实验十二 反相高效液相色谱法分析尼泊金乙酯综述
基于超高效液相色谱_串联质谱法的纺织品中7种尼泊金酯类防腐剂测定_吴刚
Determination of 7 nipagin esters in textiles by ultrahigh performance liquid chromatography in combination with mass spectrometry
2 WU Gang 1 ， ，ZHAO Shanhong 1 ，WU Jianjian 1 ，DONG Shuozhuai 3 ，
GUO Fanglong 1 ，WANG Lijun 1 ，YE Qingfu 2
（ 1. Zhejiang Academy of Science and Technology for Inspection ＆ Quarantine ，Hangzhou ，Zhejiang 2. Institute of Nuclear Agricultural Sciences ，Zhejiang University ，Hangzhou ，Zhejiang 3. Silk Test Center ，Zhejiang Entry-Exit Inspection ＆ Quarantine Bureau ，Hangzhou ，Zhejiang 310015 ，China ； 310029 ，China ； 310012 ，China ）
。 尼泊金酯因具有酚羟基结构而有杀菌活
［4］
Quattro Premier XE 型， 配电喷雾离子源， 美国 Waters 公司） ， 色 谱 柱： Acquity UPLC BEH C 18 ， 50 mm × 2. 1 mm （ 内径） ， 1. 7 μ m （ 美国 Waters 公司） ， 可控温 超声波浴（ 频率 45 kHz ， 能保持温 度 （ 70 ± 3 ） ℃ ， 昆 山舒美 超 声 仪 器 有 限 公 司 ） ， HS501 振 荡 器 （ 德 国 IKA 公 司 ） ， R210 型 旋 转 蒸 发 仪 （ 瑞 士 BUCHI 公 司） ， 分 析 天 平 （ 精 度 为 0. 1 mg 与 1 mg ， 瑞 士 Metter氮 吹 仪， 50 mL 具 螺 旋 盖 玻 璃 管， 平底 Toledo 公 司） ， 烧瓶， 容量 瓶 等 玻 璃 仪 器， 玻 璃 注 射 器， 0. 22 μ m 聚 四氟乙烯过滤头 。
高效液相色谱测定复方硝酸益康唑乳膏中尼泊金酯的含量
高效液相色谱测定复方硝酸益康唑乳膏中尼泊金酯的含量3曾立华,熊喜悦,雷春华,尹笃林(湖南师范大学化学化工学院,湖南长沙 410081) [摘要] 用乙醇2水作流动相,建立了同时测定复方硝酸益康唑乳膏中对羟基苯甲酸甲酯和丙酯的高效液相色谱方法,分析柱为Hy pe r oDsc C18(250mm ×4mm ,i 1d)色谱柱,流动相:乙醇:水=45:55,流速为018mL m in -1,检测波长为254n m ,回收率为94192%～107142%。
经测定,复方硝酸益康唑乳膏中尼泊金甲酯、丙酯质量分数分别为1197‰(g 1g -1)、01950‰(g 1g -1),含量测定重复性R S D 分别为0162%、115%。
[关键词] 尼泊金酯;含量;高效液相色谱[中图分类号]R 28411 [文献标识码]A [文章编号]1673-016x(2008)04-0037-03HPL C Determ i na ti on of Pa ra ben s i n the Co m poun d Econa zole N itra te C r eamZENG L i 2hua,X I ONG Yi 2yue,LE I Chun 2hua,Y I N Du 2lin(Collo ge o f Che m istry &Che m ica l Engineering,of Huna n N or m a l U niv eisity ,Changsha 410081,China )[Ab stra ct]HP LC was app lied to the de ter m ination of Parabens in the co m pound econaz ole nitrate crea m.The Hyper oD sc C18(250mm ×4mm,i .d )wa s used as the stationary phase,and a m ixed solution of ethanol 2wa ter in the ratio of 45to 55(by volum e )was used as the mobile phase ..UV 2detecti on at the wavelength of 254nm was used.The fl ow 2rate of mobile phase was 0.8mL m in -1.Recover y were te sted in the r ange of 94.92%～107.42%.Thr ough de ter m ining, 1.97‰(g .g -1)Methyl Paraben and 0.95‰(g .g -1)propyl Paraben were f ound in the Compound Econaz ole N itrate C ream ,and good repr oducibility (R S D 0.62%、1.5%res pectively )was obtained for the a ssay .[Key words]HP LC;parabens;de ter m inati on 前言对羟基苯甲酸酯即尼泊金酯是国际上公认的广谱性高效安全的食品防腐剂,广泛用于食品、化妆品及医药等行业[1-3]。
高效液相色谱法测定柑橘中6种防腐保鲜剂的残留
相对标准偏差为 ２ ． ３ ６ ％￣ ６ ． ７ ８ ％。该方法中乙萘酚 的检 测限为 ０ ． ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ ，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯 甲酸乙酯、２ ， ４ ． Ｄ、 苯基苯酚
和联 苯 醚 的检 测 限 为 １ ． ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ 。该 方法 简便 ，快 速 、准确 、灵 敏度 高、 重现 性好 ，能满 足柑 橘 中 ６种 防腐 保 鲜剂 残 留量 的检 测 要 求。 关键 词 ： 高效 液相 色谱 法 ；柑 橘 ； 防腐保 鲜剂 ；残 留量 文章 篇 号 ： １ ６ ７ ３ — ９ ０ ７ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ８ ． ２ ０ ２ ５ ． ２ ０ ２ ９
ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｇ ｏ ｏ ｄ ｌ ｎｅ ｉ ｒ ａ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｓ ｈ ｉ ｐ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｈｅ ｔ ｐ ｅ ａ ｋ ａ ｒ ｅ ｓ ａ ｎｄ ａ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ６ ｐ ｅ ｓ ｅ ｖａ ｒ ｉ ｔ ｖ ｅ ｓ ｉ ｎ ｈｅ ｔ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ １ ． ２ ． ０￣ ｔ ｇ ／ ｍＬ． ｗｉ ｈ ｔ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ６ Ｐｒ ｅ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｒｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｏ ｆ ｉ ｎ Ｏｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｂ ｙ Ｈｉ ｇ ｈ Ｐｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ
Ｌｉ ｑｕｉ ｄ Ｃｈｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐｈ ｙ
（ 广 东省 惠州市质量 计量 监督检 测所 ，广 东惠州 ５ １ ６ ０ ０ ３ ）
摘要 ：建立 了同时对柑橘 中 ６ 种 防腐保鲜剂 包括对羟基苯 甲酸甲酯 （ 尼 泊金 甲酯） 、对羟基苯甲酸 乙酯 （ 尼泊金 乙酯） 、乙萘酚、 ４ － 苯基苯酚、２ ， ４ － 二氯苯氧乙酸 （ ２ ， ４ － Ｄ）和联苯醚 （ 二苯醚）残留量进行测定的高效液相 色谱法。样品经 乙醚提取后，活性炭柱净化 。
尼泊金乙酯合成工艺的探究【文献综述】
尼泊金酯系列的研究越来越重要，研究和开发新型尼泊金酯异常活跃，预计尼泊金酯类将会有很大的发展而尼泊金乙酯由对羟基苯甲酸和乙醇在催化剂的作用下合成，不同的催化剂相对应的反应条件也不尽相同，按照催化剂不同，合成尼泊金乙酯的可以分为以下几类。
2.3FeCl3·6H2O
FeCl3·6H2O是一种固体催化剂，在催化剂的作用下，合成尼泊金乙酯的最佳条件为：醇酸摩尔为2:1、催化剂与酸的摩尔比为0.12:1、反应时间为3h，酯化率达77.5%。用FeCl3·6H2O代替浓硫酸进行催化，减少了三废污染，它同时还具有来源广泛，性质稳定，不溶于反应体系，反应后处理简便，是一种有前途的酯化反应催化剂[6]。
2.6大孔强酸性离子交换树脂
大孔强酸性离子交换树脂是一种物理催化剂，在此催化剂的作用下，合成尼泊金乙酯较好反应条件为：醇酸摩尔比为4:1，催化剂用量为反应物质量的20%，反应时间为8h，收率达95.5%，据估计进一步延长反应时间和增加催化剂用量，产率还能有所提高[8]。使用大孔强酸性离子交换树脂做催化剂它具有反应生成物与催化剂极易分离、操作方便、催化剂可反复使用，对设备无腐蚀作用、无三废排放、副反应少、产品质量好等优点。
2.7氯化高锡
氯化高锡是无机化合物，在它做催化剂的作用下，合成尼泊金乙酯较佳反应条件为：酸醇及催化剂的摩尔比为1∶4∶0.004污染问题[9]。氯化高锡是一种很好的催化剂，它与乙醇相溶，反应处于均相体系，催化活性高，无副反应发生，反应完毕后可从滤液中通过蒸干溶剂的方法进行回收，工艺条件及后处理极为简便，而其设备腐蚀性远比浓硫酸低，而且催化剂原料价廉易得，稳定性良好。
尼泊金乙酯合成工艺的探究【开题报告】
[7]王明星,宋溪明,常晓红,孔玉梅.对羟基苯甲酸乙酯合成的新方法[J].辽宁大学学报, 2000(01):16-29.
[8]ห้องสมุดไป่ตู้
[9]杨东伟,王芬.壳聚糖磷钨酸盐催化合成尼泊金乙酯[J].化工时刊,2008(10):45-47.
[10]
[11]钱运华,金叶玲.壳聚糖硫酸盐催化尼泊金乙酯的合成[J].化工时刊,2004(18): 57-58.
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[3]Shibasaki I. Antimicrobial activity of alkyl esters of p-hydroxybenzoic Acid[J]. Journal of Fermentation Technology, 1969(47): 167-177.
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[5]杨水金,梁永光,余新武,孙聚堂. TiSiW12O40/TiO2催化合成尼泊金酯的研究[J].湖北日用化工,2000(04):20-21.
二、研究目标与主要内容（含论文提纲）
以对羟基苯甲酸和无水乙醇为原料，通过选择优秀的催化剂﹑合适的反应温度﹑调节催化剂的投料比例来生产尼泊金乙酯，使实验过程比较高效﹑副产物少﹑流程简单可靠﹑经济效率比较高，实验内容主要就是研究原来的合理优秀的催化剂，最佳反应温度，最佳比例，主要研究这三方面内容。
论文提纲：第一部分 引言
鉴于硫酸催化法存在上述缺点,本论文拟采用二氯亚砜做为催化剂，对羟基苯甲酸和无水乙醇为原来，在加热回流条件下，合成尼泊金乙酯。
反应方程式：
HOC6H4COOH + CH3CH2OH → HOC6H4COOCH2CH3+ H2O
四、中外文参考文献
[1]Han Yi, Jia Xiaoyu, Liu Xinli, Duan Taicheng, Chen Hangtinget al.DLLME Combined with GC-MS for the Determination of Methylparaben,Ethyparaben,Propylparaben and Buthylparaben in Beverage Samples[J].Chromatographia, Vol. 2010(4): 351-355.
