电泳检测方法20090924
电泳的正确操作方法
电泳的正确操作方法
电泳是一种实验方法，用于分离和定量DNA、RNA或蛋白质的分子根据其大小和电荷的不同。
以下是电泳的正确操作方法：
1. 准备电泳仪和电泳槽：先确认电泳仪和电源正常工作。
将电泳槽插入电泳仪中，并加入足够的电泳缓冲液，注意不要漏电。
2. 准备样品：将待分离的DNA、RNA或蛋白质样品与适当的加载缓冲液混合，使其浓度适合电泳分离。
3. 加载样品：将混合好的样品缓冲液注入电泳槽的样品孔中，同时注意记录每个孔中的样品。
4. 设置电场：将电泳槽连接到电源上，并设置合适的电场强度和时间。
在DNA 或RNA的分离中，通常使用直流电场，而在蛋白质的分离中，则使用交流电场。
5. 开始电泳：打开电源，开始电泳过程。
根据样品的预期分离时间，进行所需的电泳时间。
6. 分析结果：电泳结束后，关闭电源，将电泳槽取下。
将凝胶置于透明平台上，使用紫外线照射仪或其他合适的方法来观察分离结果。
根据带有标记的参考标准来确定目标分子的位置。
7. 数据处理：根据分离结果进行定量分析和数据处理工作，比如测量分子大小或浓度。
需要注意的是，电泳操作中应遵守实验室安全规定，避免电源和设备的误操作或短路。
此外，根据不同的实验目的和样品特点，还可能需要进行染色、转移或其他进一步的处理步骤。
因此，在进行电泳实验前，最好参考相关的实验方法和操作手册，以确保正确操作。
电泳分析常用方法
电泳分析常用方法（一）醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。
由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。
这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5靏的蛋白质可得到满意的分离效果。
因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。
醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。
⒈材料与试剂醋酸纤维素膜一般使用市售商品，常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液，浓度在0.05-0.09mol/L。
⒉操作要点⑴膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液，浸透后，取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。
⑵加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。
对血清蛋白质的常规电泳分析，每cm加样线不超过1靗，相当于60-80靏的蛋白质。
⑶电泳：可在室温下进行。
电压为25V/cm，电流为0.4-0.6mA/cm宽。
⑷染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。
⑸脱色与透明：对水溶性染料最普遍应用的脱色剂是5％醋酸水溶液。
为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸：无水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。
（二）凝胶电泳以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。
其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。
琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广，介绍如下：⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。
电泳检测
3. 实验原理 琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用：主要是 依据它们的相对分子量质量及分子构型，同 时与凝胶的浓度也有密切关系。 ①在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率） 与碱基对的对数成反比； ②不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖 凝胶进行电泳分离； ③ 不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭 环DNA > 直线DNA >开环的双链环状DNA。
样品准备： 取已提取好的质粒DNA 5l，加入1l的加样 缓冲液，混匀； DNA样应该加在“+”极还是“-”极? 电泳： 将样品和5l 标准分子质量分别点样到梳孔中 恒压100v，电泳30-60分钟左右； 电泳结束后关闭电源，取出凝胶； 用凝胶成像仪进行摄影和记录。 电泳开始后,如何判断电泳糖于100ml烧杯中加入20mltae加热熔化至无颗粒状琼脂糖冷却到60左右加入glodview终浓度05gml摇匀即倒入预先架好梳子的胶模中凝固30min以上
实验三
质粒的电泳检测
实验目的 学习并掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的技 术 2. 实验材料 试剂：琼脂糖、TAE缓冲液、加样缓冲液、 Glodview*、标准分子量Marker 器材： 电泳仪、稳压电源、凝胶电泳成像 仪等
4. 实验步骤 制胶： ① 称取 0.2g 的琼脂糖于100ml烧杯中， 加入20mlTAE，加热熔化至无颗粒状琼脂 糖，冷却到60℃左右加入Glodview （终浓 度0.5g/ml），摇匀，即倒入预先架好梳子 的胶模中，凝固30min以上； ② 将凝胶放入电泳槽中，倒入适量的电 泳缓冲液TAE（淹过胶面），拔取梳子备 用。
1.
琼脂糖凝胶的特点
组成：主要由琼脂糖（agarose，约占80%） 及琼脂胶（agaropectin）组成。 琼脂糖凝胶通常采用水平装置在强度和方向 恒定的电场下电泳。直接用低浓度的荧光嵌 入染料“溴化乙锭”进行染色，可确定DNA 在凝胶中的位置。 琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片 段的有效方法。该方法具有操作方便，设备 简单，需样品量少，分辨能力高等特点。
电泳件的检验标准
;
.' 电泳件的检验标准
一、适用范围
公司所有电泳件
二、外观检查
电泳后的表面应无颗粒、疙瘩、陷穴、缩孔、针孔、水滴迹、斑痕、夹杂异物、挂流、不匀、粗糙、露底、剥落等缺陷
三、泳层厚度
泳层厚度在10-18µm
四、泳层附着力
（1）用划格法测定：即以1mm间距进行划100方格检验，划格力度深达底材，然后用3M胶布贴上，瞬间用力拉开，不得脱落20/100 （2）用圆滚线划痕法测定：用附着力测定仪测定，不低于GB/T1720中的5级。
五、泳层硬度
涂层用犁耕法测定：即以2H铅笔将笔芯前端切齐，铅笔与待测物成45度推出，表面无划痕。
六、泳层耐蚀性
电泳件要求24小时或48小时的中性实验，实验后试样的边缘以及外表面不出现白色、黑色或棕色等腐蚀点，即按GB/T6461判定覆盖层不低于5级
七、需要时，供方需出具质检报告。
电泳涂料与电泳涂膜检测指标及检测规范
电泳涂料与电泳涂膜检测指标及检测规范发布时间：2009-9-19 14:02:30 来源：庆升发布人：qyy 点击次数:1455 次电泳涂料与电泳涂膜检测指标及检测规范不挥发物的测定法一、适用范围：本标准适用于电泳漆原漆，电泳槽液及回收槽槽液的不挥发物的测定。
二、依据标准：国家标准GB6751-86《色漆和清漆，挥发物和不挥发物的测定》；EDTM-03《固成份测定法及计算方式》。
三、仪器设备和材料：1．精密天平（精确度0.001g）2．玻璃干燥器（硅胶干燥剂）3．铝箔纸4．玻璃吸管5．100ml烧杯6．细玻璃棒7．鼓风恒温烘箱8．50ml移液管四、测定方法及步骤1．抽取试样：准备好烧杯，移液管，把需要检测的漆液搅拌均匀，然后用移液管从被测液中抽取试样。
2．将铝箔纸截直径约6cm圆形纸，再将其折成直径4cm的圆盘，将截成的吕箔纸盘置于天平称重并记录为A。
3．玻璃棒搅拌被测液，使之均匀；用玻璃吸管吸取大约2g置于铝箔纸盘上精确称重为B。
4．依次置于烤箱内烘烤温度为105±2℃2小时，然后断开电源，等温度下降到70℃左右时，转移至干燥器中冷却。
5．待冷却至室温，后精确度称重为C。
6．试验平均测定至少两次。
五、结果表示：1．计算：注：NV以两次测试的算术平均值（精确到一位小数）为报告结果。
2．重复性：由同一操作者，在短时间间隔内，在同样的条件下对同一试样所测得两连续结果的差，应不超1%。
电泳漆检测技术指标检测样品检测项目技术指标检测方法电泳漆原漆外观无结块，无沉淀目视不挥发份%☆105℃×2h 乳液：35-37色膏：44-46 武科液检01细度µm 色膏：≤15武科液检15灰份%☆色膏：21-23 武科液检06MEQ酸mmol/100g 乳液：30-36 武科液检05MEQ酸mmol/100g 乳液：55-65 0.1mol/LH2SO4溶剂含量%☆ 6.8-7.2 武科液检04PH值☆乳液：6.3-6.9色膏：6.0-7.0 武科液检03导电度µs/cm☆乳液：2400-2800色膏：1550-1850 武科液检02贮存乳液：6个月；色膏：6个月；贮存条件5-35℃；密封贮存于阴凉干燥处电泳漆槽液导电度µs/cm 1000-1600 武科液检02PH值 6.0-6.6 武科液检03MEQ酸mmol/100g 26-34 武科液检05灰份%☆10-14 武科液检06槽液因体份%☆14-18 武科液检01泳透力≥98武科液检08工作温度℃28℃-32℃溶剂含量%☆2-3 武科液检04干燥性能175±5℃/20min完全干燥漆膜性能漆膜外观色泽均一，平整光滑无颗粒目视漆膜厚度µm 15-30 武科液检01漆膜硬度（铅笔）≥2H武科液检05漆膜附着力（划格1mm）0级武科液检06漆膜柔韧性mm ≤1武科液检09耐盐雾性≥1000h，单向腐蚀≤2mm武科液检12漆膜冲击强度Kg•cm50 武科液检04耐水性（40℃）≥500h，无明显变化武科液检08光泽性（60°）50-80 武科液检10杯突mm ≥6武科液检11注：☆因产品规格不同，指标也略不同，说明书上标明各规格产品详细指标。
