细胞规程
细胞复苏标准操作规程
细胞复苏标准操作规程一、准备工作在进行细胞复苏之前，需要做好以下准备工作：1.准备细胞复苏所需器材和试剂，包括细胞培养瓶、细胞复苏试剂、培养基、离心管、移液管、离心机等。
2.清洗实验器材，消毒处理，确保无菌环境。
3.计算细胞复苏所需剂量和浓度，为后续操作做好准备。
二、细胞复苏前消毒在进行细胞复苏之前，需要对细胞培养基和器材进行消毒处理，以确保细胞生存环境的安全：1.将细胞培养基和器材放入高压锅中进行高温高压消毒。
2.清洗干净细胞培养瓶，确保无残留物。
3.加入适量细胞复苏试剂，以备后续使用。
三、细胞复苏细胞复苏是将冷冻保存的细胞进行复苏解冻的过程，具体操作如下：1.将细胞培养瓶放入37℃恒温水浴中，轻轻晃动培养瓶，使试剂与细胞充分接触。
2.放置于适宜温度下培养，一般需要培养至细胞融合完全。
四、细胞计数和存活率检测在细胞复苏后，需要对细胞进行计数和存活率检测，以了解细胞的生长状态和存活情况：1.收获培养好的细胞，用离心机进行离心分离。
2.计数细胞并检测存活率，可以使用血球计数板或流式细胞仪进行计数和存活率检测。
3.记录所得数据，包括细胞数量、存活率等。
五、细胞传代和扩增在细胞生长至融合完全后，可以进行细胞的传代和扩增，以获得更多的细胞数量：1.将部分细胞进行传代培养，加入适量细胞培养基，置入37℃恒温水浴中。
2.培养一段时间，至细胞融合完全。
3.继续进行细胞的传代和扩增，直至达到所需的细胞数量。
六、细胞质量检测在细胞传代和扩增过程中，需要对细胞的形态、结构和数量进行检测，以评估细胞的质量：1.观察细胞的形态和结构，包括细胞的形状、大小、边缘等特征。
2.对细胞的生长和繁殖情况进行观察和分析，包括细胞的分裂速度、生长曲线等。
3.通过检测细胞的各项指标，综合评估细胞的质量和适用性。
七、记录和整理在细胞复苏、传代和扩增过程中，需要对各项数据进行记录和整理，以便对细胞的生长状态和质量进行评估：1.对每一步操作进行详细记录，包括操作时间、操作人员、操作步骤等。
检验用细胞管理规程
分发部门：分析研究部拷贝号:NO。
/目录1 目的 (2)2 范围 (2)3 定义 (2)4 环境、健康和安全 (2)5 培训 (2)6 职责 (3)7 程序（内容） (3)7.1 检验用细胞的来源管理（细胞资料） (3)7.2 检验用细胞的验收 (3)7.3 检验用细胞库的建立 (3)7.4 检验用细胞的储存与管理 (4)7.5 检验细胞的销毁 (4)7.6 文件归档 (4)8 相关文件 (4)9 参考文献 (5)10 流程图 (5)11 附录 (5)细胞培养记录（细胞复苏记录） (6)细胞培养记录（细胞传代、接板记录） (1)细胞培养记录（细胞冻存记录） (2)细胞交接单 (1)细胞验收记录 (1)检验用细胞管理台账 (1)液氮高度记录 (1)细胞销毁记录 (1)1目的本规程规范分析研究部检验用细胞验收、制备、检定、储存、使用等过程的控制与管理，进而保证检验用细胞的规范使用与统一管理。
2范围本规程适用于分析研究部检验用细胞按《中国药典》2015年版对所用检验用细胞由产生到销毁的全过程.3定义3.1检验用细胞是指用于生物制品检定的细胞，包括原代细胞、连续传代细胞或二倍体细胞,以及经特定基因修饰过的细胞。
3.2细胞种子（Cell Seed）：由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体,通过检定证明适用于生物制品检定.在特定条件下,将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130℃ 以下冻存，即为细胞种子,供建立主细胞库用。
3.3主细胞库（Master Cell Bank，MCB）：取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后，在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃ 以下，经检定合格后，即可作为主细胞库，用于工作细胞库的制备。
3.4工作细胞库（Working Cell Bank，WCB）:工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。
细胞活化与复苏标准操作规程
细胞活化与复苏标准操作规程一、细胞复苏的原则－快速融化必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
二、具体操作1.实验前准备（1）将水浴锅预热至37℃。
（使用烧杯盛装37度水也可）（2）用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
（3）在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。
2.取出冻存管（1）根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
（2）从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
3.迅速解冻（1）迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
（2）约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
4.平衡离心（将冻存管中的液体倒入离心管中，加入4ml培养基，离心——除去DMSO）用托盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min离心3min。
5.制备细胞悬液（1）吸弃上清液。
（2）向离心管内加入10ml培养液，吹打制成细胞悬液。
6.细胞计数细胞浓度以5×105/ml为宜。
7. 培养培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入的培养箱内2-4小时（或者24-48小时）后换液继续培养培养，37℃和5％CO2换液的时间由细胞情况而定。
易犯错误：1. 水浴锅未预热或者未预热到37℃。
