西陵知母中甾体皂苷的分离与鉴定_洪永福
知母中三个新的呋甾皂苷
知母中三个新的呋甾皂苷
孟志云;徐绥绪
【期刊名称】《沈阳药科大学学报》
【年(卷),期】1998(15)2
【摘要】从中药知母（ＡｎｅｍａｒｒｈｅｎａａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓＢ
ｇｅ．）中分离出三种新的呋甾皂苷，初步鉴定为（２５Ｓ）－２６－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖－５β－呋甾－２０（２２）－双键－３β，２６－二醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖基（１→２）〔β－Ｄ－葡萄糖基（１→３）〕－β－Ｄ－葡萄糖基（１
→４）－β－Ｄ－半乳糖苷（１），（２５Ｓ）－２６－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖基－
２２－羟基－５β－呋甾－３β，２６－二醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖基（１→２）〔β－Ｄ－葡萄糖基（１→３）〕－β－Ｄ－葡萄糖基（１→４）－β－Ｄ－半乳糖苷（２），（２５Ｓ）－２６－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖基－２２－甲氧基－５β－呋
甾－３β，２６－二醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖基（１→２）〔β－Ｄ－葡萄糖基（１→３）〕－β－Ｄ－葡萄糖基（１→４）－β－Ｄ－半乳糖苷（３）．分别命
名为ｔｉｍｏｓａｐｏｎｉｎ－ＢⅣ，ｔｉｍｏ－ｓａｐｏｎｉｎ－ＢⅤ，ｔｉｍｏｓａｐｏｎｉｎ－ＢⅥ．
【总页数】2页(P130-131)
【关键词】知母;呋甾皂苷;中药
【作者】孟志云;徐绥绪
【作者单位】沈阳药科大学中药系
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R282.71
【相关文献】
1.知母呋甾烷醇型皂苷的质谱裂解行为研究 [J], 郭信东;梁军;宫凤秋;夏永刚;匡海学
2.HPLC-CAD同时测定知母根茎与须根中5种呋甾皂苷的含量 [J], 马凤霞;孙欣光;张洁;龙珍;赵阳;张春泥;王芳旭;刘曙晨;马百平
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甾体皂苷
四、甾体皂苷元的波谱特征
UV (nm) 孤立双键 205-225 900 孤立羰基 285 500 ,-不饱和酮 240 11000 共轭双键 235 C14-OH的判断： 降解、氧化
甾体皂苷元 （含C14-OH） 脱水
CH3 C=O
307-309 nm
IR
甾体皂苷元含有螺缩酮结构的侧链，在IR 中几乎都能显示出980cm-1(A)、920cm-1 (B)、 900cm-1(C)、860cm-1(D)附近的四个特征吸 收带，且A带最强。在25S型皂苷或皂苷元 中，吸收强度B带>C带。在25R皂苷或皂苷 元中吸收强度则是B带<C带 。因此能借以 区别C25位二种立体异构体。
（4） 在甾体皂苷元的E,F环中有3个手性碳 原子，为C20,C22,C25 。 C20甲基为α型，即C20-甲基位于E环平面 的背面，对E环来说是α型，但对F环来说是β 型。 C22也为α型。 C25甲基有两种构型，当C25甲基位于环平 面上的直立键时为β型，其绝对构型为L型 （25S,25L,25βF,Neo）; S型即为螺旋甾烷，由 其衍生的皂苷为螺甾烷醇皂苷类（spirostanol saponins）。
9 10 8 14 15
（二）结构分类
甾体皂苷的皂苷元基本骨架属于螺甾烷 (spirostane）的衍生物，依照螺甾烷结构 中C25的构型和环的环合状态，可将其分为 四种类型。 O
25 21 26 27 18 12 19 1 2 9 10 8 7 6 14 15 11 17 13 16 20 22 23 24
二、化学结构
（一）结构特点
12 19 1 2 11 17 13 16 21 18 20 22
O
知母
心得
1 阅读文献要仔细，往往含有作者的经验总结，如《大孔树脂纯化 知母总皂苷的工艺研究》中提到知母提取物含糖量高，黏度大，采 用0.2mol·L-1 NaOH 溶液除杂效果较好。
前人传授的很多经验可以让我们少走好多弯路！！ 2 没有真正被研究彻底的植物！ 知母作为热门药材已被研究很久，也比较深入，但随着技术的革新， 创心思维的提高，必能不断发现新的成果！
2 双苯吡酮类
a芒果苷(mangiferin)
b异芒果苷( ismangiferin) c新芒果苷( neomangiferin)
3 木脂素类
顺一扁柏树脂酚（cishinokiresinol，R1=OH，R2=H）， 单 甲 基 一 顺一 扁 柏 树 脂酚 （ m o n o me th y - c i s - h i n o k i r es i n o l ， R1=OCH3 ，R2=H）， 氧化一顺一扁柏树脂酚（oxy-cis-hinokiresinol，R1=OH，R2=OH