电泳实验技术的使用方法与技巧
电泳实验技术的使用方法与技巧电泳实验是生物学、生物化学和分子生物学研究中常用的实验技术之一，广泛应用于DNA测序、蛋白质分离等领域。
本文将介绍电泳实验的使用方法与技巧，帮助读者更好地应用这一重要的实验技术。
一、基本原理与实验步骤电泳实验通过电场作用，将带电粒子（如DNA片段、蛋白质）在凝胶或缓冲液中进行分离。
首先，我们需要准备电泳仪和凝胶。
1. 凝胶的选择根据待分离物质的大小和性质选择凝胶的种类。
琼脂糖凝胶适用于DNA分离，聚丙烯酰胺凝胶适用于蛋白质分离。
2. 凝胶制备将凝胶原液混合均匀，加入适量硼酸缓冲液，加热至融化。
倒入凝胶板中，在上方贴上胶片，使凝胶均匀平整。
凝胶凝固后，取出胶片。
3. DNA样本制备提取DNA样本后，用酶切或PCR扩增的方法得到待检测的DNA片段。
4. 实验操作将凝胶放入电泳仪中，加入适量的缓冲液，将DNA样本注入凝胶孔中。
接通电源，根据样品大小和凝胶面积调节电压和电流。
等待一段时间后，关闭电源，取出凝胶进行显色。
二、实验技巧与注意事项1. 缓冲液的选择不同的缓冲液适用于不同的电泳实验。
TAE缓冲液适用于DNA电泳，TBE缓冲液适用于RNA电泳。
确保缓冲液质量纯净，不含杂质，可以使用试剂盒购买。
2. 凝胶孔的制作凝胶孔的大小和形状直接影响实验结果。
凝胶孔应该均匀分布在凝胶中，大小适当，孔间距要一致。
3. 样本的负载量负载量过多会导致凝胶中的带呈现模糊不清，负载量过少则带可能不明显，因此需要根据样本浓度和实验需要平衡负载量。
4. 电泳条件的优化试验过程中，适当调节电压、电流和电泳时间，可以提高分离效果。
但过高的电压和电流会导致凝胶破裂，过长的电泳时间会使DNA片段分离不清。
5. 显色与可视化电泳结束后，凝胶中的DNA或蛋白质并不可见，需要通过染色或荧光染料进行显示。
荧光染料比传统的染料方法更加快速、敏感。
6. 实验操作的无菌与安全电泳实验涉及操作试剂和仪器，对于DNA样本的保护应该尽可能避免污染。
电泳检测方法20090924
福泰涂装技术有限公司电着涂装技术资料涂料添加量计算方式1、ED槽体积：12000L2、EED-065 固成份为36%（树脂B）3、EEB-068A 固成份为45%（色膏P）4、假设ED槽内固成份为9%，欲提高为10%，则树脂及色膏须各添加多少公斤？正常添加树脂和色膏之重量比为4.5：1，即P/B=1/4.5则12000×（10%-9%）=120KG0.45X+0.36x4.5Χ=120Χ=65KG（色膏添加量）4.5Χ=285KG（树脂添加量）5、溶剂（S-210A）添加量计算方式：设ED槽溶剂量为2.0%，欲提升至2.2%则:12000×(2.2%-2.0%)=24KG6、备注：（１）、涂料及溶剂之添加应配于每日添加，不可数日后一次添加。
（２）、添加溶剂、中和剂时应先用纯水按1：1稀释。
电着液检验方法目录EDTM-01 P H(酸碱值)测定法EDTM-02电导度测定法EDTM-03固成份检验方法及计算方式EDTM-04灰份检验方法及计算方式EDTM-10膜厚测定标准EDTM-12漆膜附着力测定法EDTM-13漆膜铅笔硬度测定法库仑效率测定法电着涂料补充方法及程序补充料包括：树脂乳液、色膏、溶剂三种物料。
1、树脂乳液：直接加于副槽内。
2、色膏：先以约一倍纯水稀释后，加入搅拌较激烈处或副槽。
3、溶剂、中和剂：先以一倍至二倍纯水稀释后，加入搅拌较激烈处或主槽前段。
4、以上物料在生产作业中尽量不要添加，若不得已必需迅速调整槽液成份时，请慢慢添加于副槽内，才不致于影响涂装质量。
电泳实验的操作步骤与分析方法
电泳实验的操作步骤与分析方法引言：在现代生物学和分子医学领域，电泳技术被广泛应用于分离、纯化和分析生物大分子。
本文将介绍电泳实验的操作步骤和分析方法，以帮助读者更好地理解和应用这一技术。
一、背景知识在开始电泳实验之前，我们需要了解一些背景知识。
电泳是基于分子在电场中的迁移行为来进行分离的技术。
其中，核酸电泳用于分离DNA和RNA，蛋白质电泳用于分离蛋白质。
二、DNA电泳实验操作步骤1. 提取DNA样品首先，我们需要从细胞的裂解物或其他样品中提取目标DNA。
这可以通过常见的DNA提取方法，如酚/氯仿法或盐酸法来实现。
提取的DNA样品应该具备一定的纯度和浓度。
2. 制备琼脂糖凝胶接下来，我们需要制备琼脂糖凝胶。
首先，将适量的琼脂糖（通常为0.7-1.2%）溶解在缓冲液中，再添加一定量的琼脂糖染料（如溴化乙啶）。
将溶液倒入电泳槽中，并插入电极。
3. 加载DNA样品将提取好的DNA样品与DNA提取缓冲液混合，并将混合物加入凝胶齿孔中。
为了确定各样品带位置，可以在其中一些样品中加入DNA分子量标准物。
4. 进行电泳将电泳槽连接到电源，设置合适的电压和电流条件。
DNA分子在电场中会迁移，较小的DNA分子迁移较快，较大的DNA分子迁移较慢。
5. 可视化和记录结果当电泳结束后，取出凝胶并进行染色，如乙溴橙染色。
使用紫外光箱或相应的图像分析系统观察和记录结果。
DNA带的长度和强度可以被定量分析，以获取更精确的数据。
三、蛋白质电泳实验操作步骤1. 提取蛋白质样品首先，从细胞裂解液或其他样品中提取目标蛋白质。
这可以通过研磨、超声处理或其它细胞破碎方法来实现。
提取的样品应具有一定的纯度和浓度。
2. 准备凝胶根据需要，选择合适类型的凝胶，如SDS-PAGE凝胶或IEF凝胶。
根据凝胶配方，准备凝胶缓冲液，并在电泳槽中制备凝胶。
3. 加载蛋白质样品将提取的蛋白样品与载体缓冲液或其他加载缓冲液混合，并将混合液加载到凝胶孔中。
根据需要，也可以添加蛋白质分子量标准物。
血清蛋白电泳检查电泳法
血清蛋白电泳检查（电泳法）1. 实验原理血清电泳检查是临床实验室中一种常用的蛋白质分析技术。
它可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。
它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。
血清蛋白质在给定的PH条件下主要根据其所在带电荷数将其分离成各种片段，根据其支持介质不同，电泳技术已有很大发展。
选用琼脂糖作介质，其使用十分方便。
血清蛋白质由五个不同迁移区带组成：ALB,α1，α2，β和γ球蛋白。
每一区带含有一种或多种血清蛋白质。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：静脉血3. 标本储存：静脉血分离出血清，储存于2-8℃冰箱中，5天。
4. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。
6. 试剂6.1试剂名称：血清蛋白电泳检查试剂6.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3 包装规格：150tests6.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶10块缓冲液条带10包×2条氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml 点样模具滤纸10条×1盒6.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。
有效期两年。
7. 仪器设备7.1 仪器名称：SEBIA电泳仪7.2 仪器厂家：法国Sebia公司7.3 仪器型号：HYDRASYS8. 操作步骤8.1 启动电泳仪8.2 将加样器放在一平板上，有数字的一端向上。
各加样孔加入10ul溶血的样品，2分钟内加样完毕。
将加样器放入保湿盒内，齿端向上（转运时用塑料齿保护架）。
等待5分钟，使样品扩散至齿端。
打开电泳仪盖，抬起电极和加样器支架。
8.3 使用HYDRAGEL 15 HEMOGLOBINCE时选择仪器的“PROTEIN”程序（位于链盘左侧）。
8.4 从包装袋内取出缓冲条，拿出末端的塑料片，将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上，塑料片应紧贴支架。
电泳测定法
按支持物 纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳
按凝胶形状 水平平板电泳 园盘柱状电泳Байду номын сангаас垂直平板电泳
醋酸纤维素薄膜电泳法
试剂 (1) 巴比妥缓冲液 巴比妥缓冲液(pH8.6) 称取巴比 妥2.76g,巴比妥钠 ,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成 , 1000ml. . (2) 氨基黑染色液 称取氨基黑10B 称取氨基黑 0.5g,溶于醇 及水40ml的 ,溶于醇50ml,冰醋酸 ,冰醋酸l0ml及水 及水 的 混合液中. 混合液中. (3) 漂洗液 量取乙醇 量取乙醇45ml,冰醋酸 ,冰醋酸5ml 及水50ml,混匀. 及水 ,混匀. (4)透明液 量取冰醋酸 透明液 量取冰醋酸25ml,无水乙醇 , 75ml,混匀. ,混匀.