对羟基苯甲酸乙酯
对羟基苯甲酸乙酯班级：应化三班学号：100504303XX：韩毅简介对羟基苯甲酸乙酯又称尼泊金乙酯，对霉菌，酵母及细菌有广泛的抗菌作用。
本品无毒性，是食品，饮料，化妆品，日用品，医药等广泛使用的有效保鲜剂和杀菌防腐剂，也是医疗器械的清洗消毒剂，同时在食品行业，生物化工和生化试验中用作消毒剂。
由于本品无毒性，欧美发达国家采用本品作消毒剂的用量不断增大，我国也在推广用本品作消毒剂。
随着人民生活水平的不断提高，使用本品作消毒剂的量也将越来越大，而目前国内生产规模和生产总量相对较小，尚不能满足市场的需求，尤其是不能满足出口的需求，市场缺口很大。
本品也是重要的有机合成原料。
目录：基本信息……………………………………………………………………1.1性状介绍……………………………………………………………………2.1 质量标准……………………………………………………………………3.1 药理作用……………………………………………………………………4.1 作用用途……………………………………………………………………5.1 应用测定实例………………………………………………………………6.1 相关品种……………………………………………………………………7.1 生产工艺流程………………………………………………………………8.1 摘选出处……………………………………………………………………9.1 工艺流程图…………………………………………………………………10.1基本信息：【外文名】Ethyl Hydroxybenzoate，Nipagin A，Ethylparaban【药理作用】本品对真菌的抑菌效果较强，但对细菌的抑菌效果较弱。
用作抑菌防腐剂，广泛用于液体制剂及半固体制剂，也可用于食品及化妆品的防腐。
【规格】常用浓度0.03%～0.l5%。
另0.l%滴眼剂可用于治疗真菌性角膜溃疡。
0.2%为食物防腐，0.3%为制剂防腐。
【相对分子量】166.18【熔点（℃）】116～118【沸点（℃）】297～298（分解）性状介绍：本品为白色、晶状、几乎无臭的粉末。
高效液相色谱法同时测定饲料中多种酚类抗氧化剂和尼泊金酯类防腐剂
高效液相色谱法同时测定饲料中多种酚类抗氧化剂和尼泊金酯类防腐剂杨春林;李佳峻;胡强;吴蔚;吕小艇【摘要】实验建立了同时测定饲料中4种酚类抗氧化剂(没食子酸丙酯、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、特丁基对苯二酚)和3种尼泊金酯类防腐剂(尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯)的高效液相色谱方法.样品以甲醇-乙腈溶液(30:70,V/V)超声提取后经Inertsil ODS-sp C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,用甲醇/乙酸铵溶(pH=3.5)作流动相梯度洗脱,分别在波长256 nm和280 nm进行检测,外标法定量.结果表明,7种物质浓度为0.1～100.0μg/mL时与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均大于0.9999,检出限(3S/N)为0.027～0.102mg/L,平均回收率为79.62％～112.29％,相对标准偏差(n=6)为2.65％～8.38％.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2013(000)001【总页数】4页(P39-42)【关键词】高效液相色谱法;饲料;防腐剂;抗氧化剂【作者】杨春林;李佳峻;胡强;吴蔚;吕小艇【作者单位】乐山市产品质量监督检验所;乐山市产品质量监督检验所;乐山市产品质量监督检验所;乐山市产品质量监督检验所;乐山市产品质量监督检验所【正文语种】中文【中图分类】S816.17脂类氧化酸败是饲料在加工、储运和使用过程中发生品质恶化的主要原因之一（黄涛等，2004）。
在饲料中添加抗氧化剂能够阻止或延缓饲料中某些营养物质氧化，延长饲料贮存时间（张曼等，2006）。
可作为抗氧化剂的物质很多，其中没食子酸丙酯（PG）、叔丁基羟基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）和叔丁基对苯二酚（TBHQ）等酚类抗氧化剂目前应用最为广泛（杨晓凤，2011）。
除此之外，防腐剂也是常用的保证饲料安全卫生的手段。
尼泊金酯（又名对羟基苯甲酸酯）作为常用防腐剂之一，其抑菌范围广、毒性低、防腐效率高且防腐效果受pH变化的影响小，是饲料中常用的防腐剂（周建科等，2010）。
液相色谱法测尼泊金甲酯
反相色谱法测定尼泊金甲酯的含量一．实验目的1.了解反相色谱法分离尼泊金甲酯。
2.掌握利用标准曲线法（外标法）进行色谱定量分析。
二．实验原理1.高效液相色谱与气相色谱比较，可供选择的流动相种类较多，从有机溶剂到水溶剂，既能用纯溶剂又可用二元或多元混合溶剂，并可任意调配比例，通过改变溶剂极性或强度继而改变色谱柱效能、分离选择性和组分的容量因子，最后实现改善色谱系统分离度的目的。
2.液相分析法的特点：分析速度快。
分离效率高。
灵敏度高、易于实现操作自动化。
适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
3.高效液相色谱仪流程示意图4.外标法也称为标准曲线法。
