BD FACSAria 高速流式细胞分选仪 - 微生物技术国家重点实验室
bd facsduet技术参数
bd facsduet技术参数BD FACSDuet是一款流式细胞分析仪，其技术参数如下：1.流速：BD FACSDuet流速可以达到每秒2000个事件，使得样本可以快速地通过仪器进行分析。
2.激光器：BD FACSDuet配备了多种激光器，可以使用不同的激光波长进行细胞分析。
常见的波长包括488nm、561nm、405nm和640nm 等。
3.探测器：BD FACSDuet具有多通道的探测器系统，可以同时检测多种细胞标记物。
常用的探测器包括前向散射、侧向散射和多个荧光通道等。
4.参数：BD FACSDuet可以同时获得多个细胞特征参数，包括细胞大小、形态复杂度、表面标记物的表达水平、细胞数量统计等。
5.支持的样本类型：BD FACSDuet适用于多种类型的细胞样本，包括悬浮细胞、固定细胞、细胞培养液等。
6.自动补偿：BD FACSDuet具有自动补偿功能，能够对荧光信号之间的重叠进行补偿，减少误差。
7.数据分析软件：BD FACSDuet配备了专业的数据分析软件，可以对获得的细胞数据进行进一步的分析和可视化。
8.样本处理：BD FACSDuet除了进行流式细胞分析外，还支持样本的排序、提取和储存，满足不同实验需求。
9.操作界面：BD FACSDuet拥有友好的操作界面，易于操作和学习，即使对于新手也能够快速上手使用。
10.应用领域：BD FACSDuet广泛应用于生命科学研究、医学诊断、药物研发等领域，可以帮助科研人员更好地理解细胞的结构和功能。
总结起来，BD FACSDuet是一款功能强大的流式细胞分析仪，具有快速流速、多种激光器、多通道探测器、多个细胞特征参数等优点。
它适用于不同类型的细胞样本，具有自动补偿功能和专业的数据分析软件。
BD FACSDuet操作简便，广泛应用于生命科学研究和医学诊断等领域。
碧迪医疗-流式细胞实验室解决方案说明书
作为流式技术的先行者，碧迪医疗提供集设备、试剂、软件和服务于一体的流式细胞领域整体解决方案，为生物医学前沿研究、药物开发、临床诊疗提供强大支持，满足客户需求。
自1994年进入中国市场以来，碧迪医疗持续培训了众多专业流式细胞术实验操作人员，帮助提升科研工作者和临床医生的研发创新能力，助力中国生物科技和医疗事业的可持续发展。
其中，碧迪医疗临床流式抗体及质控产品提供多色通道，注册合规，保障检测质量，更贴近临床检测需求。
提供超过161种III类及I类有证试剂，满足各类流式临床应用需求。
专业的流式抗体提供者，超过20,000个货号，50种荧光素可供选择，助力科研工作者更好的进行探索与发现。
先进技术来源于2000年诺贝尔化学奖，更亮、更稳定，提供更多选择。
BD Sirigen 流式抗体分析型流式细胞仪分析型流式细胞仪临床试剂分选型流式细胞仪碧迪医疗科研试剂生物信息数据分析软件单细胞平台科研平台临床平台BD FACSymphony™ A5 SE BD FACSymphony™ S6BD FACSDiscover™ S8BD FACSMelody™BD Rhapsody™单细胞分析系统BD FACSAria™ Fusion BD FACSAria™ III BD FACSymphony™BD FACSLyric™BD FACSPresto™ System 自动加样系统BD FACS SPA III™BD FACSDuet™BD FACSPresto™ CartridgeBD FACSCanto™ II BD FACSCanto™BD LSR Fortessa™ X-20BD LSR Fortessa™BD FACSymphony™ A1BD FACSCelesta™BD Accuri™ C6 Plus 流式数据分析软件FlowJo™单细胞数据分析软件SeqGeq™禁忌内容或者注意事项详见说明书。
优选Aria III技术说明
BD Aria III高端分选型流式细胞仪碧迪医疗器械（上海）有限公司生物科学部第一部分高端分选型流式细胞仪产品及市场概述流式细胞仪（Flow Cytometer ,FCM）一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。
概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。
随着各项相关技术的迅速发展，流式细胞技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的重要工具。
我们可以看到，目前全球商业化流式细胞仪产品的研究开发主要遵循两个方向：一类以分析功能为主的，应用于临床检测及常规的科研系统；另一类是具备高速分选功能的高端科研型，研发趋势是越来越多的荧光检测参数，同时越来越快的分选速度，以适应越来越高的科学研究的需求。
在分选型的高端产品来说，BD公司、Dako-Cytomation与Beckman-Coulter公司都相继推出了几代产品。
1999年BD公司在原FACSVantage的基础上，推出了FACSVantage SE（分选升级型，将细胞分选功能推到一个新的高度，25,000个细胞/秒，同时增配Accudrop等选件，使得分选调试变得简单），2000年又在其基础上推出Diva系统，这是一个全数字化的系统，分析速度大大提高，同时做到四路分选。
同期的Beckman-Coulter公司的同类产品是Altra，该产品雷同于BD的FACSVantage SE，但在性能参数方面比FACSVantage SE都要差，竞争力相对较弱，于2003年停产。
同期，在高端分选型流式细胞仪市场上Dako-Cytomation公司于1996年推出了Moflo，这款产品可进行高速分析和分选，但因为操作复杂，性能不稳定而未得到广泛使用，2007年Beckman-Coulter公司在自己无法研发出新一代的流式细胞分选仪的情况下，从DAKO公司收购了Moflo，并更名为Moflo XDP，但并未改变Moflo的硬件结构。
BD FACSAria 高速流式细胞分选仪
图9 气溶胶控制系统AMO
