生物生长的测定可以客观地评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响，或评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制（或杀死）作用的效果，或客观地反映微生物生长的规律。
因此微生物生长的测量在理论上和实践上有着重要的意义。
关键词：微生物测定方法计数法生理指标法微生物生长的测定有计数、重量和生理指标等方法。
1、计数法此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。
计数法又分为直接计数和间接计数两类。
⑴直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积l mm2和高0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被刻划成25个（或16个）中格，每个中格进—步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。
将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计算4-5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。
每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×l000×稀释倍数⑵间接计数法此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml 故人无菌平皿，再倒人适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放人适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。
微生物生长量的测定方法
2 微生物生长量的测定微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难测定，意义也不大。
通常测定微生物的生长是测群体的生长，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。
2.1测生长量测定生长量的方法有许多种，适用于一切微生物。
2.1.1直接法2.1.1.1测体积它是一种较为粗放的方法，通常用于初步比较用。
例如将待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。
2.1.1.2 称干重采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%~20%。
如用离心法，将待测培养液离心，再用清水洗涤离心1~5次后干燥，可用105℃、100℃或红外线烘干，也可在较低的温度（80℃或40℃）下进行真空干燥，然后称干重。
如细菌一个细胞一般重10-12~10-13g。
如为丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜进行过滤。
过滤后，细胞可用少量水洗涤，再真空干燥（40℃以下），称干重。
以乳酸菌为例，在液体培养基中，细胞的浓度大约为2×108个/ ml。
100 ml培养物可得10~70mg干重的细胞。
2.1.2间接法2.1.2.1生理指标法与生长量相平行的生理指标很多，它们均可用作生长测定的相对值。
1）测定细胞总含氮量来确定细菌浓度大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%。
总氮量与细胞粗蛋白的含量（因其中包括了杂环氮和氧化型氮）的关系可用下式计算：粗蛋白总量=含氮量%×6.25含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。
此法适用于细胞浓度较高的样品，同时操作过程也较麻烦，主要用于科学研究中。
2）含碳量的测定微生物新陈代谢的结果，必然要消耗或产生一定量的物质，以表示微生物的生长量。
一般生长旺盛时消耗的物质就多，或者积累的某种代谢产物也多。
将少量生物材料混入1ml水或无机缓冲液中，用2ml 2%重铬酸钾溶液在100℃下加热30分钟，冷却后，加水稀释至5ml，在580nm波长下测定光密度值（用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线），即可推算出生长量。
真菌的培养技术—真菌的培养方法