特点及要求：外标法不使用校正因子，准确性较高;操作条件变化对结果准确性影响较大;对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析5.采用外标法测定尼泊金甲酯的时候，首先在一定条件下测定不同浓度的尼泊金甲酯标品的峰面积，绘出峰面积A与浓度的标准曲线，在严格相同的操作条件下，测定试样中的待测组分尼泊金甲酯的峰面积。
由测得的峰面积在标准曲线上查出被测物的浓度。
三．仪器与试剂色谱仪: Agilent 1100 色谱柱：C18柱， 250 mm×4.6 mm流动相: 甲醇:水(70:30)，流速: 1.0 mL/min检测器: 紫外检测器 254 nm四．基本操作1. 打开电脑主机，再打开高效液相色谱的模块，启动工作站并初始化仪器。
2. 仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：流动相组成=甲醇:水(70:30) ，流速=1.0 mL/min ，柱压=200 kPa。
3. 运行程序，清洗色谱柱，直至基线平稳，然后进样，进行测定。
4. 测定结束后，依次用纯水、100%甲醇洗涤20分钟，退出主程序，关闭计算机。
五．实验步骤1.标准溶液的配置：用流动相为溶剂，用标准储备液的原液配置：0.02mg/ml。
0.04mg/ml. 0.06mg/ml.0.08mg/ml. 0.10mg/ml。
羟苯乙酯尼泊金乙酯检验操作规程
羟苯乙酯尼泊金乙酯检验操作规程1 目的：建立羟苯乙酯尼泊金乙酯检验操作规程。
2 适用范围：适用于羟苯乙酯（尼泊金乙酯）的检验。
3 职责：检验人员对本规程的实施负责。
4 规程：4.1 编制依据：《中国药典》2010年版二部P1223。
4.2 质量指标：见《羟苯乙酯（尼泊金乙酯）质量标准》。
4.3 仪器与用具：紫外分光光度计、熔点仪、红外光谱仪。
4.4 试药与试液：硝酸汞试液、标准氯化钠、标准硫酸钾、稀硫酸铁铵、冰醋酸、氢氧化钠滴定液（1mol/L）、溴麝香草酚蓝指示液。
4.5 操作方法4.5.1 性状：本品为白色结晶性粉末；无臭或有轻微的特殊香气，味微苦、灼麻。
本品在乙醇或乙醚中易溶，在氯仿中略溶，在甘油中微溶，在水中几乎不溶。
熔点：按《凝点测定操作规程》测定，本品的熔点为115-118℃。
4.5.2 鉴别4.5.2.1 液相色谱：取本品和羟苯乙酯对照品适量，分别用流动相溶解并稀释制成每1ml含20g的供试品溶液与对照品溶液；照有关物质项下的色谱条件测定，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
4.5.2.2取本品约0.1g，加乙醇2ml使溶解，煮沸，加硝酸汞试液0.5ml，放置后逐渐生成沉淀，上清液显红色。
4.5.2.2 紫外光谱：取本品，加乙醇制成每1ml中含5μg的溶液，照《紫外-可见分光光度法检验操作规程》测定，在259nm的波长处有最大吸收度。
4.5.2.3 红外光谱：按《红外分光光度法检验操作规程》检验，本品的红外光吸收图谱应与对照图谱（光谱集850图）一致。
4.5.3 检查4.5.3.1溶液的澄清度与颜色：取本品1.0g，加乙醇10ml 使溶解，溶液应澄清无色；如显色，与黄色或黄绿色1号标准比色液比较，照《澄清度检查操作规程》检查，不得更深。
4.5.3.2 酸度：取溶液的澄清度与颜色项下溶液2ml，加乙醇2ml与水5ml，摇匀，加溴甲酚氯指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至显蓝色，消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）不得过0.1ml。
液相色谱法测定化妆品中多种防腐剂
Ｏ 引 言
在化妆 品中使用防腐剂主要作用是防止微生物
在产品中生长 ， 保持护肤品的性质稳定 以及开盖使
用 后不 易变 质 。
３ 标准品（ ） 纯度 ＞ ５ ： ９ ％） 尼泊金 甲酯 、 尼泊金 乙酯 、 尼泊金丙酯、 尼泊金丁酯 ； 甲基异噻唑啉酮和 甲基 氯异 噻唑 啉酮 。 ４ 标准溶液储备 液： ） 准确称取各标准品 （ 精确 至０１ｇ ， ．ｍ ） 以甲醇配制成 １０ ｍ ／ ００ ｇ Ｌ的单个标准储 备液。根据检测需要用 甲醇 配制 １０ ｇＬ的混合 ０ｍ ／
４ 流动相 （ ） 见表 １ 所列 ） 甲醇 ＋ ， ： 水 经过滤脱 气， 梯度洗脱。
表１ 流 动相 的梯 度 洗 脱 程 序
因此 ， 正确使用防腐剂是生产企业应遵循的规 则， 而正确快捷的检验方法是对化妆品安全使用的 有 效监 管 。
时间（ ｉ） ｍｎ
００ ．
２． ５
分别取标准工作液系列 １１ 进行 高效液相色 ０Ｌ ｘ 谱 分析 ， 用峰 面积 与标 准 工 作溶 液 浓 度 作 图获 得 工
作 曲线 。混 合 标 准 溶 液 色 谱 图参 见 图 １ 图 ２ 图 、 。
ｍＶ
泊金甲酯； ④尼泊金乙酯 ； ⑤尼泊金丙酯； 尼泊金 ⑥
丁酯 。
Ｄ ｌ ｔ ｈ ： ４ ｍ ｅｅ ｏ ＡＣ ｌ ５ ｎ ｃｒ ２
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高效液相色谱法检测食品中四种尼泊金酯类防腐剂研究
112·FOOD INDUSTRY 当前，食品防腐剂的种类众多，其中效果最为显著的为尼泊金酯，虽然其优点众多，但其缺点也不容忽视，为了实现对其进行有效的检测，借助了高效液相色谱法。
