酚氯仿抽提
[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
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[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤:1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液(300μl)，研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床(56?,5h)。
4.加入等体积的Tris饱和酚(500μl)，摇匀(10min)。
5.离心:12000R，7min，4?。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚:氯仿:异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心:12000R，7min，4?。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl(氯仿:异戊醇=24:1)。
11.离心:12000R，7min，4?。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20?冷冻的100%的酒精。
-20?过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4?离心。
14.弃上清，留白色沉淀(DNA)，加400μl的75%的经过-20?冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次(用75%酒精洗三次)。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理:用酚抽提细胞DNA时，有什么作用,使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点:1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。
酚氯仿法提取dna注意事项
酚-氯仿法提取DNA时，需要注意以下几点：
1. 在吸取基因组DNA时，需要使用专用的粗口吸头，避免使用普通的吸头，因为这可能会切断或损坏DNA。
2. 在准备实验的过程中，应将DNA样品放在碎冰上，以保持其低温状态。
3. 加缓冲液后，可以轻轻晃动或轻弹试管，以加速DNA的溶解。
4. 加入缓冲液后，可以置于4度过夜，这样也有助于溶解DNA。
5. 将DNA溶液在65度下温育10分钟，可以灭活DNase，防止其降解DNA。
6. 在抽提过程中，如果水相和有机层的界面不太清楚，说明其中蛋白质含量较高，这时可以增加酚/氯仿抽提的次数或适当延长离心的时间。
7. 在酚抽提过程中，如果上清液太粘稠而无法进行水相转移，可以加入适量TES稀释后再抽提。
8. 氯仿的作用是克服酚的缺陷，加快有机相与液相的分层，最后用氯仿抽提出DNA。
由于酚易溶于氯仿中，可以快速去掉核酸溶液中的微量酚。
9. 加入异戊醇能减小分子表面张力，减少抽提流程中的泡沫发生。
通常选用氯仿与异戊醇为24:1的比例，异戊醇可
以帮助分相，使离心后的上层水相、下层有机溶剂相、中层变性蛋白相保持稳定的层次。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取准确信息。
酚-氯仿抽提DNA
方法一细菌沉淀加入567μlTE溶液(10mmol/L Tris- HCl , 1mmol/L EDTA, pH810) 重悬,加入10%SDS30μl 和20mg/ml 蛋白酶K3μl , 于37 ℃温育1h,加入5mol/LNaCL100μl , CTAB/NaCl 80μl 溶液, 于65 ℃温育10min,加入等体积的氯仿/异戊醇, 混匀, 4 ℃12000g/min离心5min。
将上清液转入另1个离心管中加等体积的酚/氯仿/异戊醇, 混匀, 4 ℃12000g/min 离心5min,提取上清置于另一管中, 加入0.6体积异丙醇, 轻柔混合, 4℃12000g/min离心5min, 弃上清加入70%乙醇洗涤1min, 离心, 弃上清, 将沉淀的DNA溶于100μl 的无菌去离子水中, - 20℃保存备用方法二取 1.5 mL 培养至对数生长期的菌液于 2.0 mL 的离心管中，8 000 r/min 离心5 min，弃上清；加入600 μL 消化液（10 mmol/L Tris-HCl，0.1 mol/L EDTA，1% SDS，200μg/mL蛋白酶K，20μg/mL RNase A），37℃消化30 min ；加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25 /24/ 1）混合液，轻摇10 min，12 000 r/min 离心 5 min，取上清，重复抽提1次；加入等体积的氯仿/异戊醇（24 /1）混合液抽提 1 次；加入1/10 体积的 3 mol/L 的醋酸钠和 2 倍体积的冰乙醇混匀，静置10 min，12 000 r/min 离心10 min，弃上清；沉淀加入 1 mL 70%乙醇洗涤2次，每次8 000 r/min 离心 5 min，弃乙醇，待沉淀中残余乙醇挥发后，加入50μL 超纯水溶解DNA。
