血小板 抗原抗体检测
血小板免疫荧光步骤
血小板免疫荧光步骤
血小板免疫荧光是一种用于检测血小板表面抗原的实验方法，通常用于诊断自身免疫性血小板减少性紫癜（ITP）等疾病。
下面是血小板免疫荧光的一般步骤：
1. 样本准备，首先需要采集患者的血液样本，通常是静脉血。
采集后应立即进行处理，以避免血小板的活性丢失。
2. 血小板分离，将血液样本离心，分离出血小板。
这通常涉及到多次离心和去除其他细胞成分的步骤，确保最终得到纯净的血小板样本。
3. 标记抗体，选择与目标抗原特异性结合的荧光标记抗体。
这些抗体可以是单克隆或多克隆抗体，用于识别血小板表面的特定抗原。
4. 反应，将标记抗体加入已分离的血小板样本中，使其与目标抗原结合。
这通常需要在适当的温度和时间下进行反应。
5. 洗涤，反应后需要对样本进行洗涤，以去除未结合的抗体和
其他杂质。
6. 检测，将样本置于荧光显微镜下观察，或者使用流式细胞仪
等设备进行荧光检测。
通过荧光信号的强度和分布，可以判断血小
板表面抗原的表达情况。
7. 数据分析，最后需要对荧光检测的数据进行分析和解释，根
据结果判断患者是否存在血小板表面抗原的异常表达，从而辅助临
床诊断和治疗决策。
总的来说，血小板免疫荧光的步骤包括样本准备、血小板分离、标记抗体、反应、洗涤、检测和数据分析等环节，这些步骤需要严
格控制和操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
血小板抗原抗体检测与血小板输注的临床应用
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血小 板 抗 原 抗 体 检 测 与 血 小 板 输 注 的临 床 应 用
蒋利星 （ 西壮 族 自治 区桂 林 市 中心血 站 ５ １ ０ ） 广 ４ ０ １
抗 体 （ Ａ） 包 括 ＩＧ、ｇ ＩＡ 其 中一 项 出 现 阳 性 ， 为 血 小 Ｐ ， ｇ ＩＭ、ｇ 即
板 抗 体 检 测 阳 性 ， 且 其 量 往 往 与 外 周 血 的 血 小 板 数 量 呈 负 而
相关 。
人类 血 小 板 抗 原 系 统 有 多 种 ， Ｐ Ａ、 Ｏ、 ａ Ｙｕ 、 ｒ 如 １ Ｋ Ｂ Ｋ、 ｋ Ｂ 等 ， 中 Ｐ Ａ 系 统 是 最 常 见 的 引 起 新 生 儿 免 疫 性 血 小 板 减 少 其 １ 症 （ Ｉ ） 血 小 板 减 少 性 紫 癜 （ Ｉ 的 抗 原 系 统 ［ 。 有 研 ＮＡ ＴＰ 和 ＰＰ） １ ］ 究发 现 ， １ 等 位基 因 之 一 的 Ｐ Ａ ＰＡ １ ２基 因 与 血 栓 形 成 有 关 Ｌ 。 ２ ］
一பைடு நூலகம்
血小 板 表 面具 有 复 杂 的血 型抗 原 ， 些 抗 原 是 由遗 传 因素 决 定 这
的 。通 常 将 血 小 板 血 型 抗 原 分 为 两 大 类 ， 一类 是 存 在 于 血 小 板 膜结 构 糖 蛋 白上 的特 异 性 抗 原 ， 即人 类 血 小 板 抗 原 （ Ａ） 另 ＨＰ ；
缺 陷 患 者 的 出 血 ， 年 来 在 Ｉ 上 的使 用 日益 普 及 。但 是 部 分 近 临床 患 者 在 多 次输 注 血 小板 后 可 产 生 血 小 板 相 关 抗 体 ， 致 血 小 板 导
血小板抗体检查及配血操作规程
【口的】Capture-?®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。
进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用，也可以多个使用。
未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* OCapture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。
血小板抗体检测意义
血小板抗体检测意义因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注，成为临床亟待解决的问题。
血小板抗体检测（或筛选）包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。
