常用分子标记技术原理及应用
分子标记辅助育种技术
分子标记辅助育种技术分子标记辅助育种技术第一节分子标记的类型和作用原理遗传标记是指可以明确反映遗传多态性的生物特征。
在经典遗传学中，遗传多态性是指等位基因的变异。
在现代遗传学中，遗传多态性是指基因组中任何座位上的相对差异。
在遗传学研究中，遗传标记主要应用于连锁分析、基因定位、遗传作图及基因转移等。
在作物育种中，通常将与育种目标性状紧密连锁的遗传标记用来对目标性状进行追踪选择。
在现代分子育种研究中，遗传标记主要用来进行基因定位和辅助选择。
1、形态标记形态标记是指那些能够明确显示遗传多态性的外观性状。
如、株高、穗型、粒色等的相对差异。
形态标记数量少，可鉴别标记基因有限，难以建立饱和的遗传图谱。
有些形态标记受环境的影响，使之在育种的应用中受到限制。
2、细胞学标记细胞学标记是指能够明确显示遗传多态性的细胞学特征。
如染色体的结构特征和数量特征。
核型：染色体的长度、着丝粒位置、随体有无。
可以反映染色体的缺失、重复、倒位、易位。
染色体结构特征带型：染色体经特殊染色显带后，带的颜色深浅、宽窄和位置顺序,可以反映染色体上常染色质和异染色质的分布差异。
染色体数量特征—是指细胞中染色体数目的多少。
染色体数量上的遗传多态性包括整倍体和非整倍体变异。
细胞学标记优点：克服了形态标记易受环境影响的缺点。
缺点：（1）培养这种标记材料需花费大量的人力物力；（2）有些物种对对染色体结构和数目变异的耐受性差，难以获得相应的标记材料；（3）这种标记常常伴有对生物有害的表型效应；（4）观察鉴定比较困难。
3、蛋白质标记用作遗传标记的蛋白质分为酶蛋白质和非酶蛋白质两种。
非酶蛋白质：用种子储藏蛋白质经一维或二维聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据显示的蛋白质谱带或点，确定其分子结构和组成的差异。
酶蛋白质：利用非变性淀粉凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳及特异性染色检测，根据电泳谱带的不同来显示酶蛋白在遗传上的多态性。
蛋白质标记的不足之处：（1）每一种同工酶标记都需特殊的显色方法和技术；（2）某些酶的活性具有发育和组织特异性；（3）标记的数量有限。
分子标记技术的原理和应用
分子标记技术的原理和应用1. 简介分子标记技术是一种用于标记和检测生物分子的方法。
通过在目标分子上引入特定标记物，可以实现对这些分子进行定量、定位及特异性检测。
本文将介绍分子标记技术的原理和应用。
2. 原理分子标记技术主要通过以下步骤来实现对目标分子的标记和检测：•选择标记物：标记物通常是具有特异性的分子或结构，如荧光染料、酶、金纳米颗粒等。
根据标记物的特性和应用需求，选择合适的标记物。
•引入标记物：将选定的标记物与目标分子进行结合。
这可以通过化学反应、酶促反应或物理吸附等方法实现。
•检测标记物：使用适当的检测方法，如光谱分析、电化学方法等，对标记物进行定量或定性检测。
这些方法可以根据标记物的特性和需求选择。
3. 应用分子标记技术在许多领域都有广泛的应用。
以下是一些主要的应用领域：3.1 生物医学研究•免疫组织化学：通过标记特定抗体来检测组织中的蛋白质，用于研究疾病诊断、治疗反应和组织学研究。
•分子诊断：使用分子标记技术检测体液中的特定生物分子，如DNA、RNA和蛋白质，用于早期疾病诊断和个体化治疗。
•药物研发：利用分子标记技术对药物与靶标的相互作用进行研究，加速药物研发过程。
3.2 食品安全检测•农药残留检测：使用分子标记技术检测食品中的农药残留物，保证食品安全。
•食品成分分析：通过标记特定分子，检测食品中的成分和添加物。
3.3 环境监测•水质检测：使用分子标记技术检测水中的有害物质和污染物，保护环境和人类健康。
•大气污染监测：通过标记特定分子，检测大气中的污染物，评估空气质量。
3.4 基因组学研究•基因定位：使用分子标记技术对基因组中特定序列进行定位和研究。
•基因表达分析：通过标记RNA或蛋白质，研究基因在各个组织中的表达情况。
4. 总结分子标记技术以其高灵敏度、高特异性和高可视性等优势，在生物医学研究、食品安全检测、环境监测和基因组学研究等领域具有广泛的应用前景。
随着技术的不断发展和创新，相信分子标记技术将在未来发挥更大的作用，并为各个领域的研究和应用带来更多的突破。
第五章分子标记技术原理与应用
AFLP标记的基本原理是基于PCR技术扩增基因 组DNA限制性片段，基因组 DNA先用限制性内切酶切割，然后将双链接头 连接到DNA片段的末端，接 头序列和相邻的限制性位点序列，作为引物结 合位点。限制性片段用两种 酶切割产生，一种是罕见切割酶，一种是常用 切割酶。
分子标记的应用
获得与目标性状连锁的分子标记
分子标记辅助育种的经典例子
美国科学家将分子选择应用在玉米杂种优势遗传改良上，经过改良的B73 改良的Mo17的组合比原始的B73 Mo17组合和一个高产推广组合 Pioneer hybrid 3165皆增产10%以上（Stuber and Sisco 1991; Stuber et al. 1995）。 通过分子标记技术将3个抗稻瘟病基因（Pi-2、Pi-1和Pi-4）在水稻第6、 11和12号染色体上进行定位，然后利用连锁标记将这3个抗性基因聚合起 来。基因聚合试验从3个分别带有Pi-2、Pi-1和Pi-4基因的近等基因系 C101LAC、C101A51和C101PKT出发，已成功地获得聚合了这3个抗稻瘟病 基因的植株，它们可以作为供体亲本在育种中加以利用，可同时提供数 个抗性基因。 （Zheng et al. 1995）
一、限制性片段长度多态性技 术(RFLP)
限制性片段长度多态性技术(RFLP)是用已知的 限制性内切酶消化目标 DNA，电泳印迹，再用DNA探针杂交并放射自 显影，从而得到与探针同源 的DNA序列酶切后在长度上的差异。 RFLP标记在正常的分离群体中都呈典型的孟德 尔式遗传。PFLP的结果稳 定，在作物基因图谱构建和QTL基因定位分析 上使用较多。
三、简单重复序列SSR
3-分子标记技术原理、方法及应用
细胞学标记