4℃保存备用。
方法三将预处理后所得沉淀加入300μL细胞裂解液（主要成分：10mmol/L Tris-HCl 缓冲液、1mol /L 氢氧化钠、10mmol/L乙二胺四乙酸、生理盐水、0.2%十二烷基硫酸钠），振荡混匀，于100℃加热15min。
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理是一种常见的有机物提取方法，该方法通过酚氯仿与样品中的目标化合物发生化学反应，将目标化合物从样品中分离出来。
下面将详细介绍酚氯仿抽提原理：
1.溶剂选择：酚氯仿是一种有机溶剂，对许多有机物具有良好
的溶解能力，因此在酚氯仿抽提过程中常常选择酚氯仿作为抽提溶剂。
2.抽提原理：酚氯仿可以与目标化合物发生亲油性反应，形成
可溶于酚氯仿的复合物，并从样品中抽提出来。
这是因为酚氯仿的化学性质使其能够与许多有机物形成相互作用，例如氢键、氧化还原反应等。
3.抽提条件：酚氯仿抽提的条件包括温度、pH值、搅拌速度等。
适当的条件可以促进酚氯仿与目标化合物的反应，并提高抽提效果。
4.抽提步骤：酚氯仿抽提的步骤通常包括样品制备、酚氯仿溶
液制备、抽提过程和目标化合物的分离。
其中，在样品制备过程中需要将样品研磨或者加入适当的溶剂溶解，以便更好地与酚氯仿反应。
5.分离纯化：一般情况下，酚氯仿抽提得到的溶液中还包含有
一些杂质。
为了得到纯净的目标化合物，需要进行进一步的分离纯化步骤，例如溶剂挥发、晶体生长等。
总之，酚氯仿抽提原理通过酚氯仿与目标化合物的化学反应来分离目标化合物。
通过优化溶剂的选择、抽提条件的控制以及后续的分离纯化步骤，可以得到纯净的目标化合物。
基因组DNA的提取方法—酚
基因组DNA的提取方法—酚-氯仿抽提法1. 将95% 酒精浸泡过的标本取出，用吸水纸吸去标本表面的乙醇，用1×TE Buffer浸泡两次，每次20min。
2. 解剖取个体胸部肌肉组织约0.02g，将组织转入1.5mL离心管加入1mL液氮使其迅速冻结, 用玻璃棒迅速有力地将团状组织研磨成细粉末。
3. 加入500uL消化液（消化液成分为NaCl 0.1mol/L, Tris-HCl 0.3mol/L, EDTA 0.01mol/L, SDS 1%, Proteimase K 200ug/mL），于56℃恒稳水浴中消化8-10小时, 每隔两小时摇晃一次。
4. 消化结束后，加入等体积的饱和酚（pH7.6），用封口胶封好，置于混匀器上约12小时，离心10分钟（10000r/m）。
5. 取上清液于另一新的EP管中，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），缓慢抽提20分钟，离心10分钟（10000r/m）。
6. 取上清液于另一新的EP管中，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1），缓慢抽提20分钟，离心10分钟（10000r/m）。
7. 取上清液于另一新的EP管中，加入2倍体积的预冷的无水乙醇，-20℃放置2小时。
8. 离心后，DNA沉积于管底，用70%的预冷的乙醇洗涤2次，37℃烘干。
烘干的DNA溶于TE中，4℃保存。
9. 于基因组DNA中加入终浓度为50ug/mL的RNase（每次使用前90℃灭活10min），于37℃消化1.0-1.5hr。
10. 用0.8%的琼脂糖凝胶检测，取3μL DNA样品及2μL Load-buffer (含溴酚蓝和缓冲液)，加入点样孔。
实验所用Marker是 DNA（EcoR/HindIII），100V电压电泳90分钟。
凝胶成象分析仪进行检测。
11. 用紫外可见分光光度计测定DNA的OD值，判定DNA纯度和浓度。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DN A裂解液（300μl），研磨后再加入300μl DNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tri s饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10mi n。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了D Nase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与D NA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
酚氯仿法提取DNA要紧步骤和原理
