脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定韩华;薛改;张俊勤;闫萍;李艳丽【摘要】目的：探讨人脐带华通胶间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及冻存、复苏的方法。
方法收集健康足月新生儿脐带组织，采用组织块贴壁法分离、培养脐带间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表面抗原，将细胞冻存3个月后复苏，鉴定复苏后细胞的特性。
结果组织块贴壁法获得脐带间充质干细胞成功率高；细胞表面高表达CD29、CD44、CD90和CD105，不表达造血干细胞表型CD34、CD45等；冻存后再复苏细胞活性高达80％～90％。
结论组织块贴壁法可以从人脐带华通胶中较好的分离、培养出间充质干细胞，为干细胞移植实验研究和临床治疗提供了理想的细胞来源。
%Objective To exploreisolating,culturing,identifying,freezing and thawing mesenchymal stem cells(MSCs)approach from Wharton j elly of human umbilical cord.Methods The MSCs were isolated from neonate umbilical cord,cultured by tissue explants adherent method.The surface markers were identified by flow cytometry.Passage cells,frozen 6 months, were thawed,then their biological characteristics were identified.Results MSCs were easily obtained from Wharton j elly of human umbilical cord via the proposed approach of tissue adherence.The flow cytometry analysis showed that MSCs expressed CD29,CD44,CD90 and CD105 positively,but negatively for CD34,CD45.The living cells of MSCs were 80%-90% after having been frozen and the thawed cells had the same characteristics as the previous.Conclusion MSCs can be successfully isolated from Wharton j elly of human umbilical cord by this method. The stem cells derived from Wharton j elly of humanumbilical cord may be a novel alternative source of human MSCs for experimental and clinical applications.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P21-23)【关键词】脐带;间充质干细胞;胎血【作者】韩华;薛改;张俊勤;闫萍;李艳丽【作者单位】河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;中国人民解放军白求恩国际和平医院药剂科，河北石家庄 050082;河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;河北省人民医院妇产科，河北石家庄 050051;中国人民解放军第二六○医院病理科，河北石家庄 050041【正文语种】中文【中图分类】R394.2干细胞是一群具有自我更新和分化潜能的细胞，根据发育状态可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。
人脐带间充质干细胞的生物学特性及其在血液系统疾病中的应用