白细胞、血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要原因，非溶血性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应，文献报道输注红细胞为2～6％，输注血小板为20~30%，多次输血患者高达27％～63％，而非溶血性发热性输血反应与血小板抗体密切相关,是影响临床安全输血的严重因素。
血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意义.（一）输注红细胞悬液：1。
血小板抗体检测阳性患者的非溶血性发热反应明显高于血小板抗体检测阴性患者；血小板抗体检测阳性患者经干预后非溶血性发热反应明显下降。
2。
干预措施：1）建议使用去白的红细胞（血库型或床旁型白细胞滤器）2)建议使用洗涤的红细胞3)使用药物（二）输注血浆：1）输血性急性肺损伤（transfusion related acute lung injury，TRALI)：文献报道，输血后发生的一系列严重呼吸窘迫病，其80%病例输入的血液中含有血小抗体。
研究已经证实：血小板抗体是引起TRALI的重要因素之一.上海市血液中心杨颖教授认为中国免疫性TRALI发病虽少，但严重型较多。
2）不同国家TRALI发生\死亡率UK SHOT 德国丹麦法国加拿大1996-2003 1995 –2002 1999 –2002 1994 –19982000 –2003例数139 101 6 34 21发生率％7 3 7 0-15 0-5死亡率％9 NR NR 20 9 检测患者、供者血液的血小板抗体是可行的、必要的，目的是进一步保证输血安全。
（三）输注血小板临床血小板输注无效发生率为30％～70％,其中免疫因素引起的血小板输注无效约为20%。
血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因，文献报道20～80％多次输血的患者出现免疫性血小板输注无效，血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费,同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。
血小板抗体检测 宣传
血小板抗体检测项目（固相凝集法）一、基本原理：血小板抗体检测是检测患者血清中是否存在针对血小板的免疫性抗体，包括三类：1.ABO血型系统和HLA系统产生的血小板相关抗体，2.血小板特异性抗原（HPA）产生的特异性抗体，3.药物所致的血小板抗体二、血小板抗体检测的临床应用(一)在临床辅助诊断中的作用1、特发性血小板减少性紫癜（ITP）：ITP的临床症状很重要，但仍为排除性诊断。
如结合血小板抗体检测，则对ITP的确诊有重要价值。
2、血液系统疾病辅助诊断：对白血病、再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合症、溶血性贫血、新生儿血小板减少症有辅助诊断意义。
3、孕期流产风险评估：血小板抗体筛查可对孕期流产风险做出评估，尤其适用于有多次妊娠史、习惯性流产史以及不孕不育情况查因。
（二）在临床输血治疗中的应用1、预防红细胞输注中非溶血性发热反应：血小板抗体阳性患者输注红细胞悬液后发生非溶血性发热反应明显高于阴性者，对于血小板抗体阳性采取干预措施后非溶血性发热反应明显降低，极大提高了输血的安全性。
2、预防血小板输注无效：血小板抗体是引起免疫性血小板输注无效最重要的原因，特别是多次输血后出现的血小板输注无效。
检测血小板抗体对提高血小板治疗效率和保证输血安全有重要意义。
三、血小板抗体检查的筛查对象1、血液肿瘤科病人：评价患者体内血小板抗体水平，辅助诊断血液系统疾病：如白血病、再障、溶血性贫血、血小板减少性疾病、骨髓异常增生综合症。
2、需治疗性输注血小板患者：特别是需多次输注血小板患者，建议提前筛查血小板抗体，防止血小板输注无效。
3、妇产科孕检：评价孕期流产风险，尤其适用于有多次流产史患者查因。
四、血小板抗体在临床病例中的验证。
血小板抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
1目的为规范血小板抗体检测操作，保证检测的有效性及临床用血的安全性，依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。
2适用范围适用于医疗机构输血科（血库）进行血小板抗体检测。
3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。