抗氧化等
三 实验方法
大孔树脂纯化知母总皂苷的工艺研究
以知母总皂苷含量为指标，采用正交试验确定乙醇浓度、乙醇用量和 提取时间；考察大孔树脂型号、上样浓度、吸附流速、上样体积、 除杂溶媒、洗脱溶剂浓度及其体积对纯化结果的影响。
【选取工艺为12 倍量50%乙醇提取，每次2.0 h，提取2 次，提取液过AB-8 型大孔吸 附树脂柱（树脂径高比为1∶8），吸附流速1 mL· min-1，6BV 0.2 mol· L-1 NaOH 溶 液洗涤，再用蒸馏水洗至流出液呈中性，3BV 80%乙醇洗脱】
4 其他
多糖类 ：知母多糖A、B、C、D
有机酸类：大量烟酸、泛酸、鞣酸 微量元素：铁、锌、铜、锰、钴、铬、镍等, 其中以铁、锌含量最高
甾体皂苷提取方法研究进展
Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｐｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｆ Ｓ ｔ ｅ ｒ ｏ ｉ ｄ ａ ｌ Ｓ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｅｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ
Ｂ ＡＩ Ｙｕ ｎ － ｊ ｉ ｅ Ｌ Ｉ Ｕ Ｃｕ ｎ — ｆ ａ ｎ ｇ ’ （ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｓ ｈ ａ ａ ｎ ｘ ｉ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｈａ ｎｚ ｈ ｏ ｎ ｇ Ｓ ｈ ａ ａ ｎ ｘ ｉ ７ ２ ３ ０ ０ ０ ）
醚、 苯等有机溶剂 ， 能 与 一 些金 属 盐 类 形成 沉淀 ， 且 具 有 良
用浸 泡 、 加 热 等手 段使 有效成 分 浸 出或馏 出 。 达到提取的目
的， 常 用 的有 浸 渍 法 、 回流 法 、 渗漉法、 索 氏提 取 法等 。 分 段 析 出法 为通 过改变 混合 提取 剂中 比例 关系 ， 逐渐 降低提 取 溶 液 的极 性 ， 极 性 不 同的 皂 苷就 分 批 析 出 ， 达 到 分 离 的 目的 ， 常 用 甲 醇， 乙醇提 取 一 乙醚／ 丙 酮沉 淀 法 ， 操 作方 法 为 将 粗 皂
通常 在 常温 和加 热 的 条件 下 ， 依 照相 似相 溶原 理 ， 用有 机 溶剂 如 甲醇 、 乙醇 、 丙酮 等 。 把 药材 浸 没 于有机 溶 剂 中 ， 采
静、 抗菌 、 抗癌 、 解热 等 功效 。 甾体 皂苷 主 要用 于 甾体 激 素 类 药 物 的合成 和 新 药开 发 ， 药 用价 值 高 ， 有 广 阔 的开发 利 用 前 景。 甾体 皂 苷 由于 连 有 糖基 ， 有 独 特 的理 化 性 质 ， 有较 强 的 极性 ， 易溶于水 、 甲醇 、 乙 醇 等极 性 溶 剂 ， 不 易溶 于 氯 仿 、 乙
中药化学实验指导—实验八 甾体皂苷元的提取分离与检识
实验八 甾体皂苷元的提取分离与检识（一）目的要求学习从药材中提取、精制和检识甾体皂苷元，通过实验要求：1．掌握用酸水解，有机溶剂提取和精制皂苷元的方法。
2．熟悉皂苷及皂苷元的性质和检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质甾体皂苷主要存在于百合科、薯蓣科、龙舌兰科等植物中。
某些甾体皂苷元如薯蓣皂苷元、替告皂苷元及海可皂苷元等是制药工业中合成甾体激素类药物及甾体避孕药的重要原料。
穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Mak.的干燥根茎。
具有舒筋活血、消食利水、祛痰截疟的功效。
主治风寒湿痹、慢性气管炎、消化不良、劳损扭伤、疟疾、痈肿。
常被作为提取薯蓣皂苷元的原料，穿山龙总皂苷水解可得1.5％～2.6％薯蓣皂苷元。
1．薯蓣皂苷(dioscin) 分子式C 45H 72O 16，分子量869.08，针状结晶，mp.275～277℃（分解），可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇，难溶于石油醚、苯，不溶于水。
1 421rhaO lcrh a薯蓣皂苷2．薯蓣皂苷元(diosgenin) 又称薯蓣皂素,分子式C 27H 42O 3，分子量414.61。
为白色结晶性粉末（乙醇），mp.206～208℃，可溶于常用的有机溶剂及醋酸中，不溶于水。
（三）实验原理本实验是根据药材中的薯蓣皂苷，经酸加热水解可产生薯蓣皂苷元和糖。
因甾体皂苷元不溶于水，可溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取总皂苷元，再用活性炭吸附脱色精制，得到精制薯蓣皂苷元。
（四）实验内容1．薯蓣皂苷元的提取、精制略2．薯蓣皂苷与皂苷元的检识（1）泡沫试验：取穿山龙的水浸液2ml，置于小试管中，用力振摇1分钟，应产生多量泡沫，放置10分钟，泡沫量应无显著变化。