人脐带间充质干细胞的生物学特性及其在血液系统疾病中的应用宋希拿;何祎;韩俊领【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2009(015)002【摘要】间充质干细胞是一种具有自我更新和多向分化能力的成体干细胞,在组织工程、基因治疗和造血干细胞移植领域具有较好的应用前景.骨髓是间充质干细胞的经典来源.近年研究显示,人脐带中也存在大量间充质干细胞,由于脐带来源间充质干细胞具有来源广泛、取材方便、相对纯净、含量丰富以及免疫原性低等优点,正逐渐成为间充质干细胞研究领域的热点之一.本文就其生物学特征、优势以及在血液系统疾病中的应用前景等予以综述.【总页数】4页(P166-169)【作者】宋希拿;何祎;韩俊领【作者单位】协和干细胞基因工程有限公司,天津市脐带血造血干细胞库,天津,300384;协和干细胞基因工程有限公司,天津市脐带血造血干细胞库,天津,300384;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院,天津,300020;协和干细胞基因工程有限公司,天津市脐带血造血干细胞库,天津,300384;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院,天津,300020【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.人脐带间充质干细胞的研究进展及在心脏疾病中的应用 [J], 田洪榛;柏翠芳;陈光辉2.人脐带间充质干细胞的生物学特性及应用前景 [J], 张彦;黄平平3.人脐带间充质干细胞的生物学特性、分化及应用研究 [J], 王成俊;张涵;李鲁生;程洪斌;安沂华4.血细胞分析仪联合血细胞形态学观察在筛查血液系统疾病中的应用价值研究 [J], 农树红5.西达本胺在血液系统疾病中的应用研究进展 [J], 王晶;吴涛;白海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人脐带间充质干细胞研究进展及应用前景_张亚斌
人脐带间充质干细胞研究进展及应用前景张亚斌1，解莉楠21.天津市脐带血造血干细胞库，天津300384；2.东北林业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150040［摘要］人脐带间充质干细胞（hUCMSC ）是来源于发育早期中胚层和外胚层、存在于脐带沃顿胶和血管周围组织中的一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞。
当前主要通过分离、扩增传代培养，然后超低温保存的方法提取保存hUCMSC 。
与其他来源的干细胞相比，hUCMSC 具有来源广泛、可塑性强、对供者无不利影响、无伦理争论限制等优势，并且具有很强的向多组织分化的潜能，因此hUCMSC 成为在组织工程、造血干细胞移植及基因治疗等研究领域具有巨大潜力的种子细胞，在临床应用方面有十分广阔的前景。
［关键词］人；脐带；间充质干细胞［中图分类号］Q25［文献标识码］A［文章编号］1009-0002（2013）03-0437-04Research Progress and Prospect of Application of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem CellsZHANG Ya-Bin 1*,XIE Li-Nan 21.Tianjin Cord Blood Bank,Tianjin 300384;2.College of Life Science,Northeast Forestry University,Harbin 150040;China*Corresponding author,E-mail:zhangyabin_0225@［Abstract ］Human umbilical cord mesenchymal stem cells （hUCMSC ）,which originate from mesoderm and ecto ⁃derm at the early stage of embryonic development and inhabit the area of Wharton-jelly and perivascular tissue of umbilical cord,have been classified as a self-renewal,proliferating and multi-potential differentiating cell line.Ac ⁃cording to current technique level,hUCMSC are preserved by means of cryopreservation following enzyme-diges ⁃tion,separation,and subcultural amplification.Being superior to stem cells from other sources,hUCMSC benefit an abundant source,relatively higher plasticity while less ethical controversy,no adverse affection to donors during harvest and naturally the multiple-differentiation potential like other stem cell families.Consequently,the stem cellfamily of hUCMSC has become a clinic prospective candidate in field of tissue engineering,hematopoietic stem cell transplantation and genetic therapy.