植物细胞染色体的变异：包括染色体核型（染 色体数目、结构、随体有无、着丝粒位置等） 和带型（C带、N带、G带等）的变化。
优点: 能进行一些重要基因的染色体或染色 体区域定位
缺点: (1)材料需要花费较大的人力和较长 时间来培育，难度很大; (2) 有些变异难以用细 胞学方法进行检测
生化标记
主要包括同工酶和等位酶标记。分析方法是从 组织蛋白粗提物中通过电泳和组织化学染色法 将酶的多种形式转变成肉眼可辩的酶谱带型。
优点: 直接反映了基因产物差异，受环境影 响较小
缺点: (1)目前可使用的生化标记数量还相 当有限; (2)有些酶的染色方法和电泳技术有一 定难度
分子标记
主要指能反映生物个体或种群间基因组中某种 差异特征的DNA片段，它直接反映基因组DNA 间的差异，也叫DNA标记。
2/片段迁移率的变化要反映分子量的差异 ————DNA在聚丙烯酰胺凝胶上迁移率也受构象 变化影响
RFLP 基 本 步 骤
RFLP patterns in Pinus densata
RFLP
优点: 无表型效应，不受环境条件和发育阶段的影响
共显性，非常稳定 起源于基因组DNA自身变异，数量上几乎不受限制
分子标记技术原理、方法 及应用
黄健子 2011.10
一、遗传标记的类型及发展 二、几种常见分子标记的原理及方法 三、分子标记技术的应用
一、遗传标记的类型及发展
遗传标记(genetic marker):指可追踪染色体、染
色体某一节段、某个基因座在家系中传递的任何一 种遗传特性。它具有两个基本特征，即可遗传性和 可识别性；因此生物的任何有差异表型的基因突变 型均可作为遗传标记。包括形态学标记、细胞学标 记、生化标记和分子标记四种类型。
分子标记技术的类型原理及应用
分子标记1.分子标记技术及其定义1974年,Grozdicker等人在鉴定温度敏感表型的腺病毒DNA突变体时, 利用限制性内切酶酶解后得到的DNA片段的差异, 首创了DNA分子标记。
所谓分子标记是根据基因组DNA存在丰富的多态性而发展起来的可直接反映生物个体在DNA水平上的差异的一类新型的遗传标记,它是继形态学标记、细胞学标记、生化标记之后最为可靠的遗传标记技术。
广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质分子。
通常所说的分子标记是指以DNA多态性为基础的遗传标记。
分子标记技术本质上都是以检测生物个体在基因或基因型上所产生的变异来反映基因组之间差异。
2.分子标记技术的类型分子标记从它诞生之日起, 就引起了生物科学家极大的兴趣,在经历了短短几十年的迅猛发展后, 分子标记技术日趋成熟, 现已出现的分子标记技术有几十种, 部分分子标记技术所属类型如下。
2.1 建立在Southern杂交基础上的分子标记技术(1) RFLP ( Rest rict ion Fragment Length Polymorphism)限制性内切酶片段长度多态性标记；(2) CISH ( Chromosome In Situ Hybridization) 染色体原位杂交。
2.2 以重复序列为基础的分子标记技术(1) ( Satellite DNA ) 卫星DNA；(2) ( Minisatellite DNA ) 小卫星DNA;(3) SSR( Simple Sequence Repeat ) 简单序列重复, 即微卫星DNA。
2.3 以PCR为基础的分子标记技术(1) RAPD ( Randomly Amplif ied Polymorphic DNA ) 随机扩增多态性DNA；(2) AFLP( Amplif ied Fragment Length Polymorphism) 扩增片段长度多态性；(3) SSCP( Single Strand Conformation Polymorphism) 单链构象多态性；(4) cDNA-AFLP( cDNA- AmplifiedFragment Length Polymorphism) cDNA -扩增片段长度多态性；(5) TRAP( Target Region Amplified Polymorphism) 靶位区域扩增多态性；(6) SCAR ( Sequence Char acterized Amplified Region) 序列特征化扩增区域；(7) SRAP ( Sequencerelated Amplified Polymorphism) 相关序列扩增多态性。
常用分子标记技术原理及应用
单链制备
通过加热或化学方法 将双链DNA变性为 单链。
凝胶电泳
将单链DNA在聚丙 烯酰胺凝胶上进行电 泳，并观察迁移率变 化。
结果分析
通过比较正常和突变 DNA的迁移率，确 定是否存在基因突变。
应用实例
遗传病诊断
SSCP技术可用于检测与遗传病相关的 基因突变，如囊性纤维化、镰状细胞 贫血等。
肿瘤研究
特点
高分辨率、高灵敏度、可重复性和可 靠性，能够检测出微小的基因组差异 ，广泛应用于遗传育种、生物多样性 保护、人类医学等领域。
分子标记技术的应用领域
遗传育种
通过分子标记技术对动植物进行遗传资源鉴定、品种纯度 鉴定、遗传连锁分析和基因定位等，提高育种效率和品质。
生物多样性保护
利用分子标记技术对物种进行遗传结构和亲缘关系分析， 评估物种的遗传多样性和濒危程度，为保护生物多样性提 供科学依据。
人类医学
分子标记技术在人类医学中用于疾病诊断、药物研发、个 体化医疗等方面，有助于提高疾病的预防、诊断和治疗水 平。
常用分子标记技术简介
RFLP（限制性片段长度多态性）
SSR（简单序列重复）
利用限制性内切酶对DNA进行切割，产生 不同长度的片段，通过电泳和染色检测多 态性。
利用串联重复的DNA序列多态性进行标记 ，通过PCR扩增和电泳检测多态性。
分子标记辅助育种
利用AFLP技术标记控制重要性状 的基因，辅助育种者快速筛选具 有优良性状的个体。
植物分子生态学研
究
利用AFLP技术分析植物种群遗传 结构、物种演化和生态适应性等 方面的研究。
04
SSR技术
原理
简单序列重复标记（SSR）是一种基于PCR的分子标记技 术，利用微卫星序列的重复单元进行扩增，通过检测等位 基因的长度多态性来识别基因组中的变异。
分子标记技术原理方法及应用