（2）溶血试验：取清洁试管二支，一支加入穿山龙的水浸液0.5ml，另一支加入蒸馏水0.5ml作对照，然后各加入0.8％氯化钠水溶液0.5ml，摇匀，再向每支试管中加入红细胞悬浮液1ml，充分摇匀，静置，观察溶血现象。
甾体皂苷.ppt
防治心血管疾病、抗肿瘤、降血糖、抗血栓、免疫调 节、抗菌作用。
二、结构与分类：
（一）甾体皂苷元化学结构特点 （1）基本母核 （ 2）结构特点
（二）结构类型及代表性成分 （三）糖： α -羟基糖
三、皂苷的理化性质
（一）物理性质 （二）化学性质
1、沉淀反应 （1）与甾醇的沉淀反应 （2）与金属盐类沉淀反应
螺甾烷醇型只对A试剂呈黄色，对E试剂不显色。
2、其双皂苷类无溶血作用，不能和胆甾醇形成复合物， 无抗菌活性。而即螺甾烷醇型单皂苷类则反之。
27
O O
CH2OH 26
变型螺甾烷醇
HO
物理性质：
1、性状--- 皂苷为白色或无色无定形粉末，熔点较高。
味苦辛辣，有强烈的吸潮性；有旋光性。 皂苷元有大多有完好结晶。
穿龙薯蓣药材粗粉
水浸透后，硫酸加热加压水解8h
水解物
水洗除酸后干燥
干燥粉
脱色，汽油提取
提取物
浓缩析晶
粗薯蓣皂苷元
重结晶
薯蓣皂苷元
四、甾体皂苷的检识 五、甾体皂苷的结构研究
UV IR MS 1HNMR 13CNMR
六、中药实例
麦冬 薤白 知母 重楼
甾体皂苷
一、概述
定义 ：是一类由螺甾烷类化合物与糖结合的寡 糖苷。其水溶液振摇后产生持久性的类似肥皂 溶液样泡沫，故称为甾体皂苷。
甾体皂苷类成分提取分离方法
甾体皂苷提取分离方法甾体皂苷( steroidal saponins) 是天然产物中一类重要的化学成分,大多都具有一定的生理活性,在天然产物化学研究中日趋活跃。
据不完全统计,超过90 个科的植物含有甾体皂苷,尤以单子叶植物的百合科、石蒜科、薯蓣科和龙舌兰科等植物报道最多。
由于含甾体皂苷成分的动植物药有相当的疗效。
所以,人们在应用和研究方面越来越广泛。
例如: Dracaena draco 被用于抗腹泻和止血[1],蒺藜用于治疗眼病、浮肿、腹胀、高血压、皮癣和气管炎[2], Chlorophytum malayense 对肿瘤有潜在的细胞毒活性[3], A gave americana有通便和利尿的作用[4], Solanum nigrum 在中国和日本用于对各种癌症的治疗[5],白首乌民间用于滋补药膳,是一种有前途的抗衰老药物[6],虎眼万年青民间用于抗肿瘤[7],西陵知母用于治疗烦热消渴,骨蒸劳热,肺热咳嗽等[8]。
本文就甾体皂苷的提取分离方法做一简单综述。
甾体皂苷类化合物由于连有糖残基, 一般有较强的极性, 易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂, 不易溶于氯仿、乙醚等非极性溶剂。
甾体皂苷不易形成结晶（苷元例外）,且有时结构相似，给分离带来一定困难。
甾体皂苷提取分离基本步骤为粗提、除杂、分离。
1、提取目前, 实验室最常用不同浓度的工业乙醇或甲醇提取。
也有用水作为溶剂的, 如:Jianying zhang 等用80 - 85℃的水从Anemarrhena asphodeloides 的根状茎中提取到六种甾体皂苷[9]。
也可以先用氯仿、石油醚等强亲脂性溶剂处理中草药原料, 然后用乙醇为溶剂加热提取, 冷却提取液, 多数甾体皂苷由于难溶于冷乙醇而作为沉淀析出[10]。
2、除杂方法无论是用水还是醇作为溶剂提取所得到的皂苷,多还包含许多杂质, 如无机盐、糖类、鞣质、色素等, 尚需要进一步精制。
2.1 液液萃取法这是一种最普遍的皂苷除杂方法, 利用皂苷一般极性较大, 易溶于水而其中的一些杂质极性较小易溶于非极性溶剂的性质来去除一些脂溶性的杂质。
中药材知母中皂苷类成分的分析
知母皂苷入血成分研究
皂苷在血液中含量少 不需要对照品，可直接用分子量进行定性分析 高灵敏度、高专属性
HPLC-ELSD-MS
知母总皂苷老鼠灌胃
知母皂苷B-Ⅱ和知母皂苷B-Ⅲ
知母大部分皂苷结构相似 血样中内源性物质干扰比较大
402. [14].欧阳辉,黄小方,周茂福,等. 知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷C对照品的制备与鉴定[J].中国药房.2011,22(15):1391-
1393. [15].姚乾元,贾元印.香草醛-浓硫酸薄层色谱显色剂的改良[J].中药通报.1986,11(7):47. [16].梁均乐,韩丽萍,蒋琳兰,等.大鼠口服知母皂苷后入血成分研究[J].广州医药.2010,41(3):69-72. [17].王莉,贾彦波,陈方,等.HPLC-MS-MS法测定大叔血浆中的知母皂苷B-Ⅱ[J].中国药理学通报.2010,26(8):1064-
R=OCH3 timosaponin H2
Glc
H
timosaponin BⅡ
Glc O R
O
R=OH timosaponin I1 R=OCH3 timosaponin I2
黄酮
双苯吡酮类黄酮化合物：芒果苷、新芒果苷、异芒果苷等
HO
HO
O OH
