项目5谷氨酸发酵代谢曲线测定
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• 3．噬菌体的分离 融化固体、半固体培养基，先倒底层 固体培养基平板，凝固后，分别取上述三个浓度的稀释 液0.5毫升于底层培养基上，然后在融化后并冷却至50℃ 的半固体培养基中加入5毫升黄色短杆菌菌液，摇匀，倾 注于上述平板上，与其中的噬菌体增殖液混匀放置。待 凝固后于32℃保温箱中培养24小时。
• 1.了解种子培养基与发酵培养基的区别。 • 2.了解发酵工业的生产流程。 • 3.掌握5L发酵罐的操作及谷氨酸发酵的条件控制。 • 4.掌握分光光度计法测定菌浓及残糖、谷氨酸产量测定。 • 5.掌握分批发酵过程中菌体代谢曲线的绘制和菌体生长四期的特
点。
制药微生物发酵技术
引入（任务项目）
谷氨酸的产量发酵分析是通过？曲线
• 亦可用葡萄糖试剂盒测定残糖，纸层析法测定谷氨酸产 量。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
一、材料和器材
• 1.菌种 黄色短杆菌
• 2.器材 恒温摇床、培养箱、5L发酵罐、SBA-40C多 功能葡萄糖-谷氨酸分析仪、分光光度计、250mL三角 瓶、吸管（10mL、1mL）、洗瓶、吸水纸、接种环、 显微镜、载玻片、盖玻片
制药微生物发酵技术
操练
提出生长曲线概念→提出代谢曲线的概念→曲线的绘制
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
一、项目指导
• 由于发酵的目的不同，发酵培养基与种子培养基有所不同。 • 发酵工业的生产流程一般是：保藏斜面→活化斜面→摇瓶种
子→种子罐→发酵罐，小型实验可以略去种子罐一步。 • 发酵罐的条件控制优于摇瓶，产物产量更高。
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• 发酵生产过程中要随时观察菌体生长情况。从培养液外 观变化和镜检两方面着手，及时发现并处理染菌事故； 定时取样检测相应的参数，尤其是菌浓、残糖及产物产 量，反馈调节发酵罐控制条件，如搅拌转数、碱液、消 泡剂流加速度等。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• (2)加入土样1克、碳酸钙0.3克摇匀继续培养24小时， 培养液经4000转/分离心10分钟，取上清液至无菌瓶 中，作为第一次噬菌体增殖液。
训练项目2
制药微生物发酵技术
2 噬菌体的分离检查
• 2．噬菌体增殖液的稀释 离心第二次增殖液，取上清液 用肉汤液体培养基以10倍稀释法适当稀释，取后三个稀 释度的稀释液用以分离。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
通用式发酵罐
制药微生物发酵技术
训练项目1百度文库
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
通 用 式 发 酵 罐
制药微生物发酵技术
训练项目1
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
小型发酵罐
制药微生物发酵技术
训练项目1
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
5 L 发 酵 罐
训练项目1
制药微生物发酵技术
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
• 4．噬菌体的选择 观察平板中噬菌斑的形成，用接种针 在噬菌斑中刺几下，接入有肉汤培养液的试管中，适当 稀释，再次以上述双层平板法分离。如此反复进行大约5 次，就可得到形态大小基本一致的噬菌斑。该噬菌斑便 可作为一个噬菌体的纯株应用。
分批发酵条件下，黄色短杆菌TK0303的菌体形态变化
5L罐延迟期 （4h）
5L罐对数期 （32h）
5L罐稳定期 （48h）
5L罐衰亡期 （68h）
摇瓶衰亡期 （72h）
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• 菌浓的测定方法有分光光度计法和干重法，生产中一般 采用前者。
• 残糖及谷氨酸产量一般采用SBA-40C多功能葡萄糖-谷 氨酸分析仪测定。
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
• 认识噬菌体，学习并掌握噬菌体的分离技 术。
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