此检测方法弥补了其他检测方法的不足，对于食品中的基质进行了有效的分离，同时其分析时间相对较短，进而保证了检测结果的准确性与高效性。
实验准备在实验过程中需要准备的有试剂、仪器与样品等。
本文所选用的试剂为四种常见的尼泊金酯，分别为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯与尼泊金丁酯，其纯度均高于99.0%；仪器主要包括高效液相色谱仪，其型号为1100型，并且配有DAN检测器；超声波清洗器、低速离心机、真空泵、电子天平、超纯水处理器与电热恒温培养箱等；样品主要为固体样品与液体样品，前者主要为豆干样品，具体为五香豆干、长富豆干与泡椒豆干等，后者主要为各类饮品与酱油，前者主要为统一饮品、康师傅饮品、娃哈哈饮品等，后者主要为麻辣酱油、黄豆酱油、红烧酱油、美味鲜生抽与海天生抽豉油皇等。
实验方法方法研究。
关于仪器分离条件的选择，首先，选择检测波长，此时的波长范围为250nm 到260nm间，并且检测中波长种类为五种；其次，选择流动相，其种类为两种，第一种为柠檬酸缓冲液，它是由柠檬酸与柠檬酸钠混合而成的，在对液路进行冲洗过程中结合了甲醇溶液，此后仪器稳定基线逐渐平稳；第二种是由甲醇与乙醇铵溶液混合而成的，对二者的比例进行了调整，同时运用了等度洗脱与梯度洗脱；最后，选择稀释溶液，将标准工业溶液移入到比色管中，此时要准备4份，此后利用流动相、甲醇、乙酸铵与去离子水进行定容，使1mL的工作溶液，达到10mL的刻度。
关于滤膜实验，此时主要为干扰实验，滤膜干扰主要是利用一次性的注射器，通过滤头对样品展开过滤，此时要对初滤液与中滤液进行收集，在基线稳定后，对其进行检测，并且对其结果进行比较。
固体样品。
对于豆干而言，首先，对豆干进行提取，其中的提取液为甲醇与乙醇，此后对二者的提取效果进行比较，具体的方法为：将试样分为2组，在取样后对其进行实验，并加入中间液，以此获取100mg/kg的试样，第一组的提取液为甲醇，而第二组的提取液为乙醇，在此基础上，开展回收率实验，其中的提取液为3.0mL，并且加入了氯化钠，在超声波清洗器与低速离心机的作用下，对提取液进行合并，并使其定容到刻度，同时要对其进行过滤，再利用HPLC进行测定，以此实现了对回收率的计算。
反相色谱法测定尼泊金甲酯的含量
用进样器吸取各浓度样品，每次 20μg，点击进样按钮，命名本次样品，设定运行时间 为 7min，点击确认。当系统提示 ready 时迅速将样品打入六通阀，并立即将扳手顺时针旋 至 60°处。每次运行完毕后记下保留时间和峰面积。 检测完毕，清洗柱体，逆序关机。
数据处理
峰面积-浓度曲线：
峰面积A 1.E+07 9.E+06 8.E+06 7.E+06 6.E+06 5.E+06 4.E+06 3.E+06 2.E+06 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 浓度 0.09（mg/ml） y = 1E+08x + 92042 R² = 0.989
反相色谱法测定尼泊金甲酯的含量 实验目的
了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作。 了解反相色谱法的基本原理。 掌握利用标准曲线法进行色谱定量分析的实验方法。
实验原理
高效液相色谱法定性 液相色谱法是一种分离技术。 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱 分离柱中的两相间不断进行着的分配过程， 因而当样品流出色谱柱的时间存在显著差异， 从 而使样品中各组分分离。其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过 此固定相的液体，称为流动相。 高效液相色谱可供选择的流动相种类较多， 并可任意调配比例， 通过改变溶剂极性或强 度继而改变色谱柱效能、 分离选择性和组分的容量因子， 最后实现改善色谱系统分离度的目 的。具有分析速度快、分离效率高、灵敏度高、易于实现操作自动化、适用于高沸点、热不 稳定有机及生化试样的特点 外标法定量 即标准曲线法。因不使用校正因子故准确性较高；操作条件对结果准确性影响较大；对 进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样：������������1 =3.226min，������������2 =7.255min。������1 =6395890，������2 =5956745。 易知，1 号为尼泊金甲酯，2 号为尼泊金乙酯。 带入方程可得������尼泊金甲酯=0.053mg/ml，ε=
使用气相色谱法和液相色谱法对六种尼泊金酯类进行分离测定
食 品 防腐 剂 。然 而 ， 几年 研究 表 明 ， 量 的尼 泊金 近 过 酯 会 破坏 生物 的细胞膜 ， 蛋 白质 变形 ， 抑制 微生 使 并 物细 胞 的呼 吸酶 系与 电子 传递 酶 系 的活性 。经 研究 发 现并 经 过实 际使 用 证 明 ， 泊金 酯 类 混合 使 用 比 尼 单 独使 用 的效 果 为佳 ， 大 多 数 食 品 、 妆 品 、 品 故 化 药 中都 同 时使用 多 种 尼 泊 金 酯 。 因此 ， 到 一 种 同 时 找 测 定 多种尼 泊 金酯 的方 法是 非 常必 要 的 。 我 国 国 内生 产 厂 家 的产 品都 是 一些 低 碳 酸 酯 ， 如尼 泊金 甲酯 、 乙酯 、 酯 与 丁酯 等 ， 一些 长链 酯 ， 丙 对 如庚 酯 、 酯 、 辛 壬酯 等 ， 国内 尚未生 产 。 因此 ， 文分 本 别 采 用气 相色 谱法 和液 相 色谱 法 ， 对尼 泊金 甲酯 、 乙