OH OH
O
OH
OH OH O
Mangi Gal O
H
O
Glc O OCH3
O
timosaponin B-Ⅰ
Glc O OH
O
Glc 2 Gal O H
Xyl Glc 2 Gal O
甾体皂苷的提取分离
第一节 概述
一、定义：具有环戊烷骈多氢菲甾核的化合物 二、结构特点：
C-10，C-13角甲基，C-17侧链，β 构型 C-3 羟基
19 11 18 1 10 3 5 9 7 13 14
3
R
17 16
1 10 5 28 29 9 7 11 19 18
R
17 13 14 30 16
五、甾体皂苷理化性质
4、甾体皂苷的显色反应：与强酸(或Lewis酸)作用产生各种颜色
醋酐-浓硫酸反应
五氯化锑反应
三氯醋酸反应 氯仿-浓硫酸反应 冰醋酸-乙酰氯反应
第五节 甾体皂苷的提取分离
一、甾体皂苷元的提取分离
植物
重结晶 发酵或酸水解
植物
弱极性溶剂提取
粗皂苷元
皂苷元单体
二、甾体皂苷的提取分离
1、溶剂法：
脱脂：石油醚、苯等
除水溶性杂质：氯仿－甲醇混合溶剂萃取
2、铅盐沉淀法 3、吸附法：
活性碳：吸附叶绿素
氧化铝：吸附糖类、水溶性色素、皂苷
大孔吸附树脂
第三节 强心苷类
(五) 分离：色谱分离法
1、亲脂性苷元、单糖苷、次级苷
色谱方法：硅胶吸附层析
洗脱剂：正已烷-乙酸乙酯；苯-丙酮；氯仿-甲醇；乙酸 乙酯-甲醇
OH O CH3 + O C H3C CH3 O
HCl
氯代-L-鼠李糖丙酮化物
O
O
O
O O
O
OH OHOH CH2 OH RO OH 乌本苷 R=鼠李糖
H3C CH3 OH C HCl O O CH2 acetone OH HO OH
第九章甾体皂苷2
二、结构与分类
1.结构 1.结构
甾体皂苷元由27个碳原子组成，构成六个环； 甾体皂苷元由 个碳原子组成，构成六个环； 个碳原子组成
21 22 20
O F
E
17
25
27
O
16
C A B
D
A、B、C、D 、 、 、 为甾体母核， 为甾体母核， E环和 环以螺缩 环和F环以螺缩 环和 酮形式相连接， 酮形式相连接， 构成螺旋甾烷结 构。
2.分类（ 的构型和F环的环合状态） 2.分类（按C25的构型和F环的环合状态） 分类 螺甾烷醇型 C25S构型 直键） （ C25 －CH3 直键） 如：知母皂苷A-Ⅲ； 平伏键） 异螺甾烷醇型 C25R构型 （ C25 －CH3 平伏键） 如：薯蓣皂苷元； 呋甾烷醇型 F环开环 如：原菝契皂苷
三、甾体皂苷的理化性质
理化性质与三萜皂苷相似 1.性状 性状 甾体皂苷：无色或白色无定形粉末， 甾体皂苷：无色或白色无定形粉末，不易结 晶； 甾体皂苷元：多有较好晶形； 甾体皂苷元：多有较好晶形； 都具有旋光性，多为左旋； 都具有旋光性，多为左旋； 熔点都较高，苷元的熔点随-OH的数目增多 熔点都较高，苷元的熔点随 的数目增多 而升高。 而升高。
甾体皂苷元是合成甾体避孕药 和 激素类药物的 甾体皂苷元是合成 甾体避孕药和 激素类 药物的 甾体避孕药 重要原料； 重要原料； 随着甾体皂苷化学的发展， 随着甾体皂苷化学的发展 ， 许多新的生物活性 物质逐渐被发现，特别是在防治心脑血管疾病 心脑血管疾病、 物质逐渐被发现 ， 特别是在防治 心脑血管疾病 、 抗肿瘤、降血糖和免疫调节作用方面引起了国际 抗肿瘤 、 降血糖 和 免疫调节 作用方面引起了国际 上的广泛关注。 上的广泛关注。 如地奥心血康（ 黄山药中的甾体皂苷） 如地奥心血康 （ 黄山药中的甾体皂苷 ） 对冠 心病心绞痛发作疗效较好； 心病心绞痛发作疗效较好； 心脑舒通（ 蒺藜果实中的总皂苷） 心脑舒通 （ 蒺藜果实中的总皂苷 ） 临床上用 于心脑血管疾病的防治，具有扩冠、 于心脑血管疾病的防治 ， 具有扩冠 、 改善冠脉循 环作用，对缓解心绞痛、 环作用 ， 对缓解心绞痛 、 改善心肌缺血有较好疗 效。
黄精中甾体皂苷的分离和结构鉴定的开题报告
黄精中甾体皂苷的分离和结构鉴定的开题报告
一、研究背景
黄精是一种广泛应用于中药的药材，其主要活性成分为皂苷类物质。
其中，黄精中的甾体皂苷具有多种药理活性，例如抗肿瘤、抗氧化、降糖、降血脂等，因此受到广泛的研究和应用。
目前甾体皂苷的研究主要
集中在其提取、分离和生物活性等方面。
然而，黄精中的甾体皂苷种类
繁多，结构复杂，目前仍有一定困难。
因此，进一步深入了解黄精中甾
体皂苷的种类和结构，对于探索其药理活性、副作用等方面具有重要意义。
二、研究目的
本研究旨在分离纯化黄精中的甾体皂苷，并对其进行结构鉴定，为
进一步研究其药理活性和生物代谢提供基础。
三、研究内容和任务
1.建立高效分离纯化黄精中甾体皂苷的方法体系
2.利用质谱、核磁共振等技术进行分离物的结构鉴定
3.对纯化的甾体皂苷进行生物活性测试，探索其抗肿瘤、抗氧化、
降糖、降血脂等药理活性
四、研究方法
1.黄精样本处理：去除杂质，粉碎打粉，制备成适合提取的粉末
2.甾体皂苷提取：采用乙醇或水提取，利用苯酚-硫酸法进行初步筛
选和提纯
3.甾体皂苷分离纯化：采用高速计算机辅助制备液相色谱、逆相色
谱和凝胶过滤等技术进行分离纯化
4.甾体皂苷结构鉴定：利用质谱、核磁共振、红外光谱等技术进行结构鉴定