分子标记技术原理方法及应用分子标记技术是一种用于检测和定位特定分子的方法。
其原理是通过将一种特殊的化学物质（标记物）与目标分子结合，然后利用标记物的性质来对目标分子进行分析和检测。
分子标记技术被广泛应用于生物医学研究、生物学检测和药物研发等领域。
常用的分子标记技术有荧光标记、酶标记和放射性标记等。
荧光标记是一种将目标分子与荧光染料结合的技术。
荧光标记的原理是通过荧光染料的特性，使得目标分子在荧光显微镜下显示出特定的荧光信号，从而对其进行定位和分析。
荧光标记可以在细胞、组织和体内进行，具有灵敏度高、分辨率高和实时监测的优点。
常见的荧光标记方法有间接免疫荧光标记、原位杂交荧光标记和荧光蛋白标记等。
荧光标记技术广泛应用于细胞定位、蛋白质相互作用研究、细胞分析和分子诊断等领域。
酶标记是一种利用酶与底物反应的方法进行分子标记。
通常，酶标记将目标分子与特定的酶（如辣根过氧化酶、碱性磷酸酶等）结合，然后通过对底物的催化作用产生显色或荧光信号。
酶标记在生物学检测中得到广泛应用，特别是在酶联免疫吸附试验（ELISA）中。
酶标记具有灵敏度高、稳定性好的特点，可以用于检测蛋白质、核酸和小分子等生物分子。
放射性标记是利用放射性同位素与目标分子结合的技术。
放射性同位素具有高灵敏度和长时间半衰期的特点，可以用于追踪和测定目标分子的存在和分布。
放射性标记技术广泛应用于细胞和分子影像学、放射性定位和药物代谢等领域。
分子标记技术在生物医学研究、生物学检测和药物研发等领域有着广泛的应用。
在生物医学研究中，分子标记技术可以用于研究细胞和分子的结构和功能，探索疾病的发生机制和药物的作用机理。
在生物学检测中，分子标记技术可以用于检测和定位特定的生物分子，如蛋白质、核酸和小分子等，从而实现对生物过程的观察和分析。
在药物研发中，分子标记技术可以用于筛选和评价药物的活性和毒性，以及研究药物的代谢和药理学特性。
总之，分子标记技术的发展和应用为生物医学研究和生物学检测提供了强大的工具，有助于我们深入理解生命的奥秘和开发有效的治疗手段。
分子开发标记
分子开发标记摘要：1.分子开发标记的概述2.分子开发标记的原理与应用3.分子开发标记在生物科学领域的案例4.分子开发标记技术的发展趋势与挑战5.我国在分子开发标记领域的研究进展6.分子开发标记在医药和农业等行业的应用前景7.总结与展望正文：一、分子开发标记的概述分子开发标记，顾名思义，是一种用于标记生物分子的新技术。
它通过特定的方法与试剂，将标记物与目标分子结合，从而实现对目标分子的检测、追踪和定量。
分子开发标记在生物科学、医药、农业等领域具有广泛的应用价值。
二、分子开发标记的原理与应用分子开发标记的原理主要是基于生物学分子的特异性识别与结合。
常见的标记方法有酶标记、荧光标记、放射性标记等。
这些标记方法各有优缺点，可根据实际需求选择合适的方法。
1.酶标记：酶标记技术具有高度特异性，适用于抗原-抗体、核酸-核酸等分子的标记。
酶标记物可以与底物发生显色反应，便于观察和检测。
2.荧光标记：荧光标记具有较高的灵敏度和实时性，适用于活细胞内分子的标记与检测。
荧光标记物在荧光显微镜下可直接观察，有助于研究生物过程。
3.放射性标记：放射性标记具有较好的定量性，适用于分子水平的定量分析。
但使用放射性同位素需注意安全防护。
三、分子开发标记在生物科学领域的案例1.基因表达谱：通过荧光标记的核酸探针，可实现对特定基因在细胞或组织中的表达水平进行分析。
2.蛋白质组学：利用质谱技术结合分子标记物，对蛋白质进行定性和定量分析。
3.细胞内分子互作研究：通过生物素标记，检测蛋白质之间的相互作用，如共免疫沉淀实验。
四、分子开发标记技术的发展趋势与挑战1.发展趋势：量子点、纳米颗粒等新型标记物的开发，为分子标记技术带来更高的灵敏度、特异性和实时性。
2.挑战：如何在复杂的生物环境中准确检测和区分目标分子，以及降低非特异性结合带来的干扰。
五、我国在分子开发标记领域的研究进展我国在分子开发标记领域取得了世界领先的成果，包括新型标记物的研制、标记技术的创新以及应用领域的拓展。
dna分子标记技术
dna分子标记技术DNA分子标记技术是一种重要的生物技术手段，它在现代生命科学研究和医学诊断中扮演着至关重要的角色。
本文将全面介绍DNA分子标记技术，包括其原理、应用和未来的发展方向。
首先，我们来了解一下DNA分子标记技术的原理。
DNA分子标记技术是利用特定的标记物将DNA序列与其他分子或材料相结合，以实现对DNA的检测、分离和定位等操作。
常见的DNA分子标记技术包括荧光标记、放射性标记和酶标记等。
其中，荧光标记是最常用的方法之一，它通过将DNA与荧光染料结合，使DNA在荧光显微镜下呈现出明亮的荧光信号。
接下来，让我们来看一下DNA分子标记技术的应用领域。
DNA分子标记技术在生命科学研究中广泛应用于基因测序、基因组学、蛋白质组学等领域。
通过将DNA标记物与待研究的生物样品进行反应，可以快速准确地检测出目标基因的存在和表达水平。
此外，DNA分子标记技术在医学诊断中也有重要的应用价值。
例如，在肿瘤学中，可以利用DNA分子标记技术检测肿瘤相关基因的突变情况，为肿瘤的早期诊断和治疗提供重要依据。
然而，DNA分子标记技术仍存在一些挑战和限制。
首先，由于DNA 的序列多样性和长度差异，选择适合的标记物对不同的研究目的来说是一个复杂的过程。
此外，在分析复杂样品时，如组织和血液等，需要克服背景干扰和检测灵敏度的问题。
因此，在开发更加灵敏、快速、准确的DNA分子标记技术方面，仍需要进一步的研究。
对未来的展望来说，DNA分子标记技术具有巨大的发展潜力。
随着生物学和医药研究的不断深入，对DNA的分析和检测需求将不断增加。
因此，我们可以预见，随着技术的进一步创新和改进，DNA分子标记技术将发展成为更加成熟和可靠的工具，为生命科学研究和医学诊断提供更多的可能性。
综上所述，DNA分子标记技术是一项既生动又充满潜力的生物技术。
通过荧光标记、放射性标记和酶标记等方法，可以实现对DNA的快速、准确的检测和定位。
当前，DNA分子标记技术已经广泛应用于基因测序、基因组学和医学诊断等领域，但仍面临一些挑战和限制。
DNA分子标记技术在药用植物研究方面的应用
DNA分子标记技术在药用植物研究方面的应用
