急性经口毒性实验

小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg
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（五）中毒体征和死亡情况观察
染毒后观察和记录中毒体征及出现的时间、死 亡数量和时间及死亡前的特征。
高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即 刻密切观察。
根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。
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观察的项目包括：
（1）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、 不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏 或迟钝；
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（三）受试化学物配制与稀释
1. 溶剂：
水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶 液。
脂溶性受试化学物以吐温-80、二甲基亚砜、 植物油等配制。
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（三）受试化学物配制与稀释
2. 受试物的稀释
等容量稀释法，各个剂量组的动物均给予相同单位 体重体积的受试化学物，按照事先设计的剂量分别 稀释配制为几种不同的浓度的受试物溶液。
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三、LD50 计算：
可采用多种方法测定LD50，有机率单位法、 霍恩氏法、寇氏法等，机率单位法能计算出 任何反应率水平的剂量，且实验2-5组均可。
机率单位法遵守的要求：
1. 剂量按等比级数排列，相邻两剂量组间 的比值常用1：0.8
2. 各实验组动物数相等
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L5D 0 lo 1[g 2(5 1-y y i(0 1 5 ). 0(y 4 y)-y2)X3]
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（一）实验动物与分组：
首选健康成年小鼠(18g～25g)和大鼠 (180g～220g) 。
实验前动物要在实验环境中适应3～5 d 时 间，以了解其正常活动情况和健康状况，并 淘汰不健康或体重不符合要求的动物 。
本次实验取体重18-25 g 的小鼠，实验时， 将小鼠称体重、编号、按随机分组原则，将 实验动物分成5组，每组8只。
急性经口毒性实验 （Acute Oral Toxicity Test）
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一、实验目的：
（一）通过本次实验掌握经口灌胃技术，半 数致死剂量的意义。
（二）通过本次实验学习半数致死剂量的计 算及毒性判定。
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二、测定方法：
本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV （80g/100ml）的半数致死量 （LD50）。
例如本次实验五个剂量组: 各剂量组动物给予相同单位体重体积受试物均为 10ml/kg。
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等容量稀释法
D：设计的染毒剂量， mg/kg V：动物给药量（相同单位体重体积）均为
10ml/kg X：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml）
，
X D V
如：第一组染毒剂量D=51.2mg/kg，动物按 V= 10ml/kg体重给药，配制的受试物浓度为 X=51.2mg/10ml
1、2、3、4、5…为小剂量组到大剂量组的顺序。 5.0----为死亡率是50%时所相当的反应率的机率单位
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LD50的95%可信限=log-1(X + 1.96 SX )
X[2(51-yy 0 i(15 ). 0(y y 4)-y2)]X3
Sx[2(5-yy1)10i(y4-y2)2]
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依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为
第一组：51.2mg/10ml 第二组： 64mg/10ml 第三组： 80mg/10ml 第四组： 100mg/10ml 第五组： 125mg/10ml
各剂量组小鼠灌胃容量计算:
小鼠灌胃容量V ml=体重（g）×10ml/1000g
机率单位法计算LD50公式（用五个剂量组时） X3 ----为第三个组的剂量对数(X3=log 80，
80mg/kg) i-----为相邻两组剂量比值（以高剂量组为分子）的对数
(i=log(125/100)) y-----为死亡率相应的机率单位（查附表）
y y---为五个剂量组的死亡率相应的机率单位的均数。 5
（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸
深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； （4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房
肿胀； （5）皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽； （6）眼：眼球突出、结膜充血、角膜浑浊、血性分泌物； （7）消化系统：腹泻、厌食。
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五、注意事项：
1.灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管 2.正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损
伤 3.灌入量计算和操作要准确，否则影响结果 4.防止操作者中毒。注意通风，不要把药品
各剂量组小鼠染毒剂量:
小鼠染毒剂量= V ml ×各组的受试物浓度（mg/10ml)
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（四）灌胃方法：
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后 皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹 部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化 道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器， 将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓 缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一 旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小 鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物 挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入， 以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。
50(5.0-y)2[2(5y-y1)(y4-y2)2] W
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四、结果评价：
根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得 出的LD50及受试物的种类，按相应的国家 标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准 （课本 215页--农药的急性毒性分级）对 受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大 小。
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（二）剂量选择：
首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似 的化学物的LD50，以此值作为受试化学物的预 期毒性中值，即中间剂量组，再上下各推1-2 个剂量组，进行预实验。
Leabharlann Baidu
各剂量组的间距可根据LD50 计算方法要求按等 比级数或等差级数安排。
本实验用机率单位法计算LD50，要求按等比级 数排列，常用1：0.8，如敌敌畏的最高剂量为 125 mg/kg，其次剂量组为125 mg/kg *0.8=100 mg/kg ，依次类推为80 、64 和51.2 mg/kg五个剂量组。