项 目 品 种 白喉抗毒素
破伤风抗毒素 多价气性坏疽抗毒素 肉毒抗毒素 抗蝮蛇血清 抗眼睛蛇毒血清
琼脂糖胶凝 电泳 纯度检查 应不含或仅含痕量白 应不含或仅含痕量白 蛋白迁移率的蛋白质 蛋白迁移率的蛋白质 成分 同上 同上 同上 同上 同上
SDSSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
大多数蛋白质与阴离子表面活性剂十二 烷基硫酸钠(SDS) (SDS)按重量比结合成复合 烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合 物,使蛋白质分子所带的负电荷远远超 过天然蛋白质分子的净电荷, 过天然蛋白质分子的净电荷,消除了不 同蛋白质分子的电荷效应,使蛋白质按 同蛋白质分子的电荷效应, 分子大小分离. 分子大小分离.
项 目 品 种 人血白蛋白 人免疫球蛋白 乙型肝炎人免疫球蛋白 狂犬病人免疫球蛋白 破伤风人免疫球蛋白 静注人免疫球蛋白 抗人T细胞猪免疫球蛋白 抗人 细胞猪免疫球蛋白
醋酸纤维素薄膜 电泳 纯度检查 ≥96.0% ≥90.0% ≥90.0% ≥90.0% ≥90.0% ≥95.0% ≥90.0%
电泳涂料常规参数的检测方法
电泳涂料常规参数的检测方法Revised by Petrel at 2021电泳涂料常规参数的检测方法1．固体分的测量固体份是指电泳涂料在105℃时加热3小时后，剩余的干燥树脂和颜料份的百分含量。
测定方法如下:①称取约2g的槽液存于干燥洁净的小蒸发皿中，在105℃下，烘干3小时，称量。
②计算：NV%=（W2/W1)×100%式中:NV%—固体份值W2—烘干后残留物重量W1—样品起始称量③测定时，可取2—3个平行实验计算平均值。
2．PH值的测定测定pH值，可采用一般pH计。
测定前，先按pH计的说明书校准计。
测定温度控制在25℃。
其中槽液、极液、超滤液、去离子水可直接取样测定，而乳液和色浆则必须先用去离子水稀释一倍后再测定。
3．电导率的测定电导率的测定可采用一般的电导仪测定。
具体步骤如下:①先按电导仪的使用说明书预热，调试仪器。
②再根据说明分别测定待测液体的电导率。
注意温度控制在25℃。
4．MEQ值的测定电泳涂料的MEQ值=中和剂／胺值（酸值），也可用中和100g涂料固体份所需中和剂的毫克量来表示。
MEQ值的测定方法如下（仅适用于槽液）：①取10g电泳涂料槽液（精确到1mg）放入250ml烧杯中，加入50ml四氢呋喃，用电磁搅拌充分搅拌均匀。
②用0.1N氢氧化钠，3ml以／分的速度（自动或手动滴定均可）进行滴定。
③将所有测定的数据记作消耗碱的函数。
④经所测定的各点圆滑连接，用平行尺根据曲线的拐点找出曲线与拐点的两条平行切线的垂线相交二分之一点，此点即为中和点。
此点对应值即为消耗的碱量。
⑤计算:ＭＥＱ＝（Ｖ－Ｖ'）×N×100／WS式中:Ｖ—等当点时耗碱量（ml）Ｖ'—四氢呋喃耗碱量（ml）Ｎ—氢氧化钠溶液的浓度Ｓ—试样的固体份（％）Ｗ—试样重（g）5．库仑效率的测定库仑效率是指消耗单位库仑的电量沉积的采用一般的库仑计漆膜的重量，以毫克／库仑来表示。
阴极电泳涂料槽液的库仑效率测定:（采用一般的库仑计）①磷化钢板称量，在标准电泳条件下，制备样板。
电泳涂层性能检测方法
电泳涂层性能检测方法8．1固体份标准《GB/T1725-79（89）》测定方法仪器设备瓷坩埚：25ml玻璃干燥器，内放变色硅胶温度计：0-300℃天平：感量为0.01g鼓风恒温烘箱方法步骤：称取2-4g 涂料，精确至0.01g，然后置于已升温至规定温度的鼓风恒温烘箱内焙烘一定的时间后，取出放入干燥器中冷却至室温后，称重，再放入烘箱内按规定温度焙烘规定时间后，于干燥器中冷却至室温后，称重（同时取样2组以上）计算：固体份=烘烤后的样重/取样重量×100%8．2粘度（涂-4杯）标准《GB/T1723-93》仪器设备涂-4粘度计温度计秒表玻璃棒操作方法：测定之前，须用纱布蘸溶剂将粘度计内部擦拭干净，在空气中干燥或用冷风吹干，注意漏嘴应清洁通畅。
清洁处理后，调整水平螺钉，使粘度计处于水平位置，在粘度漏嘴下面放置150ml盛器，用手堵住漏嘴孔，将试样倒满粘度计中，用玻璃棒将气泡和多余的试样刮入凹槽，然后松开手指，使试样流出，同时立即开动秒表，当试样流丝中断时止，停止秒表读数（秒），即为试样的条件粘度。
两次测定值之差不应大于平均值的3%。
测定时试样温度为25±1℃涂-4粘度计的校正：用纯水在25±1℃条件下，按上述方法测定为11.5±0.5秒，如不在此范围内，则粘度计应更换。
8．3细度（μm）标准《GB/T 1724-79（89）》仪器：刮板细度计测定方法：细度在30微米及30微米以下的，用量程为50微米的刮板细度计，30-70微米时用量程为100微米的刮板细度计。
刮板细度计使用前必须用溶剂仔细洗净擦干。
将试样充分搅匀后，在细度计上方部分，滴入试样数滴；双手持刮刀，横置在磨光平板上端（在试样边缘外），使刮刀与表面垂直接触，在3秒钟内，将刮刀由沟槽深部向浅的部位（向下）拉过，使漆样充满板上，不留有余漆。
刮刀拉过后，立即（不超过5秒种）使视线与沟槽平面成15-30度角观察沟槽中颗粒均匀显露处，记下读数；如有个别颗粒显露在刻度线时，不超过三个颗粒时可不计。
电泳工作分析方法
电泳工作分析方法
1. 固体份
用天平精确称量铝箔容器，设这是的重量为A mg ，往铝箔上加2克试样（槽液约10ml ）迅速而精确地称出重量B mg 。
然后用恒温干燥器，以180±5℃干燥180分钟。
冷却到室温后，精确称取铝箔加热后的残余分量C mg 。
计算：固体份%=100⨯--A
B A
C 2. 槽液的pH 值
将稀释到规定的固体份的试样约100ml 倒入烧杯。
搅拌均匀，用pH=6.86的标准溶液校正后，测量。
3. 酸值
将稀释到规定的固体份的试样约100mL 倒入烧杯，搅拌均匀后，调温至20℃，测量电导率。
4. 酸值
中和1g 涂料不挥发组分所需的KOH 的毫克数称为酸值。
用移液管移去10mL 试样，移入锥形瓶中，加入80mL 无水乙醇，加酚酞作指示剂，再用0.1mol/L KOH 标准溶液滴点，滴定至浅红色为终点，记录滴定所用的毫升数B 酸值=固体份
取样量⨯⨯⨯-⨯100)()(1.56KOH C A B 5. 胺值
用酸滴定涂料液中不挥发份时所需要的酸毫克数，以HCl 的毫克数来表示胺值。
用移液管移去10mL 试样，移入锥形瓶中，加入80mL 无水乙醇，将pH-mV 计电极放入烧杯里的试样液体中，注意浸没电极，在电磁搅拌下，用0.1mol/L HCl 滴定，当pH=4.5（±0.1）时为滴定终点，记录滴定的毫升数B 。
胺值=固体份取样量⨯⨯⨯-⨯100)()(5.36HCl C A B。
电泳涂料常规参数介绍以及检测方法
電泳涂料常規參數介紹以及檢測方法1〃固體分的測量固體份是指電泳涂料在105℃時加熱3小時后，剩餘的乾燥樹脂和顏料份的百分含量。
測定方法如下:稱取約2g的槽液存于乾燥潔淨的小蒸發皿中，在105℃下，烘干3小時，稱量。
計算︰NV%=（W2/W1)×100%式中:NV%─固體份值W2 ─ 烘干后殘留物重量W1 ─ 樣品起始稱量測定時，可取2─3個平行實驗計算平均值。