2. 水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。
3. 离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。
4. 一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。
注意事项：对大多数细胞而言，1%以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。
唯对极少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5～10ml培养基中，离心300g(约1000rpm)，5分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，培养箱培养。
细胞培养传代及冻存操作规程
细胞培养传代及冻存操作规程细胞培养、传代及冻存操作规程⼀、细胞的复苏1、实验器材及试剂保温杯、温度计、镊⼦、温⽔（39℃）、培养板(根据需要选择相应孔数的培养板如6孔板，12孔板，24孔板等)、培养基DMEM+10%⾎清、双抗、1.5ml 离⼼管。
2、操作步骤①取相应体积的培养基放⼊到培养板中并加⼊双抗，放⼊CO2培养箱中预热，然后取适量的冷⽔加⼊到保温杯中，把温度计置于保温杯中，边加开⽔边⽤温度计搅拌，时刻关注温度计的度数直到温度升⾄39℃为⽌（为防⽌在移动过程中温度降低可把温度调⾼1——2℃。
②⽤镊⼦将所需要的细胞从液氮中取出，迅速放⼊提前准备好的温⽔中并不停的搅拌使其迅速解冻，细胞解冻好之后⽤移液枪把冻存管中的细胞连同冻存液⼀起吸出放到1.5ml离⼼管中，5000rpm/min 离⼼2min，尽量的除掉上清，然后在加⼊500µl培养基反复吹打待混合均匀后放⼊到事先准备好的培养板中并注明名称、⽇期及操作⼈。
⼆、细胞的传代培养1、操作步骤①准备好培养板加⼊相应体积的培养基之后放⼊培养箱中预热，添加培养基的⽅法如下表②将长满的细胞取出，吸除培养基，⽤DPBS清洗两遍，在加⼊相应体积的0.25％胰蛋⽩酶，使板底细胞都浸⼊溶液中，然后将培养板置于培养箱中 6 分钟后取出，在显微镜下观察消化情况。
添加胰蛋⽩酶的体积如下表所⽰③消化时间完成后应⽴即终⽌消化，⼀是直接加⼊培养基，⼆是吸除胰蛋⽩酶之后在加培养基，加⼊培养基以后反复吹打在此期间通过显微镜观察培养板中的细胞是否成为单细胞悬液，如果为单细胞悬液则停⽌吹打，将此单细胞悬液平均分配到已经预热好的培养板中，摇动混匀后放⼊培养箱24⼩时后换液。
2、注意事项在细胞传代培养中要时刻注意细胞的⽣长状态，以便于下⼀步实验的顺利进⾏。
其中有两点很重要，第⼀消化的时间，消化的时间并不是⼀成不变的，要根据细胞的状态随时终⽌消化，上⾯②中所诉的6分钟只是较为理想的时间；第⼆吹打的⼒度跟全⾯性，吹打的⼒度⼀定要适中，不能太⽤⼒避免将细胞打碎，另外每个培养板都是有边⾓的，那⾥会有很多细胞残留，需要提醒的是⼀定要在显微镜下观察细胞是否全部离开培养板底，如有残留可⽤枪头将其刮下在吹打。
细胞无菌检查标准操作规程
细胞无菌检查标准操作规程标准操作规程：细胞无菌检查1. 引言细胞无菌检查是实验室进行细胞培养和实验的关键步骤。
细胞环境的无菌性是保证实验结果准确性和细胞生长的重要因素。
本标准操作规程旨在规范细胞无菌检查的操作，以确保实验结果的可靠性。
2. 器材准备2.1 离心机：用于离心培养物，以分离细胞和培养液。
2.2 高温消毒器：用于消毒培养器具和试剂。
2.3 紫外线灯：用于消毒培养箱和操作台面。
2.4 细胞培养箱：用于细胞培养的环境，保持恒定的温度和湿度。
2.5 无菌离心管和移液器：用于处理无菌液体和细胞移植。
2.6 片玻片和培养皿：用于制备细胞标本。
2.7 无菌培养物：用于细胞培养和细胞无菌检查。
2.8 无菌培养基：用于培养细胞。
2.9 无菌生理盐水：用于洗涤细胞。
3. 操作步骤3.1 消毒操作台面和培养箱：使用紫外线灯对操作台面和培养箱进行紫外线照射消毒，确保无菌环境。
3.2 滴漏法消毒培养器具和试剂：将培养器具和试剂放入高温消毒器中，设置合适的温度和时间进行高温消毒。
3.3 细胞无菌接种：将需要无菌检查的细胞接种到无菌培养基中，按照实验要求进行培养，保持适宜的温度和湿度。
3.4 细胞收获和处理：在培养达到一定密度后，使用离心机将培养物离心，收集上清液。
将上清液转移至无菌离心管中，并进行离心，去除细胞沉淀。
3.5 细胞标本制备：将细胞沉淀转移至无菌离心管中，加入适量的无菌生理盐水悬浮细胞，然后将悬浮细胞制备成片玻片或涂布于无菌培养皿上。
3.6 烘干和固定：将制备好的片玻片或培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和湿度进行烘干固定，使细胞附着于玻片或培养皿上。
3.7 染色和观察：使用适当的染色方法对细胞进行染色，并通过显微镜观察细胞状态和无菌性。
3.8 结果判断：根据染色结果和观察到的细胞状态判断细胞是否具有无菌性。
4. 注意事项4.1 操作时需佩戴无菌手套，避免污染试剂和培养器具。
4.2 使用无菌移液器和管道处理液体，避免交叉污染。
检验用细胞管理规程
颁发部门：质量保证部分发部门：分析研究部拷贝号：NO. /目录1 目的 (4)本规程规范分析研究部检验用细胞验收、制备、检定、储存、使用等过程的控制与管理，进而保证检验用细胞的规范使用与统一管理。
(4)2 范围 (4)3 定义 (4)4 环境、健康和安全 (4)5 培训 (4)6 职责 (5)7 程序（内容） (5)7.1 检验用细胞的来源管理（细胞资料） (5)7.2 检验用细胞的验收 (5)7.3 检验用细胞库的建立 (5)7.4 检验用细胞的储存与管理 (6)7.5 检验细胞的销毁 (6)7.6 文件归档 (6)8 相关文件 (6)9 参考文献 (6)10 流程图 (7)11 附录 (7)细胞培养记录（细胞复苏记录） (8)细胞培养记录（细胞传代、接板记录） (1)细胞培养记录（细胞冻存记录） (1)细胞交接单 (1)细胞验收记录 (1)检验用细胞管理台账 (1)液氮高度记录 (1)细胞销毁记录 (1)本规程规范分析研究部检验用细胞验收、制备、检定、储存、使用等过程的控制与管理，进而保证检验用细胞的规范使用与统一管理。