典型数据分析
图10 用PI和Hoechst做DNA染色
BD FACSAria流式细胞分选仪的灵敏度很高（图10）。在70 psi、90 kHz条件下，用PI分析CEN的DNA含量，CV为1.5%，用Hoechst分析CEN的DNA含量，CV为3.5%。
BD FACSAria 高速流式细胞分选仪 自从1974年BD公司与美国斯坦福大学合作研制出全球第一台流式细胞分选仪，BD公司就不断推陈出新，在流式细胞技术领域里始终保持领先地位。BD公司最新推出的革命性的流式细胞高速分选仪FACSAria，更是划时代的流式细胞仪。这一新型仪器是BD公司25年的流式细胞仪研制经验的集体智慧的结晶。
液滴分辨率的提高使得仪器对每个细胞分选液滴的分析更加精确，从而得到更好的分选纯度和产率。每一个液滴都被分成32等分进行分析。由于对液滴进行了更细致的分析，所以每一个细胞分选都是精确有效的。提高了液滴分辨率就可以只分选需要的细胞，因而提高了分选的准确性。BD FACSAria工作站及软件 BD FACSAria操作系统是PC的Windows?平台。系统中包括各种可移动存储器，一个高分辨率液晶平面显示器，内置以太网卡可进行网络连接，一个带三个端口的FireWire? PCI适配器，还有无线键盘和鼠标，在移动鼠标进行样本优化和分选设置时可以更加自由地变化。独特的设计 与传统细胞分选仪器相比，BD FACSAria流式细胞仪的集成设计减小了仪器 体积，节省了整个使用空间。实际上，该仪 器可以在任何空间里安装工作，不需要其他 辅助设备。仪器可以放在普通的实验室平台 或桌子上，唯一需要的是一个标准电源插孔。 BD FACSAria流式细胞仪不再需要庞 大的水冷激光器，仍然可以获得很好的荧光 灵敏度和分选性能。液流系统完全由液流系 统车自己单独控制。无论是在仪器的设计， 还是在操作方面，BD FACSAria流式细胞分
FASCAria日常保养与维护
关于FACSAria 流式细胞仪的使用与保养知识FACSAria是B-D公司2003年最新推出的世界上第一台台式高速多荧光检测和分选的流式细胞仪，结合目前用户的使用情况，在这里提供有关FACSAria使用保养和维护的小知识，以确保仪器能够良好地运行。
一．仪器的运行环境流式细胞仪属于一种高精密度的仪器，环境是决定仪器运行状态好坏的重要因素之一。
有的用户将仪器放置在一个很小的空间内，仪器在运行过程中将产生热量，由于空间过小，将会影响散热，造成仪器内部过热。
轻者，会影响电子元件和集成电子线路的工作环境，使它们偏离工作区；严重者，部分电子元件本身工作中产生的热量无法排出，最后使该元件烧坏。
有些用户给出的空间足够大，但是防尘做的不好。
桌子和仪器上到处可见灰尘。
流式细胞仪属于精密的光学仪器，如果灰尘附着在它的光学部件上，对仪器的检测灵敏度和分辨率会造成很大的影响。
因此，仪器放置的位置应离窗户稍远些，放置仪器的房间与走道之间最好有一个缓冲带。
尽量少开或不开窗户，要勤清洁仪器周围的灰尘，养成良好的习惯，确保仪器一直工作在良好的状态中。
二．仪器的开机和关机开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，开计算机，等计算机进入WINDOWS后，开启激光电源，运行B-D FACS DiVA软件，检查废液、鞘液、双蒸水、酒精及清洗液的提示器是否有报警（见下图），如果有，应倒掉废液或灌满所提示桶内的液体，然后执行BD FACSDiVa仪器菜单中的“Fluidics Startup”,该命令的功能是清除仪器管道内的所有液体，换成鞘液桶内液体。
从 B D FACSDiVa分选（Sort）菜单，进入分选模式（Sort Setup），选择所需要的分选速度（High、Medium和Low），点击液流显示窗上的开液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间，否则，调整废液槽的位置。
同时，观察液流是否是一条线，如果不是，要将喷嘴取下重装。
在日常关机前，必须先将激光器关掉，因为激光长时间照射在没有液流流动的流动室石英杯壁上，会影响它的光学特性，降低其透光率。
bd facslyric 技术参数
BD FACSLyric 临床流式细胞仪是高性能的集成解决方案，可在用户、仪器和站点之间实现准确、可靠和可重复的结果。
它是一款性能卓越、灵敏度极高的流式细胞仪，能够展示出优异的分辨率和改善的分离能力，使得难以分辨的暗淡和稀有细胞群体更容易被解析。
此外，它还具有高度的重现性，有助于实现自动化标准化，并通过实验的可移植性促进合作。
就技术参数而言，BD FACSLyric 临床流式细胞仪有多种配置可选，包括2激光4色，2激光6色，3激光8色，3激光10色，以及3激光12色等不同型号。
每种配置都具备独特的性能优势，能满足不同的科研需求。
流式细胞仪的三大应用范围
2，白血病的免疫分型：
白血病免疫学分型是利用单克隆抗体 (McAb)检测白血病细胞的细胞膜和细 胞浆抗原（CD）,分析其表现型,以了解被 测白血病细胞所属细胞系列（如髓系、 红系、淋巴系等白血病亚型）及其分化 程度。对白血病细胞抗原的分析研究有 助于对白血病分型，为诊断和治疗提供 依据。
举例：T系急性淋巴细胞白血病免疫表 型特点（T-ALL）： 根据T淋巴细胞在胸腺内的成熟顺序， 将T-ALL分为早期、中期和晚期三类。 早期T-ALL：表达CD7和CD1a，CD4、 CD8膜CD3均为阴性；中期T-ALL：除 表达CD7和CD1a外，还表达CD2、 CD5，CD4/CD8同时表达，膜CD3仍为 阴性；晚期T-ALL：膜CD3为阳性，但 丢掉CD1a，其他标志同中期。通过检测 CD抗原来确定白血病分期。
流式细胞仪的主要应用范围
• 1，流式细胞仪的免疫荧光检测； • 2，流式细胞仪的细胞周期检测； • 3，流式细胞仪的细胞分选；
（一）在免疫学中的应用 ----重要的免疫学实验技术
• 抗原(antigen，Ag)是指能刺激机体 免疫系统诱导免疫应答并能与应答 产生如抗体或致敏淋巴细胞发生特 异反应的物质。 • 抗原多为相对分子质量在10,000以上 的蛋白质和多糖大分子.