2〃PH值的測定測定pH值，可採用一般pH計。
測定前，先按pH計的說明書校準計。
測定溫度控制在25℃。
其中槽液、極液、超濾液、去離子水可直接取樣測定，而乳液和色漿則必須先用去離子水稀釋一倍后再測定。
3〃電導率的測定電導率的測定可採用一般的電導儀測定。
具體步驟如下:先按電導儀的使用說明書預熱，調試儀器。
再根據說明分別測定待測液體的電導率。
注意溫度控制在25℃。
4〃MEQ值的測定電泳涂料的MEQ值=中和劑／胺值（酸值），也可用中和100g涂料固體份所需中和劑的毫克量來表示。
MEQ值的測定方法如下（僅適用于槽液）︰取10g電泳涂料槽液（精確到1mg）放入250ml燒杯中，加入50ml 四氫喃，用電磁攪拌充分攪拌均勻。
用0.1N氫氧化鈉，3ml以／分的速度（自動或手動滴定均可）進行滴定。
將所有測定的數據記作消耗鹼的函數。
經所測定的各點圓滑連接，用一字尺根據曲線的拐點找出曲線與拐點的兩條平行切線的垂線相交二分之一點，此點即為中和點。
此點對應值即為消耗的鹼量。
計算:ＭＥＱ＝（Ｖ－Ｖ'）×N×100／WS式中:Ｖ─等當點時耗鹼量（ml）Ｖ'─四氫喃耗鹼量（ml）Ｎ─氫氧化鈉溶液的濃度Ｓ─試樣的固體份（％）Ｗ─試樣重（g）5〃庫侖效率的測定庫侖效率是指消耗單位庫侖的電量沈積的採用一般的庫侖計漆膜的重量，以毫克／庫侖來表示。
陰極電泳涂料槽液的庫侖效率測定:（採用一般的庫侖計）磷化鋼板稱量，在標準電泳條件下，製備樣板。
电泳膜厚度检测方法
电泳膜厚度检测方法我折腾了好久电泳膜厚度检测方法，总算找到点门道。
我一开始真的是瞎摸索。
我试过用那种很简单的尺子去量，心想这膜不就跟一张纸似的嘛，一量不就知道厚度了。
结果可想而知，电泳膜那么薄，尺子根本就量不出来，这我才知道不能这么简单粗暴。
后来我想啊，能不能用称重的方法呢？我就拿着膜去称。
我想如果知道膜的面积，再称出重量，然后根据膜的材质密度是不是就能算出厚度来了呢？可是这就存在大问题了，这电泳膜的边缘很难做到非常精确的界定啊，这样算出来的面积不准，重量再准确也白搭。
这就是我失败的一个很大的教训，考虑不全面就下手。
再后来我接触到了磁性测厚仪。
这个仪器啊，就像一个会秘密侦查的小侦探，它的探头放上去就能检测。
但是要注意哦，用这个仪器的时候，一定要保证电泳膜表面很干净，要是有脏东西，就像给这个小侦探蒙上了眼睛，它就弄不准了。
我第一次用的时候就没注意这个事儿，测出来的数据乱七八糟的。
等我把膜擦得干干净净的，再测，数据才比较靠谱。
还有一种叫光学显微镜测厚法。
这就有点像拿放大镜看东西了。
这个方法其实还挺麻烦的，要先制备样本，然后在显微镜下看。
样本制备的时候，切片必须得切得很薄很均匀。
我切的时候手就容易抖，切出来的不均匀，那在显微镜下看到的图像就不对了。
这个方法确实比较考验动手能力。
不过要我说，如果比较精确的检测，还是找那种专门的检测机构吧。
他们的设备专业，人员也专业。
我把我的电泳膜拿去的时候，他们用很多我不知道的高端仪器检测，给出来的数据就比较准确。
不过这成本就高了些。
这是我的一点小心得，要是自己想试试手，前面那几个方法可以试试，但是要想特别精确，就得综合考虑各方面因素了。
像我之前犯过的那些错误，大家就别再犯啦。
电泳法
0541 电泳法电泳是指溶解或悬浮于电解液中的带电荷的蛋白质㊁胶体㊁大分子或其他粒子,在电流作用下向其自身所带电荷相反的电极方向迁移㊂电泳法是指利用溶液中带有不同量电荷的阳离子或阴离子,在外加电场中使供试品组分以不同的迁移速度向对应的电极移动,使实现分离并通过适宜的检测方法记录或计算,达到测定目的的分析方法㊂电泳法一般可分为两大类:一类为自由溶液电泳或移动界面电泳,另一类为区带电泳㊂移动界面电泳是指不含支持物的电泳,溶质在自由溶液中泳动,故也称自由溶液电泳,适用于高分子的检测㊂区带电泳是指含有支持介质的电泳,带电荷的供试品(如蛋白质㊁核苷酸等大分子或其他粒子)在惰性支持介质(如纸㊁醋酸纤维素㊁琼脂糖凝胶㊁聚丙烯酰胺凝胶等)中,在电场的作用下,向其极性相反的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带㊂区带电泳法可选用不同的支持介质,并用适宜的检测方法记录供试品组分电泳区带图谱以计算其含量(%)㊂除另有规定外,各不同支持介质的区带电泳法,照下述方法操作㊂采用全自动电泳仪操作时,参考仪器使用说明书进行;结果判断采用自动扫描仪或凝胶成像仪时,参考仪器使用说明书进行㊂ 第一法 纸电泳法纸电泳法以色谱滤纸作为支持介质㊂介质孔径大,没有分子筛效应,主要凭借被分离物中各组分所带电荷量的差异进行分离,适用于检测核苷酸等性质相似的物质㊂1.仪器装置包括电泳室及直流电源两部分㊂常用的水平式电泳室装置如图,包括两个电泳槽A 和一个可以密封的玻璃(或相应材料)盖B ;两侧的电泳槽均用有机玻璃(或相应材料)板C 分成两部分;外格装有铂电极(直径0.5~0.8c m )D ;里格为可放滤纸E 的有机玻璃电泳槽架F ,此架可从槽中取出;两侧电泳槽A 内的铂电极D 经隔离导线穿过槽壁与电泳仪外接电源相连㊂图 水平式电泳室装置电源为具有稳压器的直流电源,常压电泳一般在100~500V ,高压电泳一般在500~10000V ㊂2.测定法(1)电泳缓冲液 枸橼酸盐缓冲液(pH 3.0):取枸橼酸(C 6H 8O 7㊃H 2O )39.04g 与枸橼酸钠(C 6H 5N a 3O 7㊃2H 2O )4.12g,加水4000m l ,使溶解㊂(2)滤纸 取色谱滤纸置1m o l /L 甲酸溶液中浸泡不少于12小时,取出,用水漂洗至洗液的p H 值不低于4,置60ħ烘箱烘干,备用㊂可裁成长27c m ㊁宽18c m 的滤纸,或根据电泳室的大小裁剪,并在距底边5~8c m 处划一起始线,每隔2.5~3c m 做一点样记号㊂(3)点样 有湿点法和干点法㊂湿点法是将裁好的滤纸全部浸入枸橼酸盐缓冲液(p H 3.0)中,湿润后,取出,用滤纸吸干多余的缓冲液,置电泳槽架上,使起始线靠近阴极端,将滤纸两端浸入缓冲液中,然后用微量注射器精密点加供试品溶液,每点10μl ,共3点,并留2个空白位置㊂干点法是将供试品溶液点于滤纸上,吹干,再点,反复数次,直至点完规定量的供试品溶液,然后用喷雾器将滤纸喷湿,点样处最后喷湿,本法适用于浓度低的供试品溶液㊂(4)电泳 于电泳槽中加入适量电泳缓冲液,浸没铂电极,接通电泳仪稳压电源档,电压梯度调整为18~20V/c m ,电泳约1小时45分钟,取出,立即吹干,置紫外光灯(254n m )下检视,用铅笔划出紫色斑点的位置㊂(5)含量测定 剪下供试品斑点以及与斑点位置面积相近的空白滤纸,剪成细条,分别置试管中,各精密加入0.01m o l /L 盐酸溶液5m l ,摇匀,放置1小时,用3号垂熔玻璃漏斗滤过,也可用自然沉降或离心法倾取上清液,按各品种项下的规定测定滤液或上清液的吸光度,并计算含量㊂ 第二法 醋酸纤维素薄膜电泳法醋酸纤维素薄膜电泳法以醋酸纤维素薄膜作为支持介质㊂介质孔径大,没有分子筛效应,主要凭借被分离物中各组分所带电荷量的差异进行分离,适用于血清蛋白,免疫球蛋白,脂蛋白,糖蛋白,类固醇激素及同工酶等的检测㊂1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳㊂2.