4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体（针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX），血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。
加入受检血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体和反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗IgG及IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
5设备与材料5.1材料血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）。
5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。
6检测环境室温应控制在18-25℃，湿度应控制在30%-70%。
7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1检测样本准备7.1.1.1采集患者静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或枸橼酸钠抗凝，经3000rpm离心5分钟，分离出血浆进行检测。
7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血，经3000rpm离心5-10分钟，取上清进行检测。
7.1.1.3如果患者血标本为血浆（血清），3000转离心5-10分钟。
7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。
若需长期保存，应离心后分离血清或血浆，－20摄氏度冻存。
7.2平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。
7.3制备血小板悬液7.3.1商品化的冻干血小板稀释后直接使用。
医院检验中心血小板抗体测定PAIgGPAIgMPAIgA操作规程
医院检验中心血小板抗体测定（PAIgG，PAIgM，PAIgA）操作规程
（1）试剂
1）鼠抗人IgG多抗 cat NO 0279 蒸馏水复溶后分装，每支50ul，置-30℃贮存
2）鼠抗人IgM多抗 cat NO 0285 同上3）鼠抗人IgA多抗 cat NO 0278 同上4）FITC羊抗鼠荧光单抗 cat NO 0279 按说明书复溶，置-30℃贮存
（2）方法
血小板固定：取富含血小板的血浆0.4ml加1mlTEN缓冲液中。
再取上述稀释血浆0.4ml加等量2%的多聚
甲醛，室温固定15分钟。
洗涤：在已固定的血小板试管中加2mlTEN缓冲液，3000转/分，离心5分钟，洗涤2次。
弃上清液，加TEN
缓冲液0.4ml。
测定：测定管中分别加入IgG、IgM、IgA单抗50ul，将固定血小板50ul分别加入测定管和对照管。
室温
20分钟，用2mlTEN 3000转/分离心5分钟洗涤一
次后，再加0.6mlTEN。
上机：用各自的阴性对照。
阴性对照值在1.0左右，计数1万个血小板。
( 3 ) 参考范围
PAIgG 6.3-20.3%
PAIgM 2.6-14.5%。
血小板抗体常用的检测方法
血小板抗体常用的检测方法
嘿，咱今儿就来唠唠血小板抗体常用的检测方法。
你说这血小板抗体啊，就像是身体里的小调皮鬼，得把它们给找出来才行呢！
先来说说这酶联免疫吸附试验吧，这就好比是个超级侦探，能把那些隐藏的血小板抗体给揪出来。
它通过一些巧妙的反应和检测，让抗体无处可逃。
你想想，就像是在一个大迷宫里，这个试验就是那个能找到正确路径的指南。
还有这固相红细胞吸附试验呢，它就像是个精准的捕捉器。
血小板抗体一旦出现，它就能紧紧抓住，绝不放手。
就好像是个厉害的猎人，等着猎物上钩呢。
淋巴细胞毒试验也不能小瞧呀！它能像个敏锐的检察官一样，仔细检查每一个可能有问题的地方，不放过任何一个可疑的血小板抗体。
这可真是厉害得很呢！
流式细胞术呢，就像是个高科技的扫描仪，快速又准确地扫描着，把那些血小板抗体都给识别出来。
它可真是个厉害的角色呀！
咱再想想，要是没有这些检测方法，那得有多麻烦呀！医生们就像是在黑暗中摸索，不知道该往哪里走。