[Key words]human;umbilical cord;mesenchymal stem cellsdoi:10.3969/j.issn.1009-0002.2013.03.033综述胚胎干细胞的研究已被列为20世纪90年代世界十大科技成就之首，因此干细胞的研究包括间充质干细胞的研究已成为最具发展前景的领域之一。
人脐带间充质干细胞的应用研究现状
人脐带间充质干细胞的应用研究现状摘要：众所周知，脐带是母亲与婴儿营养传送的介质，脐带间还包含羊膜，而羊膜经过研究发现包含两条脐脉，还有一条脐静脉，通过研究人员研究发现，脐带间含有一种特殊的胚胎结缔组织，将其命名为华尔通氏胶，近年来，为了寻找更多的成人干细胞来源，研究人员将注意力转向了"废弃物"的脐带，通过偶然研究发现，脐带中含有的干细胞是很有医用价值的，自2013年以来，Mitchell等人提出对脐带间华尔通氏胶来源进行大量研究，以及在其基质细胞间发现许多干细胞，并进一步研究干细胞特性，运用于临床诊治，为临床应用提供了新的思路和方向。
本文浅谈人脐带间充质干细胞的医学领域的应用以及干细胞应用前景。
关键词：人脐带间、充质干细胞、应用研究一、关于人脐带间充质干细胞的分离与培养不同的实验室有不同的分离和培养方法，结果也不同。
目前主要有两种方法：组织块消化法和酶消化法。
当组织块连接到分离方法时，可以在组织块连接壁上看到长梭形细胞。
大约5天后，当细胞融合到70%-80%,0.25%胰蛋白酶，10%琼脂糖培养基和胰蛋白酶消化离体心脏，1:2或1:3时，对于培养基的更换时间控制在两到三天更换一次，经过九到十天的培养，可以观察到干细胞的形态发生变化。
此时将胶原酶、胰蛋白酶、透明质酸酶或各种酶的组合添加到组织块中，以获得直接生长在细胞壁上的单个细胞。
在此过程中细胞很容易被损伤，因为充质干细胞通过酶消化快速分离，在一定程度上保证了细胞的存活，但在一定程度上通过酶系统降解细胞外膜，所以细胞很容易被损伤，在培养干细胞时，应该在处理脐带采集经过一到两天内进行培养，培养过程必须遵循无菌原则，添加生长因子可促进细胞生长。
细胞可以通过冷冻来分离。
这种情况下不仅不会使得干细胞组织受到伤害，进一步保留干细胞完好，这种冷冻溶液是含有高浓度胎牛血清和7%或10%二甲基亚砜甘油的冷冻介质。
细胞在此介质中生长，不会失活，在温度升高至室温时，细胞活性迅速恢复。
人脐带华通胶间充质干细胞的生物学特性及研究新进展
人脐带华通胶间充质干细胞的生物学特性及研究新进展何蓓;杨晓清【摘要】Human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell (hWJ-MSC) is a kind of adult stem cell which has self-renewal ability, multiline age differentiation potential. As isolated from discarded tissue (umbilical cord) after birth, they are considered wide resource, easy to be acquired and not restricted by ethics. Compared to other source of adult stem cells such as bone marrow mesenchymal stem cells, hWJ-MSC has lower immunogenicity, higher proliferation, more primitive stem cell performance, which make hWJ-MSC become a new cell resource. hWJ-MSC has great therapeutic potential in cell transplantation, gene therapy for various diseases. In this review, we will discuss the biological characteristics, proliferation and differentiation potential, and immunological characteristics of hWJ-MSC, and mainly focus on the latest progress of their application on various diseases.