• 噬菌体的存在，往往给发酵生产带来危害，但从分子遗传学研究 方面,噬菌体确是一个很好的工具。因此认识和掌握噬菌体的习 性，使之造福于人类是十分重要的。
• 噬菌体在自然界的广泛分布，往往造成微生物发酵工业的严重损 失与困难。如果生产菌株被一个噬菌体侵染，那么它会很快地在 菌体内得到增殖，并迅速裂解释放出100个左右的子代噬菌体， 其后果是严重的。因此，充分了解噬菌体的特性，对于防止生产 中的噬菌体污染具有一定的实际意义。
• 3.培养基和试剂 5mol/L NaOH溶液、泡敌、保藏培 养基、活化培养基、种子培养基、发酵培养基
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
二、内容
• 1.菌种活化 取保藏斜面菌种划线接种于活化斜面，32℃培 养24h。
• 2.种子培养 接一环生长良好的的活化斜面种子至装有 30mL种子培养基的250mL摇瓶中，8层纱布封口，32℃ 、100rpm的恒温摇床上培养至对数生长中后期。
制药微生物发酵技术
制药微生物发酵技术----课件
项目1
项目2
项目3
项目4
项目5
制药微生物发酵技术
1-3谷氨酸发酵工艺过程控制
1 谷氨酸发酵的代谢曲线测定 2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
告知：
① 掌握灭菌与空气的净化知识。
② 掌握发酵工艺过程控制知识。
③ 掌握发酵生产染菌及其防治知识。
④ 掌握发酵罐及其相关设备操作维护知识
训练项目2
制药微生物发酵技术
2 噬菌体的分离检查
实训材料
• 1．样品 味精厂土样，黄色短杆菌。
• 2．培养基 肉汤固体培养基，肉汤半固体培养基
• 3．器皿 平皿，试管，三角瓶等。
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
实训步骤
• 1．噬菌体的繁殖
• (1)首先将黄色短杆菌接入装有20毫升肉汤培养基的三 角瓶中，32℃培养12小时，使细胞生长至对数中期，
• 3.发酵培养 种子液镜检无杂菌。加大发酵罐的通气量，以 10％接种量接至装有3L发酵培养基的5L发酵罐中。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• 接种完毕，5L发酵罐各项参数设置如下：通气量3L/min， 转速250rpm，温度32℃，pH值7.0，培养30～40h。发 酵期间，流加尿素以补充氮源，每隔4h取样测定 OD620nm值（将发酵液稀释20倍后，用分光光度计于吸 光度620nm处测定）、谷氨酸产量和残糖量。
• 1.了解种子培养基与发酵培养基的区别。 • 2.了解发酵工业的生产流程。 • 3.掌握5L发酵罐的操作及谷氨酸发酵的条件控制。 • 4.掌握分光光度计法测定菌浓及残糖、谷氨酸产量测定。 • 5.掌握分批发酵过程中菌体代谢曲线的绘制和菌体生长四期的特
点。
制药微生物发酵技术
引入（任务项目）
谷氨酸的产量发酵分析是通过？曲线
• 亦可用葡萄糖试剂盒测定残糖，纸层析法测定谷氨酸产 量。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
一、材料和器材
• 1.菌种 黄色短杆菌
• 2.器材 恒温摇床、培养箱、5L发酵罐、SBA-40C多 功能葡萄糖-谷氨酸分析仪、分光光度计、250mL三角 瓶、吸管（10mL、1mL）、洗瓶、吸水纸、接种环、 显微镜、载玻片、盖玻片
制药微生物发酵技术
操练
提出生长曲线概念→提出代谢曲线的概念→曲线的绘制
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
一、项目指导
• 由于发酵的目的不同，发酵培养基与种子培养基有所不同。 • 发酵工业的生产流程一般是：保藏斜面→活化斜面→摇瓶种
子→种子罐→发酵罐，小型实验可以略去种子罐一步。 • 发酵罐的条件控制优于摇瓶，产物产量更高。
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• 发酵生产过程中要随时观察菌体生长情况。从培养液外 观变化和镜检两方面着手，及时发现并处理染菌事故； 定时取样检测相应的参数，尤其是菌浓、残糖及产物产 量，反馈调节发酵罐控制条件，如搅拌转数、碱液、消 泡剂流加速度等。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• (2)加入土样1克、碳酸钙0.3克摇匀继续培养24小时， 培养液经4000转/分离心10分钟，取上清液至无菌瓶 中，作为第一次噬菌体增殖液。
训练项目2