File: 2006/9/20 Yang.002 Acquisition Date: 19-Sep-06 Quad Events % Gated % Total X UL 2 0.03 0.02 UR 121 1.57 1.21 LL 5939 77.05 59.39 1646 21.35 16.46 LR
File: 2005/2/28 319 Zho Acquisition Date: 28-Fe R1 Quad% Gate % Tota UL 23.30 9.77 UR 1.86 0.78 LL 16.24 6.81 LR 58.60 24.57
BD_FACSAria_III_Brochure_CN
分选收集仓
分选收集仓的独特结构设计使得放入样品收集管基座变得十分方 便。收集管基座的设计能够保证收集管的无菌状态。作为一个选 配件，你还可以选择一个温度控制装置来控制样品收集管或玻片 或多孔板的温度。
气溶胶控制 秉承对气溶胶严格控制的设计思路，BD FACSAria III系统是一个 从样本进样仓直至分选收集管的封闭管道。如果需要更高水平的 气溶胶控制，BD 气溶胶控制系统Aerosol Management Option (AMO) 可以在分选过程中抽空分选收集仓，阻止气溶胶颗粒的 形成。
长远而经济的投资 客户使用的BD FACSAria系列机型可以随时升级到下一代的平台而不需重新购置一台设备。不断升 级是BD公司的又一大创新，可以将BD FACSAria或BD FACSAria II 系统随时升级为BD FACSAria III。 作为杰出的流式分选平台，选择BD FACSAria就意味着持续的升级空间和长久的前沿技术保障。
激发光路 激发光路的组成包括：多根引导光纤、固定波长的激光，光束整 形装置和消色差聚焦透镜。各激光聚焦形成的光斑在空间上相互 分离，并各自聚焦成形 (9 x 65 微米)。光斑聚焦越集中，荧光标 记的微粒通过激发点时产生的信号就越强。光胶耦合的荧光透镜 能最大限度的将发射光从检测点传递给荧光收集光路。由于光路 和样本流均固定，仪器光路的正交状在不同实验、不同日期间一 直保持不变。
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FSC-W
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分选CD45RA+和 CD45RA- Tregs的设门策略 BD FACSAria III分别使用 70-μm或 100-μm喷嘴的设置 (分 别使用70 psi 或 35 psi压力设置，87 或 60 kHz振荡频率) 。CD45RA+ Tregs 和CD45RA- Tregs使用纯度模式分选。
facsaria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定_医学论文
FACS Aria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定_医学论文FACS Aria流式细胞分选调试参数和最佳条件的设定_医学论文作者：曹云新, 胡金涛, 杨安钢【摘要】目的：探讨FACS Aria流式细胞仪分选细胞亚群的调试参数和最佳设定条件. 方法: 采用进口分选质控试剂Accudrop Beads和自配鞘液为材料. 在FACS Aria流式细胞仪上，对分选液滴的振荡频率(Freq)、振动幅度（Ampl）和液滴间隔值（Gap）进行调试，摸索分选的最佳设定值. 结果：使用100 mm喷嘴，主液流窗Ampl设定为30±2，Gap灰带宽度为(2.0±0.5) mm，侧液流断点窗 4个分叉斑点直径调为(2±0.2) mm，4叉液流束光斑调至集中明亮，边界清晰，液滴偏转延时值为25±1附近，调试效率最高. 其分选纯度可达99%, 分选回收率可达98%. 结论: 流式分选条件的设定和建立，对于提高分选细胞活性，获得高纯度和高回收率的细胞，提供了快速调试的途径.【关键词】流式细胞术；分选细胞；条件【Abstract】 AIM: To find the optimal adjustment conditions and parameters for sorting cell subsets with FACS Aria flowcytometer. METHODS: Using imported sorting quality control Accudrop Beads and self made sheath fluid as materials, we kept adjusting the oscillation frequency and amplitude (Ampl) and the gaps between drops (Gap) of the sorted sample until an optimal configuration for the sorting was found and set. RESULTS: Using the 100 um nozzle, the mainstream window Ampl was set at 30±2, the Gap width at (2.0±0.5) mm, and each spot of the four forks in the side stream breakoff point window was (2±0.2) mm, the light spot of the 4 fork streams was adjusted until it was focused and bright and had clear boundaries. When the drop declination delay value was 25±1, the adjustment efficiency reached its optimum, with its purity at 99% and sorting recovery rate at 98%. CONCLUSION: Rapid adjustment and fixing of the conditions for sorting with flow cytometry is ofsubstantial significance to the purity, activity and precision of the sorted cells as well as the stability, efficiency and success of sorting.