一、绪论
药用植物的研究对于促进人类健康有着重要的作用。
在现代药学的发展中，DNA分子标记技术已经成为一种重要的技术，它可以帮助我们更好地利用药用植物，也可以更好地了解药用植物的分子基础。
本文将从以下几方面探讨DNA分子标记技术在药用植物研究方面的应用：
1、DNA分子标记技术的基本原理
2、DNA分子标记技术的种类
3、DNA分子标记技术在药用植物研究中的应用
4、DNA分子标记技术的发展前景
二、DNA分子标记技术的基本原理
DNA分子标记技术是一种利用DNA来识别和定位细胞或分子的技术。
它可以通过检测特定的DNA序列，从而让研究者更好地了解一个基因的结构、功能以及其与其他基因周围交互的方式。
DNA分子标记技术可以根据特定的DNA片段的存在或缺失来鉴定它们在特定的细胞内是否存在，从而给出有关它们起作用的生物过程的其中一种细胞活性的信号。
三、种类
1、RFLP（限制性片段长度多态）是最常使用的DNA分子标记技术之
一、它的原理是对特定DNA片段进行限制性酶切，并使用电泳技术对酶切产物进行纯化，从而产生具有特定长度的DNA条带。
借助于这种特定的DNA条带长度，研究者可以定位特定的DNA片段，进而进行基因定位。
2、RAPD（随机扩增多态位点）也是一种常用的DNA分子标记技术。
分子标记技术知识讲解
苷酸多态性） • 同一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几
个核苷酸的差异，从分子水平上单个核苷酸的差 异进行检测具有重要意义 • 检测SNPs方法a.随机扩增DNA（RAPD）法
的需要量大，在很大程度上限制了该 技术的应用
2.2 第二代分子标记技术
随机引物PCLeabharlann 标记• RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA，DNA随机扩增多态性）
• RAPD具有技术简单、检测迅速、灵敏度 高、特异性强、检测容易、DNA样品用量 少的优点，但RAPD为显性遗传，侧你在 共迁移问题，并且重复性较差
1.1分子遗传标记
• 从广义上，是指可遗传并可检测的 DNA序列或蛋白质
• 从狭义上，是指DNA标记，这个界现 在别广泛采纳
• 具有分辨率好和信息量大等优势的分 子遗传标记目前已广泛应用于生物基 因组研究以及生物遗传育种、进化起 源、分类等诸多方面。
1.2DNA分子标记的定义及特征
• 定义：指能反映生物个体或种群间基 因组中某种差异特征的DNA片段，它 直接反映基因组DNA间的差异
• ISSR在引物设计上比SSR简单，无需知道 DNA序列就可用引物扩增，还比RFLP、 RAPD、SSR提供的遗传信息更多，但多 数情况下，不能区别一个位点扩增的DNA 片段
特异引物PCR标记
• SSR（Simple Sequence Repeats,简 单重复序列）
• SSR基本原理：根据微卫星序列两端 互补序列设计引物，通过PCR反应扩 增微卫星片段，由于核心序列串联重 复数目不同，因而能够用PCR的方法 扩增出不同长度的PCR产物，将扩增 产物进行凝胶电泳，根据分离片段的 大小决定基因型并计算等位基因频率
单分子标签的原理与应用
单分子标签的原理与应用1. 引言单分子标签是一种用于研究生物大分子结构和功能的重要技术。
它以单个分子为标记，可以提供高分辨率的结构信息，为生物学研究提供了独特的手段。
本文将介绍单分子标签的原理、分类及其在生物学研究中的应用。
2. 单分子标签的原理单分子标签的原理基于量子物理学中的荧光现象。
当某些分子受到激发时，会发射出特定波长的荧光。
利用荧光标记可以对分子进行定量和定位等信息的获取。
下面将介绍两种常见的单分子标签原理：2.1 荧光染料标记荧光染料标记是一种常见的单分子标记方法。
它通过将荧光染料与目标分子进行共价或非共价结合，使目标分子获得荧光性质。
荧光染料标记可以通过荧光显微镜等设备观察到发光信号，并对分子进行定位和跟踪。
2.2 量子点标记量子点是一种特殊的纳米颗粒，具有独特的光学性质。
量子点标记利用了量子点的荧光特性，将其与目标分子结合，实现对分子的标记和检测。
量子点标记具有较高的亮度和稳定性，适用于高分辨率显微镜和生物成像等应用。
3. 单分子标签的分类单分子标签可以根据其特性和用途进行分类。
下面将介绍几种常见的单分子标签分类：3.1 荧光标记荧光标记是最常见的一种单分子标签分类。
它利用荧光染料或量子点等物质进行标记，可通过荧光显微镜等设备观测到发光信号。
荧光标记可以提供高灵敏度和高分辨率的成像。
3.2 放射性标记放射性标记利用放射性同位素对分子进行标记，通过其放射性衰变产生的射线进行检测和定位。
放射性标记具有较高的灵敏度，适用于一些较为复杂的生物研究。
3.3 磁性标记磁性标记利用磁性纳米颗粒对分子进行标记，通过磁性检测技术对分子进行定位和筛选。
磁性标记广泛应用于生物医学研究和分析。
4. 单分子标签的应用单分子标签在生物学研究中具有广泛的应用。
下面将介绍几个典型的应用领域：4.1 蛋白质相互作用研究单分子标签可以用于研究蛋白质相互作用。
通过将不同的蛋白质标记上不同的单分子标签，可以实时观察蛋白质之间的相互作用和结合动力学，揭示生物分子之间的信号传递机制。
常用分子标记技术原理及应用 共35页
形态标记（Morphological marker）
形态学上 如何区分
细胞学标记
植物细胞染色体的变异：包括染色体核型（ 染色体数目、结构、随体有无、着丝粒位置 等）和带型（C带、N带、G带等）的变化。
优点: 能进行一些重要基因的染色体或染色 体区域定位。 缺点: (1)材料需要花费较大的人力和较长时 间来培育，难度很大。
Simple sequence repeat
Simple mucleotide polymorphism
中文名称 限制性片段长度多态性
序列标签位点 随机扩增多态性DNA 扩增片断长度多态性
简单序列重复 单核苷酸多态性
二、几种常见分子标记的原理及方法
1.RFLP 2.RAPD 3.AFLP 4.SSR 5.ISSR 6.SNP
( ) ( )
AFLP—扩增片段长度多态性标记
( Amplified Fragment Length Polymorphism )