制药微生物发酵技术
2 噬菌体的分离检查
• 2．噬菌体增殖液的稀释 离心第二次增殖液，取上清液 用肉汤液体培养基以10倍稀释法适当稀释，取后三个稀 释度的稀释液用以分离。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
通用式发酵罐
制药微生物发酵技术
训练项目1百度文库
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
通 用 式 发 酵 罐
制药微生物发酵技术
训练项目1
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
小型发酵罐
制药微生物发酵技术
训练项目1
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
5 L 发 酵 罐
训练项目1
制药微生物发酵技术
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
• 4．噬菌体的选择 观察平板中噬菌斑的形成，用接种针 在噬菌斑中刺几下，接入有肉汤培养液的试管中，适当 稀释，再次以上述双层平板法分离。如此反复进行大约5 次，就可得到形态大小基本一致的噬菌斑。该噬菌斑便 可作为一个噬菌体的纯株应用。
分批发酵条件下，黄色短杆菌TK0303的菌体形态变化
5L罐延迟期 （4h）
5L罐对数期 （32h）
5L罐稳定期 （48h）
5L罐衰亡期 （68h）
摇瓶衰亡期 （72h）
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• 菌浓的测定方法有分光光度计法和干重法，生产中一般 采用前者。
• 残糖及谷氨酸产量一般采用SBA-40C多功能葡萄糖-谷 氨酸分析仪测定。
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
• 认识噬菌体，学习并掌握噬菌体的分离技 术。
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
• 噬菌体的存在，往往给发酵生产带来危害，但从分子遗传学研究 方面,噬菌体确是一个很好的工具。因此认识和掌握噬菌体的习 性，使之造福于人类是十分重要的。
• 噬菌体在自然界的广泛分布，往往造成微生物发酵工业的严重损 失与困难。如果生产菌株被一个噬菌体侵染，那么它会很快地在 菌体内得到增殖，并迅速裂解释放出100个左右的子代噬菌体， 其后果是严重的。因此，充分了解噬菌体的特性，对于防止生产 中的噬菌体污染具有一定的实际意义。
• 3.培养基和试剂 5mol/L NaOH溶液、泡敌、保藏培 养基、活化培养基、种子培养基、发酵培养基
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
二、内容
• 1.菌种活化 取保藏斜面菌种划线接种于活化斜面，32℃培 养24h。
• 2.种子培养 接一环生长良好的的活化斜面种子至装有 30mL种子培养基的250mL摇瓶中，8层纱布封口，32℃ 、100rpm的恒温摇床上培养至对数生长中后期。
制药微生物发酵技术
制药微生物发酵技术----课件
项目1
项目2
项目3
项目4
项目5
制药微生物发酵技术
1-3谷氨酸发酵工艺过程控制
1 谷氨酸发酵的代谢曲线测定 2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
告知：
① 掌握灭菌与空气的净化知识。
② 掌握发酵工艺过程控制知识。
③ 掌握发酵生产染菌及其防治知识。
④ 掌握发酵罐及其相关设备操作维护知识
训练项目2
制药微生物发酵技术
2 噬菌体的分离检查
实训材料
• 1．样品 味精厂土样，黄色短杆菌。
• 2．培养基 肉汤固体培养基，肉汤半固体培养基
• 3．器皿 平皿，试管，三角瓶等。
训练项目2
2 噬菌体的分离检查
制药微生物发酵技术
实训步骤
• 1．噬菌体的繁殖
• (1)首先将黄色短杆菌接入装有20毫升肉汤培养基的三 角瓶中，32℃培养12小时，使细胞生长至对数中期，
• 3.发酵培养 种子液镜检无杂菌。加大发酵罐的通气量，以 10％接种量接至装有3L发酵培养基的5L发酵罐中。
训练项目1
制药微生物发酵技术
1
谷氨酸发酵的代谢曲线测定
• 接种完毕，5L发酵罐各项参数设置如下：通气量3L/min， 转速250rpm，温度32℃，pH值7.0，培养30～40h。发 酵期间，流加尿素以补充氮源，每隔4h取样测定 OD620nm值（将发酵液稀释20倍后，用分光光度计于吸 光度620nm处测定）、谷氨酸产量和残糖量。