但有了这些方法，就像是点亮了一盏盏明灯，指引着前进的方向。
你说这些检测方法是不是很重要？它们就像是身体的卫士，守护着我们的健康。
我们得感谢那些发明和完善这些方法的科学家们，是他们让我们能更好地了解自己的身体。
所以呀，可别小看了这些血小板抗体常用的检测方法，它们可是在背后默默为我们的健康努力着呢！这就是关于血小板抗体常用检测方法的事儿，咱可得记住啦！。
血小板抗体检测的意义及检测技术的研究进展
血小板抗体检测的意义及检测技术的研究进展作者：付谦来源：《中国社区医师》2018年第25期摘要长期多次输血维持治疗的患者极易产生血小板相关抗体，从而导致许多严重并发症的发生。
文章对血小板抗体检测在输血中的重要意义、血小板杭体检测技术两个方面作一综述。
关键词血小板抗体;检测;输血随着输血医学研究的不断深入，成分输血越来越广泛地应用于临床，输注血小板成为一种重要的临床输血治疗手段，尤其是对治疗血小板缺乏引起的出血倾向、血小板功能性障碍具有重要价值。
但临床上常面临的问题是血小板输注无效或效果欠佳，其主要原因可能为患者体内产生了大量血小板抗体，对外来血小板造成破坏m，特别是长期多次输血维持治疗的患者极易产生血小板相关抗体，从而导致许多严重并发症的发生，如血小板输血性紫癜、血小板输注无效、重度出血等，给临床治疗带来了难度，并且对血液资源造成了严重浪费。
因此，输血前进行血小板抗体检测对于有效改善输血效果，特别是提高血小板输注效果显得尤为重要。
本文对血小板抗体检测在临床输血中的重要意义及国内几种常用检测技术的研究进展作一综述。
血小板抗体检测在输血中的重要意义血小板抗原、抗体：人类血小板表面的抗原系统较复杂，可以分为两类：①血小板自身特有的抗原，如GP、HPA等;②与其他机体组织或细胞共有的抗原，如HLA-Ⅰ、ABH等。
无论是共有抗原或自身抗原，都能够刺激机体产生异常免疫反应，产生大量血小板抗体，这是血小板输注无效的首要原因。
致使外来血小板破坏增多、功能减低、寿命缩短，特别是在多次输血患者中，55%的患者会出现PTR或（和）PTP[2]。
血小板抗体的产生是由血小板表面不同的相关抗原决定簇引起的一组复杂的免疫性疾病。
血小板抗体包括针对GP抗原的血小板特异性抗体（PB IgG）和针对HLA-Ⅰ类抗原的血小板表面相关抗体（PA IgG）两类。
随着患者输注血小板次数或输注量的不断增加，体内血小板抗原被不断刺激，导致体内血小板抗体水平上升，引起输注无效及非溶血性输血的可能性也相应增高。
血小板抗体检测方法及配型应用与血小板输注的疗效
世界最新医学信息文摘 2019年 第19卷 第95期203投稿邮箱：zuixinyixue@·医学检验·血小板抗体检测方法及配型应用与血小板输注的疗效窦广刚（苏州弘慈血液病医院 检验科，江苏 苏州 215000）0 引言血小板输注是当前临床治疗各种恶性肿瘤或者血液性疾病放化疗的重要支持治疗方法，Rh 血型以及ABO 血型同型输注是当前临床常用的血小板输注制品，但是部分患者在骨髓移植、妊娠、输血之后，会产生HPA （人类血小板抗原）、HLA （人类白细胞抗原）抗体，造成血小板输注无效[1]。
临床有研究表明：将近30-70%的慢性血小板减少患者在接受多次输血之后，会出现血小板输注无效、紫癜等，病情严重的患者会出现DIC （弥漫性血管内凝血）、颅内出血等，对患者生命安全构成巨大威胁[2]。
由此可知，对于血小板输注患者在输注之前进行血小板抗体检测，根据检测结果进行配合性血小板输注，对于提升血小板输注临床疗效意义重大。
鉴于此，本文纳入本院2017年1月至2019年1月接受的200例输注血小板治疗者，回顾性分析上述病例临床资料，现将具体研究情况汇报如下。
1 资料与方法1.1 一般资料。
本次研究从2017年1月至2019年1月，纳入该时间段内本院接受的200例输注血小板治疗者，将无输血史100例作为甲组，有输血史100例作为乙组。
甲组女性、男性病例数之比分别是42:58，年龄在3-74岁，平均（38.52±6.25）岁。
乙组女性、男性病例数之比分别是44:56，年龄在4-73岁，平均（38.49±6.21）岁。
一般资料两组相比，P>0.05，可比较。
1.2 方法。
仪器、试剂：TD5 台式低速离心机、血球计数仪（型号：BC6900；生产企业：深圳迈瑞科技有限公司），试剂均由长春博德生物技术有限责任公司提供。
血小板抗体检测：①制备血小板悬液：对冻干血小板稀释处理之后，即可直接使用，浓度在50-150×109，贮于塑料容器中，在20-25℃环境下保存8 h 待检。