%人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell,hWJ-MSC)是一类具有自我更新、多向分化潜能的成体干细胞.由于其取自分娩过程中的废弃物——脐带,因此来源广泛、取材方便、不受任何伦理学限制,同时相对其他来源的成体干细胞例如骨髓间充质干细胞,hWJ-MSC免疫原性更弱、增殖能力更强、干细胞性能更加原始,使其成为一种新型的细胞来源,广泛应用于各种疾病模型的细胞移植以及基因治疗.综述新近研究的hWJ-MSC的生物学性状、增殖分化潜能、免疫性能以及其在各类疾病中的应用进展.【期刊名称】《国际妇产科学杂志》【年(卷),期】2016(043)001【总页数】5页(P94-98)【关键词】干细胞;间质干细胞;脐带;治疗;人脐带华通胶间充质干细胞【作者】何蓓;杨晓清【作者单位】226001 江苏省南通大学附属医院妇产科;226001 江苏省南通大学附属医院妇产科【正文语种】中文△审校者人脐带内、脐血管周围含有丰富的基质即华通胶，胶内含有大量间充质干细胞——人脐带华通胶间充质干细胞（human umbilical cord Wharton′s jellyderived mesenchymal stem cells，hWJ-MSC），该干细胞能够稳定表达间充质干细胞特有的分子标记物。
脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景
233CARCINO GENESIS ，TERATO GENESIS &MUTA GENESIS脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景丁赛，张红霞，朱海英*(海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室，上海200433)收稿日期：2021-11-21；修订日期：2022-05-13基金项目：国家自然科学基金(32171387)作者信息：丁赛，E-mail ：。
*通信作者，朱海英，E-mail ：【摘要】间充质干细胞(MSCs)的来源非常广泛。
虽然各种组织来源的MSCs 生物学特性不尽相同，但在标准培养条件下该类细胞均可以贴壁生长；细胞群体中有95%以上的细胞表达典型的间充质标记分子，如CD73、CD90和CD105，但缺乏造血标记分子CD14、CD19、CD34、CD45和CD79a 的表达；特别是均具有分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞的能力。
这些性质是国际细胞治疗协会给出的定义该类细胞的最低标准。
脐带间充质干细胞是指来源于新生儿脐带组织中的多能干细胞。
目前来看，从脐带不同解剖学部位(区室)获得的MSCs 的生物学性质也存在差异，其中从脐带华通氏胶中分离获得的华通氏胶间充质干细胞，在增殖能力、分化潜能、免疫调节能力等方面均明显优于其他区室来源的间充质干细胞，是用于组织器官损伤修复及免疫调节的一种理想的“种子”细胞，被认为具有更好的临床应用前景。
本文围绕近年来华通氏胶间充质干细胞的分离建系、增殖特性、分化潜能以及临床应用方面的研究进展进行了综述，其中重点介绍了化学诱导分化方案的建立和优化，认为与通过遗传改变诱导重编程方法相比，化学诱导分化方法具有更好的临床应用潜力。
【关键词】脐带；华通氏胶；间充质干细胞；分化潜能；分离；增殖特性中图分类号：R329.2+8文献标志码：A文章编号：1004-616X(2022)03-0233-04doi ：10.3969/j.issn.1004-616x.2022.03.011间充质干细胞最早在骨髓中被发现和鉴定，随后在人体胚胎及成体的多种组织中被陆续鉴定出来，这些组织主要包括成体骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带和脐带血等。
人脐带华通氏胶间充质干细胞的分离_培养_鉴定及冻存_复苏
见 明显钙结节;成脂诱导 14 d，有明显的脂滴出现，油红 O 染色阳性。 冻 存 再 复 苏 细 胞 活 力 达 80%，细 胞 免 疫 表 型 及 成
骨、成脂诱导显示与冻存前细胞呈相同的特性。 结论：组织块培养法可从人脐带华通氏胶中分离、培养出纯度较高间充
质干细胞，冻存、复苏不改变其特性。
[关键词] 人脐带间充质干细胞；华通氏胶；细胞培养；诱导分化；冻存
定其向成骨、成脂方向诱导分化的能力；将 P1 细胞冻存 6 个月后复苏，鉴定复苏后细胞的特 性。 结果：植块法容易从人