【Keywords】 flow cytometry sorting cell conditions0 引言在流式细胞分选前的参数设定和调试是细胞分选的关键性工作，它的好坏与快慢，直接影响细胞分选的效率、纯度和精度. 目前国内外对于分选技术方法学研究和探讨的文献报道并不多见［1-2］. FACS Aria流式细胞仪是集临床和科研为一体的高精密分析和高速细胞分选的仪器，其主要用途是从细胞群中高速分选出被指定的细胞、细胞器或质点，以便做进一步细胞鉴定、功能研究或细胞克隆培养，其分选速度之快是其它方法无法比拟的［3-4］. 由于分选之前仪器的条件设置和调试比较繁琐、费时,如果不能很好地掌握这些参数和条件的设置技巧，将会对分选细胞的效率、纯度、精度以及活性的保持产生较大影响. 为最大限度地发挥仪器的功能和效率，我们对细胞分选调试的参数和最佳条件的设定做了一些探索和研究.1 材料和方法1.1 材料FACS Aria分选型流式细胞仪, 稀释鞘流液FACSFlow，溶血液和分选质控试剂Accudrop Beads等均为美国 Becton Dickinson 公司产品； Q Prep型免疫学样品制备仪，美国 Beckman Coulter 公司产品；分选所用标本为第四军医大学西京医院查体健康人肝素抗凝全血.1.2 方法1.2.1 样品制备将Accudrop Beads用FACSFlow液稀释后备用，分选样品用含肝素的真空采血管收集抗凝血2～3 mL,充分混匀，每份取100 mL全血样品加入CD4 FITC和CD8 PE避光染色30 min, 上Q Prep型免疫学样品制备仪,溶解红细胞，稳定和固定白细胞，3 h内上机分析和分选.1.2.2 主液流调校观察主液流窗的主液滴和卫星点及液流断点位置状况：将主液流断点窗的Stream打开，并设为中速（应用70 mm喷嘴）,相对固定液滴振荡频率（Freq）,调液滴振动振幅（Ampl），使第1液滴的值落在240附近，液滴间隔值（Gap）尽量恒定,使液流断点位于窗口的中上部.1.2.3 侧液流调校打开侧液流窗的高压，激活分选测试（Test sort）窗. 此时运用主液流窗中的Ampl调试，使四束偏转液流和废液流 5个光斑间距尽可能地拉开，各光斑调至明亮、集中. 此后安装两路或四路分选收集管装置. 打开分选窗，点开分选门，观察偏转的分选液流是否落入分选相应的收集管正中. 如果没有，可轻轻左右拉动侧液流窗的电压滚动条，使分选液流准确落入收集管中. 之后关闭分选电压. 将主液流窗中实际调出的Drop1值添到Drop1默认窗口中. 液流调整好后的Gap值应在默认值±3的范围内.1.2.4 确定液滴偏转延迟加电时间建立一个新的实验文件夹，再建立两个子文件夹(Specimen和Tube). 在右侧电脑的通用工作页面上建立获取模板，用横轴FSC A和纵轴SSC A建立一个散点图，并设单个微球的矩形门P1. 点击Tube使其变为绿色的采集箭头,打开分选窗口，在Device窗口中将选项设为2 Tube，在Precision中选为Initial，在Target events选项中选为Continuous. 赋予Left 为P1. 上样已稀释的Accudrop beads，调整细胞流速为每秒2000～4000个，打开分选电压，点击滤光片图标（Optical Filter）. 此时，侧液流窗口出现两个框，调整Drop delay值，使左框中粗调和细调的光斑值均大于等于95%.2 结果2．1 主液滴、卫星点及液流断点最佳位置主液流窗中主液滴、卫星点及液流断点最佳位置，Gap灰带的适中位置在主液流窗的中上部，主液滴各滴形状规则，卫星点融入液滴良好（图1A）. 而Gap灰带位置落的较高时，液滴无规则形状，无卫星点出现(图1B). 若调试不合理，卫星点太多（图1C）. 图1D～F也均属调试不佳，无法进行正常分选的图形.2.2 侧液流断点窗5叉斑点状况4个分叉斑点直径应在2 mm左右,中间废液斑点应在4 mm左右. 此外，如果看不到左边两束的斑点，可用下方摄像头的螺钉调整，直到光斑较亮较粗为止. 下方摄像头螺钉主要是用来调激光照明灯亮度强弱的，当调到最佳位置时，激光灯珠最亮，此时4叉液流会显示的很清除.2.3 CD4+ T和CD8+ T淋巴细胞亚群分选结果人全血经CD4 异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）和CD8 藻红蛋白(phycoerythrin，PE)直接标记染色后，分别获得的CD4＋ T 和CD8＋ T淋巴细胞亚群分选结果（图2），分选纯度为99%, 回收率达到98%. 说明仪器的分选参数设置正确,仪器分选处于最佳状态.3 讨论流式细胞分选是现代细胞分析领域重要的技术之一［5］. 流式细胞分选功能主要是由细胞分选器来完成, 其原理是由喷嘴射出的液流柱在电信号作用下发生振动,断裂形成均匀的小液滴. 系统根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中, 使用不同孔径的喷嘴及改变液流速度,都可能会改变分选效果［6］. 从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间. 精确的调校仪器参数和设定液滴的延迟偏转时间是决定分选质量的关键,可根据具体要求进行适当调整.我们在调试中发现，刚开机时主液流窗常常出现图1E和图1F所示的不规则图形. 此时不要急于调整Ampl等参数，而应先开关几次Stream，待液流断点出现图形有所改善后，再调试Amp1,Freq, Drop1,Gap和Drop delay. 调整主液流液滴断点位置和卫星点时，Amp1的值应≤70,如果>70仍然无法调好，应立即关闭液流，然后反复开关2～3次. 