起源：1992年由荷兰科学家Zabeau和Vos发展起来的一种检 测DNA多态性的新方法。 定义:由于单核甘酸突变或插入及缺失突变导致增加或减少限 制性酶切位点，这种差异可通过选择性的PCR扩增而检测。 AFLP是在RFLP的基础上发展起来的，差别在于检测手段。 核心技术：AFLP的关键是设计选择性扩增引物以及不同引物 组合。
几种主要的ＤＮＡ分子标记
英文缩写 RFLP STS RAPD AFLP SSR SNP
英文名称
Restriction fragment Iength polymorphism
Sequence tagged site
Random amplified polymorphic DNA
分子标记原理和技术
分子标记原理和技术分子标记原理和技术是一种用于研究和检测生物分子的方法。
分子标记是通过给生物分子附上一种特定的标记物，使其能够被观察和测量。
分子标记技术在生物医学研究、临床诊断、药物研发和环境监测等领域都有广泛的应用。
分子标记的原理是利用化学反应将标记物与待检测的生物分子结合起来，然后通过适当的方法观察或检测标记物。
常见的标记物有荧光染料、放射性同位素、酶和金纳米粒子等。
标记物的选择要考虑其化学性质、稳定性、检测灵敏度和特异性等因素。
分子标记技术有很多种，下面列举几种常见的技术：1.荧光标记：荧光标记是最常用的分子标记技术之一、通过给生物分子附加荧光染料，可以通过荧光显微镜观察其分布和表达水平。
荧光标记还可以用于流式细胞术、酶联免疫吸附实验等。
荧光标记可以选择多种不同的荧光染料，如草莓红、FITC和PE等。
2.放射性标记：放射性标记是利用放射性同位素将标记物与生物分子结合起来。
这种标记方法可以通过放射性计数器或放射影像技术来检测，具有极高的灵敏度。
常用的放射性同位素有3H（氚）、14C（碳14）和32P（磷32）等。
3.酶标记：酶标记是利用酶与底物之间的反应来检测生物分子。
常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
酶标记技术可以通过底物的颜色变化或荧光信号来观察酶的活性和分布。
4. 化学标记：化学标记是利用特定化学反应将标记物与生物分子结合起来。
常见的化学标记方法有SNAP标记、CLIP标记和Biotin-avidin 标记等。
化学标记的优点是反应选择性高，标记物的稳定性和特异性好。
5.金纳米粒子标记：金纳米粒子标记是一种新兴的分子标记技术。
金纳米粒子可以通过调节粒子大小和表面修饰来实现对生物分子的特异性识别。
金纳米粒子标记可以通过紫外-可见吸收光谱或扫描电镜观察。
分子标记技术在生物学研究中扮演着重要角色，能够帮助科学家观察和分析生物分子的功能和相互作用。
此外，分子标记技术还被广泛应用于临床诊断和药物研发领域，例如用于检测肿瘤标记物、鉴定药物靶点和筛选药物库。
常用分子标记技术原理及应用
追踪分子代谢和动力学研究、分析样品中的放射性同位素含量、放射性示踪和药物代谢 研究。
3 注意
放射性同位素的使用需要特殊的安全操作和处置措施，遵循放射性防护法规。
酶标记技术原理及应用
原理
酶标记技术利用酶与底物的特异性反应，将酶连接到目 标分子上，通过酶的催化作用进行检测和定量。
应用
• 酶活性测定和酶底物检测 • 蛋白质相互作用分析 • 医学诊断和药物筛选
应用
生物传感、分子成像、疾病诊断和药物递送系统。
分子印迹技术原理及应用
原理
分子印迹技术利用分子模板与功能单体的相互作用， 构筑具有目标分子识别特异性的聚合物材料。
应用
• 选择性分离和富集目标分子 • 分子识别和传感 • 分析化学和生物医学研究
利用放射性同位素对分子进行标记，主要用于追 踪分子代谢和分析样品中的放射性同位素含量。
3 酶标记技术
4 生物素-亲和素系统标记技术
通过将酶连接到目标分子上实现标记，常用于酶 活性测定、分子检测和医学诊断。
利用生物素与亲和素的特异性结合，对目标分子 进行标记，常用于免疫组织化学和分子生物学研 究。
荧光标记技术原理及应用
原理
荧光标记技术利用荧光染料或荧光蛋白的特性，将其 连接到目标分子上，通过激发和发射光的特性进行检 测和观察。
应用
• 细胞成像和活细胞追踪 • 蛋白质分子定位和表达分析 • 分子交互作用研究和蛋白质结构解析
放射性同位素标记技术原理及应用
1 原理
放射性同位素标记技术利用放射性同位素对目标分子进行标记，通过放射性衰变进行检 测和测量。
生物素-亲和素系统标记技术原理及应 用
1
原理
生物素-亲和素系统标记技术利用生物素与亲和素的特异性结合，将生物素或亲 和素连接到目标分子上。
分子标记技术的类型原理及应用
分子标记技术的类型原理及应用分子标记技术是一种基于分子生物学的技术，在研究、诊断和治疗等领域具有广泛的应用价值。
这种技术利用染料、荧光物质、辐射标记物等来标记目标分子，从而实现对分子的检测、追踪和研究。
下面将介绍分子标记技术的几种类型、原理及应用。
一、荧光标记技术荧光标记技术是一种常见的分子标记技术，基于物质的荧光特性，通过在目标分子上标记荧光染料或荧光蛋白等物质，实现对目标分子的可见或可荧光检测。
该技术的原理是标记物被激发后会发出荧光，通过检测荧光信号的强度、波长或寿命等特征来获得关于目标分子的信息。
荧光标记技术在生物学研究、生命体内药物输送系统的研究和临床诊断等方面得到了广泛的应用。
在生物学研究中，荧光标记技术可以用于研究细胞结构和功能、蛋白质相互作用、细胞内信号传导等。
在药物输送系统的研究中，荧光标记技术可以用于研究药物在体内的分布和代谢情况等。
在临床诊断中，荧光标记技术可以用于检测血液中的病原体、肿瘤标志物以及其他疾病相关分子等。
二、辐射标记技术辐射标记技术是一种通过辐射标记物对目标分子进行标记的技术。
常用的辐射标记物包括放射性同位素和放射性荧光染料等。
该技术的原理是通过辐射标记物自身所放出的辐射（如α、β射线等）或荧光来检测目标分子。
辐射标记技术在医学、生物学和环境科学等领域都有广泛的应用。
在医学方面，辐射标记技术可以用于肿瘤的早期诊断和治疗、药物代谢和排泄的研究等。
在生物学方面，辐射标记技术可以用于研究生物体的代谢过程、病原体的传播途径等。