血小板血型抗原抗体检测的临床应用
证合适 的潮气量 。压 力调 节容 量通气 模式 是 近年来 治疗 新 生儿 呼吸衰竭的有效通气模式 ， 结合 了容量控 制通气 与压力
控制通气优 点的智能通气模式 ， 是在确 保预先设 置 的潮 气量
等参 数 的基 础上 ， 呼吸机 能够 自动连续 测定 胸廓／ 肺 顺应 性
和容７ ， ／ 压 力关 系 ， 与此同时 ， 可反 馈调节 下一次通 气时 的压
儿肺出血 ４ ２例的疗 效观察 ． 广西医学 ， ２ ０ ０ ８ ， ３ ０ （ ７ ） ： ９ ９ ０ － ９ ９ １ ．
血 小 板 血 型 抗 原 抗 体 检 测 的 临床 应 用
张 关亭 张爱琴
【 摘要 】 目的 分析血 小板 血型抗 原抗体检测 ， 对输 注血小 板无效 的治疗效 果。方法 检测 血小 板血型抗原抗体 ， 采用 白血病滤器输注 同型机 采浓缩 血小板 ； 检测 输注前 、 后１ ｈ 、 ２ ４ ｈ血小板计 数。结 果 本组 ４ ６例 ， １小时后有效 ４ １ 例（ ８ ９ ． １ ３ ％） ， 无效 ５例 （ １ ０ ． ８ ７ ％） ； ２ ４小 时后 ， 有效 ３ ８例 （ ８ ２ ． ６ ０ ％） ，
参 考 文 献
［ １ ］ 刘 春峰． 危 重症 患 儿 呼吸 机 应用 策 略． 实用 儿 科 临床 杂 志 ，
２ ０ ０ ８ ， ２ ３ （ ６ ）： ４ ０ １ － ４ ０ ２ ．
［ ２］ 邓毅 ， 张华 ， 谭嫒 ． 机 械通气联 合 气管 内给予 凝血 酶治疗 新生
足 或通气过度情况 ， 进而 导致 高通气 或肺 通 气不 良， 很难 保
癌放 化疗后 ７例 ， 血小板 无力 症 ３例 ， 尿 毒症 ８例 。输 血 次
五种血小板抗体检测方法的比较及其优化
磊铆戈学同等学力申请硕士学位论文（２００５届）五种血小扳抗体检测方法的比较及其优化Ｃｏｍｐａｌａｔｉｖｃｓｔｕｄｉｅｓｂｙｆｉｖｅｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｍｏｄｉｆｉｃａｄｖｅａｐｐｌｉｃａｌｉｏｎ０１１ｄｃｔｃｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ周晓华研究生姓名指导教师捌名申请学位级别专业名称——鱼——垂——堂—一研究方向血液免症论文提交日期２００５年１０月五种血小板抗体检测方法的比较及其优化第一部分２．１标本制备实验中所需血小板悬液采用本单位多人份Ｏ型献血员机采血小板，经ＴＥＮ洗涤两次后备用；患者标本及对照标本分离取血浆。
２．２ＭＡＳＰＡＴ法检测ＭＡＳＰＡＴ法也即单克隆抗体固相血小板抗体实验，其操作如下：调整血小板悬液为不低于Ｏ．１４×１０８／Ｌ。
向微孔中加入５０ｕｌ血小板悬液，１０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ。
用ＰＢＳ洗涤６次，每次洗涤时旋转并轻摇微孔板。
加入２滴ＬＩＳＳ试剂，再加入５０川被检血浆，轻摇１０ｓｅｃ，３７。
Ｃ孵育３０ｍｉｎ。
用ＰＢＳ洗涤６次，立即加５０ｌａｌＭＡＳＰＡＴ抗人ＩｇＧ，并加入１滴指示细胞，轻轻震荡，１０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ看结果。
如果指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，如果指示红细胞结合到血小板层上，表示阳性结果。
见图１．２所示图１．２ＭＡＳＰＡＴ法检测血小板抗体结果（指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，指示红细胞结合到血小板层上平铺散开，表示阳性结果。
）２３４５６图２．２两种微柱凝胶法改良方法检Ｎｎｍｄ，板抗体效果比较图（１、２为阴性对照，３、４为改良方法Ｉ所得结果，５、６为改良方法ＩＩ所得结果）结果微柱凝胶法的结果判读：如红细胞凝集在胶表面或凝胶中，则结果为阳性，如红细胞沉降于凝胶管底部，则结果为阴性；ＭＡＳＰＡＴ法结果判读：如果指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，如果指示红细胞结合到血小板层上，表示阳性结果。
微柱凝胶原检测法及两种改良方法与ＭＡＳＰＡＴ法的结果比较见表２．１、表２．２。
血小板抗体检测专家共识