2 范围本规程适用于分析研究部检验用细胞按《中国药典》2015年版对所用检验用细胞由产生到销毁的全过程。
3 定义3.1 检验用细胞是指用于生物制品检定的细胞，包括原代细胞、连续传代细胞或二倍体细胞，以及经特定基因修饰过的细胞。
3.2 细胞种子（Cell Seed）：由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品检定。
在特定条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130℃以下冻存，即为细胞种子，供建立主细胞库用。
3.3 主细胞库（Master Cell Bank，MCB）：取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后，在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下，经检定合格后，即可作为主细胞库，用于工作细胞库的制备。
细胞培养室操作规程
细胞培养室操作规程1. 引言在细胞培养室进行实验时，需要遵循一定的操作规程，以确保实验的顺利进行并保护实验人员和细胞的安全。
本文档旨在提供详细的细胞培养室操作规程。
2. 实验前准备在进行细胞培养室实验前，需要做好以下准备工作：- 穿戴实验室制定的个人防护装备，如实验服、手套、口罩和护目镜。
- 检查实验室设备和操作台的清洁度，并确保工作区域整洁无杂物。
- 准备实验所需的培养基、细胞培养物和实验器材，并进行必要的消毒处理。
- 检查培养器具和实验器材的完整性和干净程度。
3. 实验操作在进行细胞培养室实验时，需按照以下操作规程进行：- 打开细胞培养室的门时，先用消毒剂擦拭手部，然后使用洗手液洗手并彻底冲洗干净。
- 进入细胞培养室后，先进行操作台和培养器具的消毒处理，使用消毒剂彻底擦拭工作面和器具表面。
- 进行各项实验操作前，务必佩戴好手套，勿将裸露的手部接触培养物或实验器材。
- 操作过程中，避免发生剧烈动作和摇动，以防止细胞培养物的污染。
- 操作完成后，彻底清洁和消毒操作台、培养器具和实验器材，确保无残留。
4. 废弃物处理细胞培养室中产生的废弃物需按照以下要求进行处理：- 生物废弃物和污染物应放入专用的标有生物危险标志的中，严禁随意丢弃。
- 已消毒处理的实验器皿和培养器具应单独收集，放入装有消毒液的中浸泡，待处理完毕后进行干燥和垃圾分类处理。
5. 安全措施在细胞培养室实验中，请注意以下安全措施：- 不得在实验室内饮食、吸烟或使用化妆品。
- 注意保持良好的个人卫生，经常洗手、勤换手套，避免感染的交叉传播。
- 遇到实验室事故或异常情况时，应立即向负责人报告，并按照相关应急预案进行处理。
6. 总结细胞培养室操作规程的遵守对于实验的成功和细胞的安全至关重要。
在进行实验前准备、实验操作、废弃物处理和安全措施等方面都需要严格按照规程执行。
保持实验室整洁和个人卫生，是保证实验可靠性和重复性的基础。
细胞检测操作规程
细胞检测操作规程细胞检测是生物学研究中常用的实验方法之一，用于研究细胞的结构、功能、代谢和变化等方面。
细胞检测操作规程是保证实验准确性和安全性的重要措施。
下面是一份细胞检测操作规程的示例，供参考。
一、实验前准备1. 设计实验方案，明确实验目的和步骤。
2. 准备所需的实验材料和试剂，确保材料的质量和完整性。
3. 检查实验设备的工作状态，如显微镜、培养箱、离心机等。
4. 打开实验室通风设备，确保实验环境的清洁和无菌。
二、细胞培养和预处理1. 处理培养皿，洗涤并消毒培养皿，然后在灭菌条件下将细胞培养基加入培养皿中。
2. 解冻细胞，将细胞培养液从液氮罐中快速取出，加入培养皿中的预热培养基中，将培养皿置于培养箱中。
3. 培养和传代细胞，根据所需的实验时间和目的，在培养箱中保持细胞的生长。
4. 细胞处理，如需处理或干扰细胞，根据实验设计添加相应处理剂。
三、细胞样品采集和制备1. 采集细胞样品，使用无菌操作和工具，将需要的细胞收集到离心管或样品瓶中。
2. 细胞计数，使用细胞计数器或显微镜，并按照所需的细胞数目调整细胞浓度。
3. 细胞离心，将细胞样品置于离心机中，以适当的速度和时间离心，从而分离细胞。
4. 细胞固定和染色，选择适当的细胞固定和染色方法，对细胞样品进行处理。
四、显微镜观察和图像分析1. 准备显微镜镜片，清洁镜片并用无尘纸擦拭干净。
2. 将处理好的细胞样品滴在镜片上，用盖玻片覆盖，避免气泡产生。
3. 在显微镜上安装镜片，调整放大倍数和合适的焦距，观察细胞样品。
4. 记录和分析细胞显微图像，使用适当的图像处理软件进行定量分析或结果展示。
五、实验后处理1. 清洁工作区，清理实验台和仪器设备，消毒处理使用过的材料和试剂。
2. 妥善保存数据和样品，记录实验过程和结果，备份数据文件。
3. 分析和解读实验结果，编写实验报告并进行交流和讨论。
4. 总结经验和改进方案，总结实验中的不足和问题，并提出改进意见。
以上是一份对细胞检测操作规程的简要描述，具体实验要根据具体的项目和要求进行调整。
细胞周期标准操作规程
细胞周期标准操作规程细胞周期是细胞从分裂到完成再次分裂的一个周期，在细胞生物学研究中是一个重要的研究对象。
为了能够准确地研究和观察细胞周期，科研人员需要遵循一系列的操作规程。
下面是细胞周期标准操作规程的详细说明：一、准备实验材料：1. 细胞培养基和试剂：选择适合细胞生长和分裂的培养基，如DMEM或RPMI 1640培养基，并根据需要添加相应的补充物和试剂，如FBS、L-谷氨酰胺、激素等。
2. 细胞株：选择适合的细胞株，如HeLa、CHO或HEK293等。
3. 细胞培养器具：包括细胞培养瓶、离心管、培养皿、显微镜片等。
4. 实验仪器：包括培养箱、离心机、显微镜等仪器。
二、细胞培养与维护：1. 细胞培养器官消毒：使用70%酒精将培养器官表面进行消毒处理，以确保无菌环境。
2. 细胞传代：将细胞转入新的培养瓶中，根据细胞倍增情况调整细胞密度，通常在细胞密度达到80%时进行传代。
3. 培养液更换：根据实验需要，定期更换培养液，以维持细胞的生长和稳定环境。
三、样品制备：1. 细胞准备：根据实验需要，将需要观察的细胞转入适当的培养器皿中，保证细胞的充分生长和附着。