脐带华通氏胶中获得间充质干细胞； 组织块贴壁后 6 d 可见组织 块周围细胞爬出， 原代培养 14~18 d 细胞融合 70%~
80%；P3 代细胞强烈表达 CD73、CD90、CD105，不表达 CD14、CD34、CD45、CD79a 和 HLA-DR；成骨诱导分化后 10 d，可
图 1 剪成 2 cm 脐 图 2 剔 除 脐 静 脉 图 3 剥 离 的 华 通
带小段
及脐动脉
氏胶
1.2.2 脐带华通氏胶 MSCs 表型的测定 用流式细 胞仪对 P3 代 UC-MSCs 表面特异性抗原进行检测。 Tryple 酶消化待检细胞，PBS 洗涤 3 次，制成 1×106/ml 的细胞悬液。 将待检细胞样品分为每管 0.1 ml，加入 CD14 -FITC、CD45 -FITC、CD79a -APC、CD90 -APC、 CD34 -PE、CD73 -PE、CD105 -PE、HLA -DR -PE 一 抗，4 ℃孵育 30 min，流式细胞仪测定各类抗原的阳 性率。 1.2.3 脐 带 华 通 氏 胶 MSCs 诱 导 分 化 向 成 骨 细 胞 诱导分化：将 P3 代细胞消化后，调整细胞密度为 1×105/ml， 接 种 于 24 孔 板 内 ，1~2 d 后 细 胞 融 合 达 70%~80%， 此时以成骨细胞诱导培养液培养， 每 3 天全量换液 1 次，第 10 天茜素红染色；向脂肪细 胞 诱导分化：培养液改为成脂肪细胞诱导培养液，其余 同前，第 14 天油红 O 染色。 1.2.4 脐带华通氏胶 MSCs 的冻存、复苏 将 P1 代
脐带间充质干细胞应用研究进展
脐带间充质干细胞应用研究进展摘要】人脐带中富含间充质干细胞（MSCs）。
这些细胞能表达多种间充质干细胞标志物及多种干细胞相关基因，可分化为3个胚层衍生的多种成熟细胞，合成多种营养因子和细胞因子，支持造血干细胞等细胞的增殖和功能，并具有低免疫原性。
本文主要就脐带间充质干细胞的生物学特性、临床作用和应用前景作简要综述。
【中图分类号】R39 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）18-0343-01脐带是胎儿循环系统与母体相连的条状结构，外层被覆羊膜，内有两条脐动脉和一条脐静脉。
在脐动脉与脐静脉之间，还存在一种胚胎粘液样结缔组织：华尔通氏胶。
以华尔通氏胶为基质进行分离获取的细胞就是脐带间充质干细胞（HUMSCs）。
脐带间充质干细胞是一种来源于胚胎形成早期中胚层的一种多能干细胞，能分化为3个胚层衍生的多种成熟细胞、合成多种营养因子和细胞因子、支持造血干细胞等细胞的增殖和功能，并具有低免疫原性。
因此HUMSCs具有巨大的临床应用价值，近年来受到医学科研工作者的重视。
1.脐带间充质干细胞生物学特性脐带间充质干细胞既不是胚胎干细胞，也不是成体干细胞，而是与两者存在显著区别的一种新的多能间充质细胞。
和其他来源的间充质干细胞一样，脐带间充质干细胞在显微镜下为长条梭形，附壁生长，可表达多种造血干细胞标记，并可表达白血病抑制因子受体通路、端粒逆转录酶及胚胎干细胞特异基因Ⅰ等原始干细胞标记［1］。
在混合淋巴细胞检测下，脐带间充质干细胞表现为免疫抑制，并可阻止T细胞的增殖，异体移植HUMSCs可出现免疫耐受，显示脐带间充质干细胞是一种免疫缺陷细胞，异体移植不会出现免疫排斥反应［2］。
2.脐带间充质干细胞的临床应用研究由于脐带间充质干细胞来源较多，取材简便，容易分离，同时表现出免疫缺陷性，且基本不受伦理道德限制，近几年来众多学者致力于研究脐带间充质干细胞的临床应用研究，并取得了令人瞩目的成果。
2.1 UMSCs应用于神经系统损伤的研究研究显示［3］，以大鼠建立脑卒中模型后，将脐带间充质干细胞移植其体内，移植细胞可迁移进入缺血边缘区，分化形成神经细胞、胶质细胞及血管内皮细胞，诱导缺血脑组织中神经细胞及血管新生，增加缺血区域局部脑皮质血流灌注，提高神经营养因子表达水平。
人脐带华通胶间充质干细胞的体外分离培养及鉴定
人脐带华通胶间充质干细胞的体外分离培养及鉴定目的：建立并优化人脐带间充质干细胞分离纯化方法，并对其表面标志与多向分化潜能进行鉴定。
方法：收集健康足月产胎儿脐带组织，采用组织块贴壁法进行原代培养，流式细胞仪对其表面标志进行检测，通过向成骨成脂分化对其多向分化潜能进行鉴定，RT-PCR对其干细胞特性基因Oct4、Nanog、Sox2、Nestin 进行检测。
结果：采用组织块贴壁法可在2周左右获得大量间充质干细胞，培养的细胞经流式细胞仪检测，高表达CD29、CD44、CD105、CD106，低表达CD34、CD45；经成骨成脂诱导2周后可分化为成骨细胞和成脂细胞，RT-PCR检测发现原代细胞表达Oct4、Nanog、Sox2、Nestin基因。
结论：人脐带间充质干细胞可在体外扩增培养，具有多向分化潜能，可作为组织工程种子细胞来源。
标签：人脐带间充质干细胞；原代培养；分离鉴定虽然胚胎干细胞具有全能性，可分化为各个胚层的细胞，但其来源还存在伦理和法律上的争议，且致瘤性目前还无法控制。