试剂(1)巴比妥缓冲液(p H 8.6) 取巴比妥2.76g ㊁巴比妥钠15.45g ,加水溶解使成1000m l ㊂(2)染色液 常用的有以下几种,可根据需要,按各品种项下要求使用㊂①氨基黑染色液 取0.5g 的氨基黑10B ,溶于甲醇50m l ㊁冰醋酸10m l 及水40m l 的混合液中㊂②丽春红染色液取丽春红9.04g ㊁三氯醋酸6g ,用水溶解并稀释至100m l㊂③含有醋酸的丽春红染色液:取丽春红0.1g ,醋酸5m l ,用水制成100m l 的溶液㊂4ħ保存㊂④含有三氯醋酸和5-磺基水杨酸的丽春红染色液:取丽春红2g ,三氯醋酸30g ,5-磺基水杨酸30g ,用水溶解并稀释至100m l ㊂(3)漂洗液 取乙醇45m l ㊁冰醋酸5m l 及水50m l ,混匀㊂(4)透明液 取冰醋酸25m l ,加无水乙醇75m l,混匀㊂㊃101㊃3.测定法(1)醋酸纤维素薄膜取醋酸纤维素薄膜,裁成2c mˑ8c m的膜条,将无光泽面向下,浸入巴比妥缓冲液(p H8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(p H8.6)中㊂(2)点样与电泳于膜条上距负极端2c m处,条状滴加蛋白含量约5%的供试品溶液2~3μl,一般应在10~ 12V/c m稳压或0.4~0.6m A/c m 总电流量=电流量(m A/c m)ˑ每条膜的宽度(c m)ˑ膜条数 稳流条件下电泳至区带距离4~5c m为宜㊂人血白蛋白与免疫球蛋白类样品,在测定时取新鲜人血清作对照,电泳时间以白蛋白与免疫球蛋白之间的电泳展开距离约2c m为宜㊂(3)染色电泳完毕,将膜条取下浸于氨基黑或丽春红染色液中,2~3分钟后,用漂洗液浸洗数次,直至脱去底色为止㊂(4)透明将洗净并完全干燥后的膜条浸于透明液中,一般浸泡10~15分钟,待全部浸透后,取出平铺于洁净的玻璃板上,干后即成透明薄膜,可用于相对含量㊁纯度测定和作标本长期保存㊂(5)含量测定未经透明处理的醋酸纤维素薄膜电泳图可按各品种项下规定的方法测定,一般采用洗脱法或扫描法,测定各蛋白质组分的相对含量(%)㊂洗脱法将洗净的膜条用滤纸吸干,剪下供试品溶液各电泳图谱的电泳区带,分别浸于1.6%的氢氧化钠溶液中,振摇数次,至洗脱完全,照紫外-可见分光光度法(附录ⅣA),在各品种项下规定的检测波长处测定洗脱液的吸光度㊂同时剪取与供试品膜条相应的无蛋白部位,同法操作作为空白对照㊂先计算吸光度总和,再计算各蛋白组分所占比率(%)㊂扫描法将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪采用反射(未透明薄膜)或透射(已透明薄膜)方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图,横坐标为膜条的长度,纵坐标为吸光度,计算各蛋白质组分的含量(%)㊂亦可用微机处理积分计算㊂人血白蛋白与免疫球蛋白类样品,以人血清作为对照,按峰面积计算各蛋白质组分的含量(%)㊂第三法琼脂糖凝胶电泳法琼脂糖凝胶电泳法以琼脂糖作为支持介质㊂琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖㊂其结构单元是D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖㊂许多琼脂糖链互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型的凝胶㊂这种网络结构具有分子筛作用,使带电颗粒的分离不仅依赖净电荷的性质和数量,还可凭借分子大小进一步分离,从而提高了分辨能力㊂本法适用于免疫复合物㊁核酸与核蛋白等的分离㊁鉴定与纯化㊂D N A分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应㊂D N A分子在高于等电点的p H溶液中带负电荷,在电场中向正极移动㊂由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链D N A几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动㊂在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中,D N A分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比;分子构型也对迁移率有影响,如共价闭环D N A>直线D N A>开环双链D N A㊂适用于检测D N A,P C R反应中的电泳检测,方法见各品种项下㊂方法1一㊁琼脂糖凝胶电泳第一法1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳㊂2.试剂(1)醋酸-锂盐缓冲液(p H3.0)取冰醋酸50m l,加水800m l混合后,加氢氧化锂固体适量使溶解调节p H值至3.0,再加水至1000m l㊂(2)甲苯胺蓝溶液取甲苯胺蓝0.1g,加水100m l使溶解㊂3.测定法(1)制胶取琼脂糖约0.2g,加水10m l,置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸-锂盐缓冲液(p H3.0) 10m l,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5c mˑ7.5c m 或4c mˑ9c m)的水平玻璃板上,涂层厚度约3m m,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得㊂(2)对照品溶液及供试品溶液的制备照各品种项下规定配制㊂(3)点样与电泳在电泳槽内加入醋酸-锂盐缓冲液(p H3.0),将凝胶板置于电泳槽架上,经滤纸桥与缓冲液接触㊂于凝胶板负极端分别点样1μl,立即接通电源,在电压梯度约30V/c m㊁电流强度1~2m A/c m的条件下,电泳约20分钟,关闭电源㊂(4)染色与脱色取下凝胶板,用甲苯胺蓝溶液染色,用水洗去多余的染色液至背景无色为止㊂方法2二㊁琼脂糖凝胶电泳第二法1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳㊂2.试剂(1)巴比妥缓冲液(p H8.6)称取巴比妥4.14g㊁巴比妥钠23.18g,加水适量,加热使之溶解,放冷至室温,再加叠氮钠0.15g,溶解后,加水稀释至1500m l㊂(2)1.5%琼脂糖溶液称取琼脂糖1.5g,加水50m l 和巴比妥缓冲液(p H8.6)50m l,加热使完全溶胀㊂(3)0.5%氨基黑溶液称取氨基黑10B0.5g,溶于甲醇50m l㊁冰醋酸10m l及水40m l的混合液中㊂(4)脱色液量取乙醇45m l㊁冰醋酸5m l及水50m l,混匀㊂(5)溴酚蓝指示液称取溴酚蓝50m g,加水使之溶解,㊃201㊃并稀释至100m l㊂3.