三、同步生长（Synchronous growth）
问题：如何研究在单个细胞的生理与遗 传特性。
同步培养: 使群体中的所有个体细胞 处于同样细胞生长和分裂周期中（即大 多数细胞能同时进行生长或分裂）的培 养方法。
同步生长往 往只能维持 2-3个世代， 随后又逐渐 转变为随机 生长。
三、霉菌菌丝的延伸过程 “菌丝尖端生长的泡囊假设”
顶端生长需要高尔基体、内 质网等细胞器参与。在菌丝的 亚顶端区富含内质网和核糖体 等细胞器。
细胞膜脂肪和蛋白质在亚顶 端区的内质网中合成后，通过 小泡囊转移到高尔基体的近侧 潴泡中，由高尔基体转向远侧 时，成熟而分泌泡囊。
分泌的泡囊从亚顶端区移向 顶端，泡囊与细胞膜融合形成 细胞膜。同时释放出细胞壁分 解酶与合成酶，分解酶使壁组 份间的键断裂，合成酶催化合 成新壁成分，并将其转移到壁 区形成新壁。
1. 延滞期（Lag phase），也称迟缓期、延迟期、适应期。
将少量菌种接入新鲜培养基后,在开始一段时间内菌数不立 即增加,或增加很少，生长速度接近于零。此时细胞特点可概 括为：分裂迟缓、代谢活跃。
该期的具体特点为： ①生长速率常数为零； ②细胞形态变大或增长，尤其是长轴最为明
显，许多杆菌可长成丝状； ③细胞内的RNA尤其是rRNA含量增高，原
生长： 微生物通过新陈代谢把营养物质转变成细胞物质，增 加个体重量的过程。
繁殖： 细胞生长到一定程度进行分裂，产生同亲代相似的子 代细胞的过程。
生长是一个逐步发生的量变过程; 繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程。
在高等生物里这两个过程可以明显分开，但在低等 特别是在单细胞的生物里，由于细胞小，这两个过程是 紧密联系又很难划分的过程。
普通微生物学课后习题及答案第六章
微生物的个体生长：指细胞物质有规律地、不可逆地增加，导致细胞体积扩大的生物学过程。
繁殖：引起生命个体数量增加的生物学过程。
微生物细胞数目的检测方法：显微直接计数法：用计数板在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。
活菌计数法：通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌的方法，计数依据是在稀释情况下一个菌落由一个活细胞繁殖形成，又称平板菌落计数法。
微生物生物量的测定方法：1、湿重法将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然后称重。
2、干重法将离心得到的细胞沉淀物置于100~105℃的烘箱中干燥过夜至水分去除，然后再称重。
3、比浊法细菌培养物在其生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增加。
在一定浓度范围内，悬液中细胞的数量与透光量成反比，与光吸收值成正比。
因此利用分光光度计在450nm~650mn的某一波长可以测定培养物的光吸收值来确定细胞量。
4、生理指标法与微生物生长量相平行的生理指标很多，可根据实验目的和条件适当选用。
一般微生物细胞的含氮量比较稳定，故可用凯氏定氮法等测定其总氮量，再乘以系数6.25即为粗蛋白含量。
蛋白质含量越高，说明菌体数和细胞物质量越高。
1、丝状微生物菌丝长度测定法将真菌接种在琼脂平皿的中央，定时测定菌落的直径或面积。
2、培养料中菌体生长速率测定法主要测定一定时间内固体培养料中菌丝体向前延伸的距离。
3、单个菌丝顶端生长速率测定法可利用湿室培养法对丝状微生物进行培养，定时将湿室中的培养有微生物的载玻片置于显微镜下，借助目镜测微尺测定一定时间内单个菌丝的伸长长度。
微生物的同步生长与同步培养方法同步培养法：使培养物中所有的微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法。
同步生长：指这种培养物中所有微生物细胞都处于同一生长阶段，并都能同时分裂的生长方式。
获得微生物同步生长的方法主要有两类：环境条件诱导法：采用物理或化学因子使微生物细胞生长进行到某个阶段停止下来，使先到该阶段的微生物细胞不能进入下个阶段，待全部群体细胞都到达该生长阶段后，再除去该因子，使全部群体细胞同时进入下个生长阶段，达到诱导微生物细胞同步生长的目的。
细菌和丝状真菌生长的特点
细菌和丝状真菌是两种不同类型的微生物，它们在生长特点上存在一些区别：
细菌的生长特点：
细菌是单细胞微生物，具有简单的细胞结构。
它们可以通过二分裂的方式进行繁殖，快速增加其数量。
细菌的生长速度相对较快，通常在适宜的环境条件下，可以在数小时到数天内繁殖成群体。
