血小板抗原抗体检测及其临床应用(检验科) -

荧光显微镜 全自动设备，半自 或流式细胞仪 动设备 敏感性高 特异性不足 血小板交叉配型应 用最为广泛的方法
血小板抗体检测方法-固相凝集法
血小板抗体检测方法-固相凝集法 用途：
血小板抗体筛检，包括HLA抗体、HPA抗体及其它血小板反应
性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。
患者自身抗体检测，包括血小板结合抗体和血清中游离抗体。 检测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后，直
血小板抗原定型
1aa
2aa
3ab
4aa
5aa
6aa
7aa
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用途： （1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板献血员库。 （2）检测受者HPA基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其HPA基因型相 匹配的血小板供者。 （3）检测患者HPA基因型，辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输 血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。 （4）对特定区域或种族人群HPA基因分型，可为人类遗传学研究提供相关 资料和证据。
血小板抗体的产生方式
输血小板、红细胞（尤其 是没有滤白的红细胞） 怀孕 移植（骨髓、器官）
药物、自身免疫
以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上 的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。
血小板抗体与部分相关疾病
抗 体 分 类
同 种 抗 体 疾 病 格兰茨曼血小板功能 不全病 新生儿同种异体免疫 性血小板减少症 血小板输注无效症 同 种 异 体 抗 体 HPA1a(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36 HLA-I抗体50~80% ,HPA17~25%(日本人为HPA-2b), HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-5b HPA-1a,HPA-3,HPA-5b 多数位于GPⅡb/Ⅲa GPIb/IX/V，少数位于 GPIV/V 和 GPIa/IIa 同上 抗原位于GPⅡb/Ⅲa和 GPIb/IX 抗原表位是PF4 极少数为ABO抗体 HLA / HPA 抗 体 其 它 抗 体 抗GPⅡb/Ⅲa抗体
抗甲状腺微粒抗体（TMab）
抗甲状腺球蛋白抗体（TGab） 抗核抗体滴度检测
狼疮抗凝物质检测
血浆D-二聚体检测（D-Dimer） 抗β2糖蛋白I型抗体 抗精子抗体 抗磷脂抗体 血小板特异性和组织相关融性抗体检测（HPA+HLA I类）
检测时段方案（仅供参考）
检测人群 有流产史、不良 孕产史、不孕不 育史等患者 高龄、二胎产妇 孕前 √ 孕（12-14周） √ 孕（6个月） √ 产前 备注 √ 在任何检测 时段检测出 抗体阳性， 皆应采取相 应干预措施 ，并根据治 疗的进程建 议一个月复 查一次，只 到抗体消除 转阴为止, 然后每三个 月复检。
、HPA-2、HPA-3等系统。
HPA抗原
已确定了33个HPA，其中12 个抗原为双等位基因表 达（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高频率抗原命 名a，低频率抗原命名b。其余21个抗原为低频率抗原， 尚未发现对偶抗原，命名为bw。
单核苷酸多态性（SNP）:33个HPA中均已搞清楚基因 背景，其中32个HPA的多态性型是由一个氨基酸置换所 致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（GP）基因的一 个核苷酸的不同所致。 HPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发 生在 AAG1929-31。
接加入抗人IgG和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗
体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。
血小板抗体检测临床意义
1.主要应用科室：检验科，血液病科，妇产科，新生儿科。
2.检验科： 检验科在常规血型鉴定中加入血小板抗体检测，可对临床输血中出 现发热、黄疸、急性肺损伤等非溶血性输血反应的风险作出评估。
血小板输血后紫癜
被动同种异体免疫 性血小板减少症 移植相关同种异体 免疫性血小板减少症 自发性血小板减少症 继发于母体自发性 血小板减少症 奎宁/奎尼丁抗体 所致疾病 肝素抗体所致疾病
少数为抗GPIa/IIa抗体
自 身 抗 体
药物依 赖性抗 体
举例——NAIT
母体同种异体抗 体通过胎盘
母体同种异体免疫
5.新生儿科：新生儿血小板同种免疫性疾病的辅助诊断。
血小板抗体检测临床应用

妇产科领域 检验科常规血型鉴定检测（门诊血型）
自身免疫性疾病的辅助诊断
药物性抗体检测
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
青年女性流产率逐年上升 每一次怀孕、流产都可能造成母体因外来抗原刺激而 产生抗体，危及下一次妊娠。 如何在孕前/孕期正确地评估因父母血小板血型不合 引起的流产、NAIT的风险？ 曾有反复流产史的育龄妇女，可在怀孕前进行夫妻双 方的血小板相关抗体检测，对由于母婴血小板血型不 合而导致的流产或 NAIT进行早期的诊断和治疗。
HPA抗原
HPA抗原
血小板抗原定型
血清学定型

即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 缺点：特异性抗体来源困难 ---人血清中血小板抗体通常为多特异性 ---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗， 无其它HPA单抗。
基因定型

限制性片段长度多态性分析（RFLP） 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)
NAIT
NAIT
血小板抗体检测常用方法
指标
应用 范围
方法 功能性
试验 √ √ 低 不好 长 不定 未提及 抗体检测 交叉配型 灵敏度 特异性
酶标法 √
荧光法 √ √
固相凝集法 √ √ 高 较好 ＜1h
性能
高 好 ＞2h 酶标仪 特异性鉴定 的可靠方法
极高 一般 ＞2h
反应时间 所用仪器 16th版AABB评价
NAIT临床表现
FMAIT患儿病情变化较大，具有自限性，常在出生后 2-3周恢复。
轻度血小板减少患儿有时没有任何临床症状。病情较重患儿 临床表现为皮肤、体内外黏膜出血，出现紫癜、瘀点或瘀斑。
严重患儿可能发生颅内出血（intracranial haemorrhage， ICH），占10%。 与FMAIT相关的ICH 80%发生在子宫内，其中14%发生在妊娠20 周前，28%发生在妊娠30周前。