目前 几乎没 有 。 本 文 中 ， 相 色谱 法使 用非 极性 色谱 柱 ， 气 采用 程
１ 实 验 部 分
１ １ 仪器 ．
美 国 ａｉ ｎ 公 司 ６ ９ Ｎ气 相 色谱 仪 ， Ｉ 检 测 ｇｅｔ ｌ ８０ ＦＤ 器 及 １０ ２ ０液 相 色谱仪 ， Ａ Ｄ Ｄ检测 器 。
冲液 ： 甲醇 ＝ ５ ５ （ ： 冲液 为 ０ ０ ｌＬ柠檬 ４ ：５ 注 缓 ． １ｍｏ／ ／ 酸 ＋ ． １ｍｏ Ｌ庚 烷磺 酸 钠 水 溶 液 ） 流速 ， ． ｍｌ ０ ０ ｌ ／ ； １０ ／ ｍ ｎ 检 测波 长 ，５ ｎ 带宽 ８ ｍ） ｉ； ２ ４ ｍ（ ｎ 。
１４ 测量 方法 ． 按 上 述 所 选 定 的色 谱 条 件 ， １０ 甲 醇 为 溶 以 ０％
高效液相色谱法测定化妆品中8种有毒有害物质
１０ ３
东
化
工
２１年 第 ９ ００ 期 第 ３ 卷 总第 ２ ９ ７ ０ 期
ｗ ｗ ｗ液相色谱 法测定化妆 品中 ８种有
毒 有 害物质
贾芳 ，王继才 ，李慧勇，谭建 华，赵 田甜 ，席 绍峰
（ 广州市质量监督检测研究院，广东 广州 ５０ １） １１０
ｐ ｏ ｙ — ａ ａ ｅ ， ｂ ｔ － ａ ａ ｅ ａ ｄ ｒｃ ｏ ａ ， ｃ ｌ ｒ ｍｐ ｅ ｉｏ ， ｍｅ ｈ ｌｔｓｏ ｔｒ ｎ ， ｓｉ ｅ ｔｏ Ａ Ｃ １ ｏ ｕ ｗ ａ ｕ ｅ ｗｉ ａ ｒｐ ｌ ｒｂ ｎ ｐ ｕｙｌ ｒｂ ｎ ｎ ｔｉｌ ｓ ｎ ｐ ｈｏａ ｈ ｎｃ ｌ ｔ ｙ － ｔ ｓｅ ｏ ｅ ｔ ｂ ｓｒ ｌ ｅ ｌ ８ ｃ ｌ ｍｎ ｓ ｓｄ ｔ ｈ ｍ ｏ ｉ ｐ ａ ｅ ｏ ｓｓ ｆ ｂｌ ｅ ｈ ｓ ｃ ｎ ｉｔ ｏ
１４ 样 品处 理 ．
老的作用， 也常被添加到某些功能性化妆品中。 目前这 ８ 种有
毒有害物质 的常 用检测 方法有液相色谱法Ｌ Ｊ ２ 、气相色谱法 Ｊ 。 、 气相色谱质谱联 用法 、分光光度法 等 ，但一般都按照防腐 Ｊ 剂、 激素 和抗 生素 的类别分别检测 。 了完善和补充原 有的 性 为 测定方法 ， 章采 用高效液相色谱法 同时测定化妆品中的尼 泊 文 金 甲酯、 乙酯、丙酯、丁酯和 三氯 生、氯霉素、 甲基睾丸酮、 己烯雌酚 ，结果证 明此方法准确 、可行 。
分别 精 确 称 取 尼 泊 金 甲酯 、尼 泊金 乙酯 、尼 泊金 丙 酯、尼 泊金 丁酯、三氯生、氯霉素标准 品 ００ ０ ，甲基 睾丸酮、 己 ．１０ｇ 烯雌酚标 准品 ００ ５ ，用甲醇溶解定容至 １ 。再分别稀 ．０ ０ ｇ ０ｍＬ 释 ２ ０ 、１０倍、５ ０倍 ０ ０倍、２ ０倍 ，４ 浓度混合标准溶液 。 种
高效液相色谱法同时测定发酵调味料中六种尼泊金酯类防腐剂方法研究
ｏ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ａ ｌ ｉ ｂ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｉ ｓ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｏ ｖ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ０ ． ０ １ ～５ ０ ０ ． Ｏ ０ ｍｇ ／ Ｌ（ ｒ ≥０ ． ９ ９ ９ ８ ）
Ｆｅｒ ｍｅｎ ｔ ｅｄ Ｃｏ ｎ ｄ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｂｙ Ｈｉ ｇ ｈ － ｐ ｅｒ ｆｏｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ Ｌｉ ｑ ｕ ｉ ｄ Ｃｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇｒ ａ ｐｈ ｙ
ＬＩ Ｊ ｉ ａ － ｊ ｕ ｎ ，ＹＡＮＧ Ｃｈ ｕ ｎ － ｌ ｉ ｎ ’，ＨＵ Ｑｉ ａ ｎ ｇ ，Ｗ Ｕ Ｗｅ ｉ
文 章编 号 ： １ ０ ０ ０ － ９ ９ ７ ３ （ ２ Ｏ １ ３ ） １ Ｏ — Ｏ ０ ８ ４ 一 Ｏ ４
Ｓｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ Ｄｅ ｔ ｅｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓｉ ｘ Ｈｙ ｄｒ Ｏ ｂｅ ｎ Ｚ Ｏ ｉ Ｃ Ａｃｉ ｄ Ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｓ ｉ ｎ
高效液相色谱法检测豆干中的尼泊金酯
高效液相色谱法检测豆干中的尼泊金酯
牛欣;李林;赵舰
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2011(032)004
【摘要】建立用高效液相色谱-二极管阵列检测器进行豆干中尼泊金酯的检测方法.豆干样品经过无水乙醇提取分离后,用0.45μm滤膜过滤进样,外标法定量.