细菌的形态多样，包括球形、杆状、螺旋形等。
它们可以生长在各种环境中，包括土壤、水体、人体等。
细菌的生长对环境条件敏感，如温度、湿度、营养物质等。
它们对不同环境条件的适应性较强，可以生长在广泛的温度和pH范围内。
细菌的生长速度和代谢活动会产生代谢产物，包括酸性或碱性物质，有时会导致异味或腐败等现象。
丝状真菌（如霉菌）的生长特点：
丝状真菌是多细胞生物，由长丝和分枝组成，形成复杂的菌丝体。
丝状真菌的生长速度相对较慢，通常需要较长时间才能形成明显的菌落或菌丝网络。
丝状真菌的菌丝体可以穿透并侵入有机物质，如食物、植物、动物组织等，从中获取营养
丝状真菌的生长需要适宜的温度、湿度和营养物质。
它们对于不同的环境条件有一定的要求。
丝状真菌可以产生孢子，用于繁殖和传播。
这些孢子可以通过空气或其他载体传播到新的环境中。
细菌和丝状真菌的生长特点在不同的物种之间可能存在差异，同时它们的生长也受到环境因素的影响。
在实际应用中，了解微生物的生长特点有助于对其进行控制和管理，以维持环境的卫生和健康。
遗传实验2-2粗糙链孢霉生活史及
05 数据记录与分析 详细记录实验数据，ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ进行分析和总结。
04
实验结果和数据分析
实验结果
01
02
03
实验组1
在适宜条件下，粗糙链孢 霉生长良好，菌落形态正 常，颜色为灰白色。
实验组2
在不适宜条件下，粗糙链 孢霉生长受到抑制，菌落 形态变小，颜色为浅灰色。
对照组
未添加粗糙链孢霉的培养 基上未观察到任何菌落生 长。
生活史
无性繁殖
粗糙链孢霉通过无性繁殖产生分生孢子进行生殖，分生孢子在适宜的条件下萌发 形成新的菌丝。
有性生殖
粗糙链孢霉在某些条件下可以完成有性生殖，产生有性孢子。有性孢子的形成需 要两个不同性别的细胞结合，经过减数分裂产生单倍体核，再经过配对和分裂形 成有性孢子。有性孢子的萌发需要适宜的条件才能形成新的菌丝。
03
实验材料和方法
实验材料
粗糙链孢霉（Neurospora crassa）：作为实验材料， 粗糙链孢霉是一种常见的真菌，具有易于培养和遗传 操作的特点。
培养基：用于培养粗糙链孢霉的培养基有多种，如 玉米粉琼脂培养基、麦芽汁琼脂培养基等，可根据 实验需求选择适合的培养基。
显微镜、玻璃器皿、滤纸等实验器材：用于观察、 分离和培养粗糙链孢霉。
生殖方式
粗糙链孢霉通过无性繁殖产生 分生孢子进行生殖，每个分生 孢子可萌发形成新的菌丝。
生活环境
温度
粗糙链孢霉适宜在温暖的环境中生长，最适温度为2530℃，在10℃以下或35℃以上生长缓慢或停止生长。
湿度
粗糙链孢霉需要相对较高的湿度，一般在70%以上 的相对湿度下生长较好。
光照
粗糙链孢霉的生长不需要光照，黑暗条件有利于菌 丝的生长，而光照条件下有利于分生孢子的形成。
实验一：丝状真菌生长的测定
2）菌落生长速度的测定： ① PDA无菌平板，将待测菌株点接于培养基 平板上。 ② 每天测量菌落的半径 ③ 记载时间和生长量，在一定限度内生长量 与时间成直线关系。
3）直接生长速度的测定： ① PDA培养基倾注入“U形”培养管中，注入 培养基的量，达到培养管℃培养箱中培养；
实验一 丝状真菌生长的测定
一、概念
丝 状 真 菌 （ filamentous fungi ） ， 俗 称 霉 菌 （ mould, mold），通常指那些菌丝体较发达又不产生大型肉质子实体 结构的真菌。
一、测定方法 1）菌丝生长的测定：
① 马铃薯（PDA）培养基倒平板，冷却（无菌操作）。
配方：葡萄糖 20克 ，琼脂 20克，削皮马铃薯 200克煮汁 定容至1000ml，pH自然，115℃灭菌30分钟； ② 待测菌株点接于培养基平板中心，倒置28℃度培养； ③ 待菌落长出后，将平板翻置于显微镜镜台上，同时校对
③ 每日测定生长距离，并计算生长率。
三、结果记录： 1）每个方法作一张表格，记录每次不同时间丝
状真菌生长情况。
所用显微镜的目镜测微尺，并计算每一格的长度。在菌落边缘选 择单根菌丝的顶端在低倍镜下聚焦，然后将目镜测微尺与菌丝平 行，并选择菌丝开始出现侧枝的部位与目镜测微尺上的一条线重 合，这个点即为“参照点”。每隔一定的时间测量一次菌丝生长 的长度，观察数次后，根据时间和延长生长的长度划一条生长曲 线，并求出生长速度（毫米/小时）。
06-食品中酵母菌、霉菌测定
知识点：果汁中酵母菌、霉菌测定情境：微生物检测技术任务：酵母菌、霉菌测定课程：食品微生物技术酵母菌、霉菌测定原理一、霉菌、酵母菌什么叫霉菌、酵母菌？❞霉菌：为丝状真菌的统称。
凡是在营养基质上能形成绒毛状、网状或絮状菌丝体的真菌（除少数外），统称为霉菌。