5.生物活性测试：采用细胞实验和动物试验等方法，探索其药理活性
五、研究预期结果
本研究预期能够分离纯化黄精中的甾体皂苷，鉴定其结构，探索其药理活性。
这些结果有望在黄精的开发利用和相关药物的研发等方面提供重要的科学依据。
中药材知母中皂苷类成分的分析报告
加热至斑点显色清晰
显色剂变革
香草醛（3-甲氧基-4-羟基苯甲醛）-浓硫酸显色剂 是薄层色谱广泛使用的一种通用显色剂 应用：在挥发油、萜类、甾类和皂苷等中药成分的薄层分离中，多能显示出颜色各 异的斑点 未改进配制：含有1%香草醛的浓硫酸溶液 缺点：粘度高
喷显困难，往往使显色点呈“花斑状”，模糊不清 易将薄层表面喷散，对薄层扫描定量影响很大 改进方法：将浓硫酸中加入一定量的水以降低其粘度 结果：70%或60%的硫酸配置的显色剂，对样品显色的灵敏度、显色速度和呈色稳 定性与浓硫酸配制基本相同。 现配制方法： 1g的香草醛加到60%的硫酸100ml中（1%）
R=OCH3 timosaponin H2
Glc
H
timosaponin BⅡ
Glc O R
O
R=OH timosaponin I1 R=OCH3 timosaponin I2
黄酮
双苯吡酮类黄酮化合物：芒果苷、新芒果苷、异芒果苷等
HO
HO
O OH
OH OH
O
OH
OH OH O
Mangiferin
HO
【功效】：清热泻火、滋阴润燥 【临床应用】：烦热消渴、热性病高烧、肺热咳嗽、结核病发热、糖尿病、大便干燥
皂苷
【数量】：知母中现已有文献报道的甾体皂苷成分约有40种 【含量】：在根茎中含量约为6% 【分类】：据皂苷元的母核不同可分为螺甾烷类皂苷和呋甾烷类皂苷两大类。
•螺甾烷类：以菝葜皂苷元连接不同的糖链构成的知母皂苷A，如皂苷A-Ⅰ,A-Ⅲ 等；马尔可皂苷元、新吉托皂苷元、薯蓣皂苷元等及其与糖组成的皂苷 •呋甾烷类：知母皂苷B，如知母皂苷B-Ⅰ、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B-Ⅲ等，知 母皂苷E1、E2、N、O，知母皂苷H1、H2、I1、I2 【结构差异】：3-位羟基连接的糖链
知母化学成分研究
知母化学成分研究摘要：为了研究知母中的化学成分，将此药材乙醇提液浓缩后，浸膏用水溶解，然后用乙酸乙酯及正丁醇来萃取。
之后根据性质采用大孔树脂吸附色谱，硅胶柱色谱、MCI柱色谱、ODS反相色谱以及凝胶柱色谱等方法来分离、纯化，并根据不同的理化性质、光谱数据进行化合物结构的鉴定。
最后分离出6个化合物，分析鉴定出4个：化合物1为芒果苷，化合物2为β-胡萝卜苷，化合物3为知母皂苷C，化合物4为知母皂苷D。
关键词：知母；化学成分；甾体皂苷；知母皂苷C；知母皂苷D第一章实验部分1.1实验仪器ESI-MS 使用 Agilent 1100 Series LC/MSD Trap SL 质谱仪测定；核磁共振使用Bruker DRX-500 型核磁共振仪测定。
薄层色谱用硅胶 GF254 和柱色谱用硅胶 (青岛海洋化工有限公司)；D101大孔树脂 (青岛海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20 (Pharmacia 公司)；大孔树脂(青岛海洋化工有限公司)；75-150 μm MCI 树脂 (日本三菱化工株式社)。
柱色谱所用试剂均为分析纯。
1.2实验过程取10Kg干燥的知母药材（300g留样），用45 L的75％的乙醇回流提取，浓缩提取液，重复3次，合并提取液，蒸干得粗浸膏6Kg，加水溶解后依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯、正丁醇、水三个部位。
取乙酸乙酯部位的浸膏，用不同梯度（100:1、50:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1和纯甲醇）的二氯甲烷-甲醇系统冲硅胶柱，在1:1处得到化合物1。
之后取10:1梯度下来的样品用二氯甲烷-甲醇1:1过凝胶柱Sephadex LH-20纯化，点板合并后流分经薄层色谱显示为单点，进一步确认分别为化合物2.取正丁醇部位的浸膏，过大孔树脂，分别以水、30％、50％、70％、95％的乙醇进行洗脱，每一梯度流出成分均做薄层色谱检验，并根据检验结果进行合并，其中70%流分过MCI树脂（不同梯度的甲醇洗脱），ODS柱（甲醇-水按比例洗脱）进行分离，得到化合物3。
一种知母总皂苷的提取方法[发明专利]
![一种知母总皂苷的提取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/6c04d13b773231126edb6f1aff00bed5b9f373ac.png)
(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.12.03C N 104173700A (21)申请号 201410450515.1(22)申请日 2014.09.05A61K 36/8964(2006.01)(71)申请人南京泽朗生物科技有限公司地址211225 江苏省南京市溧水县白马镇工业集中区食品园3号(72)发明人苏刘花 杨存(54)发明名称一种知母总皂苷的提取方法(57)摘要本发明公开了一种知母总皂苷的提取方法。