酚氯仿法提取DNA要紧步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，别离用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每一个梯度脱水时刻为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，基层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍通过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃留宿。
13.将样品掏出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的通过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处置匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
利用酚的优势：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部份poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase的活性。
酚-氯仿抽提DNA
DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。
本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法1、材料：培养菌体2、仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪3、试剂：细胞裂解液100 mM Tris-HCl 5 mM EDTA 500 mM NaCl 1.25% SDS(PH 7.5) 饱和酚氯仿/异戊醇酚/氯仿/异戊醇无水乙醇70％乙醇异丙醇 3 M NaAc(pH5.2) RNase 50×TE缓冲液电泳载样缓冲液三、操作步骤（1）培养菌体（2）加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇（3）12000－15000rpm离心15 min（4）取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min（5）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（6）加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min（7）12000－15000rpm离心10 min（8）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（9）加入2倍体积无水乙醇（10）12000－15000rpm离心10 min（11）倒弃液体留下沉淀，真空干燥（12）复溶于2 ml TE（13）加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min（14）加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min（15）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（16）加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min（17）12000－15000rpm离心10 min（18）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（19）真空干燥沉淀（20）复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。
酚氯仿提DNA 浙师大
酚-氯仿抽提DNA参照Sambrook等用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA的方法提取总DNA，加以改进，步骤如下：（1）取固定剂固定样品，清水清洗样品表面，然后用滤纸吸干表面水分。
（2）将剪刀在酒精灯上灼烧，冷却后剪取样品150~200mg，放置在1.5 mL离心管中，标记。
用小剪刀充分剪碎；（3）向上述离心管中加入800μL的DNA裂解缓冲液以及6~7μL的蛋白酶K （20mg/mL），在漩涡混合仪上混匀，金属浴(56℃ 300 rpm)消化4~5小时（不时上下颠倒），直至溶液澄清透明，消化完全后冷却至室温；（4）提前打开离心机预冷至4℃，然后将上述离心管于4℃ 8000 rpm离心8min。
取上清液饱和酚，混匀(4℃ 300 rpm)混匀15min（不时上下颠倒）至水相成乳胶状；（等体积比加）注意不能把油层取出来。
（5）将上述离心管于4℃ 8000 rpm离心10min。
取上清液心管中，加入:氯仿:异戊醇(25:24:1)，金属浴(4℃ 300 rpm)混匀15min；（6）重复操作步骤(5)，步骤(5)吸取的上清液和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)的比例均为1:1；（7）4℃ 8000 rpm离心10 min。