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结论： 在新生儿免疫性血小板减少症中，主要以父母血小板血型不合引 起新生儿同种免疫性血小板减少症为主，临床产前诊断预防和产后治疗具 有重要意义。
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
检测方案（仅供参考）
目前临床对不良孕产史查因、不孕不育查因、反复和习惯性流产查因多采用综合 检测方案排因如遗传因素、感染因素、免疫性因素等。血小板抗体检测可归类在免 疫性因素套餐中。 如深圳某三甲医院的免疫类检测套餐项目包括
血小板抗原抗体检测 及临床应用
长春博德生物技术有限责任公司 郭超
目 录 / contents
01
血小板抗原
02
血小板抗体与疾病
血小板抗体检测的意义和临床应用
03
血小板简介
血小板：D:2-5um V:红细胞*1/5 功能：促进止血和加速凝血 正常范围：100-300×109/L
骨髓干细胞
来源：
血小板
√
√
√
√
有自身免疫性疾 病史孕妇 正常孕妇
√
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√
√
√
√
结果解释
血小板抗体阳性，引起患者流产、死胎、不孕不育、NAIT等 相应疾病的风险极大。建议临床要采取干预和治疗措施。
可疑阳性，要对该患者给予风险提示，告知下次妊娠可能会 导致血小板抗体强度增强，从而引起相关疾病。可建议该患者推 迟怀孕的时间并以中医调理为主。
重。
血小板抗体检测临床意义
4.血液病科：
1）自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特 异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合 症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。 2）药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨 蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能，使血小板 的生成减少，同时应用某种药物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小 板膜上与补体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏血小板， 造成血小板破坏增多，从而引发血小板减少。
NAIT早期诊断与筛查
母体血清抗HPA抗体检测，然而母体抗体水平到 预产期时逐渐下降，约有30%的病例抗体阴性。
父母双亲的HPA基因检测，在高加索地区采取对 其HPA-1和HPA-5基因检测，而在亚洲地区应考虑进 行HPA-4和HPA-5基因检测。
父母双亲交叉配型实验，将母体血清与父亲血小 板进行交叉配型实验，即使不能确切知道不相合的 抗原，但这种方法也能发现母体是否存在血小板同 种异体免疫反应。
胞质块脱落
多功能祖细胞 巨核祖细胞 幼巨核细胞 巨核细胞
血小板形态
静息状态
活化状态
血小板抗原
血小板“非特异性”抗原
HLA-Ⅰ类抗原
ABH抗原
血小板“特异性”抗原
HPA抗原
HPA抗原
主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存 在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细 胞。 1990年国际输血协会血小板免疫学工作组提 出了HPA命名，以发现的时间顺序排列：HPA-1
血小板抗体检测临床意义
3.妇产科:孕前，孕期，产后
1).反复流产、不孕不育查因：对于反复和习惯性流产史（尤其是孕早期）和不孕不 育史的患者，检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平，可对其造成流产和不孕不育 的原因作出辅助诊断。 2).产检（尤其针对高龄和二胎产妇） 孕早期检测：在孕早期（三个月）产检中常规检测母亲与胎儿的血小板相容性，对于 孕早期出现流产和死胎的风险评价具有非常重要的意义 孕晚期检测：在孕晚期（胎儿出生前）检测母体血清或血浆中血小板抗体水平，对胎 儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病风险评价具有非常重要的意义。 3).妊娠期血小板降低的查因：孕妇在妊娠期血小板减少是一种常见现象，如是生理 性降低则危害不大，往往生产后会恢复正常。但如果血小板的降低是由于孕妇自身免 疫性疾病引起的则会引起流产、死胎、以及新生儿相关的血小板减少性疾病，危害严
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
血小板抗体检测在妇产科领域的应用 父母血小板血型不合引起新生儿同种免疫性血小板减少 症的初步研究

邓晶、夏文杰、叶欣、徐秀章、邵媛、陈扬凯、丁浩强、罗广平、王嘉励（广州 血液中心临床输血研究所）热带医学杂志 2012年11月第12卷第11期 文中观点： 通过收集22例临床上确诊为新生儿免疫性血小板减少症（NIT）的患儿为研究对象， 采用 ELISA 方法检测患儿及其父母的血小板相关抗体，应用 PCR-SSP法对患儿及 父母进行 HLA及HPA基因分型，根据相应的抗原进行抗体特异性分析。结果22例 NIT患儿中，14 例是由于同种免疫性因素引起的，其中 27.3％（6例)由 HLA抗体 引起,13.6％（3例）由HPA抗体引起，22.7％（5例）由HLA＋HPA 抗体引起 ；9.1 ％（2例）由于被动免疫性因素引起;27.3％（6例 ）由自身抗体引起 。其中,同 种免疫性抗体以抗 HLA-A2、19，抗-B40 及抗 HPA-3a多见。
胎儿血小板减少
胎盘屏障
YY
Y
Y
NAIT
胎母同种异体免疫血小板减少症（fetomaternal alloimmune thrombocytopenia，FMAIT）致病机理与新生儿溶血病（HDN） 相似，前者是由胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症， 后者为红细胞抗原不合引起的溶血性疾病。 由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生IgG型的抗血 小板抗体，该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原 的血小板结合，此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使 得胎儿血小板减少，出现瘀点和瘀斑，其严重者会导致神经系 统损伤（占已报道病例的20%）、10%出现颅内出血(死亡率近 100%）。 因多数病例在出生后才得以诊断，故此病也称作新生儿同种 异体免疫血小板减少症。 初次妊娠妇女即可发生FMAIT，其发病率大约为1/800-1500 。