与胚胎干细胞相比，间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）则因具有多向分化潜能、易培养、扩增能力强、来源广等优势而被大量用于实验和临床研究。
在各种成人干细胞中，目前研究较多的是骨髓MSC，因其可以作为自体移植的干细胞来源。
但骨髓的获取属于侵入性检查，来源有限，且骨髓MSC的量、增殖效率、分化潜能有着明显的个体差异，会随着年龄的增加而显著减少，因此寻找新的干细胞来源成为当务之急。
研究發现，可以从多种组织如骨髓、脂肪组织、脐带血、胎盘等中分离得到MSC。
相比骨髓，脐带属于医用废弃物，具有较低的免疫原性，容易获得，相对纯净，不会给供者带来痛苦，致瘤性、病毒和细菌污染的可能性均较骨髓MSC 低。
此外，与骨髓MSC相比，人脐带MSC（human umbilical cord MSC，hUCMSC）具有更强的增殖能力，其独特的多潜能特性能在体外保留更长时间，因此成为干细胞研究的重要来源。
人脐带间充质干细胞的研究进展及应用
人脐带间充质干细胞的研究进展及应用作者：王玲利来源：《中国科技博览》2018年第02期[摘要]人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）具有低免疫原性，自我更新、增殖和多向分化的潜能；hUCMSCs具有来源广泛、可塑性强、对供者无不利影响、无伦理限制问题等优势，使其成为组织工程、造血干细胞移植、细胞治疗和基因治疗中极具潜力的种子细胞，在研究及临床应用方面也有十分广阔的前景。
[关键词]人脐带；间充质干细胞；移植治疗中图分类号：S785 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）02-0324-02间充质干细胞（MSCs）根据其来源主要分为，骨髓间充质干细胞（BMSCs）、脂肪间充质干细胞（ADMSCs）和脐带间充质干细胞（UCMSCs）。
脐带间充质干细胞（UCMSCs）的特性类似于骨髓间充质干细胞（BMSCs），因其增殖和分化潜能比BMSCs更高，获取过程为非侵袭性，来源丰富、取材方便而成为科研和临床工作中干细胞的一个较好来源。
本文就近几年国内外关于hUCMSCs的研究现状和应用进行了综述。
1 hUCMSCs的来源人脐带由三部分构成：羊膜被覆上皮、脐血管和位于两者之间被称为华氏胶的胚胎黏液结缔组织。
Mitchell[1]首次从华氏胶中提取出一种成纤维样细胞，并证实了该类细胞具有多向分化的潜能。
Romanov 等首先证明了脐带组织中含有干细胞。
随后多位研究者从脐带华氏胶中分离到这种成纤维样细胞，证实其具有自我更新、增殖和多向分化的潜能，并命名为人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）。
2 hUCMSCs的分离培养2.1 hUCMSCs的分离目前hUCMSCs 的分离方法主要有组织块贴壁法和酶消化法两种。
其中，在分离培养的早期，酶消化法获得的细胞数量更多，但含有其他类型的细胞，需要标记分离纯化；组织块贴壁法操作比较简单，且传代后的细胞形态及增殖活性更加稳定，污染机会更小，培养体系中几乎没有造血细胞、内皮细胞或平滑肌细胞等。
人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性
人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性人脐带间充质干细胞（Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells, WJ-MSCs）是一种从人脐带Wharton's jelly（脐带的一部分）中分离得到的多潜能干细胞，具有广泛的应用前景。
为了实现其在临床治疗和组织工程领域的应用，对人脐带间充质干细胞的分离培养条件进行优化并探究其生物学特性非常重要。
首先，人脐带间充质干细胞的分离需要选择合适的酶消化条件。
常用的酶消化方法包括胰蛋白酶（trypsin）、胎牛血清（FBS）和DNase I。
优化的酶消化条件应考虑到最大程度地保持干细胞的完整性和生物学特性，同时实现高细胞产量。
研究发现，使用胰蛋白酶和DNase I混合消化能够有效分离人脐带间充质干细胞，但酶的浓度和消化时间需要进行调控。
其次，培养基的配方也是优化人脐带间充质干细胞培养条件的重要步骤。
常用的培养基包括DMEM/F12和α-MEM，含有10%的胎牛血清和一些生长因子，如bFGF（basic fibroblast growth factor）。
优化的培养基应该能够维持干细胞的增殖和多向分化潜能，同时最小化细胞老化和细胞凋亡。
最近的研究表明，使用serum-free的培养基可以保持干细胞的稳定性和功能。
此外，生物学特性的研究也是优化人脐带间充质干细胞培养条件的重要内容。
