生物参考区间建立与验证

性别 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 /女 男 女 男 女 男 女 男 /女 男 /女
男 /女 男 /女
参考区间 3.5～9.5 1.8～6.3 1.1～3.2 0.02～0.52 0～0.06 0.1～0.6 40～75 20～50 0.4～8.0 0～1 3～10 4.3～5.8 3.8～5.1 130～175 115～150 0.40～0.50 0.35～0.45 82～100 27～34
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
统计分析——离群值处理
• Dixon法则即1/3规则：疑似离群值与其相邻值
的差值D和数据全距R相除，D/R≥1/3则为离群 值 • Horn法则：四分位值 P25（Q1） P50（Q2） P75（Q3) 四分位间距Q=Q3-Q1 （Q1-1.5 × Q，Q3+1.5×Q）
Your Topic Goes Here 一、参考区间的概念
• 参考个体 ( reference individuals ) 按明确标准选择的用作检验对象的个体。 注：通常是符合特定标准的健康个体。 • 参考人群 ( reference population ) 由所有参考个体所组成的群体。 注：通常参考人群的个体数是未知的，因此参考人群是一个推 想的实体。 • 参考样本组 ( reference sample group ) 从参考人群中选择的用以代表参考人群的足够数量的个体。 • 参考值 ( reference values ) 通过对参考个体某一特定量进行观察或测量而得到的值（检验结果）。 注：参考值从参考样本组中获得。
知情同意：告知、自愿
参考人群选择
筛选标准：问卷、体检、实验室
分析前质量控制，影响因素，标本类型 性能验证、分析中质量控制
标本采集 标本检测 统计分析
离群值、建立参考区间、判断分组
临床可接受
参考区间验证
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
参考人群募集
• 参考人群来源：城市、农村、体检中心；性别比例；年龄分布
• 主观感觉？ • 潜在/亚临床疾病 • 界定方法：疾病？健康生活方式？自 我感觉（农村）？影像学（脂肪肝）？ 对参考个体健康状况评估进行详细记录就显得尤为重要， 可便于他人再次评估，且为其他实验室进行参考区间的转 移和验证时提供参考依据
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
标本检测——血液项目质量保证
• 精密度：使用3个浓度全血质控品，重复测定4次/天，测定5 天；计算CV值（CLSI EP-15）
• 正确度：5支新鲜血标本（8h内），每份新鲜血标本测定2
次，计算bias • 室内质控：3个浓度，连续3天不同时间段测定，计算10-20 次检验结果均值，至少用13s，22s规则 • 机器报警，涂片镜检
• 样本量：每个组别至少120人，2倍于目标人群 • 抽样方法：多级随机整群抽样原则
城市、农村社区：分层（经济状况和卫生条件）
逐级随机抽取下一级（区、县）
体检中心：分层（职业）
单位
街道、乡
社区、村
个体（性别/年龄比例）
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参考人群选择
• 何谓健康？相对、难定义
Your Topic Goes Here 二、参考区间建立的意义
• 参考区间是临床检验结果的评价标准，可帮助临床医师做
出正确的诊断和治疗决策
• 参照体外诊断试剂厂家提供的数据或文献报道，而这些数
据多来源于其他国家二三十年前参考区间或小样本局部地
区人群或数据库参考区间的研究结果
• 不同国家、地区、民族，生活环境、饮食、遗传背景、经
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
中国成人血细胞分析项目的参考区间（仪器法）
项目 白细胞(WBC) 中性粒细胞绝对值(Neut#) 淋巴细胞绝对值(Lymph#) 嗜酸性粒细胞绝对值(Eos#) 嗜碱性粒细胞绝对值(Baso#) 单核细胞绝对值(Mono#) 中性粒细胞百分数(Neut%) 淋巴细胞百分数(Lymph%) 嗜酸性粒细胞百分数(Eos%) 嗜碱性粒细胞百分数(Baso%) 单核细胞百分数(Mono%) 红细胞(RBC)
reference intervals in the clinical laboratory—— Approved guidelines》
• 2012 我国常用生化、血液项目参考区间建立和验证相关行
业标准起草
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参考人群募集
募集人群来源分布
口腔、甲状腺、淋巴结、四肢、脊柱、关节等
• 问诊：症状、病史
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参考人群选择——排除标准