若仍无效果，应检查喷嘴，看是否堵塞. 卸下喷嘴超声清洗后再重新调试，确保卫星点融入主液滴的位置正确. 主液流中的卫星点用100 mm喷嘴时应不大于3个，而70 mm喷嘴不大于5个, Gap框外的值结合Ampl做微小调试，使其达到恒定并不再有太多波动，即可获得如图1A理想的调试结果. 而调侧液流断点窗5叉斑点时，如出现液流分束不清楚、有毛刺，可进一步调整主液流窗的Ampl，也可以同步调整侧液流窗中的2nd 和3nd Drop，给这些液滴的加电量添加一个适当的补偿因子，使之达到液流分束明亮、集中、清楚. 液滴延迟时间能否快速调整好，与Accudrop Beadsd的稀释浓度和P1门是否赋予分选窗，以及分选窗中的Sort是否打开有很大关系. 液滴延迟用于设置细胞检测点与断点处之间的时间间隔，通常为10～140液滴间隔，调整液滴延迟数值决定了即将偏转的液滴的加电时间，调试时应遵循的规律是Drop值愈小，Drop delay应愈小.综上所述，该方法可以快速、准确地设置流式细胞仪的分选参数. 对于做6，24，96孔板和载波片分选细胞也非常实用，可为使用流式细胞仪进行细胞亚群分选的科研人员提供一定的参考价值.【参考文献】［1］Francisco JA, Campbell R, Iverson BL, et al. Production and fluorescence activated cell sorting of Escherichia coli expressing a functional antibody fragment on the external surface［J］. Proc Natl Acad Sci USA, 1993, 90(22): 10444-10448.［2］Lekkerkerker A, Logtenberg T. Phage antibodies against human dendritic cell subpopulations obtained by flow cytometry based selection on freshly isolated cells［J］. J Immunol Methods, 1999, 231(1 2):5363.［3］Georgiou G, Stathopoulos C, Daugherty PS, et al. Display of heterologous proteins on the surface of microorganisms: From the screening of combinatorial libraries to live recombinant vaccines［J］. Nat Biotechnol, 1997, 15(1): 29-34.［4］何小军, 胡静, 夏云, 等. 流式细胞术检测临床实体瘤细胞周期蛋白表达的方法研究［J］. 中国实验诊断学, 2007, (01): 20-23.［5］辛忠涛. 流式细胞分选技术在微生物表面展示文库筛选中的应用进展［J］. 微生物学免疫学进展, 2003, (03)：62-66.［6］徐勇. 免疫磁珠分离及流式细胞仪分选纯化外周血CD34+/CD90+干细胞［J］. 临床检验杂志，2004, (04)：871-873.。
细胞分选介绍
BD FACSAria高速流式细胞分选仪自从1974年BD公司与美国斯坦福大学合作研制出全球第一台流式细胞分选仪，BD公司就不断推陈出新，在流式细胞技术领域里始终保持领先地位。
BD公司最新推出的革命性的流式细胞高速分选仪FACSAria，更是划时代的流式细胞仪。
这一新型仪器是BD公司25年的流式细胞仪研制经验的集体智慧的结晶。
BD FACSAria流式细胞分选仪的名字来自音乐名词Aria, 取意引人注目的独奏，因为它不需要特殊的房间设备，也不要求使用者有多年的技术经验，就可以独立完成工作。
BD FACSAria 的高速细胞分选和多色分析的性能极佳，而操作却非常简便。
BD FACSAria流式细胞分选仪为高性能流式细胞仪建立了更高的新标准。
由于使用了全新的设计，BD FACSAria流式细胞仪成为世界上第一台使用石英杯流动池固定校准的，可以完成高速细胞分选的台式流式细胞仪。
BD FACSAria流式细胞分选仪使用了许多先进技术，大大降低了高速分选的成本，易于使用，分选与分析性能无与伦比，是科学研究的一大进步。
BD FACSAria流式细胞分选仪的核心技术BD FACSAria流式细胞分选仪的核心是石英杯流动检测池。
仪器使用了全新设计，实现了完全的固定光路系统。
这一设计使用户从繁琐的仪器优化调整工作中解放出来，将主要精力集中在科学研究上。
使用这种新型石英杯流动检测池，可以在低功率激光器的条件下，获得非常高的检测灵敏度。
因此，仪器可以使用空气制冷的固态激光光源，这样一来，BD FACSAria流式细胞分选仪就不再使用与高功率激光器配套的特殊电源和冷却设备了。
BD FACSAria使用光导纤维系统，将激光器发射出的激光束精确、稳定地聚焦在样本流轴心位置。
光导纤维将三根激光束（波长分别为488 nm、633 nm和407 nm）精确汇聚在棱镜上，再通过棱镜，激光束聚焦在石英杯流动检测池的中间（图1）。
由于样本轴流位于石英杯流动检测池的中心，而激光束聚焦的位置也固定在中心，所以每日开机不再需要做仪器的优化调整。
BDFACSAria-复旦大学药学院药学仪器测试中心
BD FACSAria流式细胞仪标准操作规程部门：药学院仪器测试中心实施日期：2012年12月25日FACSAria开机程序1、安装合适的喷嘴（70um或100um）。
通常喷嘴至少要达到分选颗粒直径的三倍大小。
2、开启稳压电源，开启仪器主电源，并确保激光器处于关闭状态。
若仪器刚关闭，需等到系统压力完全消除（咝咝声停止）后，再开启主电源。
主电源激光器电源3、打开流动检测池上盖。
注意:若流动检测池上盖（配有切断激光光源的开关装置）未打开，或液流未启动，则不要先开启激光器。
激光长时间照射在没有液流流动的流动室石英杯壁上，会影响它的光学特性，降低它的透光率，因而降低流动检测池的性能。