血小板抗体检测专家共识关键词：血小板抗体临床输血专家共识2016年7月25日，经国家标准化管理委员会批准，输血医学增设为临床医学二级学科。
输血医学的重要职能就是保障和指导临床安全、科学、精准输血，减少输血不良反应。
血小板具有复杂的抗原系统，包括与其它组织或细胞所共有的抗原，如ABO血型系统抗原和人类白细胞抗原（HLA）；血小板特异性抗原（HPA）；与单核/巨噬细胞及有核红细胞共有的GPⅣ/CD36抗原等。
妊娠、输血、器官移植等均可诱导机体产生血小板抗体，包括HLA抗体、HPA抗体和CD36抗体等。
这些抗体可以引起免疫性血小板输注无效（PTR）、胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（FNAIT）、非溶血性发热反应（NHTR）、输血后紫癜（PTP）等。
红细胞抗体已经成为临床输血前免疫学检测的常规项目，而输血前血小板抗体检测并未得到临床充分重视。
目前，血小板输注的策略主要采用随机输注方式，反复输血及多次妊娠者容易产生血小板抗体，引起PTR、FNAIT等疾病，以及NHTR、PTP等输血不良反应。
为保障临床输血安全和疗效，预防PTR和输血不良反应，节约血液资源，诊断血小板抗体相关免疫性疾病，现形成血小板抗体检测专家共识，内容如下。
1 血小板抗体检测的临床意义1.1 免疫性血小板输注无效（PTR）诊断：血小板抗体是免疫性PTR的主要原因。
一般患者输注血小板后血小板抗体的阳性率为8.2%～60.0%，肿瘤患者和干细胞移植患者血小板抗体阳性率为12.6%～ 66.0%[8-10]，这些抗体是导致免疫性PTR的主要因素。
对患者进行血小板抗体筛查和鉴定，可以诊断免疫性PTR。
对血小板抗体阳性患者输注血小板交叉配合的血小板，可有效预防免疫性PTR。
1.2 HLA抗体导致NHTR诊断：NHTR在输血反应中占比最大，输注红细胞的NHTR的发生率约为0.08%～6.0%，输注血小板NHTR的发生率可高达20.3%～70.0%。
血小板抗体检测及配型
血小板抗体检测及配型
一、血小板抗体检测的意义
血小板表面存在众多复杂的血型抗原，主要有血小板特异性抗原(HPA)以及相关抗原(HLA-A、B位点和ABO抗原)。
通过输血、妊娠或骨髓移植等免疫刺激产生同种血小板抗体(HPA、HLA抗体)。
血小板抗体是造成同种免疫性血小板减少症的直接原因。
1.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和交叉配型试验，能够提高血小板输注效率，预防或减少血小板输注无效发生。
2.查找输血不良反应原因：有助于输血中出现发热、黄疸、肺损伤等非溶血性输血反应原因查找。
3.自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如特发性血小板减少性紫癜等。
二、血小板抗体检测及配型对孕产妇的临床意义
1.孕前和孕期：可对孕期流产风险作出评估，尤其对于有多次妊娠史、习惯性流产史（孕早期）以及有自身免疫性疾病的育龄妇女。
2.妊娠期：有助于鉴别妊娠期相关性血小板减少症和妊娠期特发性血小板减少性紫癜，以提高血小板输注的有效率。
3.产前：在胎儿出生前检测母体血清或血浆中抗体水平，尤其鉴定是否存在针对丈夫血小板抗原的抗体，对胎儿出生后罹患新生儿血小板同种免疫性疾病风险评估具有重要意义。
三、检测方案和流程。
固相凝集法检测血小板抗体原理
固相凝集法检测血小板抗体原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊固相凝集法检测血小板抗体这档子事儿。
你说这血小板抗体啊，就像是身体里的小“捣蛋鬼”，要是没被咱及时发现，那可能就会惹出不少麻烦呢！而固相凝集法呢，就像是一个厉害的“侦探”，专门来把这些“捣蛋鬼”给揪出来。
想象一下哈，这个固相凝集法就像是一场精彩的“捉迷藏”游戏。
我们把带有血小板抗原的固相载体当成是一个“秘密基地”，然后把我们要检测的样本加进去。
这时候，如果里面有血小板抗体这个“小调皮”，它就会被“秘密基地”给吸引住，然后紧紧地黏上去，这不就被我们发现啦！这过程可神奇着呢！就好像我们在茫茫人海中一下子就找到了那个特别的人一样。
而且这个方法特别靠谱，它能很准确地告诉我们有没有血小板抗体的存在。
比如说吧，要是有人经常出现血小板减少的情况，那我们就可以用固相凝集法来检测一下，看看是不是这些“捣蛋鬼”在捣乱。
要是真的检测出来了，那我们就能赶紧想办法对付它们，让身体重新恢复健康。