方法步骤如下：1）将知母烘干，粉碎；2）称取一定量的知母粉末加水浸润，然后加入知母粉末重量0.5%-3%的生物酶试剂进行酶解处理；3）酶解完成后，加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）将提取液过滤，滤渣重复提取，合并提取液，减压浓缩，得到知母总皂苷浓缩液；5）将浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得知母总皂苷。
采用本发明制备知母总皂苷，工艺操作简单、生产成本低、所得产品纯度高、易于实现工业化生产。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书3页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页(10)申请公布号CN 104173700 A1. 一种知母总皂苷的提取方法，其特征在于以下步骤：1）将知母烘干，粉碎；2）称取一定量的知母粉末加水浸润，然后加入知母粉末重量0.5%-3%的生物酶试剂进行酶解处理，收集酶解原料；3）然后加入乙醇水溶液回流提取，得到提取液；4）将提取液过滤，滤渣重复提取2-3次，合并提取液，减压浓缩至原体积的1/4-1/2，得到知母总皂苷浓缩液；5）将浓缩液上大孔吸附树脂柱洗脱，收集乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，即得知母总皂苷。
2. 根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤2）中所述的粉末大小为40-60目，粉末与水的质量体积比为1：0.5-1倍，浸泡时间为30-60分钟。
3. 根据权利要求1所述的知母总皂苷的提取方法，其特征在于：步骤2）中所述的生物酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶中的一种，酶解时的温度设定在30-45℃，酶解时间为2-4小时。
甾体皂苷提取分离及结构研究方法
甾体皂苷提取分离及结构研究方法王莹莹，寇永奎，朱建松（华中师范大学生命科学学院，武汉４３００７９）摘要：甾体皂苷是一类重要的生物活性物质，是许多药用植物的有效成分之一，随着人们对甾体皂苷生理活性的研究，如何从天然产物中提取分离甾体皂苷及其结构研究引起人们的广泛关注。
本文就甾体皂苷的提取分离及结构研究方法作一综述，为进一步开发利用甾体皂苷药用植物资源提供参考。
关键词：甾体皂苷；提取；分离；化学结构基金项目：国家８６３计划项目（２００４ＡＡ２Ｚ３５５０）作者简介：王莹莹（１９８０－），女，山东临沂人，华中师范大学生命科学学院２００４级硕士研究生，研究方向为植物化学与药物工程。
甾体皂苷（ｓｔｅｒｏｉｄａｌｓａｐｏｎｉｎｓ）是一类由螺甾烷类（ｓｐｉｒｏｓｔａｎｅｓ）化合物衍生的寡糖苷，其皂苷元是由２７个碳原子组成。
植物中的甾体皂苷以百合科、薯蓣科、蒺藜科、茄科研究报道最多，在如玄参科、石蒜科、豆科、鼠李科的一些植物中也含有甾体皂苷。
常用中药知母、麦冬、七叶一枝花等都含有大量的甾体皂苷［１］。
近年来，人们从如海参［２］、软珊瑚Ｃａｒｉｊｏａｒｉｉｓｅｉ［３］等海洋生物中分离到多种具有生理活性的甾体皂苷。
甾体皂苷除因作为合成甾体激素和避孕药的原料而著名外，其自身的药用价值也引起人们的关注。
某些皂苷具有抗肿瘤［４］、抗真菌［５］、防治心脑血管疾病［６］、降血糖［７］、杀灭钉螺［８］等活性。
为了更好地开发天然甾体皂苷药物，本文就甾体皂苷的提取分离及结构研究方法作一简要综述。
１提取方法甾体皂苷类化合物由于连有糖残基，一般有较强的极性，易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，不易溶于氯仿、乙醚等非极性溶剂。
目前，实验室最常用不同浓度的工业乙醇或甲醇提取。
也有用水作为溶剂的，如：Ｊｉａｎｙｉｎｇｚｈａｎｇ等用８０－８５℃的水从Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ的根状茎中提取到六种甾体皂苷［９］。
也可以先用氯仿、石油醚等强亲脂性溶剂处理中草药原料，然后用乙醇为溶剂加热提取，冷却提取液，多数甾体皂苷由于难溶于冷乙醇而作为沉淀析出［１０］。
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西陵知母中甾体皂苷的分离与鉴定洪永福＊,张广明1,孙连娜,韩公羽,计国桢1(第二军医大学药学院,上海200433;1中科院上海有机化学研究所,上海200032)摘要 目的:从新鲜西陵知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge.)根茎中分离出有生理活性的化学成分—甾体皂苷。
方法:用柱色谱法分离纯化,通过理化方法及光谱分析(U V,IR,1HN M R,13CN M R,EI-M S,ESI-M S,HM BC, HM Q C)鉴定化学结构。