研究人员通过研究干细胞的表面标记物、基因表达和细胞功能等方面来了解其特性。
人脐带间充质干细胞具有多向分化潜能，可以分化成脂肪细胞、软骨细胞和骨细胞等。
此外，它们还具有抗炎、免疫调节和组织修复能力。
这些特性对于人脐带间充质干细胞的应用具有重要意义。
总之，优化人脐带间充质干细胞的分离培养条件和研究其生物学特性是实现其临床应用的基础。
通过合理选择酶消化条件和培养基配方，可以最大限度地保持干细胞的完整性和生物学功能。
此外，深入了解其生物学特性有助于发现其潜在的治疗机制和应用价值。
人脐带华通氏胶间充质干细胞的分离_培养_鉴定及冻存_复苏
MSCs 消化后以 1×106/ml 密度冻存， 冻存液 DMSO∶ FBS∶DMEM 为 1∶1∶8，将冻存细胞放入 4 ℃预冷的程 序冷冻盒内，直接将程序冷冻盒放入-80 ℃冰箱，第 2 天放入-196 ℃液氮保存。 冻存 6 个月后将程序冷 冻盒从-80 ℃冰箱取出，细胞直接放入 37 ℃预热的 水浴锅内，用 4 ℃预冷的 PBS 洗涤细胞 2 遍，将细胞 接种于含 10%胎 牛血清的 DMEM 培 养 瓶 内 ， 放 入 37 ℃、5%CO2 培养箱中培 养。 待细胞传 代至 P3 代 时， 用流式细胞 仪检测 CD14、CD45、CD79a、CD90、 CD34、CD73、CD105、HLA-DR，并 进 行 成 骨 细 胞 、成 脂细胞诱导分化，方法同前。
YANG Xiaoqing1**, ZHANG Mu2, YANG Bing3, ZGANG Hu3, ZHANG Yuquan1***
(1Department of Gynaecology and Ob-
sterics, Affiliated Hospital of Nantong University; 2Department of Clinical Medical class 071, Medical College of Nantong U-
来源 MSCs 具有来 源广泛 、取 材 方 便 、相 对 纯 净 、含 量丰富及免疫原性低等优点， 正逐渐成为 MSCs 研 究领域的热点之一。 人脐带 MSCs 的来源有 4 种，其 中华通氏胶(WJ)来源的 MSCs 含量丰富但对其 分离 培养的研究相对较少， 本文就探讨从人脐带华通氏 胶 中 分 离 出 脐 带 间 充 质 干 细 胞 (umbilical cord mesenchymal stem cells， UC-MSCs)并进行体外培养、鉴 定及定向分化，为 MSCs 的应用提供更广泛的来源。
脐带间充质干细胞制备原理
脐带间充质干细胞制备原理导言随着干细胞研究的不断深入，脐带间充质干细胞作为一种重要的干细胞资源，受到了广泛关注。
本文将为大家介绍脐带间充质干细胞的制备原理，探讨其在生物医学领域的应用前景。
什么是脐带间充质干细胞脐带间充质干细胞（Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells，WJ-MSCs）是一种存在于脐带Wharton’s jelly（韧带）中的间充质干细胞。
它们具有多能性，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等。
脐带间充质干细胞的制备过程脐带间充质干细胞的制备过程主要包括以下几个步骤：步骤一：脐带收集和处理1.选择健康的孕妇，并取得其同意，对脐带进行收集。
2.清洗脐带，去除表面的血液和细胞残留物。
3.将脐带剪成适当的大小，并用理化方法处理，以消除可能的微生物感染。
步骤二：组织析出1.将处理后的脐带放入离心管中。
2.使用适当的消化酶（如胶原酶）进行组织的分解，使细胞从基质中解离出来。
3.离心管离心，获得细胞和基质的沉淀。
步骤三：细胞培养1.用培养基悬浮细胞沉淀，并接种到培养器皿中。
2.提供适当的培养环境，如培养基、温度和湿度，以促进细胞的生长和增殖。
3.定期检查和观察细胞的形态和倍增情况。
步骤四：细胞鉴定和扩增1.使用细胞表面标记物的抗体进行免疫细胞化学染色，以确定细胞的纯度和特异性。
2.使用流式细胞术等技术，对细胞进行进一步的鉴定和排序。
3.如果需要，进行细胞扩增，以获取足够数量的干细胞用于后续的实验和应用。
脐带间充质干细胞的应用前景脐带间充质干细胞具有以下几个优点，使其在生物医学领域有着广阔的应用前景：优点一：丰富的源头脐带是产妇和胎儿之间的纽带，获得脐带间充质干细胞不需要借助捐赠，因此更加容易获取，资源丰富。
优点二：低免疫原性脐带间充质干细胞表面的HLA-ABC 分子表达较低，导致其具有较低的免疫原性，在移植过程中不易被宿主免疫系统识别和攻击。
脐带间充质干细胞
间充质干细胞的冻存
• 细胞收集前须给检测送样做细菌检测 和流式（CD90+、CD105+、CD166+）
• 冷冻保护剂（胎牛血清+DMSO） 配制：DMSO 10%
• 冷冻方式 深低温冰箱梯度降温
细胞治疗程序