这就好比我们家里进了老鼠，我们得赶紧找到它们的踪迹，然后想办法把它们赶出去或者抓住，不然家里可就不得安宁啦！固相凝集法就是我们找这些“老鼠”的好工具。
它操作起来也不难，只要按照步骤一步一步来，就像我们做一道熟悉的菜一样。
先准备好各种材料，然后按照特定的方法去处理，最后就能得到我们想要的结果。
而且啊，这个方法还很灵敏呢！哪怕只有一点点的血小板抗体，它也能察觉到。
这就像一个超级敏锐的“小雷达”，任何细微的变化都逃不过它的“法眼”。
咱可别小看了这个固相凝集法检测血小板抗体的原理，它可是在医学领域有着很重要的地位呢！它能帮助医生们更准确地诊断疾病，为患者提供更好的治疗方案。
这难道不是很了不起吗？总之啊，固相凝集法检测血小板抗体原理就像是一把开启健康之门的钥匙，让我们能更好地了解自己的身体，及时发现问题并解决问题。
所以啊，大家一定要好好了解它，说不定哪天就能派上大用场呢！这可不是开玩笑的哟！。
血小板 抗原抗体检测
血小板抗原抗体检测什么是血小板？血小板又称为血小板细胞，是一种无核的细胞碎片，主要功能是协助止血和凝血。
在血液中的数量通常是150,000到450,000个/微升，以细胞碎片的形式存在于血液中，通过骨髓细胞不断增生来保持血小板数量的平衡。
血小板在凝血过程中起到关键的作用，它们会迁移至受损的血管壁，然后与其他血小板和蛋白质一起形成血栓，堵住受损的部位防止进一步出血。
什么是抗原和抗体？抗原是指触发人体免疫系统反应的物质，包括细菌、病毒、真菌、肿瘤等。
当免疫系统侦测到它们时，会产生抗体来攻击这些物质。
抗体是由免疫系统产生的一种蛋白质，其特异性与抗原相对应。
当免疫系统产生抗体之后，抗体会结合到相应的抗原上面，从而促进细胞递送并消灭被抗体结合的物质。
为什么要进行血小板抗原抗体检测？血小板抗原抗体检测是用于分析血液样本中抗体和抗原的存在情况的实验室检测。
该检测通常用于两个主要的目的：1.诊断凝血障碍：一个常见的例子是自身免疫性血小板减少症（ITP），这种疾病导致人体免疫系统攻击自身的血小板，引发低血小板计数和出血。
血小板抗原抗体检测可以帮助诊断这种疾病，从而安排相应的治疗方案。
2.确定血型：血小板抗原抗体检测也可以用于确定个人的血型，这对于无论是进行输血还是移植都是非常重要的信息。
如何进行血小板抗原抗体检测？血小板抗原抗体检测通常需要一份血液样本。
在实验室中，会使用不同的试剂来检测特定的抗原和抗体。
检测结果会被记录下来，以便将来参考。
血小板抗原抗体检测的常见问题：1.血小板抗原抗体检测是痛苦的吗？因为血小板抗原抗体检测需要采集血液样本，因此可能会引起少许疼痛或不适。
但是，采集血液只需要很少的时间，这种不适通常不会持续很久。
2.血小板抗原抗体检测是否需要特殊准备？通常不需要特殊准备。
建议避免在检测前吃过多的食物，并避免饮用咖啡或茶。
此外，如果正在服用任何药物或服用保健品，请在检测前通知医生。
3.血小板抗原抗体检测的结果需要多长时间才能出来？血小板抗原抗体检测通常需要几天时间即可出结果。
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自身 抗体
被动同种异体免疫 性血小板减少症
移植相关同种异体 免疫性血小板减少 症
自发性血小板减少 症
继发于母体自发性 血小板减少症
HLA / HPA 抗 体
HPA1b(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, AntiCD36 HLA-I抗体50~80% 17~25%(日本人为 HPA-2b), HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA3b,HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-5b
血小板抗原抗体
广州医科大学附属第五医院 输血科
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目录
血小板抗原 血小板抗体 抗体检测及交叉配血
血小板相关疾病
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2
血小板抗原
❖ 血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体, 并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子.