结果:从新鲜西陵知母根茎的乙醇提取物中分离得到西陵知母皂苷A与B,其化学结构分别为萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-葡糖基(1※2)-O-β-D-半乳糖苷和萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-葡糖基(1※3)-O-β-D-葡糖基(1※2)-O-β-D-半乳糖苷。
结论:西陵皂苷B为一新化合物。
关键词 知母;甾体皂苷;西陵皂苷A;西陵皂苷B 中药知母为百合科(liliaceae)植物Anemar-rhena asphodeloides Bunge.的干燥根茎,主产于我国北方,其中以河北易县西陵一带所产品质最佳,为中药道地药材,称西陵知母。
知母性味苦寒,有滋阴降火、润燥滑肠的功效,用于治疗烦热消渴,骨蒸劳热,肺热咳嗽,大便燥结,小便不利等症。
知母根茎中含大量甾体皂苷,已分离鉴定出多种皂苷[1～6],其皂苷元有萨尔萨皂苷元(sarsasapogenin),吗尔考皂苷元(markogenin),新支脱皂苷元(neogitogenin),有A 环C-3位连接糖的苷,F环开环后,C-26位上连接糖的苷和C3,C26位同时连接有糖的苷。
此外还有芒果苷,异芒果苷,新芒果苷,脂肪油,油脂,菸酸,菸酰胺,多糖[7～9]等。
药理实验表明[10],知母皂苷及皂苷元有抑制Na+,K+-ATP酶的活性。
这可能与知母滋阴降火,治烦热消渴,骨蒸劳热的解热机理相关。
本文报道从秋季采集的新鲜西陵知母根茎中,分离得到两个甾体皂苷:西陵皂苷A与B。
根据理化性质与光谱分析,确认其结构。
皂苷A(xilingsaponin A)为萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-葡糖基(1※2)-O-β-D-半乳糖苷,皂苷B(xilingsaponin B)为萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-葡糖基(1※3)-O-β-D-葡糖基(1※2)-O-β-D-半乳糖苷。
皂苷B为一新化合物。
皂苷A 白色针状结晶,不溶于水,mp315℃(dec),[α]19D-42.32°(c0.27,dioxane)(mp317～322℃(dec),[α]27D-41.6°)[11]。
对Liebermann—Burchard反应呈紫红-兰绿色,对Molish试剂呈紫收稿日期:1998-10-26＊Tel:(021)25070345,E-mail:yfhong@infow 洪永福 男,53岁,教授环反应。
UVλMeOHmaxnm:263,324。
IR(KCl)cm-1: 985,920,895,890(920>895),表明皂苷A有C25βF 型甾体皂苷结构。
皂苷A的MS m/z:741(M+ H)+,579(M+H-162)+,417(M+H-162-162)+,表明含有两个6碳糖,及甾体皂苷E和F环特征碎片峰和螺甾烷侧链产生的m/z139(基峰), 126,115特征峰。
皂苷A经酸水解得皂苷元,为白色细针状结晶,mp197～198℃。
经薄层色谱,UV,IR,M S, 1HNM R光谱测定与萨尔萨皂苷元完全一致。
因此皂苷A的苷元被确定为萨尔萨皂苷元。
水解母液中检出半乳糖和葡糖两种单糖。
皂苷A的1HNM Rδ4.96(1H,d,J=7.56Hz)和δ5.28(1H,d,J=7.56Hz)为糖的端基质子信号,表明皂苷A分子中有两分子糖,且均以β-键相连接。
将皂苷A的13CNM R数据与相关化合物作比较,表明其皂苷元部分与萨尔萨皂苷元完全一致,糖部分两个单糖—半乳糖与葡糖连接的顺序与相关化合物一致。
从HMQC可见,皂苷A的H34.32与C375.0相关,g al H14.96与gal C1102.5相关,g lu H15.28与glu C1106.1相关,进一步确认糖与苷的连接位置。
相关化合物13CNM R数据见表1。
据此知皂苷A的化学结构为萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-葡糖基(1※2)-O-β-D-半乳糖苷。
与文献[2,11]报道的知母皂苷A III或An-I一致。
皂苷B 白色无定形粉状物,极易溶于水,mp 178～180℃(dec),[α]20D-22.96°(c0.6,M eOH)。
泡沫实验阳性,对Liebermann—Burchard反应呈紫红-兰绿色,对Molish试剂呈紫环反应。
Ehrlish反·518·药学学报A cta Pharmaceutica Sinica1999,34(7)∶518～521 DOI:10.16438/j.0513-4870.1999.07.009应阴性,表明F环为闭环。
UVλMe OHmaxnm:262,325。
IR(KCl)cm-1:985,910,895,850(910>895),具C25βF型甾体皂苷结构特征吸收。
ESI-MS测得其分子量为904,推测分子中含有3个6碳糖。