保持流动检测池上盖处于开放状态，直到液流开放以后。
4、启动激光器，在电源板上按下相应的激光器电源按钮，等待约15分钟使其预热，等待过程中可继续执行步骤5。
5、启动计算机，在出现的登陆对话框中，输入用户名和密码，点击“OK”。
观察桌面右下角系统时间旁的网络图标中有一个显示仪器与电脑已连接。
6、运行BD FACSDiva Software软件，双击桌面上的快捷方式。
在出现的登陆对话框中，无需输入用户名和密码，直接点击“OK ”。
7、在“仪器框”中确认软件已经和仪器相连接；8、检查仪器窗口底部的液流系统水平；如果需要，则充满液体或倾空废液。
单击工作区工具栏中的“Instrument (仪器)”按钮，可以显示该窗口。
鞘液废液去离子水漂水乙醇9、在FACSDiva软件的“Instrument(仪器)”菜单中，选择“Fluidics Startup (启动液流系统)”选项。
该程序去除内置缓冲容器和液流管道中的去离子水，并代之以鞘液。
10、当“启动液流系统”程序完成后，使用控制软件来开启液流。
a)如需要，单击工作区工具栏中“Sort(分选)”选项，可显示液流断点窗口(Breakoff)和侧液流窗口(Side Stream)。
b)如需要，在“Sort (分选)”菜单中选择“Sort Setup(高速分选设置)”选项设置鞘液压力。
FACSAria流式细胞仪
侧向角散射光（SSC）
2. 荧光信号
散射光信号的特征
前向角散射光信号FSC
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3/6/2014
侧向角散射光信号SSC
散射光信号的特征
红细胞裂解的全血
荧光信号的特征
荧光信号的特征
什么是荧光信号
发射光的荧光强度与结合的位点成正比
当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过激光 束时，染料吸收光子跃迁到高能级，返回基 态时，染料释放出能量，大部分以光的形式 释放。这种系统
分选系统
Accudrop功能（Accudrop微球的分选）
分选模式
摄像头：监测侧液流 二极管激光以及滤片：检测Accudrop微球的 荧光 分选最佳时，即可精确计算从颗粒被检测至 液滴断开的时间
Purity Yield Single Cell Initial Fine Tune
1
3/6/2014
流式细胞仪的研究对象
它们有什么共同之处?
细胞表面抗原 胞内抗原 核内抗原 核酸 分泌蛋白
血细胞 原生动物细胞 藻类细胞 染色体
流式细胞仪
流式细胞仪的特征
Injector Tip
在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的 一种仪器；
Sheath fluid
灵敏度高 速度快 单细胞水平上分析 多参数分析（可同时标记多种荧光素） 可分析大量细胞 需要样本量少 出结果快 标本来源广：全血样本、骨髓、组织、培养细胞、穿刺物、 胸水、腹水、灌洗液、脑脊液、眼泪、乳汁、血清/血浆、 细胞裂解液
Fluorescence signals
BD FACSAria Ⅲ流式细胞分选仪
1.开机程序（1）开启稳压电源，启动计算机，在出现的登陆对话框中，输入用户名和密码，点击“OK”。
（2）开启仪器电源，打开所需激光电源。
若仪器刚关闭，需等到仪器系统压力完全消除后，再开启主电源。
（3）运行BD FACSDiva Software软件，双击桌面上的快捷方式。
在出现的登陆对话框中，无需输入用户名和密码，直接点击“OK”。
（4）仪器自动联机，在“Cytometer仪器框”中确认软件已经和仪器相连接即“Cytometer Connected”；检查此窗口底部的液流系统水平，如果需要，则充满液体或清空废液。
（5）在FACSDiva软件的“Cytometer”菜单中，选择“Fluidics Startup”选项。
按窗口提示步骤进行操作。
（6）将气路和液路从乙醇关机液桶断开，连接到鞘液桶相对应的接口上，点击done。
（7）确认装有O圈的闭合喷嘴在流动检测池上，点击done。
（8）取下闭合喷嘴，点击done。
（9）安装合适口径的喷嘴，保证O圈正确装入喷嘴。
（10）单击OK完成此过程。
（11）液流启动完成后，在“Sort”菜单中选择“Sort Setup”选项，确认设置模式与喷嘴的口径相匹配。
（12）开启液流。
（13）打开流动检测池上盖，打开分选区门，检查位于废液吸引器中的液流的位置，并检查断点液流窗口中的液流情况。
液流应顺利由喷嘴流入废液吸引器的中央。
液滴应该表现大小均匀，且以一定的距离相隔排列。
如果发现有液滴滴洒、不稳定或者任何液流异常现象，关闭液流，重新检查液流情况。
（14）关闭分选区门和流动检测池上盖。
2.关机程序（1）关闭液流。
（2）检查废液桶是否已满、乙醇关机桶是否需要补液。
（3）从流动检测池取下喷嘴。
（4）安装好闭合喷嘴，确定O圈在喷嘴上。
（5）在“Cytometer”菜单下选择“Cleaning Modes/Clean Flow Cell”选项。
（6）在进样管中装入约2ml FACSClean solution 或0.5%NaClO溶液，放于载物台上，点击OK。
BDFACSCantoII流式细胞仪参数
流式细胞仪参数一、总体要求1，仪器为全新整机进口产品，用于基础医学研究兼顾临床检测分析。
★2，仪器通过中国SFDA认证，提供注册信息，以符合临床的需要。
★3，江西省内至少有5家同等型号的用户，以方便学术和临床交流，江西省内有制作厂商的售后服务工程师二、技术参数1;光学系统★（1），标准配置两根激光器同时激发6色及以上荧光，第一激光器：488nm蓝色激光器；第二激光器：633nm红色激光器；★（2），可以升级配置405nm紫色激光器（3），荧光信号收集方式：采用八角形和三角形的全反射光路设计，先收集波长最长的弱信号（如PE-Cy7），再收集波长最短的荧光信号（如FITC），以保证是最高效的荧光信号收集。
（4），光信号通过光导纤维传输，非空气传输模式，保证光信号在传导过程中的最小能量损失。