❞酵母菌：一些单细胞真菌。
一种肉眼看不见的微小单细胞微生物，能将糖发酵成酒精和二氧化碳，分布于整个自然界，是一种典型的兼性厌氧微生物，在有氧和无氧条件下都能够存活，是一种天然发酵剂。
二、霉菌、酵母菌测定原理❞霉菌和酵母菌菌数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数（粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数）。
❞霉菌和酵母数主要作为判定食品被污染程度的标志，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
本方法适用于所有食品。
酵母菌、霉菌测定原理与菌落总数测定类似，选用平板菌落计数法。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
酵母菌、霉菌测定步骤1.液体样品稀释以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min～2min，制成1:10 的样品匀液。
2.梯度稀释❞取1 mL 1:10 样品匀液注入含有9 mL 无菌稀释液的试管中，另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸，或在漩涡混合器上混匀，此液为1:100 的样品匀液。
❞按上述操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
四、倒平板❞根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
微生物生长的几种检测方法
微生物生长的几种检测方法关于微生物生长的几种检测方法一、生长量测定法1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。
方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。
菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。
这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。
1.2称干重法：可用离心或过滤法测定。
一般干重为湿重的10-20%。
在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。
干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。
如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。
称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。
1.3比浊法：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。
通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。
对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。
将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。
该法主要用于发酵工业菌体生长监测。
如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。
1.4菌丝长度测量法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长二、微生物计数法2.1血球计数板法:血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1mm2面积上刻有400个小方格。
丝状真菌并提取真菌块的方法
丝状真菌并提取真菌块的方法
提取丝状真菌块的方法可以通过以下步骤进行：
1. 准备样品：选择含有丝状真菌的培养物或土壤样品作为提取材料。
2. 预处理样品：将样品在消毒柜中进行表面消毒，以去除外部的污染物。
3. 制备培养基：可以选择适合丝状真菌生长的培养基，如Saboraud（沙伯拉尔）培养基。
4. 接种培养基：将预处理后的样品均匀地均布在培养基表面。
5. 培养：将接种后的培养基置于适宜的培养条件下，如恒温箱中，在适当的温度（一般为25-30摄氏度）和湿度下培养。