2. 细胞处理：根据实验设计，添加适当的药物或诱导剂对细胞进行处理，如添加细胞周期调控剂。
3. 细胞采集：根据需要，使用离心机将细胞离心沉淀，然后去除上清液，最后将细胞沉淀用适量的缓冲液悬浮备用。
四、细胞周期监测：1. 细胞周期检测：根据实验需要，选择适当的方法和试剂对细胞周期进行监测，如细胞染色、流式细胞术、蛋白质检测等。
2. 数据采集：使用相应的仪器和软件进行数据采集和分析，记录细胞周期的相关参数，如G1期的长度、S期的进程等。
五、数据分析与结果解释：1. 数据处理：对采集的数据进行统计分析，如计算平均值、标准差等，确保数据的可靠性和准确性。
2. 结果解释：根据数据分析结果，对细胞周期的变化和相关现象进行解释和讨论，以得出科学结论，如细胞周期的调控机制、细胞周期异常与疾病的关系等。
流式细胞术操作规程
流式细胞术操作规程流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，它可以用来检测和分析细胞表面标记物、细胞数量、细胞分布等信息。
以下是一份流式细胞术操作规程，详细介绍了该技术的操作步骤和注意事项。
一、实验前准备1. 准备所需的实验材料，包括流式细胞仪、标记抗体、孵育培养基、样本组织、显微镜片等。
2. 检查流式细胞仪的功能是否正常，确认仪器能够正常运行。
3. 清洁实验台面，确保操作环境干净整洁。
4. 准备所需的试剂和溶液，如PBS缓冲液、抗体染色溶液等。
二、样本处理1. 准备样本组织，将其转移到离心管中，并添加适量的孵育培养基使其完全浸泡。
2. 使用离心机将样本离心，去除上清液。
3. 重悬样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
4. 重复洗涤过程，直到样本完全洗净。
三、标记抗体染色1. 取出经过洗涤的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的标记抗体溶液。
2. 在黑暗条件下孵育样本，使其与标记抗体充分结合。
3. 静置反应15-30分钟，确保充分染色。
4. 在光线和温度适宜的条件下冰冻样本，避免抗体的结合。
5. 根据实验需求，可以选择单标记或多标记抗体。
四、样本准备1. 取出经过标记抗体染色的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
2. 将样本离心并去除上清液。
3. 重悬样本，并根据实验需要加入适量的PBS缓冲液进行稀释。
4. 检查样本的细胞数目和活性是否符合实验要求，如有必要，可以使用显微镜进行观察和计数。
五、流式分析1. 打开流式细胞仪，并确认仪器的设置和参数是否符合实验要求。
2. 调整仪器的流速和灵敏度，使其适应样本的特性。
3. 将样本转移至流式细胞仪的样本管中。
4. 开始流式细胞分析，记录并保存实验数据。
5. 根据实验需要，可以进行不同的数据分析和处理，包括细胞分布、细胞数量、表面标记物的表达等。
六、实验后处理1. 关闭仪器，清洁工作台和操作区域。
2. 处理和储存实验数据，可以使用相应的图像科学软件进行数据处理和结果分析。
细胞培养标准操作规程
细胞培养标准操作规程
一、适用范围
适用于实验室从事细胞培养的实验技术人员和研究生。
二、操作规程
1、所需试剂细胞培养液、血清、胰酶、PBS或Hank`s液
2、规程：
2.1 细胞株的培养
2.1.1 获取所需细胞株（一般细胞株的运送是把细胞放在培养瓶中，干冰保存运输的）
2.1.2 得到所需细胞株后弃掉多余的培养液，放到5%的CO2培养箱中培养
2.1.3 每天至少观察一次，待细胞长满整个培养瓶的80%时传代
2.1.4 倒掉培养液，用1mlPBS 漂洗细胞一次，加入500ul胰酶消化，消化时间视细胞种类、胰酶浓度和消化温度而定，一般3-5min
2.1.5 终止消化，向上一步消化液中加入含10%血清的培养液，一般5ml
2.1.6 吹打，用吸管轻轻吹打至细胞全部脱落，注意尽量减少气泡产生
2.1.7 细胞计数，取少量液体于细胞计数板上，确定接种密度
2.1.8 将细胞接种到另外的培养瓶中
2.1.9 换液，根据细胞生长情况，间隔一定时间半量换液。
2.2 原代细胞培养
2.2.1 原代细胞的获取无菌条件下取动物组织剪碎
2.2.2 向剪碎的动物组织加入适宜浓度的胰酶，消化，时间因细胞种类和胰酶浓度而定
2.2.3 终止消化，向上一步消化叶重加入含10%血清的培养液，一般5ml
2.2.4 吹打将终止消化后的组织转入一培养皿中，加入一定量的培养液轻轻吹打数次，静置5-10分钟
2.2.5 细胞计数，取少量液体于细胞计数板上，确定接种密度
2.2.6 将细胞接种到培养瓶或培养板中，放入5%的CO2培养箱中培养。
检验用细胞管理规程
颁发部门：质量保证部分发部门：分析研究部拷贝号：NO. /目录1 目的 (4)2 范围 (4)3 定义 (4)4 环境、健康和安全 (4)5 培训 (4)6 职责 (5)7 程序（内容） (5)7.1 检验用细胞的来源管理（细胞资料） (5)7.2 检验用细胞的验收 (5)7.3 检验用细胞库的建立 (5)7.4 检验用细胞的储存与管理 (6)7.5 检验细胞的销毁 (6)7.6 文件归档 (6)8 相关文件 (6)9 参考文献 (6)10 流程图 (7)11 附录 (7)细胞培养记录（细胞复苏记录） (8)细胞培养记录（细胞传代、接板记录） (1)细胞培养记录（细胞冻存记录） (1)细胞交接单 (1)细胞验收记录 (1)检验用细胞管理台账 (1)液氮高度记录 (1)细胞销毁记录 (1)本规程规范分析研究部检验用细胞验收、制备、检定、储存、使用等过程的控制与管理，进而保证检验用细胞的规范使用与统一管理。
2 范围本规程适用于分析研究部检验用细胞按《中国药典》2015年版对所用检验用细胞由产生到销毁的全过程。
3 定义3.1 检验用细胞是指用于生物制品检定的细胞，包括原代细胞、连续传代细胞或二倍体细胞，以及经特定基因修饰过的细胞。
3.2 细胞种子（Cell Seed）：由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品检定。