取上清液-20℃ (用之前放于-20℃冰箱备用) 沉淀DNA至少3小时；（8）将上述离心管于4℃ 12000 rpm离心15min（可省）。
室温干燥DNA；（9）将上述提取的总DNA溶于200μL的无菌水中，标记好对应编号并置于-20℃冰箱内保存备用。
实验试剂：DNA裂解缓冲液、蛋白酶K（20mg/mL）、Tris饱和酚、酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)、预冷无水酒精注意：1.试剂盒常温提取，酚-氯仿4℃提取2.rcf 重力加速度；rpm转速；8000rcf（g）————10800 rpm。
外周血DNA抽提(酚-氯仿法)
外周血DNA抽提（酚－氯仿法）实验前准备：1、融化冻存的血2、调水浴锅至56℃。
操作步骤：新鲜血液1、全血离心1300g,15min(或静置)2、吸上层白细胞到1.5ml离心管中3、加灭菌过的纯水至1.5ml刻度，离心,4℃，4000g，15min4、去上层血清，加无菌水1ml溶血5、离心4℃，3500g，10min去上清，反复洗血3次。
6、加TES 720ul，RNaseA 5微升，37℃或室温静置20min（消化RNA）。
7、PK（10mg/ml）15ul,56℃消化3-4小时或过夜，直至没有肉眼可见的悬浮物。
……后续操作从冻存血液操作步骤第5步开始。
冻存血液1．冻存血室温溶解，取1ml转移至1.5ml离心管。
2. 离心：室温，3500g，15分钟，弃上清，约残留30至50微升。
注意：冻存血融化后会溶血，离心后白细胞沉至管底，呈粘稠的团状，棕红色，与上清的颜色接近，不易分辨，吸除上清的时候动作要缓慢，注意不要吸走白细胞沉淀。
3. 加TES 635微升，RNaseA 5微升，37摄氏度或室温静置20min（消化RNA）。
4. 加PK（10mg/ml）100微升，温和地翻转8次混匀，56度温育过夜（直至没有肉眼可见的悬浮物），不时翻转混匀。
5. 加入等体积（740微升）酚,翻转10分钟混匀。
6. 离心：15000g, 15分钟,吸取上层水相640微升。
7. 加入等体积（640微升）酚, 翻转10分钟混匀。
8. 离心：15000g, 15分钟,吸取上层水相520微升。
9. 加入等体积（520微升）酚-氯仿-异戊醇, 翻转10分钟混匀。
10. 离心：17000g, 15分钟,吸取上层水相400微升。
11. 加入3M 乙酸钠（pH5.2）40微升（1/10体积），加入880微升（两倍体积）-20℃预冷的无水乙醇 ,翻转20次混匀，会出现白色絮状DNA沉淀。
12. 15000g, 4 ℃ 10分钟,小心的倒掉上清，在吸水纸上扣干残液。
苯酚氯仿提取法原理
苯酚/氯仿提取法原理
苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。
DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。
蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。
当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。
离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。
酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。
氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。
抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在NaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。
酚氯仿法提取DNA实验报告
酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告一、实验目的实验原理：酚氯仿法：先从全血中分离白细胞，再通过蛋白酶K消化，通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸晶使DNA分子完整地分离出来。
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出来再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析出。
氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。
而DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA二、实验用品试剂：1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA（pH8.0），5M NaCl TES（15mM Tris, 15mM EDTA，15mM NaCl）Tris饱和酚（PH8.0）氯仿/异戊醇（V/V=24/1）10％SDS5mg/ml Protease K70％乙醇、无水乙醇TE缓冲液（pH8.0）：10mM T ris-Cl（PH8.0）1mM E DTA(PH8.0)10mg/mL 溴化乙锭（EB）耗材：仪器：低温离心机、移液枪一套，低温冰箱，恒温水浴锅、紫外分光光度计（Eppendorf）。
三、实验步骤4.1取血样：实验人员相互取血样5ml.（用品：采血管、采血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸）4.2血液样品的预处理：分取2ml 血样加入到离心管A中用于酚氯仿法提取DNA。
1) 破除RBC：用移液器将采血管中剩余的3ml血样中的血凝块取出转移到组织匀浆器中研磨粉碎，再移入50ml 离心管B中，再加入5倍体积无菌水，颠倒混匀，冰上静置十分钟，用于试剂盒法提取DNA。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提DNA原理是一种常用的DNA提取方法，通过该
方法可以从复杂的生物样品中高效地提取纯度较高的DNA样本。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞破碎：首先将待提取的生物样品经过离心等操作，去除无关细胞和组织，然后使用细胞裂解缓冲液将目标细胞破碎，使细胞内部的DNA释放出来。
2. 蛋白酶处理：在细胞裂解的过程中，蛋白酶会释放出来，为了去除其对DNA的影响，可以加入蛋白酶抑制剂来保护DNA。
此步骤的目的是降解蛋白质，同时保持DNA的完整性。
3. 混合酚氯仿：将细胞裂解液与等体积的氯仿混合，产生两相体系。
氯仿主要用来分离DNA和其他细胞成分，如脂质、蛋
白质等。
在混合过程中，DNA溶于水相，而其他成分溶于有
机相。
这样，通过离心使两相分离。
DNA会聚集在水相中。
4. DNA沉淀：将水相转移到新的离心管中，加入冷酒精或异
丙醇，使DNA沉淀出来。
酒精或异丙醇中的离子会中和
DNA上的电荷，从而使DNA不溶于水，形成可见的白色沉淀。
5. 洗涤与溶解：将DNA沉淀用无菌蒸馏水洗涤去除酒精或异
丙醇的残余，并用TE缓冲液溶解DNA，使其得以储存和进
一步应用。
通过酚氯仿抽提DNA，可以将DNA从细胞中高效地提取出
来，纯度较高，适用于许多分子生物学实验和技术的应用，如PCR、酶切、测序等。
基因组提取 (酚氯仿法)
定位克隆实验室2010-12-27 胡文波修订酚氯仿提基因组-大量高纯度DNA的制备原理：酚、氯仿是蛋白质变性剂，能有效去除核蛋白，使核酸从核蛋白中分离出来。
氯仿还能加速有机相与液相的分层，少许异戊醇能稳定界面，减少蛋白质变性过程中产生气泡。
操作步骤：1.将材料放入预冷的研钵中，加入液氮后迅速研磨成粉末状（刚加入液氮时不停上下锤击材料，液氮快挥发完时用研棒旋转搅拌挤压材料使之破碎）。
2.研磨完毕后，加入800ul抽提缓冲液，轻轻摇匀，形成匀浆状。
3.将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入Proteinase K至终浓度为100ug/ml（800ul加4ul蛋白酶K（20ug/ul））,55℃水浴保温过夜。
4.加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min。
5.离心：12000rpm 4℃ 10min，将粘稠的水相移至洁净的离心管中。
6.再用酚:氯仿（v:v =1:1），氯仿各抽提1次（离心：12000rpm 4℃ 10min）。
7.将上层水相移至洁净的离心管中，加入2倍体积无水乙醇，转动离心管使溶液充分混合，DNA立即形成沉淀。
8.离心：7500g 4℃ 10min，使DNA沉于管底，将离心管倒置于滤纸上，晾干（或用玻璃棒/消毒牙签将DNA沉淀从乙醇沉淀中移出）。
9.用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次（离心：7500g 4℃ 10min）。
10.加入200ul TE(pH8.0)使DNA完全溶解。
11.加入RNase至终浓度为50ug/ml，37℃保温1h。
12.紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
13.调节DNA终浓度为1000ng/ul。
14.将DNA做梯度稀释：1×102 ，1×101 ，1×100 ，1×10-1 ，1×10-2ng/ul，稀释体积为100ul。
15.取2ul DNA与2ul 2×上样缓冲液混匀，点样到琼脂糖凝胶（w/v = 2%）中，以2.5-5v/cm电泳。
酚氯仿法提取dna注意事项 -回复
酚氯仿法提取dna注意事项-回复酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，适用于从多种生物样本中提取高质量的DNA，具有操作简便、成本低廉、提取效果好的优点。