在环境科学方面，辐射标记技术可以用于了解污染物的迁移和转化、生态系统的功能及稳定性等。
三、化学标记技术化学标记技术是一种通过化学反应将标记物与目标分子结合的技术。
常见的化学标记物包括生物素、抗原抗体等。
该技术的原理是通过物质间的化学反应使两者结合，并通过检测化学标记物的特征来获得目标分子的信息。
化学标记技术在生物医学研究、食品安全检测和环境监测等领域有广泛应用。
分子标记原理和技术
分子标记原理和技术分子标记是一种用于追踪和分析生物分子的技术，在生命科学研究中得到广泛应用。
它通过在特定分子上加上标记物，如荧光染料、放射性同位素或酶等，来实现对这些分子的检测和定位。
分子标记技术的原理主要包括标记物的选择和绑定、信号的检测和分析等方面。
分子标记技术的核心是选择适合的标记物，并将其与目标分子进行特异性的结合。
常用的标记物包括荧光染料、放射性同位素和酶等。
荧光染料是一类可发光的化学物质，可以通过荧光显微镜来检测其存在和分布情况。
放射性同位素则利用放射性衰变的原理，通过放射性测量仪来检测其辐射信号。
酶则是一类能够催化特定化学反应的蛋白质，通过对酶反应进行检测来间接地确定目标分子的存在。
标记物与目标分子的结合方式多种多样，常用的方法包括共价结合、亲和结合和非共价结合等。
共价结合是指通过化学反应将标记物与目标分子共同连接起来，常用的反应有偶氮化反应、醛基化反应等。
亲和结合则是利用亲和分子对目标分子进行特异性结合，常用的亲和分子包括抗体、配体等。
非共价结合则是通过分子间的非共价相互作用来实现标记物与目标分子的结合，如疏水相互作用、静电相互作用等。
分子标记技术中信号的检测和分析是至关重要的一步。
对于荧光标记物，需要使用荧光显微镜来观察目标分子的荧光信号，并通过图像处理和分析来定量分析目标分子的数量和分布情况。
对于放射性同位素标记物，需要使用放射性测量仪来测量目标分子的放射性信号，并通过计数方法来确定目标分子的数量。
对于酶标记物，需要使用酶反应底物来触发酶催化反应，产生可测量的信号，如颜色变化、发光等，通过光谱仪或分光光度计来检测和分析。
分子标记技术具有许多优点，如高灵敏度、高特异性、高分辨率等。
它可以用于检测和定位生物分子，如蛋白质、核酸等，也可以用于研究生物分子的相互作用、代谢途径等。
分子标记技术在生命科学研究中的应用非常广泛，如免疫组织化学、原位杂交、蛋白质定位、细胞追踪等。
2. Saha K, Agasti SS, Kim C, Li X, Rotello VM. Gold nanoparticles in chemical and biological sensing. Chem Rev. 2024;112(5):2739-2779.。
分子标记在作物种质资源评价中的应用
分子标记在作物种质资源评价中的应用作物种质资源是现代农业发展的重要基础和保障。
种质资源评价是作物育种和遗传改良的基础环节，而分子标记技术是评价作物种质资源不可或缺的手段之一。
本文将从分子标记技术原理、种质资源评价方法、应用案例等方面对其应用进行探讨。
一、分子标记技术原理分子标记可以简单解释为在分子水平上，对不同个体之间基因变异的特异性检测。
作为现代分子遗传学的重要组成部分，分子标记技术已广泛应用于种质资源评价和遗传改良。
常见的分子标记类型包括基因多态性序列标记（SSR），单倍型标记（SNP）和扩增片段长度多态性标记（AFLP）等。
分子标记的基本原理是利用基因间重复DNA序列的变异，通过PCR扩增和电泳分离，检测出个体间的DNA序列变异差异。
二、种质资源评价方法（一）基于分子标记的种质资源评价分子标记在种质资源的快速鉴定、分类和遗传多样性评价中发挥了重要作用。
基于分子标记的种质资源评价方法包括基因频率分析、遗传距离图谱、群体分化分析等。
其中，遗传距离图谱是使用分子标记数据构建的一种反映不同种质资源群体之间遗传距离关联程度的图谱。
通过不同种质资源群体之间的DNA序列变异差异，可以将其聚类到同一分支上，或者说明它们在遗传上存在相似性。
（二）基于表型的种质资源评价基于表型的种质资源评价是传统的种质资源评价方法，包括外形鉴定和生理生化鉴定等。
这些评价指标总是受到环境因素影响，因此不能全面反映种质资源的遗传特性。
基于分子标记的种质资源评价方法可以洞察到DNA序列层面上的变异情况，可以判断群体间的遗传多样性差异，有助于发现群体之间的亲缘关系和遗传稳定性。
三、应用案例（一）玉米品种种质资源评价玉米是世界上最重要的粮食作物之一，其种质资源评价具有重大意义。
使用SSR标记对我国60个玉米品种进行了RD、IR和TYL三个玉米螟的抗性评价。
研究结果表明，具有抗RD和TYL两种抗性的玉米品种比只有IR抗性的品种更为抗虫。
常用分子标记技术原理及应用
常用分子标记技术原理及应用分子标记技术是现代分子生物学、生物化学和生物医学研究中常用的重要方法之一，其原理是利用特定的物质（分子标记）与待检测分子结合，从而实现对待检测分子的定位、测定和分析。
常用的分子标记技术包括荧光标记、酶联免疫法（ELISA）、放射性同位素标记和生物素标记等，下面将详细介绍其中的原理及应用。
1.荧光标记技术荧光标记技术是一种基于物质固有性质的分子标记方法，其原理是将待检测物质与荧光染料结合，通过荧光信号的激发和发射实现对物质的定位和检测。
荧光标记技术具有高灵敏度、多重标记、高分辨率和实时监测等优点，在生物学研究和临床诊断中得到广泛应用。
例如，荧光标记技术可应用于细胞内分子定位、蛋白质相互作用研究和病原体检测等领域。
2.酶联免疫法（ELISA）酶联免疫法是一种常用的免疫学实验方法，其原理是将待检测物质与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗对抗体进行反应，通过酶底物的转化反应实现对待检测物质的定性和定量分析。
酶联免疫法具有高灵敏度、高特异性和简单易行等特点，在医学诊断和生物分析中被广泛应用。
例如，酶联免疫法可用于检测临床血清中的肿瘤标志物、抗体和炎症因子等，对于早期疾病诊断、药物研发和治疗效果评估具有重要意义。
3.放射性同位素标记技术放射性同位素标记技术是一种基于放射性元素的分子标记方法，其原理是将待检测物质与放射性同位素结合，通过放射性同位素的放射衰变实现对物质的定位和追踪。