（5），激光光路固化，无需人工调试校正光路（6），多激光配置采用空间立体激发，保证多激光同时激发简便易行（7），检测方式：180 ×430µm矩形石英流动检测室（8），仪器具有激光功率监控系统，在操作界面可以随时监控激光的功率和状态是否处于正常情况，确保激光器处于最佳的状态。
2;检测分析系统★（1），荧光灵敏度：提供SFDA检测报告，实测值FITC<12MESF、PE<11MESF（2），样本交叉污染率<0.1%（3），最小样本量≤50 µL，适合微量样本和稀有样本的检测（如婴幼儿血液）。
★（4），样本流速范围：10-120µL/分钟★（5），最大检测颗粒直径为50 µm。
（6），具备单管手动进样和全自动进样两种模式，两种模式独立并存，并可自由切换。
3;信号处理系统★（1），电子系统采用高达32比特的浮点运算，电子死时间为0，以最大程度保证数据检测精度和分辨率。
（2），最大数据储存量超过10的20次方，确保检测数据的完整和准确。
（3），信号脉冲处理：任意参数的脉冲信号高度(Height)，面积(Area)，宽度(Width)检测以及比率检测（4），时间参数：可与任意参数结合, 做动态检测（5），荧光补偿方式：全矩阵补偿方式，具有在线补偿、脱机补偿、网络补偿等功能。
BDFACSAriaIII流式细胞仪
BD FACS AriaIII流式细胞仪
仪器品牌型号产地搁置地址
BD FACS AriaIII美国科技楼C104
仪器功能介绍：
宽泛应用于单细胞或其余生物粒子的定量剖析和分选，不只能够定性、定
量剖析细胞膜、细胞质和细胞核中的各样细胞成分，并且能够研究细胞的各样功能状态（如细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化、酶活性、细胞膜通透性、氧化复原状态、吞噬性等），借助其分选系统，可将拥有特定形状或功能的细胞从混淆细胞集体中分别出来，再进行剖析或培育。
仪器主要技术参数：
主机系统：配置488nm ，633nm ，375nm ，405nm 四根激光器
光路 : 四激光立体空间激发方式实现13 色荧光剖析
光电倍增管 :光谱检测范围 300nm-1100nm
电压 150V-990V
荧光检测敏捷度：＜ 125MESF。
CV 值＜ 3%。
剖析速度： 70,000-100,000个细胞 / 秒。
分选速度： 50,000 个细胞 /秒。
分选纯度：＞ 99%。
2 路、 4 路分选。
配件 BD ACDU装置，能够在微孔板上定量分选细胞。
BDFACSAriaIII的简明操作规程
BD FACS AriaIII的简明操作规程一、开机（一）准备液路1. 将流式细胞仪的上盖打开。
2. 开启计算机，等待所有程序载入。
3. 开主机电源Mainpower，从电脑桌面上双击打开。
FACSDiva 软件，输入密码BDIS。
如果仪器刚关机，等压力完全降下来后再开启。
打开激光开关laser power；开启实验所需激光器电源。
4. 确认液流车中各种液体的液面水平，倒空废液或加满其他液体。
5. 从软件的Cytometer 菜单上选择Fluidic Startup，点击OK 确认。
将出现如下窗口：6．确认将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done；7．确认Closed-loop Nozzle 插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中；8．移去Closed-loop 喷嘴，完成后点Done；9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6 倍）；10．然后点OK，完成整个过程；11．从菜单上选择Sort>sort setup,确认setup 模式与喷嘴大小匹配。
（二）开液流1．打开液流窗口的液流；点击软件界面上的按钮打开分选液流窗口点击分选液流窗口的按钮，开启液流2．打开分选仓前的门，检查液流。
液流应为一条细线落入废液槽中；如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10 秒钟后再开，排除气泡。
3．关上分选仓前的门。
（三）设定液流断点1. 调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3 处。
Ampl 不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适；2. 确认卫星液滴与大液滴融合，如果没有融合，重新安装喷嘴；应该在断滴的6 滴之内融合；二、关机1.Cytometer>cleaning modes>sample line backflush 冲洗样本管路2min；2.准备一管洗液（0.5% 的次氯酸钠溶液），load，高速5min；3.准备一管DI Water，load，高速10min；4.打开sort blocker，在waste drawer两边加满水，清洗drawer；5.在断点窗口关闭液流；6.将喷嘴换成闭环喷嘴；7.准备一管DI water，Cytometer>Cleaning modes>Clean flow cell，清洗流动室两次；8.关软件，关机，关电脑。
浙江大学肿瘤研究所流式细胞分选实验注意事项
浙江大学肿瘤研究所流式细胞分选实验注意事项一、仪器简介BD FACSAria II流式细胞分选仪，现配备3个激光器（488nm、633nm和375nm），11个探测器，获取速度达70,000细胞/秒，分析速度达50,000细胞/秒，理论分选纯度大于98%，CV值小于2.0%，喷嘴可选择85mm或100mm，进样管和收集管可选择12*75mm流式管或15ml离心管，可两管或四管分选，配备BD ACDU装置，可以在微孔板上定量分选细胞。
二、预约方式与收费标准影响流式细胞分选成功与否的因素较多，在上机时曾发生荧光抗体选择不正确无法区分、细胞未处理成单细胞悬液堵塞管路、未做预实验无法找到待分选细胞群等情况，为避免浪费宝贵的样品和上机时间，请仔细阅读本注意事项，不明之处请联系管理员。
按照研究所规定，请先预缴费用，到账后预约上机，具体流程如下。