测定法(1)制胶取上述1.5%的琼脂糖溶液,趁热将胶液涂布于大小适宜的水平玻璃板上,涂层厚度约3m m,静置,待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层,即得㊂(2)对照品和供试品溶液对照品正常人血清或其他适宜的对照品㊂供试品溶液的制备用生理氯化钠溶液将供试品稀释成蛋白质浓度为1%~2%的溶液㊂(3)点样与电泳在电泳槽内加入巴比妥缓冲液(p H8.6);于琼脂糖凝胶板负极端的1/3处打孔,孔径2~ 3m m,置于电泳槽架上,经3层滤纸搭桥与巴比妥缓冲液(p H8.6)接触㊂测定孔加适量供试品溶液和1滴溴酚蓝指示液,对照孔加适量对照品及1滴溴酚蓝指示液㊂100V恒压条件下电泳2小时(指示剂迁移到前沿),关闭电源㊂(4)染色与脱色取下凝胶板,用0.5%氨基黑溶液染色,再用脱色液脱色至背景无色㊂第四法聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质㊂聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体和少量的交联剂甲叉双丙烯酰胺,在催化剂作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶㊂单体的浓度或单体与交联剂比例的不同,其凝胶孔径就不同㊂使用聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质进行电泳,生物大分子保持天然状态,其迁移速率不仅取决于电荷密度,还取决于分子大小和形状,可以用来研究生物大分子的特性,如电荷㊁分子量㊁等电点等㊂根据仪器装置的不同分为水平平板电泳㊁垂直平板电泳和盘状电泳㊂根据制胶方式的不同又可分为连续电泳和不连续电泳㊂1.仪器装置通常由稳流电泳仪和圆盘电泳槽或平板电泳槽组成㊂其电泳室有上㊁下两槽,每个槽中都有固定的铂电极,铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流档上㊂使用垂直平板电泳槽的测定法参见S D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,使用圆盘电泳槽方法如下㊂2.试剂(1)溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36.6g㊁四甲基乙二胺0.23m l,加1m o l/L盐酸溶液48m l,再加水溶解并稀释至100m l,置棕色瓶内,在冰箱中保存㊂(2)溶液B 取丙烯酰胺30.0g㊁次甲基双丙烯酰胺0.74g,加水溶解并稀释至100m l,滤过,置棕色瓶内,在冰箱中保存㊂(3)电极缓冲液(p H8.3)取三羟甲基氨基甲烷6g㊁甘氨酸28.8g,加水溶解并稀释至1000m l,置冰箱中保存,用前稀释10倍㊂(4)溴酚蓝指示液取溴酚蓝0.1g,加0.05m o l/L氢氧化钠溶液3.0m l与90%乙醇5m l,微热使溶解,加20%乙醇制成250m l㊂(5)染色液取0.25%(g/m l)考马斯亮蓝G250溶液2.5m l,加12.5%(g/m l)三氯醋酸溶液至10m l㊂(6)稀染色液取上述染色液2m l,加12.5%(g/m l)三氯醋酸溶液至10m l㊂(7)脱色液7%醋酸溶液㊂3.测定法(1)制胶取溶液A2m l,溶液B5.4m l,加脲2.9g使溶解,再加水4m l,混匀,抽气赶去溶液中气泡,加0.56%过硫酸铵溶液2m l,混匀制成胶液,立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10c mˑ0.5c m)中,使胶层高度达6~7c m,然后徐徐滴加水少量,使覆盖胶面,管底气泡必须赶走,静置约30分钟,待出现明显界面时即聚合完毕,吸去水层㊂(2)对照品/分子量标准品溶液及供试品溶液的制备照各品种项下的规定㊂(3)电泳将已制好的凝胶玻璃管装入圆盘电泳槽内,每管加供试品或对照品/标准品溶液50~100μl,为防止扩散可加甘油或40%蔗糖溶液1~2滴及0.04%溴酚蓝指示液1滴,也可直接在上槽缓冲液中加0.04%溴酚蓝指示液数滴,玻璃管的上部用电极缓冲液充满,上端接负极,下端接正极㊂调节起始电流使每管为1m A,数分钟后,加大电流使每管为2~3m A,当溴酚蓝指示液移至距玻璃管底部1c m 处,关闭电源㊂(4)染色和脱色电泳完毕,用装有长针头并吸满水的注射器,自胶管底部沿胶管壁将水压入,胶条即从管内滑出,将胶条浸入稀染色液10~12小时或用染色液浸泡10~ 30分钟,用水漂洗干净,再用脱色液脱色至无蛋白区带凝胶的底色透明为止㊂4.结果判断将胶条置灯下观察,根据供试品与对照品/标准品的色带位置和色泽深浅程度进行判断㊂(1)相对迁移率供试品和对照品/标准品的电泳区带有时可用相对迁移率(Rᶄm)进行比较㊂其计算式如下:相对迁移率(Rᶄm)=进胶端到供试品或对照品/标准品区带的距离进胶端到溴酚蓝区带的距离(2)扫描将清晰的胶条置双波长薄层扫描仪或凝胶电泳扫描仪中扫描并积分,由各组分的峰面积计算含量(%)㊂第五法S D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳法S D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳法是一种变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法㊂S D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离蛋白质的原理是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(S D S)按重量比结合成复合物,使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷,消除了不同蛋白质分子的电荷效应,使蛋白质按分子大小分离㊂1.仪器装置恒压或恒流电源㊁垂直板或圆盘电泳槽和制胶模具㊂㊃301㊃2.试剂(1)水(电阻率不低于18.2MΩ㊃c m)㊂(2)A液1.5m o l/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液㊂称取三羟甲基氨基甲烷18.15g,加适量水溶解,用盐酸调p H值至8.8,加水稀释至100m l㊂(3)B液30%丙烯酰胺溶液-0.8%N,Nᶄ-亚甲基双丙烯酰胺溶液(避光保存)㊂(4)C液10%十二烷基硫酸钠溶液㊂(5)D液N,N,Nᶄ,Nᶄ-四甲基乙二胺㊂(6)E液10%过硫酸铵溶液,临用前配制㊂(7)F液0.5m o l/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液㊂称取三羟甲基氨基甲烷6.05g,加适量水使溶解,用盐酸调p H值至6.8,加水稀释至100m l㊂(8)电极缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷3g㊁甘氨酸14.4g㊁十二烷基硫酸钠1g,加适量水溶解,用盐酸调p H 