【总页数】3页(P136-138)
【作者】牛欣;李林;赵舰
【作者单位】西南大学,食品科学学院,重庆,400716;西南大学,食品科学学院,重庆,400716;重庆市疾病控制中心,重庆,400042
【正文语种】中文
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定酱油中4种尼泊金酯含量 [J], 杨华梅
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3.高效液相色谱法测定牙膏中四种尼泊金酯 [J], 常洪娟;
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高效液相色谱法测定烟用香精和料液中对羟基甲酸甲酯、乙酯、丙酯
高效液相色谱法测定烟用香精和料液中对羟基甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯含量发表时间：2020-05-19T16:12:56.823Z 来源：《健康世界》2020年7期作者：翟崇华[导读] 高效液相色谱法测定烟用香精和料液中对羟基甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯含量材料与方法仪器（1）日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪（带紫外检测器）。
（2）AS-A型系列超声波清洗器（天津奥特赛恩斯化器有限公司）。
（3）超纯水机（台湾艾柯仪器公司）。
（4）分析天平，感量0.1mg。
（5）高速匀浆机（转速能达到10000r/min）。
（6）往复机械振荡器（振荡频率能达到100次/min，振幅能达到20mm）。
（7）离心机（转速能达到5000r/min）。
（8）真空抽滤泵及配套玻璃抽滤装置。
试剂（1）水，符合GB/T6682中一级水的要求。
（2）甲醇（色谱纯）。
（3）冰乙酸（分析纯）。
（4）乙酸铵（分析纯）。
（5）对羟基苯甲酸甲酯，纯度99.9％。
（6）对羟基苯甲酸乙酯，纯度99.9％。
（7）对羟基苯甲酸丙酯，纯度98.0％。
（8）对羟基苯甲酸丁酯，纯度99.5％。
试剂配制（1）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g优级纯乙酸铵用水溶解后定容至1000mL，经0.45μm水系滤膜用真空泵抽滤。
（2）乙酸-乙酸铵缓冲溶液准确称取3.855g乙酸铵于100mL烧杯中，加入3.0mL冰乙酸，用水溶解后转移至1000mL容量瓶中定容至刻度。
（3）萃取溶剂甲醇和乙酸-乙酸铵缓冲溶液按体积比1：1混合。
色谱条件色谱柱：Inertsil ODS-3 5μm 4.6×250mm（日本岛津），流动相：甲醇：乙酸铵=60：40，总流速1.2mL/min，柱压20MPa，柱温40℃，检测波长256nm，进样量20μL，采集时间20min。
检测部分标准溶液配制（1）一级标准储备液。
分别用100mL烧杯精确称取0.1mg对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，用甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中摇匀，定容至刻度，在2℃—8℃下密封保存，有效期为6个月。
实验十二 反相高效液相色谱法分析尼泊金乙酯综述
实验十二反相高效液相色谱法分析尼泊金乙酯预习提示1.液相色谱仪的基本结构及操作技术2.什么是反相液相色谱，反相高效液相色谱的分离特点是什么。
3.色谱分析外标定量法的操作要点。
一、目的要求1.熟悉高效液相色谱仪器操作技术；2.掌握HPLC保留值定性方法和外表定量方法。
（了解定制报告编辑方法）。
二、基本原理尼泊金酯（对羟基苯甲酸酯）混合物中含有尼泊金甲、乙、丙、丁酯，均属于强极性化合物，可用反相HPLC进行分析，选用非极性的C18烷基键合固定相，甲醇水溶液作流动相。
外标定量法：配制系列标准浓度溶液，在一定色谱条件下进样得到对应的色谱峰面积，绘制标准曲线；在相同色谱条件下进样测得试样中被测组分色谱峰面积，据此在标准曲线上得到被测组分含量。
三、仪器、试剂1.恒流泵Series Ⅲ2. 500型紫外检测器3. 高压六通进样阀（20ul）4.分析之星色谱数据工作站5.超声波发生器、过滤器6.进样器1ml7.10ug/ml对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯甲醇溶液；备测试样。
四、实验条件1.色谱柱：250mm×4.6mm i.d 固定相：C18烷基键合相5um2.流动相：甲醇：水（85：15）1ml/min3.检测器：紫外光度监测器，254nm，灵敏度0.024.进样量20ul五、实验步骤1.将过滤配好的85％甲醇开盖置于超声波发生器脱器15min。
2.按仪器操作规程打开数据工作站，据给定仪器条件启动HPLC至基线平直。
3.用甲醇清洗进样注射器、进样阀（10ml容量瓶取甲醇适量，用干净的1ml注射器操作）。
4.取干净10ml 容量瓶5只，分别取10ug/ml的对羟基苯甲酸乙酯-甲醇标准溶液配制系列标准溶液：以85%甲醇稀释至标线。
5.用干净的1ml注射器取样0.4～0.6ml，排气泡，加过滤头，注入进样阀（LOAD位），接着按仪器操作规程“10”进样操作。
待试样出峰完毕，积分后记录被测组分峰面积A i（每样进三次以便取平均值）。
反相色谱法测定尼泊金甲酯(防腐剂)