6. 观察生长：观察培养皿中真菌块的生长情况，通常需要培养一段时间（如1-2周）以使真菌块足够生长。
7. 提取真菌块：使用无菌的工具（如托勒密式铲子），将生长良好的真菌块小心地取出，放入干燥的无菌小瓶或容器中。
8. 清洗真菌块：用去离子水或缓冲液轻轻地清洗真菌块，去除培养基的残留物。
9. 干燥真菌块：将清洗后的真菌块放置在无菌的过滤纸或无菌
网格板上，用空气流通的离心机或培养箱中适当的温度下干燥。
10. 存储：将干燥的真菌块存放在干燥、无菌的容器中，并储
存在低温（通常为4摄氏度）下，以防止真菌的进一步生长。
注意事项：
- 所有的操作必须在无菌条件下进行，避免污染。
- 在提取过程中要注意真菌的种类和特殊条件。
- 最好在有经验的实验室中进行提取和培养，以确保操作的准
确性和安全性。
实验一：丝状真菌生长的测定
所用显微镜的目镜测微尺，并计算每一格的长度。在菌落边缘选 择单根菌丝的顶端在低倍镜下聚焦，然后将目镜测微尺与菌丝平 行，并选择菌丝开始出现侧枝的部位与目镜测微尺上的一条线重 合，这个点即为“参照点”。每隔一定的时间测量一次菌丝生长 的长度，观察数次后，根据时间和延长生长的长度划一条生长曲 线，并求出生长速度（毫米/小时）。
每天测量菌落的半径每天测量菌落的半径每天测量菌落的半径每天测量菌落的半径记载时间和生长量在一定限度内生长量记载时间和生长量在一定限度内生长量与时间成直线关系
实验一 丝状真菌生长的测定
一、概念
丝 状 真 菌 （ filamentous fungi ） ， 俗 称 霉 菌 （ mould, mold），通常指那些菌丝体较发达又不产生大型肉质子实体 结构的真菌。
③ 每日测定生长距离，并计算生长率。
三、结果记录： 1）每个方法作一张表格，记录每次不同时间丝
状真菌生长情况。
2）菌落生长速度的测定： ① PDA无菌平板，将待测菌株点接于培养基 平板上。 ② 每天测量菌落的半径 ③ 记载时间和生长量，在一定限度内生长量 DA培养基倾注入“U形”培养管中，注入 培养基的量，达到培养管直径的一半，另一端用塞 子塞好；
② 凝固后从一端接种，置28℃培养箱中培养；
一、测定方法 1）菌丝生长的测定：
① 马铃薯（PDA）培养基倒平板，冷却（无菌操作）。
配方：葡萄糖 20克 ，琼脂 20克，削皮马铃薯 200克煮汁 定容至1000ml，pH自然，115℃灭菌30分钟； ② 待测菌株点接于培养基平板中心，倒置28℃度培养； ③ 待菌落长出后，将平板翻置于显微镜镜台上，同时校对
od值的测定[资料]
![od值的测定[资料]](https://img.taocdn.com/s3/m/8a5e7c9570fe910ef12d2af90242a8956becaa1f.png)
根据测OD时光的波长，波长在紫外范围就能够测，如果不在，就不能测量。
非常感谢细履平沙.哪位能说的具体一点啊,我想测枯草芽孢杆菌的OD,我不太知道是在多少nm下测,我看过一些文献,上面说细菌大概600nm,还是我自己摸索吸收波长啊?另外是测吸光度还是透光率啊,空白用培养基做吗.请高人指点,谢谢了.一般测菌体密度的OD的波长范围是580nm-660nm我们哪会儿测的(枯草芽孢杆菌)用600nm,已经属于可见光区空白如用水做,需要离心洗涤菌体,空白如用不接种的培养基做就不需要洗涤,但是不接种的培养基要和接种的同时培养,以求条件一致最后注意如果OD大于2.0,一般要稀释后再测,因为OD太大了,分光光度计的灵敏度就会显著降低一般都测吸光值，而且最好是整个实验过程中，保持发酵液或菌体的稀释倍数一致，吸光值与稀释倍数不一定成正比，可保证整个实验点有可比性一般OD值在控制在0 .1-0.4最好，在这个区内的值就可靠，最好不要超过1.0取值的时候要连续读数，重复3次的数最好。
测菌体密度的OD的波长可以自己摸出来，看看用哪个波长有最大吸收就可以了。
有合适的现场用的分光光度计推荐吗？要求只用作菌浓的OD值测定，哪种最便宜的分光光度计可以选择？DNA合成常见问题及解答Q: 怎样对合成DNA制品进行定量?A: DNA的量与260 nm处的吸光度值（OD值）成正比，因此使用紫外分光光度计定量是最科学的。
1个OD值的合成DNA的重量约为33 mg。
Q: 怎样理解测定的OD值?A: 进行OD值测定时，分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD 值。
当测定200 ml溶液中的OD值为1.5时，溶液整体的OD量应该为多少？此时的OD值= 1.5 OD/ml × 0.2 l = 0.3 OD。
Q: 合成Oligo DNA应怎样保存?A: 保存合成的Oligo应该注意以下几点：1. 干燥制品很稳定，常温下数个月无问题。