放射性同位素标记技术具有极高的灵敏度和追踪性，广泛应用于核医学、分子显像和生物研究等领域。
例如，放射性同位素标记技术可用于肿瘤显像、药物代谢研究和放射免疫测定等，对于肿瘤早期诊断、药物研发和治疗效果评估有着重要的作用。
4.生物素标记技术生物素标记技术是一种基于生物素-亲和素相互作用的分子标记方法，其原理是将待检测物质与生物素结合，通过生物素和亲和素之间的特异性结合实现对物质的定位和检测。
生物素标记技术具有高特异性、高亲和力和多重标记等优势，在生物学研究和生物医学中得到广泛应用。
分子标记的原理特点及应用
分子标记的原理特点及应用一、分子标记的原理分子标记是一种用于确定和定位特定分子的方法。
它基于分子中的特定结构或性质进行标记，并利用这些标记来进行分子的定位和识别。
常见的分子标记方法包括荧光标记、抗体标记和DNA标记等。
1. 荧光标记荧光标记是通过给分子引入荧光物质，使其发出特定波长的荧光信号来标记分子。
荧光标记的原理是将某种荧光物质或染料与目标分子结合，形成带有荧光信号的复合物。
荧光标记具有灵敏度高、实时性好等优点，广泛应用于药物研发、细胞生物学等领域。
2. 抗体标记抗体标记是通过给目标分子结合抗体，利用抗体的特异性和亲和性来对目标分子进行标记。
抗体标记的原理是将目标分子与特定的抗体结合，形成结合复合物。
抗体标记具有高度特异性和灵敏性，常用于生命科学研究和临床诊断等领域。
3. DNA标记DNA标记是利用DNA分子的特性对分子进行标记和检测。
DNA标记的原理是将目标分子与特定的DNA序列结合，形成带有DNA标记的复合物。
DNA标记常用于基因测序、分子诊断和基因工程等领域。
二、分子标记的特点分子标记具有以下几个特点：1. 高选择性分子标记的方法通常具有高度的选择性，可以根据目标分子的特定结构或性质进行标记。
这使得分子标记可以精确地定位和识别目标分子，减少误判和混淆。
2. 高灵敏度分子标记方法通常具有高度的灵敏度，可以检测到非常低浓度的目标分子。
这使得分子标记成为很多科学研究和临床诊断中的重要工具，例如用于检测罕见疾病的基因突变。
3. 实时性分子标记方法通常具有较快的响应速度和实时性，可以实时监测和观察目标分子的变化。
这使得分子标记在动态过程观察和实时监测中具有重要意义，例如用于研究细胞信号转导的过程。
4. 多样性分子标记具有多样性，可以根据具体需求选择不同的标记方法和标记物质。
不同的标记方法可以针对不同的分子结构和目标分子进行标记，满足不同领域和研究的需求。
三、分子标记的应用分子标记在多个领域中得到广泛应用，包括生命科学研究、临床诊断、药物研发等。
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起源：1992年由荷兰科学家Zabeau和Vos发展起来的一种检
测DNA多态性的新方法。 定义:由于单核甘酸突变或插入及缺失突变导致增加或减少限 制性酶切位点，这种差异可通过选择性的PCR扩增而检测。 AFLP是在RFLP的基础上发展起来的，差别在于检测手段。 核心技术：AFLP的关键是设计选择性扩增引物以及不同引物 组合。
SSR
Simple Sequence Repeat
基本原理：微卫星DNA是一种广泛分布于真核生物基因组 中的串状简单重复序列，每个重复单元的长度在1—10bp之 间，常见的微卫星如TGTG……TG= (TG)n或AATAAT……AAT= (AAT)n等，不同数目的核心序列呈串联重复排列，而呈现 出长度多态性。在基因组中，因每个SSR序列的基本单元 重复次数在不同基因型间差异很大，从而形成其座位的多 态性。而且每个SSR座位两侧一般是相对保守的单拷贝序 列，据此可设计引物，其关键是首先要了解SSR座位的侧 翼序列(Flanking Region)，寻找其中的特异保守区。
eg:蛋白质标记如种子贮藏蛋白同工酶（指由一个以上基 因位点编码的酶的不同分子形式）
2.狭义的分子标记（DNA marker)概念只是指DNA标记
能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的
DNA片段，它直接反映基因组DNA间的差异。
分子标记（DNA marker）
分子标记的概念：是以直接检测DNA核苷酸序列的 差异为基础的遗传标记，又叫DNA分子标记。 分子标记的特点： (相对形态，细胞，生化标记具有的优点)
（1）直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育 阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题； （2）数量极多，遍布整个基因组，可检测座位几乎无限； （3）多态性高，自然界存在许多等位变异，无须人为创造； （4）表现为中性，不影响目标性状的表达； （5）许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体。
3.预扩增：应用一对引物对酶切片段进行第一轮 扩增，目的是富聚目标片段，减少本底，扩增引 物序列为接头序列加一个选择核甘酸。只有一端 为EcoRI切点，一端为MseI切点的DNA酶切片段， 同时也与选择核甘酸配对的DNA序列才能被扩增。 1～3步的产物可以通过Agarose胶检测。 4.选择扩增：应用含有接头序列和三个选择核甘 酸序列的引物进行选择扩增。通过这一轮扩增， 进一步降低扩增片段数量，同时一个引物被同位 素或荧光染料标记（也可用银染），电泳后压片 检测。
缺点：由于创建新的标记时需知道重复序列两端的序列信息，对于许多物种需构建，因此其开发有一定困难， 费用也较高。
ISSR
Inter Simple Sequence Repeat by Zietkiewicz et al. (1994) 基本原理：在SSR的5’或 3’端加锚 l～4个嘌呤或嘧啶碱 基，然后以此为引物，对两侧具有反向排列SSR的一段基 因组DNA序列进行扩增。在SSR的3’端或5’端锚定1-4个简 并碱基的优点是在基因组上只有那些与锚定的核苷酸匹配 的位点才能被靶定，因而避免了SSR在基因组上的滑动大 大提高了PCR扩增的专一性。