反相色谱法测定尼泊金甲酯（防腐剂）一、实验目的1、了解反相色谱法测定试样中尼泊金甲酯的含量的实验原理和方法；2、掌握外标法进行色谱定性分析的方法和原理。
二、实验原理1、尼泊金甲酯的物理、化学性质又称对羟基苯甲酸甲酯（结构式如右图），又叫尼泊金甲酯，白色结晶粉末或无色结晶，易溶于醇，醚和丙酮，极微溶于水，沸点270-280℃。
主要用作有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂。
2、外标法原理先测量一系列尼泊金甲酯标准溶液的色谱峰，得到峰面积。
然后用峰面积对溶度作图，得一标准曲线。
然后在相同实验条件下测定样品中尼泊金甲酯的峰面积，由标准曲线上找出该峰面积下所对应的溶度，从而算出试样中尼泊金甲酯的含量。
三、仪器与试剂：色谱柱：C18（十八烷基硅烷键合硅胶固定相为填充剂），柱长75mm ，柱径4.6mm ；10mg/ml 的尼泊金甲酯标样（储备液）流动相：甲醇：水=70:30 混合溶剂，流动相流速为1mL/min,检测器：紫外检测器，254nm四、 实验步骤：1 、标准溶液的配制：用流动相为溶剂，标样储备液为原液配制浓度为0.02mg/mL 、0.04mg/mL 、0.06mg/mL 、0.08mg/mL 、0.10mg/mL 一系列标准溶液。
2.标准曲线的制作：待仪器稳定后，依次进样20μL 已知浓度的标准溶液，记录色谱图（1-5）及保留时间t R ；3.样品分析：注入20μL 未知溶液，记录色谱图（6）及各组分保留时间t R ；五、数据处理： OHOO根据色谱图1-5中峰面积，绘出峰面积对浓度的标准曲线；根据步骤2中标样的保留时间确定未知样品中尼泊金甲酯的位置；根据色谱图（6）确定尼泊金甲酯的峰面积，然后在标准曲线上查出被测组分的浓度。
表一：一系列尼泊金甲酯标准溶液保留时间及其峰面积：进样量浓度 mg/mlt R /min 峰面积 0.021.223 2838968 0.041.225 4219146 0.061.252 7403238 0.081.247 9370584 0.10 1.251 126680060.020.040.060.080.102000000400000060000008000000100000001200000014000000吸收峰u v /s 进样量浓度 (mg/mL)根据表一中数据制得尼泊金甲酯的标准曲线图由图可求得标准曲线方程式：S(峰面积)= 1.24047E8*C--142845.8将未知液峰面积s=5421742代入上式得：未知液浓度c=0.053mg/ml六、思考题：外标法与内标法比较有什么优点？七、注意事项及实验反思1.仪器若长时间不用，用注射器抽洗阀门（上下两个）中的溶液，以减少泵的磨损；2.在实验操作过程中千万不能关闭系统；实验过程中进样是要快速；溶液的配制要精准；每次要润洗次数要足够多；为得到的数据线性关系更佳，可多测量几次。
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实验十二反相高效液相色谱法分析尼泊金乙酯
预习提示
1.液相色谱仪的基本结构及操作技术
2.什么是反相液相色谱，反相高效液相色谱的分离特点是什么。
3.色谱分析外标定量法的操作要点。
一、目的要求
1.熟悉高效液相色谱仪器操作技术；
2.掌握HPLC保留值定性方法和外表定量方法。
（了解定制报告编辑方法）。
二、基本原理
尼泊金酯（对羟基苯甲酸酯）混合物中含有尼泊金甲、乙、丙、丁酯，均属于强极性化合物，可用反相HPLC进行分析，选用非极性的C18烷基键合固定相，甲醇水溶液作流动相。
外标定量法：配制系列标准浓度溶液，在一定色谱条件下进样得到对应的色谱峰面积，绘制标准曲线；在相同色谱条件下进样测得试样中被测组分色谱峰面积，据此在标准曲线上得到被测组分含量。
三、仪器、试剂
1.恒流泵Series Ⅲ
2. 500型紫外检测器
3. 高压六通进样阀（20ul）
4.分析之星色谱数据工作站
5.超声波发生器、过滤器
6.进样器1ml
7.10ug/ml对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯甲醇溶液；备测试样。
四、实验条件
1.色谱柱：250mm×4.6mm i.d 固定相：C18烷基键合相5um
2.流动相：甲醇：水（85：15）1ml/min
3.检测器：紫外光度监测器，254nm，灵敏度0.02
4.进样量20ul
五、实验步骤
1.将过滤配好的85％甲醇开盖置于超声波发生器脱器15min。
2.按仪器操作规程打开数据工作站，据给定仪器条件启动HPLC至基线平直。
3.用甲醇清洗进样注射器、进样阀（10ml容量瓶取甲醇适量，用干净的1ml注射器操作）。
4.取干净10ml 容量瓶5只，分别取10ug/ml的对羟基苯甲酸乙酯-甲醇标准溶液配制系列标准
溶液：
以85%甲醇稀释至标线。
5.用干净的1ml注射器取样0.4～0.6ml，排气泡，加过滤头，注入进样阀（LOAD位），接着
按仪器操作规程“10”进样操作。
待试样出峰完毕，积分后记录被测组分峰面积A i（每样进三次以便取平均值）。
6.以上述相同方法进被测试样分析，取5次以上A i平均结果。
7.实验完毕按仪器操作规程停机。
六、数据处理
1.据实验记录数据绘制标准曲线（用坐标纸或Microsoft Office Excel处理）并求得标准曲线方程、相关系数。
2.测定结果经统计处理列表：
七、思考题
1.液相色谱仪的主要部件有哪些？试画出HPLC流程方框图。
2.什么是反相液相色谱？按极性，化合物流出顺序如何？
3.液相色谱操作应注意哪些问题？
实验数据记录表（参考）
1.标准系列测定记录表
2.试样分析记录表。