在特定条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130℃以下冻存，即为细胞种子，供建立主细胞库用。
3.3 主细胞库（Master Cell Bank，MCB）：取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后，在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下，经检定合格后，即可作为主细胞库，用于工作细胞库的制备。
细胞计数试验的标准操作规程
细胞计数试验的标准操作规程（编号：029）
1、目的及适用范围
该SOP用来规范细胞计数的实验操作。
2、主要仪器
计数板（0.1mm×1/400mm2）、盖玻片、低倍倒置显微镜
3、操作步骤
3.1 将计数板及盖玻片擦拭干净，并将盖玻片盖在计数板上。
3.2 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖玻片边缘，使悬液充满盖玻片和计数板之间，静置3min，注意盖玻片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3.3 数出计数室的四角的四个中方格的细胞总数，再除4，最后乘以2.5×104，即为每mL细胞悬浮液之细胞数。
若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。
4、问题向导
4.1细胞数/mL=4中格细胞总数/4×2.5×104
4.2计数板计数时，最适浓度为5～10×105细胞/mL，此范围外计数误差偏大。
高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。
镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按当个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
58。
细胞培养传代及冻存操作规程
细胞培养、传代及冻存操作规程一、细胞的复苏1、实验器材及试剂保温杯、温度计、镊子、温水（39℃）、培养板(根据需要选择相应孔数的培养板如6孔板，12孔板，24孔板等)、培养基DMEM+10%血清、双抗、1.5ml 离心管。
2、操作步骤①取相应体积的培养基放入到培养板中并加入双抗，放入CO2培养箱中预热，然后取适量的冷水加入到保温杯中，把温度计置于保温杯中，边加开水边用温度计搅拌，时刻关注温度计的度数直到温度升至39℃为止（为防止在移动过程中温度降低可把温度调高1——2℃。
②用镊子将所需要的细胞从液氮中取出，迅速放入提前准备好的温水中并不停的搅拌使其迅速解冻，细胞解冻好之后用移液枪把冻存管中的细胞连同冻存液一起吸出放到1.5ml离心管中，5000rpm/min 离心2min，尽量的除掉上清，然后在加入500μl培养基反复吹打待混合均匀后放入到事先准备好的培养板中并注明名称、日期及操作人。
二、细胞的传代培养1、操作步骤①准备好培养板加入相应体积的培养基之后放入培养箱中预热，添加培养基的方法如下表②将长满的细胞取出，吸除培养基，用DPBS清洗两遍，在加入相应体积的0.25％胰蛋白酶，使板底细胞都浸入溶液中，然后将培养板置于培养箱中 6 分钟后取出，在显微镜下观察消化情况。
添加胰蛋白酶的体积如下表所示③消化时间完成后应立即终止消化，一是直接加入培养基，二是吸除胰蛋白酶之后在加培养基，加入培养基以后反复吹打在此期间通过显微镜观察培养板中的细胞是否成为单细胞悬液，如果为单细胞悬液则停止吹打，将此单细胞悬液平均分配到已经预热好的培养板中，摇动混匀后放入培养箱24小时后换液。
2、注意事项在细胞传代培养中要时刻注意细胞的生长状态，以便于下一步实验的顺利进行。
其中有两点很重要，第一消化的时间，消化的时间并不是一成不变的，要根据细胞的状态随时终止消化，上面②中所诉的6分钟只是较为理想的时间；第二吹打的力度跟全面性，吹打的力度一定要适中，不能太用力避免将细胞打碎，另外每个培养板都是有边角的，那里会有很多细胞残留，需要提醒的是一定要在显微镜下观察细胞是否全部离开培养板底，如有残留可用枪头将其刮下在吹打。
细胞培养中细胞计数标准操作规程
细胞培养中细胞计数标准操作规程一、目的：建立用于细胞培养过程的计数操作规范，以确保标准细胞在传代扩增前达到所需数量。
二、范围：细胞传代扩增前三、仪器：超净工作台、倒置显微镜四、试剂及耗材DMEM高糖完全培养基（DMEM基础培养基+10%胎牛血清+1%双抗，用于贴壁细胞培养）、1640完全培养基（1640基础培养基+10%胎牛血清+1%双抗，用于悬浮细胞培养）、0.25%胰酶、PBS缓冲液、75%乙醇、血细胞计数板、15mL离心管、1.5mL离心管、离心机、移液枪、吹风机等。
五、操作规程1.超净台紫外照射灭菌半小时，DMEM高糖完全培养基、1640完全培养基、PBS 溶液在37℃水浴锅中预热，0.25%胰酶平衡至室温。
2.从培养箱中取出培养至细胞丰度达80%以上的贴壁细胞的培养皿（10 cm2），用75%的乙醇喷洒后拿进超净台，用滴管移去培养皿中的培养液，用2mL的PBS 溶液清洗细胞一遍，弃去，以洗掉残存的培养液。
3.用移液枪吸取2 mL 0.25%胰酶至培养皿中，轻轻摇晃使胰酶覆盖整个平皿，在显微镜下消化3-5 min，观察培养皿中的细胞直至细胞变圆，从培养皿脱落。
4.向培养皿中加入2 mL的DMEM高糖完全培养基，终止胰酶消化，用吸管吹打细胞至细胞成单分散状态。
将细胞悬液转移至15 mL离心管中，900 rpm离心3 min，小心弃去全部上清液。
（若为悬浮细胞，上述步骤可省略。
用吸管轻轻吹打培养液后全部转移入15mL离心管中，900 rpm离心4 min弃去上清即可。
）5.加入2mL PBS溶液将细胞沉淀吹打均匀。
6.取100µL细胞悬液至1.5mL离心管中，若为悬浮细胞，加入900µLPBS溶液稀释10倍；若为贴壁细胞，加入400µLPBS溶液稀释5倍。
7.将计数板及盖片用酒精浸泡洗净，用吹风机吹干，并将盖片盖在计数板上。
8.吸取10µL稀释后的细胞悬液滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