1.校内用户实验流程：（a）确定本仪器能否满足实验要求，可使用在线工具SpectrumViewer确定荧光种类是否合适；（b）确定预缴费用，由管理员开具“医学院肿瘤学重点学科平台大型仪器有偿服务平台测试清单”，凭清单去财务处办理转账（5000元以上请向管理员索取测试报告，10000元以上需提供合同）；（c）费用到账后联系管理员预约上机时间（提前一周左右）；（d）按预约时间上机完成分选，上机人员签三联单确认费用，如超出预缴费用则需开具测试清单补缴费用，如有结余可用于下次实验。
2.校外用户实验流程：其他流程同校内用户，发票在到账后联系管理员开具。
3.取消预约：最迟于预约时段前一天电话取消预约。
4.上机时间：周一至周五下午1:30-5:00。
5.上机地点：杭州解放路88号浙江大学医学院附属第二医院门诊楼1208室6.联系方式：葛维挺geweiting@ 0571-********杭州解放路88号浙江大学医学院附属第二医院门诊楼1303室7.收费标准：按《浙江大学大型仪器设备有偿服务管理办法》，流式细胞分选：校内800元/小时，校外1200元/小时。
FACSAria流式分选仪性能指标
高速分选型流式细胞仪用途 1.临床免疫学的应用：免疫状态的评价、免疫功能监测等。
2. 临床血液学的应用：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、干细胞移植等。
3. 临床肿瘤学的应用：肿瘤患者的免疫功能、粘附分子、细胞的DNA倍体、细胞周期、肿瘤预后、疗效监测、多药耐药性检测。
4. 血栓与止血的应用：血小板活化、血小板膜糖蛋白、血小板抗体等分析。
5. 骨髓与器官移植的应用：骨髓或脐血的干/祖细胞测定、移植前配型、移植后的免疫监测。
电力：100/115/230 VAC, 50或60 Hz, 最大功率1500 w工作条件1．检测性能技术参数荧光灵敏度FITC: <125 MESF; PE: <125 MESF荧光分辨率PI染色CEN样本, G0/G1期全峰宽PI-Area CV < % (488 nm)；Hoechst染色CEN样本, G0/G1期全峰宽PI-Area CV < % (407 nm)荧光线性度：P I染色CEN样本, 双粘体/单细胞比率2 (488 nm);Hoechst染色CEN样本, 双粘体/单细胞比率2 (407 nm)散射光灵敏度：可以有效区分固定血小板和噪音信号, 辨别细菌和 micron微球分析速度：100,000细胞/秒。
2. 分选性能分选速度：70,000细胞/秒振荡频率：1-100,000 Hz喷嘴规格：多规格喷嘴固定位置喷嘴，可拆卸, 可超声清洗，保证液流稳定分选纯度和回收率：在分选条件70 psi, 90 kHz，获取速度25,000/秒时,做四路分选: 纯度> 98%, 回收率> 80%。
提高分选速度，纯度不受影响。
分选细胞活性：在不同鞘液压力下分选细胞系和人外周血单个核细胞, 分选所得细胞培养数天后, 细胞均存活, 并有增殖分选细胞收集：二路分选: 收集管可以使用微量管, 12 75 mm管, 15 mL 管;四路分选: 收集管可以使用微量管, 12 75 mm管;细胞收集管位于封闭区域, 可有效控制气溶胶ACDU（选配件）：微孔板细胞分选(ACDU): 可以使用载玻片, 微孔板（6孔板, 24孔板, 48孔板, 96孔板, 384孔板）收集细胞，可以做单克隆细胞分选液滴时间延迟：红色二极管激光可以自动实时设定液滴时间延迟，确保准确分选细胞，用户可以手动或自动确定液滴延迟时间液流自动监控：可对液流断点进行自动监测，并自动调控，同时可以自动监测细胞堵塞无菌分选模式：管路自动无菌处理，确保细胞分选时无细菌污染3. 光路系统激发光路：稳定性光路，激光固定校准, 无需调整光路激光规格：全部使用IIIb级激光：488 nm Coherent Sappire固态激光, 功率13-20 mW;633 nm JDS Uniphase氦氖激光, 功率10-20 mW;激光光斑：椭圆形光斑, 高9 3 um 宽65 7 um检测方式：石英杯流动池, 与荧光物镜通过数值孔径比相同的光胶偶连，达到光收集效率最大化石英杯涡旋口设计，可自动去除流动池内的气泡光路引导系统：光导纤维将激光信号传导并固定于石英杯流动池;散射光和荧光信号经光导纤维传导并由全反射光信号收集系统进行收集。
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仪器的操作和使用
①打开电源，对系统进行预热；
②打开气体阈，调节压力，获得适宜的液流速度；开启光源冷却系统；
③在样品管中加入去离子水，冲洗液流的喷嘴系统；
④利用校准标准样品，调整仪器，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0 。
和90 。
散射的荧光强度最强，并要求变异系数为最小；
⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品；同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程；
⑥样品测量完毕后，再用去离子水冲洗液流系统；
⑦因为实验数据已存入计算机硬盘（有的机器还备有光盘系统，存贮量更大），因此可关闭气体、测量装置，而单独使用计算机进行数据处理；
⑧将所需结果打印出来。
在操作和使用中一定要注意如下事项：
1 ）光电倍增管要求稳定的工作条件，暴露的较强的光线下以后，需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作；另外还要注意磁屏蔽；
2 ）光源不得在短时间内（一般要1h 左右）关上又打开；使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常；
3 ）液流系统必需随时保持液流畅通，避免气泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要经过过滤、消毒；
4 ）注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等；
5 ）特别强度每次测量都需要对照组。