急慢性感染 动脉粥样硬化、血管病 烧伤和肌肉创伤 心脏病、高血压 慢性肾病 糖尿病 肝胆管疾病 自身免疫性疾病 过敏性疾病
妇女4.8-6.2%；D-D妊娠妇女高；甲状腺激素不同孕期
参考区间） • 困难更大：人群募集、标本采集、情绪饮食控制
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
多中心实验室联合建立参考区间的趋势
• 工程浩大：数量、质量 • 各医院参考区间不同： 医生、患者、医疗资源
• CLSI：相同项目不用试剂仪器厂家、实验室参照相同标
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统计分析——参考区间计算
• 建立参考区间：分布判断
参考值95%的分布范围 x-1.96s，x+1.96s P2.5—P97.5
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
统计分析——分组判断
• Z检验（正态分布，或接近正态分布）
血红蛋白(Hb) 红细胞比容(Hct) 平均红细胞容积(MCV) 平均红细胞血红蛋白量(MCH) 平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC) 血小板(PLT)
单位 ×109/L ×109/L ×109/L ×109/L ×109/L ×109/L ％ ％ ％ ％ ％
×1012/L g/L
L/L
fl pg g/L ×109/L
序号
1 2 3 4 5 6
地理区域
东北地区 华北地区 华东地区 西北地区 西南地区 华南地区
承担单位
中国医科大学附属第一医院 北京大学第三医院 复旦大学附属中山医院 第四军医大学第一附属医院 四川大学华西医院 广东省中医医院
基于中国人群多中心研究结果，可溯源至国际公认参考方法，广泛 征求临床意见
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
Z=
Z*=3(naverage/120)1/2=3[(n1+n2)/240]1/2
• 判断标准：如果Z值大于Z*值，或者较大SD大于
较小的1.5倍，建议分组，临床可接受
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特殊人群参考区间的建立
• 特殊人群：儿童、妊娠、少数民族 • 必要性：不适用性（HbA1c 妊娠妇女4-5.5%，非妊娠
中国成人肝脏功能项目和电解质项目的参考区间
项目 血清丙氨酸氨基转移 酶（ALT） 单位 U/L 性别 男 女 男 女 男 女 男 女 男/女 男/女 男/女 男/女 男/女 男/女 男/女 参考区间 9～50 7～40 15～40 13～35 10～60 7～45 45～125 20-49岁：35～100 50-79岁：50～135 65～85 40～55 20～40 1.2～2.4 3.5～5.3 137～147 99～110
血清天门冬氨酸氨基 转移酶(AST)
血清 γ-谷氨酰转移酶 (GGT) 血清碱性磷酸酶 (ALP) 血清总蛋白(TP) 血清白蛋白 (ALB) 血清球蛋白(GLB) 白蛋白/球蛋白(A/G) 血清钾离子(K＋) 血清钠离子(Na＋) 血清氯离子(Cl－)
U/L
U/L U/L
g/L g/L g/L mmol/L mmol/L mmol/L
• 精密度：使用高低浓度质控品，重复测定4次/天，测定5天； 计算CV值，小于试剂说明书的标称指标（CLSI EP-15）
• 正确度：使用新鲜冰冻血清及NIST标物，重复测定5次，连
续2天；计算偏倚(bias)与1/2TEa比较，超出，查找原因 （试剂、校准、参数、仪器等） • 室内质控：每天不同时段分析质控品5次，连续4天，计算 质控品的均值和标准差，质控图，符合质控规则
Your Topic Goes Here 一、参考区间的概念
• 参考分布 ( reference distribution ) 参考值的分布。 注：参考人群的推想分布可用参考样本组的参考分布及合适的统计 方法进行试验；参考人群推想分布的参数可用参考样本组的参考分 布及合适的统计方法来估计。
• 参考限 ( reference limit ) 一个来自参考分布用于分类目的的值。 注：参考限通常是使规定部分的参考值分别小于等于或大于等于的 下侧或上侧限值，参考限将参考值分类；参考值可能与其他类型的 决定限不同。
Your Topic Goes Here 一、参考区间的概念
参考个体 Comprise a 参考人群 From which is selected a 参考样本组 On which are determined 参考值 On which is observed a 参考分布 From which are calculated 参考限 That may define 参考区间

甲亢或甲减疾病 血液系统疾病 呼吸系统疾病 吸烟量饮酒量 2周内服用药物 肥胖：BMI≥28 怀孕或产后不足1年 6个月内做过手术 4个月内献血或输血
Yourቤተ መጻሕፍቲ ባይዱTopic Goes Here 三、参考区间的建立方法
参考人群选择——实验室检查
• 尿检：正常 • 免疫学排除：HBsAg、HCV-Ab、HIV-Ab • 生化学排除：血糖、血脂等
参考人群选择——调查问卷
年龄 吸烟、饮酒
性别
民族 联系方式 职业环境 睡眠 锻炼
药物使用情况
维生素摄入情况 近期住院、手术 近期输血、献血 病史、家族史 过敏史
饮食
针对女性的特殊问题
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
参考人群选择——体格检查
• BMI、腰围、臀围 • 血压 • 全身全系统体格检查：一般情况，心肺腹查体，
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
标本采集——分析前质量控制
个体准备
饮食 空腹时间 药物、烟、酒 运动 应激
标本采集
环境 时间 体位 标本类型 技术
标本处理
运输 凝块 血清/血浆分离 储存 据检测时间
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
标本检测——生化项目质量保证
准，检测值可互换——多中心共同参考区间成为可能 • 通用参考区间：人群、可比 • 室间质评、检验标准化、医改检验结果一致性工作推进 ，提供良好基础和技术保障
本标准参考区间基于中国人群多中心研究结果，检验结果可溯源至国际公认参考方法。
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
多中心实验室联合建立参考区间的趋势
济存在差异，生物学变异等存在决定不同国家和地区需建 立符合本地人群特征的参考区间
• 方法学和检测技术不断更新，人民生活水平提高，许多项
目参考区间不再适用
Your Topic Goes Here 三、参考区间的建立方法
• 2008 CLIS C28-A3文件《How to define and determine
生物参考区间的 建立和验证
Your Topic Goes Here 一、参考区间的概念
• 正常值 • 参考范围 • Expected values • 参考区间 （reference intervals） 两参考限之间包括两参考限的区间。 注：参考区间是指从参考下限到参考上限的值的区间，通常 是参考分布中间95%区间，在某些情况下只有一个参考限具 有临床意义，通常是参考上限，这时的参考区间可以是0到参 考上限。 • 医学绝对水平