❖ 血小板相关抗原: 红细胞血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 白细胞抗原：HLA抗原
筛选基因型相容的供者 避免血小板抗体的产生
采取预防和治疗措施 避免流产、出血等
减少血小板输注无效 避免紫癜、出血和死亡
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血小板抗原定型
HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a ba ba b a b ab a b
阳性对照条带 等位基因条带
1bb
2ab
3bb
4aa 5aa 15aa
❖ 血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）
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血小板抗原
血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 ❖ 来源：血小板表面的A、B抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所
固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将O 型血小板和A或B型血清温育，血小板就会带上A或B抗原。 ❖ 不同个体间血小板膜ABH抗原量存在差异; ❖ 同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大，由此可以解释有些人输入 ABH不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其 生命力不受影响.
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血小板相关疾病
临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少 症主要有5种：
1. 血小板输注无效（PTR） 2. 输血后紫癜（PTP） 3. 新生儿同种免疫血小板减少症（FMAIT/NAIT） 4. 被动免疫血小板减少症（PAT）
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血小板抗体检测 血清学
❖ ELISA法(酶联免疫试验) ❖ 血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA) ❖ 固相血小板免疫血清学试验(SPISA) ❖ 简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA) ❖ 流式细胞仪 ❖ 改良抗原俘获(ELISA) ❖ 免疫荧光试验
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简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
❖ 主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板 特异性抗原
❖ 高频率抗原以“a”表示，低频率抗原以“b”表示
❖ 人血小板同种抗原（HPA）自1959年被发现以来， 迄今已经检出24个抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4 ，-5，-6,-15被血小板命名委员会（PNC）列入抗 原系统，包含14个对偶抗原，而HPA-7-14，-16,-
血小板谱细胞 （三人份O型混合血小板）
50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔
阳性 水浴 洗30涤m5i次n
反应板 （已包被血小板单抗）
血小板单层
阴性
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞）
抗人IgG 各50μl/孔
200g,5min离 心
200g,5min离 心
阳性反应
阴性反应
HPA-1a,HPA-3,HPA-5b
其它抗体 抗GPⅡb/Ⅲa抗体
极少数为ABO抗体 少数为抗GPIa/IIa抗 体
多数位于GPⅡb/Ⅲa GPIb/IX/V，少数位 于 GPIV/V 和 GPIa/IIa
同上
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抗体检测及交叉配血
抗原定型
血小板相容性检测 抗体检测
交叉配型
建立血小板供者库
诊断血小板免疫性疾病 筛查血小板相容性供者
❖ GPⅡb（CD41）是跨膜蛋白，细胞外116 kD的重链，通过 二硫键与22 kD的轻链共价结合。GPⅡb上携带 HPA-3和 HPA-9bw；
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血小板抗体
抗体 分类
疾病
同 种 格兰茨ห้องสมุดไป่ตู้血小板功 抗 体 能不全病
同种 异 体抗 体
新生儿同种异体免 疫性血小板减少症
血小板输注无效症
血小板输血后紫癜
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简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
▪ 直接测定法
血小板表面结合血小板抗体的测定
▪ 间接测定法
血清内抗血小板抗体的测定
▪ 交叉配血试验
选择配合的血小板供体
▪ 质量控制
阴阳性对照
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ELISA法(酶联免疫试验)
单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：该法先制备羊抗鼠IgG包被 的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共 同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗 人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。
17因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。
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血小板抗原
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血小板抗原
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血小板抗原
❖ 24个抗原主要分布在糖蛋白GPⅡb，GPⅢa，GPⅠb，GPⅠa 以及CD109上 ；
❖ GPⅢa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4， HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw， HPA-14bw，HPA-16bw
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血小板抗原
❖ 白细胞抗原：HLA抗原 ❖ 血小板存具有HLA-Ⅰ类抗原类抗原，主要是HLA-A
和HLA-B位点的抗原（少量表达的HLA-C抗原）。 ❖ HLA-Ⅰ类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中
吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白细胞弱。
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血小板抗原
❖血小板特异性抗原（human platelet antigen， HPA）
血清学定型
➢ 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原
➢ 缺点：特异性抗体来源困难
---人血清中血小板抗体通常为多特异性
---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗，
无其它HPA单抗。
基因定型
➢ 限制性片段长度多态性分析（RFLP）
➢ 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)
➢ 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)