值至8.3,加水稀释至1000m l㊂(9)供试品缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷0.303g㊁溴酚蓝2m g㊁十二烷基硫酸钠0.8g,量取盐酸0.189m l㊁甘油4m l,加水溶解并稀释至10m l㊂该缓冲液用于非还原型S D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳㊂如用于还原型S D S-聚丙烯酰胺凝胶电泳,则再加β-巯基乙醇2m l㊂(10)分子量标准品所选用的标准品的分子量范围应将供试品的分子量包括在其中㊂(11)固定液(蓝染法)称取三氯醋酸5g,加水200m l溶解后,加甲醇200m l,再加水至500m l㊂固定液(银染A法)取甲醇250m l㊁冰醋酸60m l,加水稀释至500m l㊂固定液(银染B法)取甲醇50m l,37%甲醛溶液54μl,加水至100m l㊂(12)漂洗液(银染A法)取乙醇100m l㊁冰醋酸50m l,加水稀释至1000m l㊂(13)辅染液(银染A法)称取重铬酸钾10g,量取硝酸2m l加适量水溶解并稀释至200m l㊂用前40倍稀释㊂(14)银染液(银染A法)称取硝酸银2.04g,加水溶解并稀释至1000m l㊂硝酸银溶液(银染B法)取硝酸银0.8g,加水至4.0m l,将此溶液滴加到0.1m o l/L氢氧化钠溶液20m l与25%氨溶液1.5m l的混合液中,摇匀,用水稀释至100m l㊂(15)显色液(银染A法)称取碳酸钠30g,加适量水溶解,加甲醛0.5m l并稀释至1000m l㊂显色液(银染B法)取1%枸橼酸溶液2.5m l,37%甲醛溶液270μl,加水至500m l㊂(16)终止液(银染A法)取冰醋酸10m l,加水稀释至1000m l㊂终止液(银染B法)取冰醋酸100m l,加水至1000m l㊂(17)考马斯亮蓝染色液称取考马斯亮蓝R2501g,加入甲醇200m l㊁冰醋酸50m l㊁水250m l,混匀㊂(18)考马斯亮蓝脱色液取甲醇400m l㊁冰醋酸100m l 与水500m l,混匀㊂(19)保存液取冰醋酸75m l,加水至1000m l,摇匀㊂供试品溶液的制备将供试品与供试品缓冲液按3ʒ1的比例混匀,或照各品种项下的规定制备,除另有规定外于水浴中加热3~5分钟;对照品/标准品溶液同法操作㊂3.测定法(1)制备分离胶溶液根据不同分子量的需要,按下表制成分离胶溶液,灌入模具内至一定高度,加水封顶,室温下聚合(室温不同,聚合时间不同)㊂凝胶种类分离胶溶液浓缩胶溶液凝胶浓度5%7.5%10%12.5%15%17.5%4.5%试液/m lA液444444B液2.745.46.789.41.35C液0.160.160.160.160.160.160.09D液0.010.010.010.010.010.010.007E液0.10.10.10.10.10.10.07F液2.25H2O8.837.536.414.833.812.415.86(2)制备浓缩胶溶液待分离胶溶液聚合后,用滤纸吸去上面的水层,再灌入浓缩胶溶液(配方见上表),插入样品梳,注意避免气泡出现㊂(3)加样待浓缩胶溶液聚合后小心拔出样品梳,将电极缓冲液注满电泳槽前后槽,在供试品孔中加入供试品溶液与对照品/标准品溶液5μg(银染法)或10μg以上(考马斯亮蓝染色法)㊂(4)电泳垂直板电泳:恒压电泳,初始电压为80V,进入分离胶时调至150~200V,当溴酚蓝迁移胶底处,停止电泳㊂或恒流电泳,以恒流10m A条件下开始电泳,至供试品溶液进入分离胶后将电流调至20m A,直至电泳结束㊂圆盘电泳:调节电流使每管8m A㊂(5)固定与染色①考马斯亮蓝法电泳完毕,取出胶片(条),置固定液中30分钟,取出胶片(条),置染色液中1~2小时,用脱色液脱色至凝胶背景透明后保存在保存液中㊂②银染法除另有规定外,银染法一般不用于定量试验;做定性试验时,上样量可以适当增加;做纯度试验时,若结果的量效关系不成正比,建议用考马斯亮蓝法染色㊂银染A法.将电泳后的凝胶浸入固定液中10~12小时,取出,用漂洗液漂洗3次(温度应不低于25ħ),每次10分钟;漂洗后的凝胶浸于辅染液中7~10分钟后取出,用水浸洗3次,每次2分钟;将浸洗后的凝胶浸于银染液中,置较强日光或类似光源下照射30分钟,再于室内光线㊃401㊃下放置20分钟;将凝胶自银染液中取出,用水浸洗2次,每次1分钟;然后将凝胶浸于显色液中,每隔2分钟换液1次,直至蛋白质条带显色完全;将凝胶浸于终止液中10分钟后,取出凝胶保存于水中㊂银染B法.胶片浸在固定液中至少2小时后弃去固定液,用水浸洗至少1小时;胶片置1%戊二醛溶液中15分钟后,用水洗2次,每次15分钟;胶片置硝酸银溶液中15分钟后,用水洗3次,每次15分钟;胶片置显色液中,待各带显出后置终止液中㊂4.结果判断用卡尺或用扫描定位法测量溴酚蓝指示剂和蛋白迁移距离(如为圆盘电泳还应测量染色前后胶条长度,垂直板电泳胶片厚度低于1m m,染色前后胶片长度基本不变)㊂按下式计算相对迁移率:相对迁移率(Rᶄm)=蛋白迁移距离/脱色后胶条长度ˑ脱色前胶条长度/溴酚蓝指示剂迁移距离(1)供试品主成分迁移率应与对照品迁移率一致㊂(2)分子量以Rᶄm为横坐标,标准蛋白质的分子量对数值为纵坐标,进行线性回归,由标准曲线求得供试品的分子量㊂(3)纯度取凝胶置薄层扫描仪,以峰面积按归一化法计算㊂如使用商品化的S D S-聚丙烯酰胺预制胶电泳系统,生产厂家可能提供不同表面积和厚度的凝胶,为了达到最优的分离度,按厂家推荐的条件进行电泳,电泳时间和电流/电压需要按照厂家说明进行调整㊂第六法等电聚焦电泳法等电聚焦电泳法是两性电解质在电泳场中形成一个p H 梯度,由于蛋白质为两性化合物,其所带的电荷与介质的p H值有关,带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移,当到达其等电点(此处的p H值使相应的蛋白质不再带电荷)时,电流达到最小,不再移动,从而达到检测蛋白类和肽类供试品等电点的电泳方法㊂方法1一㊁等电聚焦垂直板电泳法1.仪器装置恒压或恒流电源㊁带有冷却装置的垂直板电泳槽和制胶模具㊂2.试剂(1)水(电阻率不低于18.2MΩ㊃c m)㊂(2)A液称取丙烯酰胺29.1g㊁亚甲基双丙烯酰胺0.9g,加适量水溶解,并稀释至100m l,双层滤纸滤过,避光保存㊂(3)B液10%过硫酸铵溶液,临用前配制㊂(4)供试品缓冲液(4倍浓度)取甘油8m l㊁40%两性电解质(p H3~10)溶液4m l,加水至20m l㊂加0.1%甲基红溶液20μl㊂(5)等电点标准品所选用的标准品的等电点范围一般应涵盖供试品的等电点㊂(6)固定液称取三氯乙酸34.5g㊁磺基水杨酸10.4g,加水溶解并稀释至300m l㊂(7)脱色液(平衡液)取95%乙醇500m l㊁冰醋酸160m l,加水稀释至2000m l㊂(8)染色液称取考马斯亮蓝G250(或R250)0.35g,加脱色液300m l,在60~70ħ水浴中加热,使溶解㊂(9)保存液取甘油30m l,加脱色液300m l,混匀㊂(10)正极液(0.01m o l/L磷酸溶液)取磷酸1m l,加水至1800m l㊂(11)负极液(0.01m o l/L氢氧化钠溶液)称取氢氧化钠0.4g,加水溶解并稀释至1000m l㊂3.