液氮罐取存细胞操作规程
液氮罐取存细胞操作规程液氮罐取存细胞的操作规程是实验室中非常关键的一部分，它直接关系到细胞的保存质量和实验结果的准确性。
以下是详细的取存细胞操作规程:一. 液氮罐存细胞操作规程1.细胞准备:●选择成功培养的.健康的细胞株，确保细胞状态良好。
●配制适当的冻存液，通常包含基础培养基.血清和冷冻保护剂(如DMSO)。
2.细胞消化与重县:●使用胰酶或其他适当的消化酶对细胞进行消化。
去除培养基,并用PBS冲洗。
●消化完全后，用完全培养液悬浮细胞，并将预冷的冻存液加入细胞中，轻轻吹打混匀。
3.分装与标记:●在每支冻存管中加入适量的细胞悬液(如1ml) , 密封后标记清楚冻存细胞的名称、代数、冻存日期等信息。
●使用专门的标签或记号笔进行标记，以方便后期追踪。
4.冻存管转移:●将装有细胞的冻存管放入预先准备好的冻存盒中，然后固定在配套冻存架上。
●将冻存架转移到液氮罐中，或者直接用棉线+纱布袋缠裹冻存管投入液氮容器中，确保细胞的稳定性与安全性。
5.液氮罐维护:●定期检查液氮余量，确保液氮量充足，一般应在液氮剩余量为总容量的三分之一时及时补充。
●检查液氨罐的密封性和安全性，确保无泄漏和损坏。
●遵循液氮罐的使用说明和安全规范。
确保操作安全。
二、液氮罐取细胞操作规程1.个人防护:，●穿戴好防护服、手衰、护目镜等个人防护装备，防止液氮直接接触皮肤或眼睛。
2.打开液氮罐:●轻轻打开液氮罐的盖子,注意避免液氮溅出。
●拿出颈塞，以垂直方向快速取出冻存架或冻存盒。
3.取细胞:●根据需要取出相应的细胞冻存管，注意保持手部稳定，避免液氨溅出。
●将取出的细胞冻存管迅速放入-80°C冰箱或放倒在吸水纸上，使渗入液氮缓慢挥发或流出，避免爆管。
4.关闭液氮罐:●将其他细胞放回液氮罐中，确保冻存架或冻存盒固定好。
●盖上颈塞和盖子，确保液氮罐密封良好。
5.细胞复苏●将取出的细胞冻存管按照细胞复苏的标准流程进行复苏操作，包括快速融化、离心、重悬等步骤。
细胞采集和储存的制度、标准和规程。
细胞采集和储存的制度、标准和规程。
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细胞细胞安全操作及保养规程
细胞细胞安全操作及保养规程简介细胞是生命体系中的基本单位，细胞的生长和复制是维持生命活动的基础。
因此，在实验室中对细胞进行研究和培养是非常重要的。
但是，细胞操作也存在很多安全风险，如果操作不当可能会对实验室的安全和研究结果产生不利影响。
本文旨在提供细胞细胞安全操作及保养规程，帮助实验室进行安全操作，保证实验室安全和细胞研究质量。
实验前准备在进行细胞操作之前，需要进行充分的准备工作，包括：1. 实验室清洁细胞研究需要一个干净、无菌的环境，因此在进行细胞操作前，需要清洁工作台和工具，以及保持实验室的干净整洁。
2. 工具准备细胞操作需要一些必要的工具，如移液器、组织培养皿、离心管、冰桶等，这些工具需要提前准备好，并进行消毒处理。
3. 试剂准备在进行细胞培养和操作时，需要使用多种试剂，如培养基、酶、抗生素等。
这些试剂需要提前准备好，并按照规定的用量和方法进行配置。
细胞操作注意事项在进行细胞操作时，需要注意以下事项：1. 消毒操作为了保证实验室的无菌，细胞操作需要进行严格的消毒处理。
包括：洗手消毒、试剂和工具消毒、工作台消毒、实验室定期消毒等。
2. 操作技巧细胞操作需要非常纯熟的操作技巧，避免对细胞的伤害和污染。
比如，在进行细胞移植或传代时，需要非常轻柔，避免产生气泡和机械刺激。
3. 细胞数量和密度细胞数量和密度对细胞培养和实验的结果影响很大。
因此，在进行细胞培养和操作时，需要控制细胞数量和密度，以保证实验的有效性和准确性。
4. 细胞被污染风险细胞被污染可能会导致实验结果产生误差，并影响实验的有效性。
因此，在进行细胞操作时需要注意细胞的污染来源，严格控制试剂、工具、环境等可能污染细胞的因素。
细胞保养规程实验室中的细胞需要定期进行保养，保证其正常生长和繁殖。
以下是细胞保养规程的具体内容：1. 细胞分离和传代细胞需要定期进行分离和传代，以保证细胞的生长状态和数量。
在进行分离和传代时，需要注意操作技巧，避免对细胞的伤害和污染。
细胞规程
生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程本规程适用于人用生物制品生产用动物细胞基质及检定用动物细胞，包括具有细胞库体系的细胞及原代细胞。
细胞基质系指可用于生物制品生产的所有动物或人源的连续传代细胞系、二倍体细胞株及原代细胞。
生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。
生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。
生产杂交瘤制品的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。
一、对生产用细胞基质总的要求用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定，须具有如下相应资料，并经国务院药品监督管理部门批准。
（一）细胞系/株历史资料1. 细胞系/株来源资料应具有细胞系/株来源的相关资料，如细胞系/株制备机构的名称，细胞系/株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。
这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。
人源细胞系/株须具有细胞系/株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及健康状况及病原体检测结果的相关资料。
动物来源的细胞系/株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、供体的一般健康状况及病原体检测结果的相关资料。
如采用已建株的细胞系/株，应具有细胞来源的证明资料。
应从能够提供初始细胞历史及其溯源性书面证明材料的机构获得，且应提供该细胞在该机构的详细传代记录，包括培养过程中所使用的所有原材料的详细信息，如种类、来源、批号、生产日期及有效期、制备或使用方法、质量标准及检测结果等。