但为保证万无一失，放置于-20℃保存为好。
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菌体干重法：液体培养真菌的生长期完成后，过滤菌丝、洗涤、离心、烘
干、称量干重。这种测定法比较直接而可靠，但仅适用于菌体浓度较高的样品， 而且要求样品中不含有菌体以外的其它干物质。 菌体湿重法：也可以采用测定菌丝湿重法，把烘干步骤省去。但无论测定 干重或湿重，大都用于工业发酵过程的检测。 真菌的生长还可用间接的方法测定，如全氮量和核糖核酸的分析，一般干 的菌丝体含氮量是4.5-8.5%，核糖核酸是2.0-4.0%。另外，还可以分析培养基 中糖的消耗量、氧的吸收量等作为测定生长量的指标。这些方法大都是工业生 产中所采用的方法。
（三）直线生长速率的测定 这一方法使用并不广泛。它是在“Ｕ”形培养管中进行的。培养管长40厘
米，内径约1.3厘米，在两端5厘米处弯成45°角，如图所示。
在培养管中加入适量的溶化的琼脂培养基，达到培养管直径的一半，两端加 棉塞后灭菌。凝固后从一端接种，然后按时测定生长距离，并计算生验内容：菌丝顶端延长生长的测定 1．配制 PDA培养基，高压灭菌备用 2．制备PDA培养基平板，在平板中心点接黑根霉，于28℃培养15h左右。 3．用显微镜的镜台测微尺来校对目镜测微尺。镜台测微尺100格共长1mm，每
格为10μm，标定目镜测微尺上每小格表示多少μm。
4．将黑根霉平板放置于显微镜台上，在菌落边缘选择单根菌丝边缘，在低倍镜 下聚焦。 5．将目镜测微尺与菌丝平行，并选择菌丝开始出现侧枝的位置与目镜测微尺上
细胞质的泡囊起源于高尔基体，高尔基体、核、内质网一起存在于亚顶端部位。
1970年，Grove等人提出了菌丝顶端生长的泡囊假说：
二、菌丝顶端生长的机制 泡囊作用的三重性： 1. 运输细胞壁溶解酶去破坏原来壁 组成之间的键;
2. 运输新的壁物质，并在壁合成酶
的作用下并入细胞壁中，增加了 壁的面积; 3. 在生长期间增加了原生质膜的表 面积
2. 工业上常用菌丝干重法或湿重法来测定丝状真菌的生长情况，请简述之。
3. 除了实验中的方法外，还有哪些间接方法来测定丝状真菌的生长？ 4．丝状真菌顶端延长生长的机理是什么？
顶端生长被认为是细胞壁水解、壁 的合成和壁的膨压之间的动力平衡
三、顶端生长的驱动力 对细胞质流、微管和电位势梯度的研究都支持和解释了泡囊移动现象。 第一，细胞质的流动驱使和带动泡囊移向顶端； 第二，泡囊借助于顶端和亚顶端区域之间水的电位势梯度而驱动； 第三，在菌丝细胞中，微管与菌丝生长方向平行，因此，可能微管运输泡囊 到菌丝顶端，如果菌丝顶端细胞有顶体的话，可能先运输到顶体部位，然后 由顶体直接运动这些泡囊到质膜。
的一条划线重合，这个点即为“参照点” 。
6．每隔一定时间（分钟）测量一次菌的生长长度。 7．观察五次后，根据时间和延长生长的长度绘制延长生长曲线，并求出生长速 度（mm/h）： L×10-3×60 S=
S：速度
t
= mm/h
t：时间 （min）
L：长度 （μm）
五、实验报告
上述方法要求严格按操作规程及时观察，认真记录，在报告中分别绘制生长曲线， 计算出生长速度。 六、思考题 1. 丝状真菌生长量的测定与细菌、酵母菌单细胞生物生长量的测定有何不同？
一、直线生长的测定 直线生长的测定目前主要应用下述三种方法： （一）菌丝生长的测定 这一方法是将待测菌株点于培养基平板的中心，生长一定时间后，将平板置 于显微镜台上，同时校对所用显微镜的目镜测微尺，并计算每一格的长度。在
菌落边缘选择单根菌丝的顶端在低倍镜下聚焦。然后将目镜测微尺与菌丝平行，
并选择菌丝开始出现侧枝的部位与目镜测微尺上的一条划线重合，这个点即为 “参照点” 。每隔一定时间测量一次菌丝生长的长度，观察数次后，根据时间 和顶端延长生长的长度划一条生长曲线，并求出生长速度(毫米/小时)。
（二）菌落生长速度的测定 测定菌落的半径或直径来表示生长的快慢是比较简便的方法。定期测量一个 菌落，能够看出真菌生长的过程和变化。因为它不是一种很准确的方法，目前常 用来作为初步测定。 常用的方法是将待测菌株点种于培养基平板上，每隔一定时间测量菌落的半
径或直径。如以时间和生长量作曲线，在一定限度内生长量与时间成直线关系。
实验六
一、实验目的
丝状真菌生长的测定
学习和掌握丝状真菌生长测定的三种方法。 二、实验原理 通过三种测定方法观察丝状真菌的生长，验证丝状真菌顶端延长生长 的机理。
一、菌丝顶端生长的泡囊学说
卵菌纲
接合菌纲
有隔真菌 蜜环菌菌丝顶端区域，顶端原生 质膜凹入部位，即为泡囊与原生 质膜的融合
菌丝顶端泡囊排列的主 要类型