皂苷B 经酸水解得皂苷元,为白色细针状结晶,mp197～198℃。
薄层色谱,UV,IR,M S和1HNMR光谱测定与萨尔萨皂苷元完全一致。
因此皂苷B的苷元被确认为萨尔萨皂苷元。
水解母液经纸色谱和气相色谱分析,检出半乳糖和葡糖。
皂苷B经苦杏仁酶酶解,得酶解物,为白色针状结晶,m p315℃(dec),经薄层色谱,IR,1HNM R和MS测定,结果与皂苷A 一致。
文献[9]报道知母皂苷A II I(即本文所得皂苷A)不为苦杏仁酶酶解,在本实验中亦得到证实,从酶解母液中仅检出葡糖。
证明皂苷B的分子结构是在皂苷A分子上连接葡糖,且以β-键形式相连接。
在皂苷B的1HNM R,可见3个糖的端基质子信号:δ4.82(1H,d,J=7.07Hz),δ4.90(1H,d,J= 8.49Hz),δ5.26(1H,d,J=7.44Hz)。
皂苷B的13CNM R数据与相关化合物比较,表明其皂苷元部分与萨尔萨皂苷元完全一致(表1),其糖链部分有3个单糖:一个半乳糖,两个葡糖,且两个葡糖以1※3链相连,再与半乳糖以1※2链相连,半乳糖与苷元C3部位成苷。
皂苷B的HMQC(heteronuclear multiple-quantum correlation)图谱表明,H3δ4.30与C3δ75.0相关,gal H1δ4.90与g al C1δ102.6相关,glu H1δ5.26与glu C1δ106.1相关,glu H1'δ4.82与glu C1'δ105.1相关;HMBC(heteronuclear multiple-bond correlation)图谱可见半乳糖上端基质子gal H1δ4.90与皂苷元上C3δ75.0相关,glu H1δ5.26与gal C2δ81.9相关,同时又与glu C3δ84.6相关,glu H1'δ4.82与glu C3δ84.6相关。
进一步确认糖部分的连接位置,皂苷B的结构见图1。
实验部分熔点用日本Yanaco显微熔点测定仪测定(温度未校正);紫外光谱用岛津UV-300型紫外仪测定;红外光谱用日立270-50型红外仪测定;核磁共振谱用BrukerAC-300P和Bruker AM X-400型核磁共振仪测定。
质谱用JMS-D300型及HP5989A-GC-MS 质谱仪测定。
气液色谱用日本岛津GC5A测定。
1 提取分离新鲜西陵知母根茎8kg,切碎,用95%EtOH回Fig1 Structure and HM BC of xilingsaponin B.流提取3次,提取液减压回收至无醇味,放置,析出棕色油膏状物。
滤液用热戊醇萃取,分步浓缩,得粗总皂苷86g及知母黄酮0.7g。
总皂苷经酸水解,得知母皂苷元。
总皂苷经多次硅胶柱色谱,以水饱和n-BuOH洗脱,分别得皂苷A与B和知母黄酮。
2 鉴定皂苷元 白色细针晶,mp197～198℃,Lieber-mann—Burchard反应呈紫红-兰绿色,硅胶CMC 薄层色谱,展开剂:n-BuOH—HOAc—H2O(4∶1∶5 v/v上层),SbCl3氯仿液显色,Rf值与sarsasa-pogenin一致。
UVλMeOHm axnm:275,314。
IR(KCl) cm-1:3480,3380,2940,2900,2870,2860,1470, 1450,1385,1375,1340,1275,1225,1215,1175, 1135,1100,1070,1050,1040,1005,990,970,950, 921,915,897,882,853。
MS m/z:416(M+),398, 357,344,302,273,176,161,139(基峰),126,115, 55。
1HNMR(C5D5N)δ:0.78(3H,s,18-CH3),0.95 (3H,s,19-CH3),1.06(3H,d,C27-CH3),1.24(3H, d,21-CH3)。
皂苷A 白色针状结晶,mp315℃(dec),[α]19D -42.32°(c0.27,dio xane)。
Liebermann—Burchard 反应呈紫红-兰绿色,M olish反应阳性。
元素分析分子式:C39H64O13,计算值(%):C63.24,H8.65;实验值(%):C63.00,H8.58。
UVλMeOHmaxnm:263, 324。
IR(KCl)cm-1:3380(-OH),2970,2900, 2875,2865,1450,1380,1370,1335,1300,1225, 1215,1175,1115,1070,1045,1000,985,930,920, 895,875,870,850。
1HNM R(DMSO)δ:0.75,0.94,·519·药学学报A cta Pharmaceutica Sinica1999,34(7)∶518～5211.04,1.10,1.45～2.20(m),3.42,3.88～3.93 (m),4.05,4.10,4.25,4.28,4.32(m),4.35～4.70 (m),4.96(1H,d,J=7.56Hz),5.28(1H,d,J=7.56 Hz)。
13CNM R数据见表1。
HM QC H4.32与C 75.0;H4.96与C102.5;H5.28与C106.1相关。