2．细胞系/株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系/株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，外源插入序列，筛选细胞所进行的任何遗传操作或筛选方法、在动物体内传代过程以及细胞生长特征、培养液成分等。
同时还应具有细胞鉴别、内源及外源因子检查结果的相关资料。
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生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程本规程适用于人用生物制品生产用动物细胞基质及检定用动物细胞，包括具有细胞库体系的细胞及原代细胞。
细胞基质系指可用于生物制品生产的所有动物或人源的连续传代细胞系、二倍体细胞株及原代细胞。
生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。
生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。
生产杂交瘤制品的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。
一、对生产用细胞基质总的要求用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定，须具有如下相应资料，并经国务院药品监督管理部门批准。
（一）细胞系/株历史资料1. 细胞系/株来源资料应具有细胞系/株来源的相关资料，如细胞系/株制备机构的名称，细胞系/株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。
这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。
人源细胞系/株须具有细胞系/株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及健康状况及病原体检测结果的相关资料。
动物来源的细胞系/株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、供体的一般健康状况及病原体检测结果的相关资料。
如采用已建株的细胞系/株，应具有细胞来源的证明资料。
应从能够提供初始细胞历史及其溯源性书面证明材料的机构获得，且应提供该细胞在该机构的详细传代记录，包括培养过程中所使用的所有原材料的详细信息，如种类、来源、批号、生产日期及有效期、制备或使用方法、质量标准及检测结果等。
2．细胞系/株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系/株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，外源插入序列，筛选细胞所进行的任何遗传操作或筛选方法、在动物体内传代过程以及细胞生长特征、培养液成分等。
同时还应具有细胞鉴别、内源及外源因子检查结果的相关资料。
应提供细胞传代历史过程中所用的细胞培养液的详细成分并应具有朔源性。
如使用人或动物源性成分，如血清、胰蛋白酶、乳蛋白水解物或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、批号、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的相关资料。
（二）细胞培养操作要求细胞取材、建库及制备全过程应具有可溯源性及操作的一致性、并对各个环节的风险进行充分的评估。
1．细胞来源供体所有类型细胞的供体应无传染性疾病或未知病原的疾病。
神经系统来源的细胞不得用于疫苗生产。
2．原材料的选择与细胞培养相关的所有材料，特别是人源或动物源性材料，应按照本版药典的相关要求进行风险评估，选择与生产相适应的原材料，必要时进行检测。
所有生物源性材料均应无细菌、真菌、分枝杆菌、支原体及病毒等外源因子污染。
细胞培养过程中所用的牛血清及胰酶应符合本版药典的相关要求。
细胞培养液中不得含有人血清。
如果使用人血白蛋白，应使用获得国家药品管理当局批准的人用药品。
用于生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素。
配制各种溶液的化学药品应符合《中国药典》（二部）或其他相关国家标准的要求。
3．细胞培养体系：应控制对细胞生长有重大影响的关键的已知可变因素，包括规定细胞培养液及其添加成分的化学组成及纯度，记录所有制备的培养用试剂并通过检定放行，规定细胞培养的理化参数（如pH、温度、湿度、气体组成等））的变化范围并进行监测，以保证细胞培养条件的稳定性。
4．细胞收获及传代应结合生产工艺的特性，尽可能减少对细胞的操作。
细胞收获及传代应采用可重复的方式,以保证收获时细胞的汇合率、孵育时间、温度、离心速度、离心时间以及传代后活细胞接种密度具有一致性。
传代细胞的体外细胞龄可采用细胞群体倍增水平或传代水平计算。
二倍体细胞的细胞龄通常以群体倍增水平计算，也可以每个培养容器细胞群体细胞数为基础，每增加一倍作为一世代粗略估算，即一瓶细胞传二瓶(1:2分种率)，再长满瓶为一世代；一瓶传四瓶(1:4)为二世代；一瓶传八瓶(1:8)则为三世代。
生产用细胞龄限制在细胞寿命期限的前2/3内。
连续传代细胞系的细胞龄可以群体倍增水平计算，也可以按照固定的传代比率进行传代，每传一次视为一代。
5．细胞系建立如对细胞进行了对其特性有重要影响的操作，如具有了成瘤性，进行了细胞克隆及遗传修饰等，这种细胞则应被视为一个新（或不同的）细胞系，应在原细胞名称后增加后缀或编号重新命名，并重新建立主细胞库。
在细胞克隆过程中，应选择单个细胞用于扩增，详细记录克隆过程，并根据整合的重组DNA的稳定性、细胞基因组及表型的稳定性、生长速率、目的产物表达水平和完整性及稳定性，筛选具有分泌目的蛋白最佳特性的候选克隆,可用于建立细胞种子。
6．细胞冻存细胞应在大多数细胞处于对数生长期时进行冻存。