1、治疗前咨询： 明确诊断，明确疾病处于哪一期；
2、治疗风险： 分析利弊；可能的副作用；获益
脐带——获取干细胞的另一来源
我国科学家2006年首次从新生婴儿废弃的
脐带组织中得到了一种多能干细胞，称 作脐带间充质干细胞(UC-MSC)。UCMSC具有胚胎干细胞类似的增殖能力和 多向分化潜能，且来源丰富、取材方便、 低病毒感染率、无伦理障碍，又没有胚 胎干细胞产生畸胎瘤的问题，并且抗原 性很低。不产生免疫排斥反应，异体使 用无需HLA配型。
移植后 4周 36.28±5.81 65.67±20.63 33.75±19.71 15.68±4.14
P
值 <0.01
<0.05
>0.05
<0.05
MSC治疗肝硬化的机制
主要有以下几个方面： • 1)MSC分化形成正常肝细胞，补充肝细胞数量，
改善肝功能； • 2)MSC分泌细胞因子/生长因子、抑制炎症反应； • 3)MSC抑制肝星形细胞，活化、阻止细胞外基质
的生成； • 4)MSC激活卵原细胞，促进肝细胞再生； • 5)MSC降解肝内过量的细胞外基质。
二、脊髓损伤
临床资料
本组男11例，女4例。年龄11-48岁， 平均37岁。病程4个月-5年，平 均1.2年。治疗前均有损伤平面以 下肌力、肌张力减退，其中尿失 禁9例，大便失禁7例。
临床资料
脐带间充质干细胞108，第一次、第
脐带华通氏胶分离操作
脐带华通氏胶分离操作
《脐带华通氏胶分离操作》
脐带华通氏胶分离操作是一种新型的胎盘脐带处理技术，可以有效地将脐带中的华通氏胶与其他成分分离开来，使其应用更加广泛和便捷。
华通氏胶是一种具有生物活性的物质，具有很强的生物可降解性和成分多样性，具有重要的生物医学应用前景。
在脐带华通氏胶分离操作中，首先需要对新鲜脐带进行处理，将其表面清洁并切分成小段，然后通过特定的离心和过滤技术，将华通氏胶从脐带中分离出来。
这种操作过程需要具备一定的技术和专业知识，以确保分离得到的华通氏胶的纯度和活性。
脐带华通氏胶分离操作的成功，不仅可以使华通氏胶更好地被应用于医学领域，例如用于生物医药制品的生产、组织再生和损伤修复等方面，也有助于进一步深化人类对华通氏胶的认识和开发。
同时，通过脐带华通氏胶分离操作，可以减少对人体脐带的破坏，保护人体的健康和生命安全。
总的来说，脐带华通氏胶分离操作是一种具有潜力和前景的技术方法，对医学和生物医学领域具有重要的意义和价值。
随着科学技术的不断发展和创新，相信这一技术将会得到更加广泛的应用和推广，为人类的健康和生活质量带来更多的福祉。
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脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景丁赛;张红霞;朱海英
【期刊名称】《癌变.畸变.突变》
【年(卷),期】2022(34)3
【摘要】间充质干细胞(MSCs)的来源非常广泛。
虽然各种组织来源的MSCs生物学特性不尽相同,但在标准培养条件下该类细胞均可以贴壁生长;细胞群体中有95%以上的细胞表达典型的间充质标记分子,如CD73、CD90和CD105,但缺乏造血标记分子CD14、CD19、CD34、CD45和CD79a的表达;特别是均具有分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞的能力。
这些性质是国际细胞治疗协会给出的定义该类细胞的最低标准。
脐带间充质干细胞是指来源于新生儿脐带组织中的多能干细胞。
目前来看,从脐带不同解剖学部位(区室)获得的MSCs的生物学性质也存在差异,其
中从脐带华通氏胶中分离获得的华通氏胶间充质干细胞,在增殖能力、分化潜能、
免疫调节能力等方面均明显优于其他区室来源的间充质干细胞,是用于组织器官损
伤修复及免疫调节的一种理想的“种子”细胞,被认为具有更好的临床应用前景。
本文围绕近年来华通氏胶间充质干细胞的分离建系、增殖特性、分化潜能以及临床应用方面的研究进展进行了综述,其中重点介绍了化学诱导分化方案的建立和优化,
认为与通过遗传改变诱导重编程方法相比,化学诱导分化方法具有更好的临床应用
潜力。
【总页数】4页(P233-236)
【作者】丁赛;张红霞;朱海英
【作者单位】海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R329.28
【相关文献】
1.人脐带华通氏胶间充质干细胞的分离、培养、鉴定及冻存、复苏
2.人脐带华通氏胶间充质干细胞定向分化:现状与前景
3.BK通道抑制剂对人脐带华通胶来源的间充质干细胞的增殖、凋亡及细胞因子的影响
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5.人脐带动脉旁、静脉旁与华通氏胶间充质干细胞的血管生成能力比较及移植安全性评价
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