测定法(1)制胶装好垂直平板电泳槽,压水,于玻璃板和玻璃纸之间加入60%甘油1m l㊂取水12m l㊁甘油2m l㊁A液4.0m l㊁两性电解质(p H3~10)溶液(或其他两性电解质) 1.0m l,混匀,脱气,再加B液72μl,N,N,Nᶄ,Nᶄ-四甲基乙二胺3μl,混匀后注入槽内,插入样品梳,注意避免气泡出现㊂(2)供试品溶液的制备将供试品对水透析(或用其他方法)脱盐后,与供试品缓冲液按3ʒ1体积比混匀㊂供试品溶液最终浓度应不低于0.5m g/m l㊂或按照各品种项下的方法制备㊂(3)电泳待胶溶液聚合后小心拔出样品梳,将电极缓冲液注满电泳槽前后槽,样品孔每孔加供试品缓冲液20μl,接通冷却循环水,于10ħ㊁250V(约10m A)条件下电泳30分钟㊂每孔分别加供试品溶液与等电点标准品溶液各20μl,于10ħ㊁500V(约10m A),上限电压2000V条件下,电泳约3.5小时㊂(4)固定与染色电泳结束后,即将凝胶放入固定液中固定20分钟以上;取出,放入平衡液中20~30分钟;再放入染色液中40~60分钟,然后用脱色液浸洗至背景无色,取出放入保存液中30分钟;亦可做成干胶保存㊂4.结果判断(1)鉴别供试品主成分迁移距离应与标准品一致㊂(2)等电点以各标准品的等电点(p I)对其相应的迁移距离作线性回归,将供试品的迁移距离代入线性回归方程,求出供试品的等电点㊂方法2二㊁等电聚焦水平板电泳法1.仪器装置恒压或恒流电源㊁带有冷却装置的水平电泳槽和制胶模具㊂2.试剂(1)水(电阻率不低于18.2MΩ㊃c m)㊂(2)A液称取丙烯酰胺29.1g㊁亚甲基双丙烯酰胺㊃501㊃0.9g,加适量水溶解,并稀释至100m l,双层滤纸滤过,避光保存㊂(3)B液10%过硫酸铵溶液,临用前配制㊂(4)等电点标准品所选用的标准品的等电点范围一般应涵盖供试品的等电点㊂(5)固定液称取三氯乙酸34.5g㊁磺基水杨酸10.4g,加水溶解并稀释至300m l㊂(6)脱色液(平衡液)取95%乙醇500m l㊁冰醋酸160m l,加水稀释至2000m l㊂(7)染色液称取考马斯亮蓝G250(或R250)0.35g,加脱色液300m l,在60~70ħ水浴中加热,使溶解㊂(8)保存液取甘油30m l,加脱色液300m l,混匀㊂(9)正极液(0.5m o l/L磷酸溶液)量取磷酸50m l,加水至1800m l㊂(10)负极液(0.2m o l/L氢氧化钠溶液)称取氢氧化钠8g,加水溶解并稀释至1000m l㊂3.测定法(1)制胶量取A液6.25m l㊁p H3~10两性电解质(或其他两性电解质)1.5m l㊁水17.1m l,抽气5~10分钟,加B液175μl㊁N,N,Nᶄ,Nᶄ-四甲基乙二胺20μl,混匀后缓慢地注入水平模具内,室温下聚合㊂将已聚合的聚丙烯酰胺凝胶放在冷却板上,其间涂以液体石蜡或煤油并避免产生气泡㊂(2)供试品溶液的制备将供试品对水透析(或用其他方法)脱盐,并使蛋白质或多肽含量调节在每0.5~5m g/ m l范围㊂或按照各品种项下的方法制备㊂(3)电泳用正极液与负极液分别润湿正极与负极电极条,然后分别放于阳极与阴极上,将加样滤纸放在凝胶上㊂分别加供试品溶液与等电点标准品溶液各5~30μl㊂将电极对准电极条的中心,加盖,在上限电压2000V㊁上限电流50m A㊁功率为每1c m胶1W㊁温度4ħ的电泳条件下,开始电泳,电泳2.5小时,电泳30分钟后去掉加样滤纸㊂(4)固定与染色同等电聚焦垂直板电泳㊂4.结果判断同等电聚焦垂直板电泳㊂㊃601㊃。
电泳鉴定
电泳鉴定一．准备工作1．实验器具与材料：（1）移液枪：10μl（2）吸头：20μl（3）吸头台：放置200μl和20μl的吸头一个（4）三角烧瓶：50ml一个（5）琼脂糖2.实验器具的处理与准备（1）塑料制品：（包括吸头等）送至高压3次，试验前将枪头放入吸头台。
（2）电泳板及电泳槽：用自来水冲洗干净备用3.试剂配制和准备：（1）电泳缓冲液（TAE）:先配制0.5mol/l PH8.0的EDTA溶液：将37.2g EDTA-NA 加入160ml蒸馏水中，在搅拌器上剧烈搅拌。
在用NaoH调节溶液PH值至8.0（约需4gNaoH）。
用蒸馏水定容至200ml。
后送至高压灭菌。
室温保存。
再配制50*TAE溶液：在400ml蒸馏水中溶解121g Tris碱，加入28.55ml冰乙酸和50ml0.5ml/l EDTA 溶液，再加蒸馏水定容至500ml，室温保存。
（2）琼脂糖溶液（1.0%）:50*TAE溶液取10ml，稀释成500ml，取50ml溶解0.5g琼脂糖，电炉上煮至沸腾，溶化的琼脂物冷却至60℃左右时加入10mg/ml EB 5 ul,充分混匀，将温热的凝胶倒入已置好梳子的电泳板中，在室温下放置45min左右后进行电泳。
（3）溴化乙锭（EB）(10mg/ml):在20ml水中加入0.2g溴化乙锭，磁力搅拌数小时。
然后用铝箔包裹容器或将溶液转移至棕色瓶中，室温保存。
（4）加样缓冲液(loading Buffer) 一般为6* loading Buffer二．电泳鉴定时注意事项：佩戴一次性手套，避免皮肤接触EB.无论作胶还是电泳缓冲液尽量用新的，不要超过两周。
三．电泳步骤1. 50*TAE 取10ml稀释成500ml，取50ml溶解0.5g琼脂糖。
电炉上煮沸后加入EB5ul.另外450ml TAE倒入电泳槽中。
2.用透明胶封闭电泳板，琼脂糖溶液冷却至温热时，倒入带数组的电泳板中，冷却后，拔出梳子，放入电泳槽中。
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福泰涂装技术有限公司
电着涂装技术资料
涂料添加量计算方式
1、ED槽体积：12000L
2、EED-065 固成份为36%（树脂B）
3、EEB-068A 固成份为45%（色膏P）
4、假设ED槽内固成份为9%，欲提高为10%，则树脂及色膏须各添加多少公斤？正常添加树脂和色膏之重量比为4.5：1，即P/B=1/4.5
则12000×（10%-9%）=120KG
0.45X+0.36x4.5Χ=120
Χ=65KG（色膏添加量）
4.5Χ=285KG（树脂添加量）
5、溶剂（S-210A）添加量计算方式：
设ED槽溶剂量为2.0%，欲提升至2.2%则:
12000×(2.2%-2.0%)=24KG
6、备注：
（１）、涂料及溶剂之添加应配于每日添加，不可数日后一次添加。
（２）、添加溶剂、中和剂时应先用纯水按1：1稀释。
电着液检验方法
目录
P H(酸碱值)测定法
电导度测定法
固成份检验方法及计算方式
灰份检验方法及计算方式
漆膜附着力测定法
漆膜铅笔硬度测定法
库仑效率测定法
电着涂料补充方法及程序
补充料包括：树脂乳液、色膏、溶剂三种物料。
1、树脂乳液：直接加于副槽内。
2、色膏：先以约一倍纯水稀释后，加入搅拌较激烈处或副槽。
3、溶剂、中和剂：先以一倍至二倍纯水稀释后，加入搅拌较激烈处或主
槽前段。
4、以上物料在生产作业中尽量不要添加，若不得已必需迅速调整槽液成
份时，请慢慢添加于副槽内，才不致于影响涂装质量。
5、。