应采用符合细胞培养物的最佳冻存方法；在每一次冻存时均应采用相同的降温过程，并记录每一次的冻存过程。
每一个细胞库冻存时，应将同一次扩增的处于相同倍增水平的细胞培养物合并，并在分装前混合均匀。
每支冻存管中的细胞数应足以保证细胞复苏后可获得有代表性的培养物。
对于一个新的细胞库，除早代培养物在组织采集时或重组细胞筛选可能需要使用抗菌素外，细胞建库培养时不应使用抗菌素。
7．人员生产人员应定期检查身体，已知患有传染性疾病的人员也不能进行细胞培养。
在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物的操作；在同一工作日进行细胞培养前，不得接触动物或操作有感染性的微生物（三）细胞库细胞库的建立可为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。
细胞建库应在符合现行药品生产质量管理规范（GMP）的条件下制备。
1．细胞库建立细胞库为三级管理，即细胞种子、主细胞库及工作细胞库。
在某些特殊情况下，也可采用细胞种子及MCB二级管理，但须得到国务院药品监督管理部门的批准。
（1）细胞种子（Cell seed）由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品生产或检定。
在特定条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130℃以下冻存，即为细胞种子，供建立主细胞库用。
对于引进细胞，生产者获得细胞后，冻存少量细胞，经过验证可用于生物制品生产，此细胞可作为细胞种子，供建立主细胞库用。
（2）主细胞库(MCB)取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后在特定倍增水平或传代水平同次均匀混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下，经全面检定合格后，即可作为主细胞库，用于工作细胞库的制备，生产企业的主细胞库最多不得超过两个细胞代次。
（3）工作细胞库(WCB) 工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。
由MCB的细胞经传代增殖，达到定代次水平的细胞，合并后制成一批均质细胞悬液，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下备用，即为工作细胞库。
生产企业的工作细胞库必须限定为一个细胞代次。
冻存时细胞的传代水平须确保细胞复苏后传代增殖的细胞数量能满足生产一批或一个亚批制品。
复苏后细胞的传代水平应不超过批准用于生产的最高限定代次。
所制备的WCB必须经检定合格（见本规程‘细胞检定’中有关规定）后，方可用于生产。
2．细胞库的管理主细胞库和工作细胞库应分别存放。
每一个库应在生产设施内至少2个不同的地点或区域存放。
应监测并维护细胞库冻存容器以保证细胞库贮存在一个高度稳定的环境中。
非生产用细胞应与生产用细胞严格分开存放。
每种细胞库均应分别建立台帐，详细记录放置位置、容器编号、分装及冻存数量，取用记录等。
细胞库中的每支细胞均应具有细胞系/株名、代次、批号、编号、冻存日期，贮存容器的编号等信息。
为保证细胞冻存后仍具有良好的活力，冻存前的细胞活力应不低于90%，冻存后应取一定量的可代表冻存全过程的冻存管复苏细胞，复苏后细胞的活力应不低于80%。
二倍体细胞冻存后，应至少作一次复苏培养并连续传代至衰老期，检查不同传代水平的细胞生长情况。
细胞冻存后，可通过定期复苏细胞及复苏后细胞的活力数据验证细胞在冻存及贮存条件下的稳定性。
（四）细胞检定细胞检定主要包括以下几个方面：细胞鉴别、外源因子和内源因子的检查、①生产终末细胞:是指在或超过生产末期时收获的细胞，尽可能取按生产规模制备的生产末期细胞。
“+”为必检项目，“-”为非强制检定项目。
（+）需要根据细胞特性、传代历史、培养过程等情况要求的检定项目。
1．细胞鉴别试验新建细胞系/株、细胞库(MCB和WCB)和生产终末细胞应进行鉴别试验，以确认为本细胞，且无其他细胞的交叉污染。
细胞鉴别试验方法有多种，包括细胞形态、生物化学法(如同工酶试验)、免疫学检测(如组织相容性抗原、种特异性免疫血清)、细胞遗传学检测(如染色体核型、标记染色体检测)、遗传标志检测(如DNA指纹图谱,包括短串联重复序列（STR）、限制片段长度多态性（RFLP-PCR）以及内含子多态性（EPIC-PCR）法等)以及其它方法（如杂交法、PCR法、报告基因法等）。
应至少选择上述一种或几种方法对细胞进行种属和细胞株间及专属特性的鉴别。
2．细菌、真菌无菌检查取混合细胞培养上清液或冻存细胞管样品，依法检查（附录XII A），应符合规定。
对于MCB及WCB培养物，至少取混合细胞培养上清液10 毫升，尽可能采用薄膜过滤法检测。
对于冻存细胞，至少取冻存细胞总量的1%或至少2支冻存细胞管，可采用直接接种法检测。
3、分枝杆菌检查取至少107个活细胞用培养上清制备细胞裂解物，按照无菌检查法（附录XXX）进行分枝杆菌检查。
取细胞裂解物接种于适宜的固体培养基（如罗氏培养基（LöwensteinJensen medium）或Middlebrook 7H10 培养基），每个培养基接种1mL并做3个重复。
并同时以草分枝杆菌做为阳性对照。
将接种后的培养基置于37℃培养56天，阳性对照应有菌生长，接种供试品的培养基未见分枝杆菌生长，则判为合格。
用于外源病毒检测的豚鼠接种法也可检测分枝杆菌，豚鼠法也可用于分枝杆菌检测，按表2所列方法进行试验和观察。
豚鼠在注射前应观察4周，结核菌素试验为阴性者方可用于试验，观察期末应进行结核菌素试验，并剖检观察主要脏器是否有节结形成。
结核菌素试验为阴性，主要脏器无结节，为则符合要求。
分枝杆菌检查也可采用经过验证的分支杆菌核酸检测法替代培养法。
4．支原体检查取细胞培养上清液样品，依法检查（附录XII B），应符合规定。
5．细胞内、外源病毒因子检查应注意检查细胞系/株中是否有来源物种中潜在的可传染的病毒，以及由于使用的原材料或操作带入的外源性病毒。
细胞进行病毒检查的种类及方法，须根据细胞的种属来源、组织来源、细胞特性、传代历史、培养方法及过程等确定。