AFLP的原理
Principle of AFLP
DNA提取
两种限制性内切酶酶切DNA
寡聚核苷酸接头的连接
对限制性酶切片段的选择性扩增
扩增产物的电泳分析
AFLP特点
AFLP 结合了 RFLP 和 RAPD两种技术的优点
优点： 1、具有分辨率高 2、稳定性好 3、效率高的优点
缺点：
1、试验成本高 2、对 DNA 的纯度和内切酶的质量要求很高
AFLP
基 DNA提取
两种限制性内切酶酶切DNA
本 寡聚核苷酸接头的连接 步 对限制性酶切片段的选择性扩增 骤 扩增产物的电泳分析
AFLP技术路线
1.基因组DNA被酶切成小片段：通常用一个四个 碱基识别位点的限制性内切酶如MseI和一个六个 碱基识别位点的酶如EcoRI，其中MseI确保产生 合适大小的DNA片段，这些片段能在序列胶上进 行有效的分离；而六碱基识别位点酶EcoRI能够 限制扩增片段数目，确保DNA多态性的正常检测； 2.接头与酶切片段的连接：接头序列包括：一个 核心序列和酶切位点特异序列，MSE接头和 ECORI接头，核心序列是一段已知的20核甘酸的 DNA序列；
SSR
SNP
Simple sequence repeat
Simple mucleotide polymorphism
简单序列重复
单核苷酸多态性
二、几种常见分子标记的原理及方法 1.RFLP 2.RAPD 3.AFLP 4.SSR 5.ISSR 6.SNP
( ) ( )
AFLP—扩增片段长度多态性标记
几种主要的ＤＮＡ分子标记
英文缩写 RFLP STS RAPD AFLP 英文名称 Restriction fragment Iength polymorphism Sequence tagged site Random amplified polymorphic DNA Amplified frangment length Polymorphism 中文名称 限制性片段长度多态性 序列标签位点 随机扩增多态性DNA 扩增片断长度多态性
遗传标记的类型主要有四大类：
1.形态标记 ( morphological marker )
2.细胞学标记( cytological marker )
3.生化标记 ( biochemical marker ) 4.分子标记 ( molecular marker )
形态学标记
主要包括肉眼可见的外部形态特征，如：矮秆、紫鞘、
SSR
分
子
基
础
SSR
基 DNA酶切 收集酶切片段连接载体 本 合成末端标记的SSR探针 步 筛选含SSR的阳性克隆用于测序 骤
根据测序结果设计引物进行PCR扩增
SSR
SSR
优点: 数量丰富，广泛分布于整个基因
共显性标记，可鉴别出杂合子和纯合子 实验重复性好，结果可靠 所需DNA量少，对DNA质量要求不高
形态学上 如何区分
细胞学标记
植物细胞染色体的变异：包括染色体核型 （染色体数目、结构、随体有无、着丝粒位 置等）和带型（C带、N带、G带等）的变化。 优点: 能进行一些重要基因的染色体或染色 体区域定位。 缺点: (1)材料需要花费较大的人力和较长时 间来培育，难度很大。 (2) 有些变异难以用细胞学方法进行 检测。
人类22对常染色体
细胞学标记
细胞分裂中期（Metaphase）
• 染色体组karyotype(Chromosome phenotype) analysis
生化标记（Biochemical Marker）
概念：主要包括贮藏蛋白、同工酶等标记，也指以基因表达的 蛋白质产物为主的一类遗传标记系统。 种类：可分为酶蛋白质和非酶蛋白质两类。在非酶蛋白质中用 得最多的是种子贮藏蛋白（清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋 白）。 同工酶（isoenzyes)：催化功能相同，但结构和生理性质不同 的一类酶。 生化标记的优点：数量更丰富，受环境影响更小。 生化标记的缺点：蛋白质受生物体发育的时空影响很大。
分子标记技术
主要内容：
一、分子标记的相关概念及分类
二、几种常见分子标记的原理及方法 三、分子标记技术的应用
分子标记来源于DNA水平的突变
突变(Mutation)：是指DNA水平的可遗传的变异， 不管这种DNA变异能不能导致可检测的表型或生化 改变。突变产生的变异是自然选择的基础。可遗
传的突变在群体中扩散从而产生多态性。
多态性源自限制性酶切位点的变异。
AFLP的实验操作 Procedures for AFLP
AFLP技术主要包括模板DNA制备、引物设计、酶 切片段扩增及凝胶电泳分析4个步骤。各步骤具体 的过程有： 1.DNA模板酶切和接头连接（EcoRI/MseI） 2.在Taq聚合酶的作用下，完成AFLP的选择性扩 增。 3.PCR产物变性后在含尿素的聚丙烯酰胺变性胶 上电泳。 4.多态性比较分析，特异片段回收克隆分析。
ISSR 分
子
基
础
ISSR
银杏5个群体66个个体进行扩增的13种有效ISSR引物的特点
图 引物UBC845扩增ＴＭ群体15棵植株基因组DNA的ISSR电泳图
ISSR
分子标记的分类
在遗传学研究中广泛应用的DNA分子标记已经发展了 很多种，一般依其所用的分子生物学技术大致可以分 为三大类： 第一类：是以分子杂交为核心的分子标记，包括RFLP、DNA
指纹技术等，这类分子标记被称为第一代分子标记；
第二类：是以PCR为核心的分子标记，包括随机扩增多态性 RAPD、简单序列重复SSR、扩增片段长度多态性AFLP、序列 标签位点STS等，为第二代分子标记； 第三类：是一些新型的分子标记，如：SNP标记、表达序列 标签EST标记等，也以PCR技术为基础，为第三代分子标记。
多态性(Polymorphism)：－群体内同一DNA序列的
两种或多种变异形式，统计表明：群体内任何两
个生物个体平均每1000～10000个碱基对有一对有
差别，这种差别就是多态性。
一分子标记相关概念
1.广义的分子标记(molecular marker)是指可遗传的 并可检测的DNA序列或蛋白质。
常用分子标记原理与应用
知识框架
形态学标记 遗传 标记
常见分子标记
细胞学标记
生化标记 分子标记
RFLP
RAPD
AFLP
SSR
ISSR SNP