然而，在进行酚氯仿法提取DNA时，有一些注意事项需要遵守，以确保提取到的DNA质量和纯度满足实验要求。
本文将一步一步回答有关这一主题的问题。
第一步：准备实验材料在进行酚氯仿法提取DNA之前，需要准备好以下实验材料:- 酚氯仿：用于沉淀DNA，可以购买现成的酚氯仿溶液。
- 氯仿：用于去除蛋白质等杂质。
- 去离子水：用于配制实验缓冲液和洗涤试剂。
- 各种缓冲液：例如Tris-HCl缓冲液、TE缓冲液等，用于维持溶液的pH 值、维持DNA的稳定性等。
- 乙醇、异丙醇：用于洗涤、沉淀DNA等步骤。
- 高速离心管、离心机：用于离心沉淀DNA。
- 热板：用于DNA溶解步骤中的加热。
- 显微镜：用于观察DNA的溶解情况。
第二步：取样从待提取DNA的生物样本中取样时，需要注意以下几点:- 样本应选择新鲜的、含有丰富DNA的组织或细胞。
- 取样时应尽量避免污染，使用无菌工具，避免有外源DNA的干扰。
第三步：细胞破碎将取得的样本放入离心管中，加入破碎液并充分混匀。
常用的细胞破碎液包括含有洗涤剂（例如SDS或Triton X-100）和蛋白酶K的缓冲液。
注意事项如下：- 破碎液应加入足够量，以确保细胞完全破裂。
- 破碎液的温度和pH值应适宜，通常为室温和中性pH值。
第四步：离心将混合后的细胞溶液进行离心，去除细胞碎片和细胞核。
注意事项如下：- 离心条件应根据细胞大小和沉淀速度进行调整，通常为1,200-2,000 rpm，5-10分钟。
- 应尽量避免将上清液中的沉淀物和底物混合。
第五步：提取DNA将上清液转移到新的离心管中，加入酚氯仿并混合。
注意事项如下：- 酚氯仿的添加量应为样本体积的1/5-1/10，用于沉淀DNA。
- 混合时应充分摇匀，以便酚氯仿与上清液充分接触。
苯酚 氯仿抽提的技术原理
苯酚氯仿抽提的技术原理
使用氯仿从苯酚溶液中抽提的技术原理可以概括为:
1. 苯酚与氯仿的相对溶解度
苯酚易溶于氯仿而难溶于水,氯仿与水基本不混溶。
2. 抽提过程
将苯酚的水溶液与氯仿混合,搅拌使苯酚转移至氯仿相中。
3. 两相分离
静置后上层为氯仿相,含有苯酚;下层为水相。
根据相对密度分离收集上氯仿相。
4. 回流提纯
可以通过多次氯仿回流提纯,进一步提高苯酚纯度。
5. 除水干燥
使用无水硫酸钠等干燥剂除去氯仿相中的残留水分。
6. 蒸馏浓缩
简单蒸馏可以回收氯仿;减压蒸馏可浓缩提纯苯酚。
7. 萃取机械提高效率
采用连续萃取设备,可以提高抽提效率。
8. 溶剂回收
通过蒸馏、萃取等方式回收氯仿溶剂,实现循环利用。
9. 过程参数控制
控制好溶液pH、温度、流量等参数,可以提高提取效果。
10. 环保处理
对废溶剂、废水等要进行处理,减少污染。
综上,该技术利用溶解度差异实现苯酚的溶剂萃取和提纯。
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酚氯仿抽提
一、DNA抽提
试剂：
1.酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）；
2.3M NaAc（pH 5.2）；
3.80%乙醇。
步骤：
1. 样品加去离子水至总体积100 μL；
2．加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），充分震荡后，10,000 rpm离心10 min；
3. 转移上清于新的离心管中，按体积的1/10加入3M NaAc（pH5.2），按体积的2倍加入100%乙醇，轻轻混匀后，-20 ︒C静至至少30 min沉淀DNA；
4. 4 ˚C，12,000 rpm离心10 min，弃去上清；
5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀，10,000 rpm离心2 min；
6. 弃去乙醇，风干后，加入适量去离子水或TE溶解质粒。
二、RNA抽提
试剂：
1.水饱和酚；
2.氯仿；
3.3M NaAc（pH 5.2，DEPC水配制）；
4.75%乙醇（DEPC水配制）。
步骤：
1. 加入DEPC水至总体积为100 μL；
2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1)，室温混匀；
3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min；转移上清至新的离心管中；
4. 加入等体积的氯仿，4 ︒C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清；
5. 加入上清体积1/10的3M NaAc（pH5.2, DEPC水配制）和2.5倍体积的100%
的乙醇，-80 ︒C沉淀过夜；
6. 4 ︒C离心，12, 000 rpm, 30 min；
7. 去上清，加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制)，洗涤沉淀；
8. 12, 000 rpm 离心5 min，去乙醇；风干，溶于适量DEPC水中，-20 ︒C保存。